CN107974420A - 高产乙醛的保加利亚乳杆菌jmcc0018、其分离纯化方法及应用 - Google Patents

高产乙醛的保加利亚乳杆菌jmcc0018、其分离纯化方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018、其分离纯化方法及应用，该保加利亚乳杆菌是从西藏传统发酵乳中分离筛选出来的具有很好发酵特性、肠细胞粘附性和在酸奶发酵过程中高产乙醛的菌株；该菌株已保存于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏号为CGMCC NO.14425；本发明筛选出的保加利亚乳杆菌与已有的保加利亚乳杆菌相比，对低pH值和高胆汁酸盐环境具有更强的抗性，具有更好的耐受人消化道不良环境的能力，可以更好地发挥其益生作用，同时可以产生更多的风味物质乙醛，使酸奶风味浓郁；该菌株具有良好的发酵特性，可用于功能性乳制品的开发。

Description

高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018、其分离纯化方法及 应用
技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及一种乳杆菌，具体地说，是一种保加利亚乳杆菌JMCC0018、其筛选方法及应用。
背景技术
目前我国规定可用于食品的益生菌仅有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种、嗜热链球菌。保加利亚乳杆菌被认为是“公认安全性（GRAS）”成分，已经遍布全世界。由于保加利亚乳杆菌具有调节胃肠道健康、促进消化吸收、增加免疫功能、抗癌抗肿瘤等重要的生理功能，因此被规定为可用于保健食品的益生菌菌种之一，在食品发酵、工业乳酸发酵、饲料行业和医疗保健领域均有比较广泛的应用。作为酸奶发酵剂的主要成分与嗜热链球菌共同完成酸奶的发酵及酸奶风味的形成，其中产生风味物质主要为乙醛、双乙酰等，为了使酸奶风味浓郁筛选一种能够高产乙醛的菌株具有重要意义和应用价值。
中国发明专利CN105647808A“一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法”，公开了一种保藏保加利亚乳杆菌的方法，用琼胶寡糖作为保加利亚乳杆菌的碳源，保护保加利亚乳杆菌在低温贮藏下的活性，保护保加利亚乳杆菌在人体胃肠液中存活率，提高保加利亚乳杆菌的菌活力。中国发明专利CN102286407A“低温发酵的德氏保加利亚乳杆菌及用其制备酸奶的方法”，公开了一种德氏乳杆菌保加利亚亚种，在中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC NO. 4774。
发明内容
本发明要解决的技术问题，是提供一种保加利亚乳杆菌JMCC0018（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）它是从西藏传统发酵乳中分离筛选出来，该保加利亚乳杆菌JMCC0018是一种具有很好发酵特性和黏附肠细胞、在酸奶发酵过程中高产乙醛的菌株。
本发明的保加利亚乳杆菌（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）JMCC0018，已于2017年7月14日，保存于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO. 14425。
本发明的另外一个发明目的，是提供上述保加利亚乳杆菌JMCC0018的一种分离纯化方法。
本发明还有一个发明目的，是提供一种上述保加利亚乳杆菌JMCC0018的应用。与已有保加利亚乳杆菌相比，保加利亚乳杆菌JMCC0018对低pH值和高胆汁酸盐具有更强的抗性，具有更好的耐受人消化道不良环境的能力，可以更好地发挥其益生作用，同时可以产生更多的风味物质乙醛。
为达到上述目的，本发明的技术方案是：
一种高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018，它是从西藏传统发酵乳中分离筛选出来的；该菌菌株已保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏号为CGMCC NO.14425。
作为限定，所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的16Sr DNA序列如下：
GACTCCTATAAAGGTTATCCCACCGACTTTGGGCATTGCAGACTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCGTGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAGTCCGAACTGAGAACAGCTTTAAGAGATCCGCTTACCCTCGCGGGTTCGCTTCTCGTTGTACTGCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCTTTAGAGTGCCCAACTTAATGATGGCAACTAAAGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTCTCTGCGTCCCCGAAGGGAACCACCTATCTCTAGGTGTAGCACAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGCGCTTAATGCGTTTGCTGCGGCACTGAGGACCGGAAAGTCCCCAACACCTAGCGCTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTGCAGACCAGAGAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGAATGACAGTTTCCGATGCAGTTCCACGGTTGAGCCGTGGGCTTTCACATCAGACTTATCATTCCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGACTTTCTGGTTGATTACCGTCAAATAAAGACCAGTTACTGCCTCTATCCTTCTTCACCAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTACGCATCATTGCCTTGGTAGGCCTTTACCCCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGCTCATCCTAAAGTGACAGCTTACGCCGCCTTTCAAACTTGAATCATGCGATTCATGTTGTTATCCGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGGTATCCCAGTCTTTAGGGCAGATTGCCCACGTGTTACTCACCCATCCGCCGCTAGCGTCCAACAAATCATCCCGAAGGAAT
作为另一种限定，所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的Phes基因序列如下：
CACCTGCTGCGGAGCCTCACTTCACCAGTTCAAGCCCGGACCATGGAAAAGCATGACTTCATAAAGGGGACCTCAAGATGATCTCCCCAGGCAAGGTTTACACAATAGACGATGACGACGCCACCCAGTCCCACCAGTTCATGCAGATGGAAGGGCTGGTTGTCAGCAAGAACATCTCCTTGAGTGACCTTAAGGGGACCTTGGAACTGGTGGCCAAACACGAATTCGGCCAGGACCGGGAAACCCGCTTGCGGCCAAGCTACTTCCCATTTACTGAACCATCACTTGAAATGGACTTTTCTTGCTTTGAATGCGGCGGCAAGGGCTGCTCGATCTGCAAGAACACCGGCTGGATCGAAGTTCTGGGTGCCGGGATCGTTCACCCGAATGTTTTGTCTGCCGCCGGCATTGACCCAAACGTCTACTCTGGTT
本发明还提供了上述高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的一种分离纯化方法，它按照以下步骤顺序进行：
①样品采集
取25mL内蒙古传统的发酵乳制品，加入到250mL生理盐水中，充分混匀，得到样品；
②样品富集
取样品2mL，加入到100mL的LC液体培养基中，35℃培养72h，得到培养液；
③菌株分离
取培养液1mL，用重量与体积百分比为0.9%的无菌生理盐水稀释100000倍，分别为梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍，得到菌悬液；
取MRS琼脂培养基，融化后，倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，吸取0.1mL菌悬液涂布到培养基上；
置35℃环境下厌氧培养72h，观察菌落生长情况，其中H2：CO2：N2=5：10：85；
待平板出现典型菌落后，根据标准保加利亚乳杆菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的菌落，进行下一步的菌株纯化；
④菌株纯化
挑取选中的单菌落，将菌落培养物划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；然后，再将培养皿上长出的单菌落，继续划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；连续培养三次；
⑤将纯培养物置于无菌的20%甘油中在-70℃保存，同时接种MRS琼脂培养基试管斜面用于临时保存。
作为限定：
所述MRS液体培养基具有以下组成：酪蛋白胨 10g；牛肉膏 10g；酵母膏 5g；葡萄糖20g；乙酸钠 5g；柠檬酸二胺 2g；吐温-80 1g；K2HPO4 2g；MgSO4·7H2O 0.2g；MnSO4·7H2O0.05g；琼脂 15g；蒸馏水 1000mL；
该MRS液体培养基调节pH6.8±0.1。
作为另一种限定，所述步骤③中，糖发酵管中包括水杨苷、核糖、阿拉伯糖、麦芽糖、甘露醇、纤维二塘、蔗糖、棉子糖、山梨醇。
本发明也提供了上述高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的应用，它应用于制备发酵乳制品。所述发酵乳为酸牛奶、乳酸菌饮料或菌粉制剂。
由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比所取得的技术进步在于：本发明采用的菌株具有很好的黏附肠道的作用，可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，因此具有很好的整肠作用；本发明采用的菌株具有良好的发酵特性并在发酵过程中高产风味物质乙醛，可将其用于发酵乳制品的开发。
