CN110624019A - 天然植物源水产品镇静剂及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了天然植物源水产品镇静剂及其制备方法与应用，镇静剂包括以下重量份组分混合过滤得复合液，再经超声、浓缩、冷冻干燥制成粉末，萝芙木根粗提液6～12份、毛泡桐叶粗提液8～14份、栀子成熟果实粗提液8～16份、猴头菇固体粉末5～10份、黄芪固体粉末6～12份。本发明取用天然绿色植物，成本低廉、安全可靠，运用于水产品运输水体、检测暂养水体中，镇静效果优异，降低水产品应激反应，提高其免疫力，使水产品成活率增加，减少水产品损耗。

Description

天然植物源水产品镇静剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及水产品镇静剂领域，更具体地说，它涉及一种天然植物源水产品镇静剂及其制备方法，以及镇静剂在水产品中的应用。
背景技术
我国水产品资源丰富，种类繁多，具有高蛋白、低脂肪、营养丰富且平衡等特点，是现代人类摄取最重要的动物性蛋白质来源之一。由于水产品具有独特的风味以及优越的营养特征，国民更愿意选择食用水产品代替畜禽肉类提供人体所需蛋白质，因而，对其需求量逐年递增。
在水产品批量活体运输时，养殖户、商家均使用适量麻醉剂对其进行麻醉以降低应激反应，提高成活率，增加运输密度，延长保活时间。水产品从养殖到销售至终端客户，需要历经倒池、捕捞、转移、运输、包装、装卸、配送等各环节，商户均采用镇静剂降低上述操作所带来的应激，降低水产品新陈代谢，减少在运输途中因碰撞、挤压等对水产品体造成的伤害，从而提高运输存活率。此外在水产养殖中，还需要合理使用镇静剂，使水产品体安静，以降低取样、采血等操作时的应激反应，使操作得以顺利进行。
目前，水产品常用的镇静剂包括MS～222、丁香酚、盐酸苯佐卡因、液态二氧化碳等，使用这些镇静剂会使水产品存在以下安全问题，例如：致癌、致畸性、致突变等，造成一定的危害，影响人们的身体健康与生态环境，阻碍养殖产业的健康发展。市场上普通渔用镇静剂价格昂贵、稳定性差，例如：MS～222溶液应避免阳光直射，否则对水产品有较强的毒性；盐酸苯佐卡因对环境有严重的危害，并且易燃烧，对人体都致敏性等。在水产品的暂养、运输环节中，水产品往往会因为水质的污染而受到感染以及镇静剂的使用导致水产品的免疫力下降，甚至水产品死亡的结果。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种天然植物源镇静剂，该镇静剂应用于水产品养殖，运输，降低应激反应，提高水产品的免疫力，可使水产品成活率增加，减少水产品损耗，提高水产品的经济价值。与目前市面上的镇静剂相比较具有成本低廉、安全可靠、效果显著的优点。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
天然植物源水产品镇静剂，包括以下重量份组分混合过滤得复合液，再经超声、浓缩、冷冻干燥制成粉末，萝芙木根粗提液6～12份、毛泡桐叶粗提液8～14份、栀子成熟果实粗提液8～16份、猴头菇固体粉末5～10份、黄芪固体粉末6～12份。
通过实验可知，将萝芙木的干燥根提取液、毛泡桐的干燥叶提取液和栀子的干燥成熟果实提取液结合后，对水产品的镇静效果显著，且安全性高。
萝芙木的根从夹竹桃科萝芙木属植物萝芙木中采集，主要分布于中国西南、华南及台湾等省区，模式标本采自广东西江。具有镇静、降压、活血止痛、清热解毒的功效。用于高血压病，头痛，眩晕，失眠，高热不退;外用治跌打损伤，毒蛇咬伤。性味苦，寒。
毛泡桐的叶从玄参科植物毛泡桐上采集，主要分布在中国辽宁南部、河北、河南、山东、江苏、安徽、湖北、江西等地，通常栽培，西部地区有野生，海拔可达1800米。具有镇静、降压、镇咳、祛痰、平喘、抑菌的功效。
栀子的成熟果实从茜草科植物栀子上采集，主要分布在山东、河南、江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、香港、广西、海南、四川、贵州和云南。具有镇静安定、清肺止咳、清热凉血、抗菌消炎的功效。
黄芪属豆科草本植物，又名绵芪。多年生草本，高50～100厘米。主根肥厚，木质，常分枝，灰白色。茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。多年生草本，高50～100厘米。产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。
猴头菇属伞菌纲红菇目猴头菇属，主要分布在河南、河北、西藏、山西、甘肃、陕西、内蒙古、四川、湖北、广西、浙江等省，性平、味甘。具有利五脏，助消化；健胃，补虚，抗癌，益肾精之功效。
本发明还提供了天然植物源水产品镇静剂的制备方法，
（1）萝芙木根粗提液制备；
（2）毛泡桐叶粗提液制备；
（3）栀子成熟果实粗提液制备；
