CN107951914A - 植物源安定剂、制备方法及其应用和使用方法 - Google Patents

植物源安定剂、制备方法及其应用和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于水产品安定剂领域，具体涉及植物源安定剂，还涉及上述安定剂的制备方法，以及该安定剂在水产品中的应用。植物源安定剂，含有天文草提取物和八角枫根提取物。天文草提取物和八角枫根提取物的重量份数比为3‑5:1‑2。植物源安定剂的制备方法，是将天文草与八角枫根分别粉碎、提取粗提液，然后将各自的粗提取液混合，进行酶法‑超声联合提取、浓缩，冷冻干燥，得安定剂。本发明的有益效果在于：（1）和背景技术中披露的传统的安定剂或麻醉剂相比，其安全性能高；（2）原料易得，成本低廉；（3）各种成份之间比例适中，易于储存，复合成分稳定，效果优异，不会对水产品造成二次污染。

Description

植物源安定剂、制备方法及其应用和使用方法
技术领域
本发明属于水产品安定剂领域，具体涉及植物源安定剂，还涉及上述安定剂的制备方法，以及该安定剂在水产品中的应用，还涉及上述的安定剂的使用方法。
背景技术
我国水产品资源丰富，种类繁多，人们对水产品的需求量日益增加。在水产养殖过程中，有时需要合理使用安定剂，使鱼体安静，以降低采卵、采精、采血等操作时的应激反应，使操作得以顺利进行。在水产品活体运输过程中，安定剂能够降低鱼体新陈代谢，减少在运输途中因碰撞、挤压等对鱼体造成的伤害，从而提高运输存活率。因此，安定剂在水产养殖、流通、销售等领域中的应用越来越广泛，对安定剂的研究和管理需求也显得尤为重要。
目前，水产品常用的安定剂包括MS-222、丁香酚、盐酸苯佐卡因、液态二氧化碳等，使用这些安定剂会使水产品存在以下安全问题，例如：致癌、致畸性、致突变等。同时会造成一定的危害，影响人们的身体健康与生态环境，阻碍养殖产业的健康发展。市场上普通渔用安定剂价格昂贵、稳定性差，例如：MS-222溶液应避免阳光直射，否则对水产品有较强的毒性；盐酸苯佐卡因对环境有严重的危害，并且易燃烧，对人体都致敏性等。CN 103239463A在《一种水产品麻醉剂及其制备方法》中介绍了以α-葡糖基丁香酚为主要成分，并与α-葡萄糖苷酶协同作用的针对水产品的麻醉剂。该发明虽然麻醉效果较好，麻醉时间短，但是仍然存在安全隐患，该麻醉剂在水产品体内的残留量以及残留时间对人体是否有毒害作用等都存在疑问。因此，非常有必要研究一种天然绿色、成本低廉、安全可靠、效果优异的植物源水产品安定剂。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种来源于植物的安全可靠、效果优异的植物源水产品安定剂；
本发明还提供了上述的安定剂的制备方法；
上述安定剂的应用及其使用方法，也是本发明所要保护的范围。
本发明的构思是，结合植物源材料的特点，将其制备成一种可应用于水产品尤其是鱼类的安定剂，减少由于传统方法中采用化学成分安定鱼类所潜在的安全隐患，提高水产品的安全性。天文草和八角枫根具有以下的特点：
天文草为菊科植物金钮扣的全草，分布于福建、台湾、广东、广西、四川、云南、西藏等地。天文草辛苦、有麻舌感、微温，具有止咳平喘、解毒利湿、消肿止痛之功效，主治疟疾，腹泻，龋齿痛，毒蛇咬伤，狗咬伤，痈疖肿毒，瘰疽等。
八角枫根为八角枫科植物八角枫或瓜木的根、须根或根皮，分布于长江流域及辽宁、山西、河南、福建、台湾等地。八角枫根辛，温，有毒，具有祛风，通络，散瘀，镇痛，并有麻醉及松弛肌肉之功效，主治风湿疼痛，麻木瘫痪，心力衰竭，劳伤腰痛，跌打损伤等。
本发明人通过实验得出，将两者的提取物结合后，应用于水产品类的安定，其效果显著。而且上述两种植物源的提取物安全性高。
本发明所提供的植物源安定剂，含有天文草提取物和八角枫根提取物。
天文草提取物和八角枫根提取物的重量份数比为3-5:1-2。
植物源安定剂的制备方法，是将天文草与八角枫根分别粉碎、提取粗提液，然后将各自的粗提取液混合，进行酶法-超声联合提取、浓缩，冷冻干燥，得安定剂。
上述的方法中，粗提液的制备步骤如下：
S1:制备天文草粗提液
(1)天文草的预处理
将天文草全草18-30g用自来水清洗3-5min，沥水15-30min，将其置于电热鼓风干燥箱中，于55-65℃下烘干40-60min，然后取出放置在4℃冷库中冷却30-55min；
(2)天文草溶液的制备