本发明下面将结合具体实施例作进一步详细说明。
具体实施方式
以下实施例只用于说明本发明，而并不限定本发明。
实施例１保加利亚乳杆菌JMCC0018及其分离纯化方法
一、菌种
高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018，是从西藏传统发酵乳中分离筛选出来的，该菌株已于2017年7月14日，保存于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏号为CGMCCNO. 14425。
二、上述保加利亚乳杆菌JMCC0018的分离纯化方法
该分离纯化方法按照以下步骤顺序进行：
步骤1 样品采集
取25mL内蒙古传统的发酵乳制品，加入到250mL生理盐水中，充分混匀，得到样品。
步骤2 样品的富集
取样品2mL，加入到100mL的LC液体培养基中，35℃培养72h，得到培养液。
步骤3 菌株分离
取培养液1mL，用0.9%（重量与体积的百分比）无菌的生理盐水稀释100000倍，分别为梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍，得到菌悬液；
取MRS琼脂培养基，融化后，倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，吸取0.1mL菌悬液涂布到培养基上；
置35℃环境下厌氧培养72h（H2：CO2：N2=5：10：85），观察菌落生长情况；
待平板出现典型菌落后，根据标准保加利亚乳杆菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的菌落，进行下一步的菌株纯化。
步骤4 菌株的纯化
挑取选中的单菌落，将菌落培养物划线接种到MRS固体培养基上，35℃有氧环境培养72h；然后，再将培养皿上长出的单菌落，继续划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；连续培养三次；最后，将纯培养物置于无菌的20%甘油中在-70℃保存，同时接种MRS琼脂培养基试管斜面用于临时保存。其中： MRS培养基具有以下组成：
酪蛋白胨 10g；牛肉膏 10g；酵母膏 5g；葡萄糖 20g；乙酸钠 5g；柠檬酸二胺 2g；吐温-80 1g；K2HPO4 2g；MgSO4·7H2O 0.2g；MnSO4·7H2O 0.05g；琼脂 15g；蒸馏水 1000mL；
该培养基调节pH6.8±0.1。
实施例2 JMCC0018的细菌学特征
一．基本特征
JMCC0018基本特征如表1所示：
表1. JMCC0018基本特征
由表1可见，JMCC0018为革兰氏阳性、杆状、无芽孢、接触酶和氧化酶试验的阴性菌株。
二．糖发酵特性实验
将分离纯化的菌株挑取单菌落进行平板划线，37℃培养48h，分别挑取一接种环菌株接入糖发酵管中，37℃培养48h，观察颜色变化。具体结果见下表。
表2. JMCC0018的鉴定结果
注：“+”表示发酵利用；“-”表示不发酵利用。
三．分子生物学鉴定
将上述菌株进行分子生物学鉴定，通过DNA提取、PCR扩增，16SrDNA测序，NCBI网站blast最终确定为保加利亚乳杆菌。
JMCC0018的16SrDNA测序结果如下：
GACTCCTATAAAGGTTATCCCACCGACTTTGGGCATTGCAGACTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCGTGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAGTCCGAACTGAGAACAGCTTTAAGAGATCCGCTTACCCTCGCGGGTTCGCTTCTCGTTGTACTGCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCTTTAGAGTGCCCAACTTAATGATGGCAACTAAAGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTCTCTGCGTCCCCGAAGGGAACCACCTATCTCTAGGTGTAGCACAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGCGCTTAATGCGTTTGCTGCGGCACTGAGGACCGGAAAGTCCCCAACACCTAGCGCTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTGCAGACCAGAGAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGAATGACAGTTTCCGATGCAGTTCCACGGTTGAGCCGTGGGCTTTCACATCAGACTTATCATTCCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGACTTTCTGGTTGATTACCGTCAAATAAAGACCAGTTACTGCCTCTATCCTTCTTCACCAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTACGCATCATTGCCTTGGTAGGCCTTTACCCCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGCTCATCCTAAAGTGACAGCTTACGCCGCCTTTCAAACTTGAATCATGCGATTCATGTTGTTATCCGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGGTATCCCAGTCTTTAGGGCAGATTGCCCACGTGTTACTCACCCATCCGCCGCTAGCGTCCAACAAATCATCCCGAAGGAAT