（4）猴头菇固体粉末制备；
（5）黄芪固体粉末制备；
（6）将步骤（1）至（5）制备所得液体或粉末按重量比6～12：8～14：8～16：5～10：6～12的比例进行混合，放入搅拌机中，以转速400～500rmp搅拌10～15min，室温静置1～2h，然后将搅拌液流经过滤孔径为50～100mm的滤膜进行过滤，得复合液；
（7）将步骤（6）所得复合溶液加入酶活力为15～20U/m的纤维素酶，反应温度55～60℃，酶解时间120～150min，得到酶提取液；将所得的酶提取液进行超声波提取，搅拌速度为80～120rmp/min，超声波频率为40～60KHZ，温度为45～60℃，提取20～30min后，停止15～20min，再继续提取20～30min，将提取液转移至离心机中，以1500～3000rmp转速进行分离，得超声提取液；
（8）将步骤（7）所得超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为0.065～0.088Mpa，水浴温度为75～90℃，浓缩至比重为1.2～1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液；
（9）将步骤（8）所述复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入18～24℃的冰箱内冷冻12～36h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷冻温度为-45～50℃，干燥室压力为60～80Pa，干燥12～30h，制得复合粉末为镇静剂。
进一步改进技术方案是，所述萝芙木根粗提液制备步骤包括：
（1）萝芙木的前处理：取萝芙木根清洗干净，室温下沥干，置于风干燥箱中，在40～50℃下烘干30～50min，放入储存罐中移置4℃冷库中冷却1～2h；
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理所得萝芙木根粉碎过200～400目筛，得萝芙木根粉末；
（3）浸泡处理：将步骤（2）制得的粉末倒入储存罐中，加入2～4L浓度为85%的乙醇，在15～25℃下浸泡8～12h；
（4）搅拌过滤处理：将步骤（3）制得的浸泡液放入搅拌机以400～500rmp的转速搅拌4～6min，然后将搅拌液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤；
（5）离心处理：将步骤（4）制得的滤液转移到管式离心机中，调节转速为1500～3500rmp，离心10～20min，得上清液；
（6）氮吹浓缩：将步骤（5）所得的上清液进行氮吹浓缩，氮吹1～2h以除去其中的乙醇，浓缩后的上清液用非极性大孔吸附树脂进行吸附，吸附在常温下操作，吸附时间为10～20h，然后用清水洗涤该树脂，再用乙醇进行洗脱，洗脱液分段收集到储液瓶中，收集到的洗脱液即为萝芙木根粗提液。
进一步改进技术方案是，所述毛泡桐叶粗提液制备步骤包括：
（1）毛泡桐叶前处理：取毛泡桐叶清洗干净，室温下沥干，置于干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min ,然后将毛泡桐叶放入储存罐中移至4℃冷库中冷却1～2h；
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理制得的毛泡桐叶粉碎过400～500目筛，得毛泡桐叶粉末，将粉末放在干燥箱中，在40～50℃的温度下干燥20～45min；
（3）浸泡离心：将步骤（2）干燥粉碎后的毛泡桐叶粉末过40～100目筛，放入储存罐中，用浓度为85%的乙醇在室温下浸泡24h后，取浸泡液放入管式离心机中以2000～2500rmp/min离心10～15min，然后取上清液，放置在储液瓶中静置30～40min即得毛泡桐叶粗提液。
进一步改进技术方案是，所述栀子成熟果实粗提液制备步骤包括：
（1）栀子成熟果实前处理：取栀子成熟果实清洗干净，室温下沥干，置于干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min ,之后将栀子成熟果实放入储存罐中移至4℃冷库中冷却25～45min；
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理制得的栀子成熟果实粉碎，放入干燥箱中，在40～50℃的温度下干燥15～20min；
（3）超声处理：将步骤（2）粉碎后的栀子成熟果实粉末过30～100目筛，放入储存罐中，室温下用水浸泡1～3h，得到浸泡液，将浸泡液放入超声池中超声15～30min，超声频率30～50kHz、功率为2500～3500W；
（4）离心处理：将步骤（3）制得的浸泡液放入管式离心机以1500～3000rmp/min离心15～30min，得到上清液；