将步骤(1)所得的冷却后的天文草全草以400-500rmp的转速粉碎10-15min，过400-500目筛，将所得的天文草粉倒入避光玻璃储存罐中，并按粉:酒精1-3：100-200的重量比加入体积浓度为50％的酒精，室温条件下将其完全转移至搅拌器中，以80-120rmp的转速搅拌3-5min，转移至4℃冷库中静置5-8min，过滤，制得天文草粗提液；
S2:制备八角枫粗提液
(3)八角枫根预处理
将八角枫根6-12g用自来水清洗3-5min，沥水15-30min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55-65℃的温度下，烘干40-60min,将八角枫根取出放置在4℃冷库中冷却30-55min；
(4)八角枫根溶液的制备
将步骤(3)制得的八角枫根以400-500rmp的转速粉碎15-20min，得八角枫粉末；
取体积浓度为50％的酒精，酒精与八角枫粉末的重量比为100-200：1-3；然后加入1mol/L的氢氧化钠，氢氧化钠的体积为酒精体积的1/2，震荡使其溶解，待氢氧化钠完全溶解后，加入八角根茎粉末，在60-70℃下回流搅拌反应2-3h，反应结束后，将样品置于分层漏斗中静置分层，除去底部甘油，分两次加入稍大于分层液的蒸馏水洗涤，静置样品分层后，取上层液于收集罐中；将所取的上层液蒸馏30-40min，上层液每批进样200-300ml，预脱气温度为50-70℃，预脱气压力100-250pa，进料速率控制70-100ml/h，刮膜器转速为250-400rmp，预热温度60-90℃，蒸馏温度100-130℃，压力10-25pa，蒸馏物收集瓶收集分馏物，制得八角枫根粗提取液；
将步骤(2)制得的天文草粗提取液和步骤(4)制得的八角枫根粗提取液混合，并以转速为150-200rmp搅拌10-15min，室温静置1-2h，过滤，得复合溶液；
然后进行下述步骤：
(6)酶-超声提取液的制备
将步骤(5)制得的复合溶液加入酶活力为15-20U/m的纤维素酶，反应温度55-60℃，酶解时间120-150min，得到酶提取液；将所得的酶提取液超声波提取，搅拌速度为80-120rmp，超声波频率为40KHZ，温度为45-60℃，并提取20-30min后，停止15-20min，再继续提取20-30min，将提取液转移至离心机中，以3500-4500rmp转速进行分离，得超声提取液；
(7)浓缩液的制备
将步骤(6)中所得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065—0.088Mpa，水浴温度为75-90℃，浓缩至比重为1.2-1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液；
(8)安定剂的制备
将步骤(7)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18℃的冰箱内冷冻12-36h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45--50℃，干燥室压力为60-80Pa，干燥12-30h，制得复合粉末为安定剂。
经过上述的方法制备所得的植物源安定剂在水产品中的应用，也是本发明所要保护的范围。
本发明的安定剂所应用的水产品主要为鲆鲽鱼类；鲤鱼、鲫鱼等淡水鱼类。
将安定剂8-15g，倒入1000L清水中，在室温下以80-120rmp搅拌2-5min，制得安定诱导溶液，将不同水产品置于安定诱导溶液中，进行诱导休眠。
本发明的有益效果在于：
(1)和背景技术中披露的传统的安定剂或麻醉剂相比，其安全性能高；
(2)原料易得，成本低廉；
(3)各种成份之间比例适中，易于储存，复合成分稳定，效果优异，不会对水产品造成二次污染；
(4)可广泛用于水产品尤其是鱼类的运输、暂养、周转、实验等过程中，其生长数据的获得、标记、取样以及人工繁殖等操作而展开的麻醉镇定，以及用于水产品保活运输前期处理，为水产品加工或运输或相关的科研提供了极大的便利。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
实施例1
(1)天文草预处理
取天文草全草18g用自来水清洗3min，沥水15min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55℃的温度下，烘干40min，将天文草取出放置在4℃冷库中冷却30min，备用；
(2)天文草溶液的制备
将步骤(1)制得的天文草全草放入粉碎机中以转速400rmp粉碎5min，筛选过400目，倒入避光玻璃储存罐中，并按粉：酒精为1：100的重量比加入体积浓度为50％的酒精，室温条件下将其完全转移至搅拌器中，以转速为80rmp搅拌3min，转移至4℃冷库中静置5min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得天文草粗提液，备用；