JMCC0018的Phes基因测序结果如下：
CACCTGCTGCGGAGCCTCACTTCACCAGTTCAAGCCCGGACCATGGAAAAGCATGACTTCATAAAGGGGACCTCAAGATGATCTCCCCAGGCAAGGTTTACACAATAGACGATGACGACGCCACCCAGTCCCACCAGTTCATGCAGATGGAAGGGCTGGTTGTCAGCAAGAACATCTCCTTGAGTGACCTTAAGGGGACCTTGGAACTGGTGGCCAAACACGAATTCGGCCAGGACCGGGAAACCCGCTTGCGGCCAAGCTACTTCCCATTTACTGAACCATCACTTGAAATGGACTTTTCTTGCTTTGAATGCGGCGGCAAGGGCTGCTCGATCTGCAAGAACACCGGCTGGATCGAAGTTCTGGGTGCCGGGATCGTTCACCCGAATGTTTTGTCTGCCGCCGGCATTGACCCAAACGTCTACTCTGGTT
四．肠细胞粘附特性实验
将肠上皮细胞以每孔1mL细胞悬液加入加有盖玻片的24孔板中，于37℃培养箱中孵育48h；待细胞贴壁完全，以无菌PBS洗涤2次，每孔加入1mL浓度为108个/mL的乳酸菌悬液，孵育1h；然后取出盖玻片，用无菌PBS漂洗3次，然后用质量分数为4%多聚甲醛固定30min，烘干后用结晶紫染色，于显微镜下观察，随机挑选20个视野，每个视野50个细胞，计算其表面粘附的乳酸菌数量并取3次实验的平均值表示细胞的粘附能力。
五．发酵乳中乙醛含量检测
实验选择发酵乳贮藏起始0h开始测定，并且发酵乳贮藏期间每隔12h取样进行乙醛含量的测定。
(1) 样品处理：准确称取5g发酵乳样，加入20%柠檬酸0.5mL，最后用灭菌三蒸谁定容到15mL摇匀，于4℃，4200g离心10min取上清于-80℃保存备用。
(2) 使用乙醛检测试剂盒K-ACHYD（Megazyme，Ireland），按照说明书进行操作后计算结果。
六．菌株发酵特性
取鲜牛奶200份，白砂糖18份，调配均匀后，于65℃、15MPa下均质，95℃杀菌300s后，降温至35-40℃，接种JMCC0018 菌种106cfu/ml，于37℃发酵24h，发酵结束后对发酵样品进行感官品评，根据感官品评结果最终筛选出在酸奶发酵过程中能够高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018。
实施例3 抗生素敏感性实验检测
采用K-B法测定送检菌种对30种抗生素的敏感性，实验用抗生素标准品由中国食品药品检定研究院出品。实验结果由表3所示：
表3 抗生素敏感实验结果
实验结果表明，高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018菌种对测试的25种抗生素敏感，对4种抗生素有抗性。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述技术内容作为启示加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作出的简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明权利要求的保护范围。
序列表
<110> 石家庄君乐宝乳业有限公司
<120> 高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018、其分离纯化方法及应用
<130> 2017.12.10
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1399
<212> DNA
<213> Lactobacillus bulgaricus
<400> 1
gactcctata aaggttatcc caccgacttt gggcattgca gacttccatg gtgtgacggg 60
cggtgtgtac aaggcccggg aacgtattca ccgcggcgtg ctgatccgcg attactagcg 120
attccagctt cgtgcaggcg agttgcagcc tgcagtccga actgagaaca gctttaagag 180
atccgcttac cctcgcgggt tcgcttctcg ttgtactgcc cattgtagca cgtgtgtagc 240
ccaggtcata aggggcatga tgacttgacg tcatccccac cttcctccgg tttgtcaccg 300
gcagtctctt tagagtgccc aacttaatga tggcaactaa agacaagggt tgcgctcgtt 360
gcgggactta acccaacatc tcacgacacg agctgacgac agccatgcac cacctgtctc 420
tgcgtccccg aagggaacca cctatctcta ggtgtagcac aggatgtcaa gacctggtaa 480
ggttcttcgc gttgcttcga attaaaccac atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca 540