（5）洗脱处理：将步骤（4）制得的上清液通过大孔吸附树脂进行吸附，上清液与大孔吸附树脂的体积比为8～10：1，之后先用清水清洗大孔吸附树脂柱,再用浓度为85%乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，洗脱时间15～25h，得到洗脱液；
（6）过滤：将步骤（5）制得的洗脱液倒入过滤孔径为40～100mm的滤膜进行过滤，滤液即为栀子成熟果实粗提液。
进一步改进技术方案是，所述猴头菇固体粉末制备步骤包括：
（1）猴头菇前处理：取猴头菇清洗干净，室温下沥干，放入干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～35min，将干燥的猴头菇粉碎过60～100目筛，得猴头菇粉末；
（2）蒸汽爆破：取步骤（1）制得的猴头菇粉末放入压力为1.5Mpa～2Mpa、温度为100～200℃蒸汽爆破装置中爆破2～6min，得爆破猴头菇粉；
（3）超声处理：将步骤（2）制得的爆破猴头菇粉按照固液比1：20的比例加入水浸泡1～2h，并在30～50℃放入功率为3000～4000W的超声仪器下超声10～15min，得固液混合物；
（4）蛋白酶解：将步骤（3）制得的固液混合物加入储存罐中，储存罐内温度调节为45～60℃，pH值为6.0～8.0，投入蛋白酶，蛋白酶重量占猴头菇粉重量的0.5～1.5%，持续搅拌1～2h进行蛋白酶解，得酶解液；
（5）减压浓缩：将步骤（4）制得的酶解液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤，过滤后低温减压浓缩至原体积的1/3～1/2，低温减压浓缩温度为50～80℃即得猴头菇浓缩液；
（6）干燥：将步骤（5）制得的猴头菇浓缩液经真空低温干燥后，真空低温干燥温度为60～90℃，得猴头菇固体粉末。
进一步改进技术方案是，所述黄芪固体粉末制备步骤包括：
（1）黄芪前处理：取黄芪清洗干净，室温下沥干，置于干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min，将黄芪取出放置在储存罐中移至4℃冷库中冷却25～45min；
（2）粉碎处理：将步骤（1）制得的黄芪粉碎过50～100目筛，得黄芪粉末；
（3）超声处理：将步骤（2）制得的黄芪粉末按照固液比1：100的比例加入水，在40～50℃下浸泡1～2h，然后在40～50℃条件下放入功率为2500～3500W的超声仪器中超声10～20min，得固液混合物；
（4）纤维素酶解：将步骤（3）制得的固液混合物加入反应罐内，反应罐内温度调节为50～60℃，Ph值为6.0～8.0，投入纤维素酶，纤维素酶重量占黄芪粉末重量的1%～2%，持续搅拌1～3h进行纤维素酶解，得酶解液；
（5）过滤处理：将步骤（4）制得的酶解液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤，过滤后将滤液放在反应罐内，移入干燥箱中，在60～100℃下进行干燥得固体粉末。
本发明天然植物源水产品镇静剂应用于水产品运输水体中。
本发明天然植物源水产品镇静剂应用于水产品检测暂养水体中。
本发明有益效果：
1、本发明所用原料从绿色植物中提取，安全可靠无毒害作用；
2、本发明用于水产品的养殖、运输环节，较目前市场上的镇静剂具有效果显著的特点，减少水产品的损耗；
3、本发明所用原材料从植物中提取，具有成本低，经济效益高的特点；
4、本发明镇静剂较市场上的镇静剂还添加了具有提高免疫力的黄芪和猴头菇，可提高水产品在暂养、运输环节中的免疫力，防止水产品感染，提高水产品的存活率。
具体实施方式
实施例1
由以下重量份组分组成：萝芙木根粗提液6份、毛泡桐叶粗提液10份、栀子成熟果实粗提液16份、猴头菇固体粉末5份、黄芪固体粉末12份。
实施例2
由以下重量份组分组成：萝芙木根粗提液12份、毛泡桐叶粗提液8份、栀子成熟果实粗提液8份、猴头菇固体粉末10份、黄芪固体粉末6份。
实施例3
由以下重量份组分组成：萝芙木根粗提液10份、毛泡桐叶粗提液14份、栀子成熟果实粗提液10份、猴头菇固体粉末8份、黄芪固体粉末10份。
实施例1-3具体制备步骤：
1、制备萝芙木根粗提液
（1）萝芙木的前处理：取萝芙木根用自来水清洗2～3min，于室温下放置在沥水架上沥水10～15min，将其置于容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，于40～50℃下烘干30～50min，然后取出放置在容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中放入4℃冷库中冷却1～2h。
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理所得萝芙木根放置于小型粉碎机中，以500～600rmp的转速粉碎5～10min，过200～400目筛，得萝芙木根粉末。