(3)八角枫根预处理
将八角枫根6g用自来水清洗3min，沥水15min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55℃的温度下，烘干40min，将八角枫根取出放置在4℃冷库中冷却30min，备用；
(4)八角枫根溶液的制备
将步骤(3)制得的八角枫根放入粉碎机中以转速400rmp粉碎15min，八角枫根茎粉末按粉：酒精为1：100的重量比加入体积浓度为50％的酒精，将酒精加入反应器皿中，加入1/2倍50％酒精量氢氧化钠，震荡使其溶解，待氢氧化钠完全溶解后，加入八角根茎粉末，在60℃下回流搅拌反应2h，反应结束后，将样品置于分层漏斗中静置分层，除去底部甘油，分两次加入稍大于分层液的蒸馏水洗涤，静置样品分层后，取上层于收集罐中即可；将取得的上层液采用刮膜式分子蒸馏设备进行蒸馏30min，上层液每批进样200ml，预脱气温度为50℃，预脱气压力100pa，进料速率控制70ml/h，刮膜器转速为250rmp，预热温度60℃，蒸馏温度100℃，压力10pa，蒸馏物收集瓶收集分馏物，制得八角枫根粗提取液，备用；
复合溶液到安定剂的具体步骤为：
(5)复合溶液的制备
将步骤(2)制得的天文草粗提取液和步骤(4)制得的八角枫根粗提取液混合，并以转速为150rmp搅拌10min，室温静置1h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用。
(6)酶-超声提取液的制备
将步骤(5)制得的复合溶液加入酶活力为15U/m的纤维素酶，反应温度55℃，酶解时间120min,得到酶提取液。将所得的酶提取液放入超声波提取仪中进行超声波提取，搅拌速度为80rmp，超声波频率为40KHZ，温度为45℃，并提取2min后，停止15min，再继续提取20min，将提取液转移至离心机中，以3500rmp的转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(7)浓缩液的制备
将步骤(6)中制得的酶-超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065Mpa，水浴温度为75℃，浓缩至比重为1.2时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(8)安定剂的制备
将步骤(7)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18℃的冰箱内冷冻12h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45℃，干燥室压力为60Pa，干燥12h，制得复合粉末，即安定剂。
安定剂的使用方法：
以大菱鲆成鱼为例，将实施例1中的安定剂8g，倒入1000L配制好的海水中，在室温下以80rmp搅拌2min，制得安定诱导溶液，水温调节为16℃，连接曝气石向水中通入空气，将大菱鲆成鱼放入，3分钟后即可达到安定状态。
对照例1
与实施例1不同之处在于，本对照例采用丁香酚对大菱鲆成鱼安定的最佳效果配比40mg/L加入1000L养殖水中进行安定；
对照例2：
与实施例1不同之处在于，本对照例采用MS-222对大菱鲆成鱼安定的最佳效果配比50mg/L加入1000L养殖水中进行麻醉；
表1安定效果比较
指标 实施例1 对照例1 对照例2
平均失衡时间 2min30s 7min36s 5min40s
平均恢复时间 8min32s 31min25s 26min27s
48h后存活率 100％ 83.90％ 91.60％
安定效果主要取决于安定剂使动物进入安定状态所需要时间与安定消失时间，这两者时间越短说明安定效果越好，实施例1使大菱鲆完全失衡的时间仅需要2min30s，其他对照组所需的时间均大于5min，是实施例1处理后的大菱鲆平均恢复时间为8min32s,对照例1和对照例2平均恢复时间远远大于实施例1的平均恢复时间。完全恢复平衡暂养48h，测得存活率，实施例1可达100％，而对照组存活率均低于实施例1，其中对照例1存活率仅为83.90％。综述所示，实施例1的麻醉效果明显优于各对照组。
表2安定剂残留比较