attcctttga gtttcaacct tgcggtcgta ctccccaggc ggagcgctta atgcgtttgc 600
tgcggcactg aggaccggaa agtccccaac acctagcgct catcgtttac ggcatggact 660
accagggtat ctaatcctgt tcgctaccca tgctttcgag cctcagcgtc agttgcagac 720
cagagagccg ccttcgccac tggtgttctt ccatatatct acgcattcca ccgctacaca 780
tggaattcca ctctcctctt ctgcactcaa gaatgacagt ttccgatgca gttccacggt 840
tgagccgtgg gctttcacat cagacttatc attccgcctg cgctcgcttt acgcccaata 900
aatccggaca acgcttgcca cctacgtatt accgcggctg ctggcacgta gttagccgtg 960
actttctggt tgattaccgt caaataaaga ccagttactg cctctatcct tcttcaccaa 1020
caacagagct ttacgatccg aaaaccttct tcactcacgc ggcgttgctc catcagactt 1080
gcgtccattg tggaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtttgggc cgtgtctcag 1140
tcccaatgtg gccgatcagt ctctcaactc ggctacgcat cattgccttg gtaggccttt 1200
accccaccaa ctagctaatg cgccgcgggc tcatcctaaa gtgacagctt acgccgcctt 1260
tcaaacttga atcatgcgat tcatgttgtt atccggtatt agcacctgtt tccaagtggt 1320
atcccagtct ttagggcaga ttgcccacgt gttactcacc catccgccgc tagcgtccaa 1380
caaatcatcc cgaaggaat 1399
<210> 2
<211> 432
<212> DNA
<213> Lactobacillus bulgaricus
<400> 2
cacctgctgc ggagcctcac ttcaccagtt caagcccgga ccatggaaaa gcatgacttc 60
ataaagggga cctcaagatg atctccccag gcaaggttta cacaatagac gatgacgacg 120
ccacccagtc ccaccagttc atgcagatgg aagggctggt tgtcagcaag aacatctcct 180
tgagtgacct taaggggacc ttggaactgg tggccaaaca cgaattcggc caggaccggg 240
aaacccgctt gcggccaagc tacttcccat ttactgaacc atcacttgaa atggactttt 300
cttgctttga atgcggcggc aagggctgct cgatctgcaa gaacaccggc tggatcgaag 360
ttctgggtgc cgggatcgtt cacccgaatg ttttgtctgc cgccggcatt gacccaaacg 420
tctactctgg tt 432

Claims (8)

1.一种高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018，它是从西藏传统发酵乳中分离筛选出来的；该菌菌株已保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏号为CGMCC NO.14425。
2.根据权利要求1所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018，其特征在于其16SrDNA序列如下：
GACTCCTATAAAGGTTATCCCACCGACTTTGGGCATTGCAGACTTCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCGTGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAGTCCGAACTGAGAACAGCTTTAAGAGATCCGCTTACCCTCGCGGGTTCGCTTCTCGTTGTACTGCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCTTTAGAGTGCCCAACTTAATGATGGCAACTAAAGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTCTCTGCGTCCCCGAAGGGAACCACCTATCTCTAGGTGTAGCACAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGCGCTTAATGCGTTTGCTGCGGCACTGAGGACCGGAAAGTCCCCAACACCTAGCGCTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTGCAGACCAGAGAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGAATGACAGTTTCCGATGCAGTTCCACGGTTGAGCCGTGGGCTTTCACATCAGACTTATCATTCCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGACTTTCTGGTTGATTACCGTCAAATAAAGACCAGTTACTGCCTCTATCCTTCTTCACCAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTACGCATCATTGCCTTGGTAGGCCTTTACCCCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGCTCATCCTAAAGTGACAGCTTACGCCGCCTTTCAAACTTGAATCATGCGATTCATGTTGTTATCCGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGGTATCCCAGTCTTTAGGGCAGATTGCCCACGTGTTACTCACCCATCCGCCGCTAGCGTCCAACAAATCATCCCGAAGGAAT。
3.根据权利要求1所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018，其特征在于其Phes基因序列如下：
CACCTGCTGCGGAGCCTCACTTCACCAGTTCAAGCCCGGACCATGGAAAAGCATGACTTCATAAAGGGGACCTCAAGATGATCTCCCCAGGCAAGGTTTACACAATAGACGATGACGACGCCACCCAGTCCCACCAGTTCATGCAGATGGAAGGGCTGGTTGTCAGCAAGAACATCTCCTTGAGTGACCTTAAGGGGACCTTGGAACTGGTGGCCAAACACGAATTCGGCCAGGACCGGGAAACCCGCTTGCGGCCAAGCTACTTCCCATTTACTGAACCATCACTTGAAATGGACTTTTCTTGCTTTGAATGCGGCGGCAAGGGCTGCTCGATCTGCAAGAACACCGGCTGGATCGAAGTTCTGGGTGCCGGGATCGTTCACCCGAATGTTTTGTCTGCCGCCGGCATTGACCCAAACGTCTACTCTGGTT。
4.权利要求1－3中任一项所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的一种分离纯化方法，其特征在于它按照以下步骤顺序进行：
①样品采集
取25mL内蒙古传统的发酵乳制品，加入到250mL生理盐水中，充分混匀，得到样品；
②样品富集
取样品2mL，加入到100mL的LC液体培养基中，35℃培养72h，得到培养液；
③菌株分离
取培养液1mL，用重量与体积百分比为0.9%的无菌生理盐水稀释100000倍，分别为梯度稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍，得到菌悬液；
取MRS琼脂培养基，融化后，倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，吸取0.1mL菌悬液涂布到培养基上；
置35℃环境下厌氧培养72h，观察菌落生长情况，其中H2：CO2：N2=5：10：85；
待平板出现典型菌落后，根据标准保加利亚乳杆菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的菌落，进行下一步的菌株纯化；
④菌株纯化
挑取选中的单菌落，将菌落培养物划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；然后，再将培养皿上长出的单菌落，继续划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；连续培养三次；
⑤将纯培养物置于无菌的20%甘油中在-70℃保存，同时接种MRS琼脂培养基试管斜面用于临时保存。
5.根据权利要求4所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的分离纯化方法，其特征在于：
所述MRS液体培养基具有以下组成：酪蛋白胨 10g；牛肉膏 10g；酵母膏 5g；葡萄糖20g；乙酸钠 5g；柠檬酸二胺 2g；吐温-80 1g；K2HPO4 2g；MgSO4·7H2O 0.2g；MnSO4·7H2O0.05g；琼脂 15g；蒸馏水 1000mL；
该MRS液体培养基调节pH6.8±0.1。
6.根据权利要求4所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤③中，糖发酵管中包括水杨苷、核糖、阿拉伯糖、麦芽糖、甘露醇、纤维二塘、蔗糖、棉子糖、山梨醇。
7.根据权利要求1－3中任一项所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的应用，其特征在于：它应用于制备发酵乳制品。
8.根据权利要求7所述的高产乙醛的保加利亚乳杆菌JMCC0018的应用，其特征在于：所述发酵乳为酸牛奶、乳酸菌饮料或菌粉制剂。
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