（3）浸泡处理：将步骤（2）制得的粉末倒入到容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中，加入2～4L浓度为85%的乙醇，在15～25℃下浸泡8～12h。
（4）搅拌过滤处理：将步骤（3）制得的浸泡液放入搅拌机以400～500rmp的转速搅拌4～6min，然后将搅拌液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤。
（5）离心处理：将步骤（4）制得的滤液转移到管式离心机中，调节转速为1500～3500rmp，离心10～20min，得上清液。
（6）氮吹浓缩：将步骤（5）所得的上清液进行氮吹浓缩，氮吹1～2h以除去其中的乙醇，浓缩后的上清液用非极性大孔吸附树脂进行吸附，吸附在常温下操作，吸附时间为10～20h，然后用清水洗涤该树脂，水的体积为1～2.5L，洗涤时间为0.5～3h，随后用乙醇进行洗脱，乙醇的体积为1～2L，洗脱时间为3～8h，洗脱液分段收集到储液瓶中，收集到的洗脱液即为萝芙木根的粗提液。
2、制备毛泡桐叶粗提液
（1）毛泡桐叶前处理：取毛泡桐叶用自来水清洗4～6min，于室温下放置在沥水架上沥水10～15min，将其置于容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min ,然后将毛泡桐叶取出放置在容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中移至4℃冷库中冷却1～2h。
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理制得的毛泡桐叶放入小型粉碎机中，以400～500rmp的转速粉碎15～20min，过400～500目筛，得毛泡桐叶粉末；将粉末放在容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在40～50℃的温度下干燥20～45min。
（3）浸泡离心：将步骤（2）干燥粉碎后的毛泡桐叶粉末过40～100目筛，放入容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中，然后用浓度为85%的乙醇1～2L在室温下浸泡24h后，取浸泡液放入管式离心机中以2000～2500rmp/min离心10～15min，然后取上清液，放置在储液瓶中静置30～40min即得毛泡桐叶的粗提液。
3、制备栀子成熟果实粗提液
（1）栀子成熟果实前处理：取栀子成熟果实用自来水清洗4～6min，于室温下放置在沥水架上沥水10～15min，然后将其放在容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min ,之后将栀子成熟果实取出放置在容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中移入4℃冷库中冷却25～45min。
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理制得的栀子成熟果实放入小型粉碎机中，以400～500rmp的转速粉碎15～20min，得栀子成熟果实粉末；然后放在容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在40～50℃的温度下干燥15～20min。
（3）超声处理：将步骤（2）粉碎后的栀子成熟果实粉末过30～100目筛后放入容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中，然后用1～2L水在室温下浸泡1～3h，得到浸泡液，将浸泡液放入超声池中超声15～30min（频率30～50kHz、功率为2500～3500W），
（4）离心处理：将步骤（3）制得的浸泡液放入管式离心机以1500～3000rmp/min离心15～30min，得到上清液。
（5）洗脱处理：将步骤（4）制得的上清液通过大孔吸附树脂进行吸附，上清液与大孔吸附树脂的体积比为8～10：1。之后先用1～2L的清水清洗所述大孔吸附树脂柱,再用1～2L浓度为85%乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，洗脱时间15～25h，得到洗脱液，
（6）过滤：将步骤（5）制得的洗脱液倒入过滤孔径为40～100mm的滤膜进行过滤，滤液即为栀子成熟果实的粗提液。
4、猴头菇固体粉末的制备
（1）取猴头菇用自来水清洗4～6min，于室温下放置在沥水架上沥水10～15min，然后放入容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～35min。将干燥的猴头菇放入小型粉碎机中，以400～500rmp的转速粉碎5～10min，过60～100目筛，得猴头菇粉末；