采用上述实施例1与2组对照对大菱鲆进行了安定处理，分别在安定前、完全安定时、安定后48h对大菱鲆血液进行了残留检测。从表2可以得出，实施例1仅在完全安定时残留量为0.2μg/ml，48h后残留量为0，对照组均在完全麻醉时残留量达到最高水平，48h后残留量明显降低，但仍然存在残留，其中对照例2残留量最高，为16.9μg/ml。
表3大菱鲆肌糖原含量的变化
采用上述实施例1与2组对照组对大菱鲆进行了安定处理，分别在安定前、完全失衡时、恢复平衡时、平衡后48h对大菱鲆背部肌肉肌糖原含量进行了测定。从表3可以得出，各对照组肌糖原含量对大菱鲆安定完全失衡时其肌糖原含量的下降幅度均大于实施例1；在恢复平衡时，实施例1最为接近安定前肌糖原含量，而对照组肌糖原含量也在逐步上升；平衡后48h实施例1肌糖原含量已达到安定前正常值，而对照组肌糖原含量处于接近安定前值。综上所述，实施例1安定过程中肌糖原含量相对其他对照组较为稳定，且影响较小。
表4大菱鲆血清皮质醇含量的变化
采用上述实施例1与2组对照对大菱鲆进行了安定处理，分别在安定前、完全失衡、恢复平衡、平衡后48h时对大菱鲆血清皮质醇含量进行了测定。从表4可以得出，实施例1处理的大菱鲆其皮质醇含量从安定前的1596.68mg/g降低到完全失衡的1352.69mg/g，而对照例1与对照例2处理的含量分别降至1156.43mg/g和959.36mg/g。当恢复平衡时，与对照组相比，实施例1处理的含量最接近安定前。平衡后48h时，实施例1处理的含量已经达到正常值，而对照组处理的含量均向正常值靠近。由此说明，实施例1处理后对大菱鲆血液皮质醇含量的影响较小，使其含量趋于稳定，而对照组处理后对其皮质醇含量影响较大，而且稳定性较差。
从成本比较来看，1千克天文草现在市场价45元，1千克八角枫根是30元；本发明的18克天文草和6g八角枫根制备所得的安定剂为18克，而其使用的剂量为1.5×10-2g/L；换算后其成本每1千克天文草与0.33千克的八角枫根可制备安定剂1000克，成本价为60元左右，1000克本发明的产品可用于对6.67×104L水中的鱼类进行安定。
鱼类常用的安定剂有以下几种：
乙醚，剂量10-20ml/L，缺点：副作用大，不安全；
特戊醇：剂量5-6ml/L，缺点：副作用大，不安全；
尿烷：剂量5-40ml/L，缺点：副作用大，不安全；
MS-222(烷基磺酸盐又叫间位氨基苯甲酸乙酯),安定效果好，但价格昂贵，需从国外进口；5克售价是293元，其用量是1:10000到1:45000。
喹那啶：安定效果较好，剂量0.01～0.03ml溶于等量的丙酮内加入1L水中，但安定后鱼还保持某种程度的反射性反应，故不太适宜用于手术过程长的麻醉。
通过以上的比较，本发明的产品具有以下的优点：
1成本低，其成本远远低于进口的MS-222；
2安定效果好，本发明的实施例1通过大量的实验证明了本发明产品的安定效果优异；
3安全性高，相对于传统的安定剂乙醚，特戊醇或尿烷，本发明的产品安全性高。
实施例2
(1)天文草预处理
取天文草全草25g用自来水清洗3min，沥水15min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55℃的温度下，烘干40min，将天文草取出放置在4℃冷库中冷却30min，备用；
(2)天文草溶液的制备
将步骤(1)制得的天文草全草放入粉碎机中以转速450rmp粉碎12min，筛选过400目，倒入避光玻璃储存罐中，并按粉：酒精为1：100的重量比加入体积浓度为50％的酒精，室温条件下将其完全转移至搅拌器中，以转速为80rmp搅拌3min，转移至4℃冷库中静置5min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得天文草粗提液，备用；
(3)八角枫根预处理
将八角枫根8g用自来水清洗4min，沥水20min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55℃的温度下，烘干50min,将八角枫根取出放置在4℃冷库中冷却40min，备用；
(4)八角枫根溶液的制备
将步骤(3)制得的八角枫根放入粉碎机中以转速400rmp粉碎15min，八角枫根茎粉末按粉：酒精为1：100的重量比加入体积浓度为50％的酒精，将酒精加入反应器皿中，加入1/2倍50％酒精量氢氧化钠，震荡使其溶解，待氢氧化钠完全溶解后，加入八角根茎粉末，在65℃下回流搅拌反应2h，反应结束后，将样品置于分层漏斗中静置分层，除去底部甘油，分两次加入稍大于分层液的蒸馏水洗涤，静置样品分层后，取上层于收集罐中即可；将取得的上层液采用刮膜式分子蒸馏设备进行蒸馏30min，上层液每批进样200ml，预脱气温度为50℃，预脱气压力100pa，进料速率控制70ml/h，刮膜器转速为250rmp，预热温度60℃，蒸馏温度100℃，压力10pa，蒸馏物收集瓶收集分馏物，制得八角枫根粗提取液，备用；
复合溶液到安定剂的具体步骤为：
(5)复合溶液的制备
将步骤(2)制得的天文草粗提取液和步骤(4)制得的八角枫根粗提取液混合，并以转速为150rmp搅拌10min，室温静置1h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用。
(6)酶-超声提取液的制备
将步骤(5)制得的复合溶液加入酶活力为15U/m的纤维素酶，反应温度55℃，酶解时间120min,得到酶提取液。将所得的酶提取液放入超声波提取仪中进行超声波提取，搅拌速度为80rmp，超声波频率为40KHZ，温度为45℃，并提取2min后，停止15min，再继续提取20min，将提取液转移至离心机中，以3500rmp的转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(7)浓缩液的制备
将步骤(6)中制得的酶-超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065Mpa，水浴温度为75℃，浓缩至比重为1.2时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(8)安定剂的制备
将步骤(7)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18℃的冰箱内冷冻12h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45℃，干燥室压力为60Pa，干燥12h，制得复合粉末，即安定剂。
安定剂的使用方法：
以鲤鱼成鱼为例，称取实施例2中制得的复合粉末15g,倒入1000L清水中，在室温下以80rmp搅拌8min，制得安定剂溶液，水温调节为19℃，连接曝气石向水中通入空气，将鲤鱼成鱼放入，数分钟即可达到安定效果。
对照例3
与实施例2不同之处在于，本对照例采用丁香酚对鲤鱼安定的最佳效果配比加入1000L养殖水中进行安定；
对照例4
与实施例2不同之处在于，本对照例采用MS-222对鲤鱼安定的最佳效果配比加入1000L养殖水中进行安定；
表5安定效果比较
指标 实施例2 对照例3 对照例4
平均失衡时间 3min32s 10min54s 8min23s
平均恢复时间 10min58s 25min16s 30min35s
48h后存活率 98.50％ 89％ 92.10％
安定效果主要取决于安定剂使动物进入安定状态所需要时间与安定消失时间，这两者时间越短说明麻醉效果越好。从安定效果比较表可知，实施例2处理的鲤鱼完全失衡时间最短仅需要3min32s，其他对照组所需时间均较长。完全恢复平衡并暂养48h，测得存活率，实施例2高达98.5％，而对照组存活率均低于实施例2。因此，通过上述指标的综合对比，实施例2的麻醉效果明显优于各对照组。
表6安定剂残留比较
采用上述实施例2与2组对照组进行了安定处理，分别在安定前、完全安定时、安定后48h对鲤鱼血液进行了残留检测。从表6可以得出，实施例2仅在完全安定时残留量为10μg/ml，48h后则为零残留。对照组均在完全安定时残留量达到最高水平，48h后残留量明显降低，但仍然存在残留，而且残留量较大，其中对照组3残留量最高，为45.8μg/ml。综上所述，实施例2处理的鲤鱼在安定后48h残留量为0，因此，是安全可靠、天然绿色的安定剂。
实施例3
(1)天文草预处理
取天文草全草30g用自来水清洗3min，沥水15min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55℃的温度下，烘干40min，将天文草取出放置在4℃冷库中冷却30min，备用；
(2)天文草溶液的制备
将步骤(1)制得的天文草全草放入粉碎机中以转速400rmp粉碎5min，筛选过400目，倒入避光玻璃储存罐中，并按粉：酒精为1：100的重量比加入体积浓度为50％酒精，室温条件下将其完全转移至搅拌器中，以转速为80rmp搅拌3min，转移至4℃冷库中静置5min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得天文草粗提液，备用；
(3)八角枫根预处理
将八角枫根12g用自来水清洗3min，沥水15min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55℃的温度下，烘干40min,将八角枫根取出放置在4℃冷库中冷却30min，备用；