（2）蒸汽爆破：取步骤（1）制得的猴头菇粉末放入压力为1.5Mpa～2Mpa、温度为100～200℃蒸汽爆破装置中爆破2～6min，得爆破猴头菇粉；
（3）超声处理：将步骤（2）制得的爆破猴头菇粉按照固液比1：20的比例加入水浸泡1～2h，并在30～50℃放入功率为3000～4000W的超声仪器下超声10～15min。得固液混合物；
（4）蛋白酶解：将步骤（3）制得的固液混合物加入容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中，储存罐内温度调节为45～60℃，pH值为6.0～8.0，投入蛋白酶，蛋白酶用量占猴头菇粉重量比0.5～1.5%，持续搅拌1～2h进行蛋白酶解；得酶解液；
（5）减压浓缩：将步骤（4）制得的酶解液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤，过滤后低温减压浓缩至原体积的1/3～1/2，低温减压浓缩温度为50～80℃即得猴头菇浓缩液；
（6）干燥：将步骤（5）制得的猴头菇浓缩液经真空低温干燥后，真空低温干燥温度为60～90℃，得猴头菇固体粉末。
5、黄芪固体粉末的制备
（1）取黄芪用自来水清洗4～6min，于室温下放置在沥水架上沥水10～15min，然后将其放在容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min，将黄芪取出放置在容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的储存罐中移入4℃冷库中冷却25～45min。
（2）粉碎处理：将步骤（1）制得的黄芪放入小型粉碎机中，以400～500rmp的转速粉碎5～10min，过50～100目筛，得黄芪粉末。
（3）超声处理：将步骤（2）制得的黄芪粉末按照固液比1：100的比例加入水，在40～50℃下浸泡1～2h，然后在40～50℃条件下放入功率为2500～3500W的超声仪器中超声10～20min，得固液混合物。
（4）纤维素酶解：将步骤（3）制得的固液混合物加入容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的反应罐内，反应罐内温度调节为50～60℃，Ph值为6.0～8.0，投入纤维素酶，纤维素酶用量占黄芪粉末重量比为1%～2%，持续搅拌1～3h进行纤维素酶解，得酶解液。
（5）过滤处理：将步骤（4）制得的酶解液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤，过滤后将滤液放在容量为5L，尺寸为300mm×160mm×210mm的反应罐内，移入容量为54L内部尺寸为36cm×36cm×42cm的HGPF-9052型台式电热鼓风干燥箱中，在60～100℃下进行干燥得固体粉末。
6、复合液的制备
将步骤1、步骤2、步骤3、步骤4、步骤5制得的萝芙木根粗提取液、毛泡桐叶粗提取液、和栀子成熟果实粗提液、猴头菇固体粉末和黄芪固体粉末按比例混合，放入搅拌机中，以转速400～500rmp搅拌10～15min，室温静置1～2h，然后将搅拌液流经过滤孔径为50～100mm的滤膜进行过滤，得复合液。
7、超声提取液的制备
将步骤6制得的复合溶液加入酶活力为15～20U/m的纤维素酶，反应温度55～60℃，酶解时间120～150min，得到酶提取液；将所得的酶提取液进行超声波提取，搅拌速度为80～120rmp/min，超声波频率为40～60KHZ，温度为45～60℃，提取20～30min后，停止15～20min，再继续提取20～30min，将提取液转移至离心机中，以1500～3000rmp转速进行分离，得超声提取液。
8、浓缩液的制备
将步骤7所得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为0.065～0.088Mpa，水浴温度为75～90℃，浓缩至比重为1.2～1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液。
9、镇静剂的制备
将步骤8制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入18～24℃的冰箱内冷冻12～36h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷冻温度为-45～50℃，干燥室压力为60～80Pa，干燥12～30h，制得复合粉末为镇静剂。
以鲫鱼为例，三个容器分盛1000L配制好的海水，将实施例1、2、3制得的镇静剂各取6g，分别倒入各容器中，在室温下以80rmp搅拌4min，制得镇静诱导溶液，水温调节为16℃，连接曝气石向水中通入空气，将成鱼放入进行诱导安定，每个容器中各放入4条.