(4)八角枫根溶液的制备
将步骤(3)制得的八角枫根放入粉碎机中以转速400rmp粉碎15min，八角枫根茎粉末按粉：酒精为1：100的重量比加入体积浓度为50％的酒精，将酒精加入反应器皿中，加入1/2倍50％酒精量氢氧化钠，震荡使其溶解，待氢氧化钠完全溶解后，加入八角根茎粉末，在60℃下回流搅拌反应2h，反应结束后，将样品置于分层漏斗中静置分层，除去底部甘油，分两次加入稍大于分层液的蒸馏水洗涤，静置样品分层后，取上层于收集罐中即可；将取得的上层液采用刮膜式分子蒸馏设备进行蒸馏30min，上层液每批进样200ml，预脱气温度为50℃，预脱气压力100pa，进料速率控制70ml/h，刮膜器转速为250rmp，预热温度60℃，蒸馏温度100℃，压力10pa，蒸馏物收集瓶收集分馏物，制得八角枫根粗提取液，备用；
复合溶液到安定剂的具体步骤为：
(5)复合溶液的制备
将步骤(2)制得的天文草粗提取液和步骤(4)制得的八角枫根粗提取液混合，并以转速为150rmp搅拌10min，室温静置1h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用。
(6)酶-超声提取液的制备
将步骤(5)制得的复合溶液加入酶活力为15U/m的纤维素酶，反应温度55℃，酶解时间120min,得到酶提取液。将所得的酶提取液放入超声波提取仪中进行超声波提取，搅拌速度为80rmp，超声波频率为40KHZ，温度为45℃，并提取2min后，停止15min，再继续提取20min，将提取液转移至离心机中，以3500rmp的转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(7)浓缩液的制备
将步骤(6)中制得的酶-超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065Mpa，水浴温度为75℃，浓缩至比重为1.2时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(8)安定剂的制备
将步骤(7)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18℃的冰箱内冷冻12h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45℃，干燥室压力为60Pa，干燥12h，制得复合粉末，即安定剂。
无水保活运输前期安定剂使用方法:
以黄颡鱼成鱼为例，称取实施例3制得的复合粉末10g，倒入1000L清水中，在室温下以120rmp搅拌5min,制得安定剂溶液，水温调节为20℃，连接爆气石向水中通入空气，将黄颡鱼放入进行诱导安定，同时，进行梯度降温至0.5℃冷库内进行无水保活。具体降温速率如表7所示：
表7降温速率
降温梯度℃ 降温速率℃/h
20.0-10.0 1.5
10.0-5.0 0.6
5.0-0.5 0.5
对照例5：
与实施例3不同之处在于，本对照组不加入任何安定剂，只根据实施例3中的降温速率进行梯度降温至0.5℃，再充氧包装直接转移至0.5℃冷库内进行无水保活。
对照例6：
与实施例3不同之处在于，本对照例未进行梯度降温，将黄颡鱼直接放入制得的安定剂溶液中进行诱导休眠，待24h后完全休眠时，再充氧包装直接转移至0.5℃冷库内进行无水保活。
表8黄颡鱼呼吸频率变化
呼吸频率 3h(次/min) 6h(次/min) 12h(次/min) 24h(次/min)
实施例3 82 66 54 28
对照例5 79 70 60 46
对照例6 79 68 58 35
呼吸频率是鱼类状态以及机体代谢的重要表现特征，呼吸频率越低，其机体代谢越低，其休眠状态越深入。从表8可以得出，随着时间的延长，各组黄颡鱼呼吸频率均呈现下降趋势，其中实施例3降低速率最快，在24h时，其呼吸频率降至28次/min,而对照例5与对照例6呼吸频率高于实施例3，分别降至46次/min与35次/min。24h时，实施例3处理的黄颡鱼呼吸频率最低，机体代谢达到最低限，因此，休眠状态也达到最佳点。
表9黄颡鱼无水保活与成活率的关系
从表9可以得出，随着保活时间的延长，三组均呈现下降趋势，实施例3在60h开始下降至96％，保活72h时高达89％，而对照例5自36h时就开始下降，保活72h时，成活率仅为56％。保活72h时对照例6成活率为75％。由此可见，实施例3处理的黄颡鱼无水保活时间最长，成活率最高，明显优越于对照组。

Claims (8)

1.植物源安定剂，含有天文草提取物和八角枫根提取物。
2.如权利要求1所述的植物源安定剂，其特征在于，天文草提取物和八角枫根提取物的重量份数比为3-5:1-2。
3.如权利要求1所述的植物源安定剂的制备方法，是将天文草与八角枫根分别粉碎、提取粗提液，然后将各自的粗提取液混合，进行酶法-超声联合提取、浓缩，冷冻干燥，得安定剂。
4.如权利要求3所述的植物源安定剂的制备方法，粗提液的制备步骤如下： S1: 制备天文草粗提液
（1）天文草的预处理
将天文草全草18-30g用自来水清洗3-5min，沥水15-30min，将其置于电热鼓风干燥箱中，于55-65℃下烘干40-60min，然后取出放置在4℃冷库中冷却30-55min；
（2）天文草溶液的制备
将步骤（1）所得的冷却后的天文草全草以400-500rmp的转速粉碎10-15min，过400-500目筛，将所得的天文草粉倒入避光玻璃储存罐中，并按粉:酒精1-3：100-200的重量比加入体积浓度为50%的酒精，室温条件下将其完全转移至搅拌器中，以80-120rmp的转速搅拌3-5min，转移至4℃冷库中静置5-8min，过滤，制得天文草粗提液；
S2: 制备八角枫粗提液
（3）八角枫根预处理
将八角枫根6-12g用自来水清洗3-5min，沥水15-30min，将其放在电热鼓风干燥箱中，在55-65℃的温度下，烘干40-60min,将八角枫根取出放置在4℃冷库中冷却30-55min；
（4）八角枫根溶液的制备
将步骤(3)制得的八角枫根以400-500rmp的转速粉碎15-20min，得八角枫粉末；
取体积浓度为50%的酒精，酒精与八角枫粉末的重量比为100-200：1-3；然后加入1mol/L的氢氧化钠，氢氧化钠的体积为酒精体积的1/2，震荡使其溶解，待氢氧化钠完全溶解后，加入八角根茎粉末，在60-70℃下回流搅拌反应2-3h，反应结束后，将样品置于分层漏斗中静置分层，除去底部甘油，分两次加入稍大于分层液的蒸馏水洗涤，静置样品分层后，取上层液于收集罐中；将所取的上层液蒸馏30-40min，上层液每批进样200-300ml，预脱气温度为50-70℃，预脱气压力100-250pa，进料速率控制70-100ml/h，刮膜器转速为250-400rmp，预热温度60-90℃，蒸馏温度100-130℃，压力10-25pa，蒸馏物收集瓶收集分馏物，制得八角枫根粗提取液。
5.如权利要求4所述的植物源安定剂的制备方法，其特征在于，将步骤（2）制得的天文草粗提取液和步骤（4）制得的八角枫根粗提取液混合，并以转速为150-200rmp搅拌10-15min，室温静置1-2h，过滤，得复合溶液；
然后进行下述步骤：
(6)酶-超声提取液的制备
将步骤（5）制得的复合溶液加入酶活力为15-20U/m的纤维素酶，反应温度55-60℃，酶解时间120-150min，得到酶提取液；将所得的酶提取液超声波提取，搅拌速度为80-120rmp，超声波频率为40KHZ，温度为45-60℃，并提取20-30min后，停止15-20min，再继续提取20-30min，将提取液转移至离心机中，以3500-4500rmp转速进行分离，得超声提取液；
(7)浓缩液的制备
将步骤（6）中所得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065—0.088Mpa，水浴温度为75-90℃，浓缩至比重为1.2-1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液；
(8)安定剂的制备
将步骤(7)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18℃的冰箱内冷冻12-36h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45--50℃，干燥室压力为60-80Pa，干燥12-30h，制得复合粉末为安定剂。
6.如权利要求1所述的植物源安定剂在水产品中的应用。
7.如权利要求6所述的植物源安定剂在水产品中的应用，其特征在于，水产品为鲆鲽鱼类；鲤鱼、鲫鱼等淡水鱼类。
8.如权利要求1所述的植物源安定剂的使用方法，其特征在于，将安定剂8-15g，倒入1000L清水中，在室温下以80-120rmp搅拌2-5min，制得安定诱导溶液，将不同水产品置于安定诱导溶液中，进行诱导休眠。
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