对照例4：
与实施例1不同之处在于，本对照例采用丁香酚对鲫鱼麻醉的最佳效果配比80mg/L加入1000L养殖水中进行麻醉；
对照例5：
与实施例1不同之处在于，本对照例采用间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）对鲫鱼麻醉的最佳效果配比180mg/L加入1000L养殖水进行麻醉；
表一镇定效果比较：
指标 实施例1 实施例2 实施例3 对照例4 对照例5
平均失衡时间 2min30s 2min28s 2min31s 5min15s 4min30s
平均恢复时间 8min15s 8min16s 8min13s 15min20s 12min5s
48h后存活率 100% 100% 100% 98% 95%
镇定效果主要取决于镇定剂使动物进入镇定状态所需要时间与镇定消失时间，这两者时间越短说明镇定效果越好，如表，实施例1的平均失衡时间、平均恢复时间、存活率均优于其他各组。
表二镇定剂残留比较
组别 镇定前残留 完全镇定时残留 镇定后48h残留
实施例1 0.20ug/ml 0ug/ml
实施例2 0.23 ug/ml 0ug/ml
实施例3 0ug/ml 0.19 ug/ml 0ug/ml
对照例4 49ug/ml 20ug/ml
对照例5 30ug/ml 8ug/ml
采用上述实施例1与2组对照对鲫鱼进行了镇定处理，分别在镇定前、完全镇定时、镇定后48h对鲫鱼血液进行了残留检测。从表二可以得出，实施例1仅在完全镇定时残留量为0.2ug/ml，48h后残留量为0，对照组均在完全镇定时残留量达到最高水平，48h后残留量明显降低，但仍然存在残留，其中对照例4残留量最高，为20μg/ml。
从成本比较来看，1千克萝芙木现在市场价35元，1千克毛泡桐现在市场价是10元，1千克黄芪现在市场价15元，1千克栀子现在市场价10元，1千克猴头菇现在市场价30元；本发明由以下重量份组分组成：萝芙木1kg、毛泡桐1.4kg、栀子1kg、猴头菇0.8kg、黄芪1kg。即萝芙木1kg、毛泡桐1.4kg、栀子1kg、猴头菇0.8kg、黄芪1kg按比例10：14：10：8：10可制备镇定剂1000克，成本价为102元左右，1000克本发明的产品可用于对2 .3×105L水中的鱼类进行镇定。目前鱼类常用的麻醉剂成品有以下几种：
鱼酚(丁香酚、MS-222)100g/瓶，鱼酚与的酒精比例1g:5ml ,1毫升鱼酚对应4升水，价格 450元/瓶，价格昂贵，并且麻醉的鱼量少；
鱼宝(MS-222)33元/100ml ,与酒精1:1稀释，15毫升再兑100斤左右的水，麻醉的鱼量相对较少。
通过以上的比较，本发明的产品具有以下的优点：
1、成本低，其成本远远低于市场上流通的成品；
2、用量少，无残留；与丁香酚和MS-222相比，本镇定剂在1000L养殖水中只需加入6g即可达到镇定效果；
3、镇定剂平均失衡时间、平均恢复时间、存活率均优于市场上流通的成品。

Claims (9)

1.天然植物源水产品镇静剂，其特征在于：包括以下重量份组分混合过滤得复合液，再经超声、浓缩、冷冻干燥制成粉末，萝芙木根粗提液6～12份、毛泡桐叶粗提液8～14份、栀子成熟果实粗提液8～16份、猴头菇固体粉末5～10份、黄芪固体粉末6～12份。
2.天然植物源水产品镇静剂的制备方法，其特征在于：
（1）萝芙木根粗提液制备；
（2）毛泡桐叶粗提液制备；
（3）栀子成熟果实粗提液制备；
（4）猴头菇固体粉末制备；
（5）黄芪固体粉末制备；
（6）将步骤（1）至（5）制备所得液体或粉末按重量比6～12：8～14：8～16：5～10：6～12的比例进行混合，放入搅拌机中，以转速400～500rmp搅拌10～15min，室温静置1～2h，然后将搅拌液流经过滤孔径为50～100mm的滤膜进行过滤，得复合液；
（7）将步骤（6）所得复合溶液加入酶活力为15～20U/m的纤维素酶，反应温度55～60℃，酶解时间120～150min，得到酶提取液；将所得的酶提取液进行超声波提取，搅拌速度为80～120rmp/min，超声波频率为40～60KHZ，温度为45～60℃，提取20～30min后，停止15～20min，再继续提取20～30min，将提取液转移至离心机中，以1500～3000rmp转速进行分离，得超声提取液；
（8）将步骤（7）所得超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为0.065～0.088Mpa，水浴温度为75～90℃，浓缩至比重为1.2～1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液；
（9）将步骤（8）所述复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入18～24℃的冰箱内冷冻12～36h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷冻温度为-45～50℃，干燥室压力为60～80Pa，干燥12～30h，制得复合粉末为镇静剂。
3.根据权利要求2所述的天然植物源水产品镇静剂的制备方法，其特征在于：所述萝芙木根粗提液制备步骤包括：
（1）萝芙木的前处理：取萝芙木根清洗干净，室温下沥干，置于风干燥箱中，在40～50℃下烘干30～50min，放入储存罐中移置4℃冷库中冷却1～2h；
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理所得萝芙木根粉碎过200～400目筛，得萝芙木根粉末；
（3）浸泡处理：将步骤（2）制得的粉末倒入储存罐中，加入2～4L浓度为85%的乙醇，在15～25℃下浸泡8～12h；
（4）搅拌过滤处理：将步骤（3）制得的浸泡液放入搅拌机以400～500rmp的转速搅拌4～6min，然后将搅拌液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤；
（5）离心处理：将步骤（4）制得的滤液转移到管式离心机中，调节转速为1500～3500rmp，离心10～20min，得上清液；
（6）氮吹浓缩：将步骤（5）所得的上清液进行氮吹浓缩，氮吹1～2h以除去其中的乙醇，浓缩后的上清液用非极性大孔吸附树脂进行吸附，吸附在常温下操作，吸附时间为10～20h，然后用清水洗涤该树脂，再用乙醇进行洗脱，洗脱液分段收集到储液瓶中，收集到的洗脱液即为萝芙木根粗提液。
4.根据权利要求2所述的天然植物源水产品镇静剂的制备方法，其特征在于：所述毛泡桐叶粗提液制备步骤包括：
（1）毛泡桐叶前处理：取毛泡桐叶清洗干净，室温下沥干，置于干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min ,然后将毛泡桐叶放入储存罐中移至4℃冷库中冷却1～2h；
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理制得的毛泡桐叶粉碎过400～500目筛，得毛泡桐叶粉末，将粉末放在干燥箱中，在40～50℃的温度下干燥20～45min；
（3）浸泡离心：将步骤（2）干燥粉碎后的毛泡桐叶粉末过40～100目筛，放入储存罐中，用浓度为85%的乙醇在室温下浸泡24h后，取浸泡液放入管式离心机中以2000～2500rmp/min离心10～15min，然后取上清液，放置在储液瓶中静置30～40min即得毛泡桐叶粗提液。
5.根据权利要求2所述的天然植物源水产品镇静剂的制备方法，其特征在于：所述栀子成熟果实粗提液制备步骤包括：
（1）栀子成熟果实前处理：取栀子成熟果实清洗干净，室温下沥干，置于干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min ,之后将栀子成熟果实放入储存罐中移至4℃冷库中冷却25～45min；
（2）粉碎处理：将步骤（1）前处理制得的栀子成熟果实粉碎，放入干燥箱中，在40～50℃的温度下干燥15～20min；
（3）超声处理：将步骤（2）粉碎后的栀子成熟果实粉末过30～100目筛，放入储存罐中，室温下用水浸泡1～3h，得到浸泡液，将浸泡液放入超声池中超声15～30min，超声频率30～50kHz、功率为2500～3500W；
（4）离心处理：将步骤（3）制得的浸泡液放入管式离心机以1500～3000rmp/min离心15～30min，得到上清液；
（5）洗脱处理：将步骤（4）制得的上清液通过大孔吸附树脂进行吸附，上清液与大孔吸附树脂的体积比为8～10：1，之后先用清水清洗大孔吸附树脂柱,再用浓度为85%乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，洗脱时间15～25h，得到洗脱液；
（6）过滤：将步骤（5）制得的洗脱液倒入过滤孔径为40～100mm的滤膜进行过滤，滤液即为栀子成熟果实粗提液。
6.根据权利要求2所述的天然植物源水产品镇静剂的制备方法，其特征在于：所述猴头菇固体粉末制备步骤包括：
（1）猴头菇前处理：取猴头菇清洗干净，室温下沥干，放入干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～35min，将干燥的猴头菇粉碎过60～100目筛，得猴头菇粉末；
（2）蒸汽爆破：取步骤（1）制得的猴头菇粉末放入压力为1.5Mpa～2Mpa、温度为100～200℃蒸汽爆破装置中爆破2～6min，得爆破猴头菇粉；
（3）超声处理：将步骤（2）制得的爆破猴头菇粉按照固液比1：20的比例加入水浸泡1～2h，并在30～50℃放入功率为3000～4000W的超声仪器下超声10～15min，得固液混合物；
（4）蛋白酶解：将步骤（3）制得的固液混合物加入储存罐中，储存罐内温度调节为45～60℃，pH值为6.0～8.0，投入蛋白酶，蛋白酶重量占猴头菇粉重量的0.5～1.5%，持续搅拌1～2h进行蛋白酶解，得酶解液；
（5）减压浓缩：将步骤（4）制得的酶解液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤，过滤后低温减压浓缩至原体积的1/3～1/2，低温减压浓缩温度为50～80℃即得猴头菇浓缩液；
（6）干燥：将步骤（5）制得的猴头菇浓缩液经真空低温干燥后，真空低温干燥温度为60～90℃，得猴头菇固体粉末。
7.根据权利要求2所述的天然植物源水产品镇静剂的制备方法，其特征在于：所述黄芪固体粉末制备步骤包括：
（1）黄芪前处理：取黄芪清洗干净，室温下沥干，置于干燥箱中，在40～50℃的温度下，烘干30～50min，将黄芪取出放置在储存罐中移至4℃冷库中冷却25～45min；
（2）粉碎处理：将步骤（1）制得的黄芪粉碎过50～100目筛，得黄芪粉末；
（3）超声处理：将步骤（2）制得的黄芪粉末按照固液比1：100的比例加入水，在40～50℃下浸泡1～2h，然后在40～50℃条件下放入功率为2500～3500W的超声仪器中超声10～20min，得固液混合物；
（4）纤维素酶解：将步骤（3）制得的固液混合物加入反应罐内，反应罐内温度调节为50～60℃，Ph值为6.0～8.0，投入纤维素酶，纤维素酶重量占黄芪粉末重量的1%～2%，持续搅拌1～3h进行纤维素酶解，得酶解液；
（5）过滤处理：将步骤（4）制得的酶解液倒入过滤孔径为60～100mm的滤膜进行过滤，过滤后将滤液放在反应罐内，移入干燥箱中，在60～100℃下进行干燥得固体粉末。
8.权利要求1所述的天然植物源水产品镇静剂应用于水产品运输水体中。
9.权利要求1所述的天然植物源水产品镇静剂应用于水产品检测暂养水体中。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN107951914A (zh) * 2017-12-08 2018-04-24 山东商业职业技术学院 植物源安定剂、制备方法及其应用和使用方法

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