CN107951900B - 用于急性肝损伤治疗的中药多糖及其制备方法 - Google Patents

用于急性肝损伤治疗的中药多糖及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于急性肝损伤治疗的中药多糖及其制备方法。其中的中药多糖为黄精多糖。动物试验表明，该中药多糖具有显著的抗炎、抗氧化作用，能在短时间内促进四氯化碳诱导的肝损伤的修复，有效解决了临床急性肝损伤治疗难的问题，并且没有任何毒副作用；该中药多糖提取方式为水提醇沉法，首先对影响提取率的液料比、温度和时间三个主要因素进行了单因素试验，再用响应面分析法对提取工艺进行优化，最后获得了工艺流程简单、提取率高的制备工艺，适合于工业化批量生产。治疗肝损伤的有效低毒药物前景非常广阔，很容易在临床上推广应用。

Description

用于急性肝损伤治疗的中药多糖及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种用于急性肝损伤治疗的中药多糖及其制备方法。
背景技术
肝损伤系各种肝脏疾病的病变结果，主要由药物、酒精、生物、病毒、环境等因素造成，其中物理性肝损伤、化学性肝损伤、酒精性肝损伤、环境性肝损伤及代谢性肝损伤等各种肝损伤为我国目前严重的多发常见病，是脂肪肝、肝硬化、肝腹水及肝癌的直接前期病因和成因。肝功能衰竭或其并发症可导致死亡，对人类健康造成重大威胁。鉴于此，研究开发具有良好治疗作用的肝损伤药物是非常迫切而必要的。
随着医药科技的飞速发展，治疗肝损伤的药物已经研究报道很多，主要包括中草药、生物药、化学药和微量元素等。但是一些研究表明，有些抗肝损伤的药物还会不可避免的产生生物毒性，对生命造成危险，况且靶向性给药也不强。可见，目前对于肝损伤的防治仍是一个严峻的课题。中药是我国传统医学的瑰宝，许多具有清热解毒、利湿退黄、活血化瘀、疏肝理气等功效的中药及中药成分，可以直接对肝损伤进行治疗，也不会产生非常明显的毒副作用，因此，这些药物的研究与开发对临床肝损伤的治疗具有重要的实际意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用于急性肝损伤治疗的中药多糖。
本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种用于急性肝损伤治疗的中药多糖的制备方法。
对于中药多糖，本发明采用的技术方案是，用于急性肝损伤治疗的中药多糖，该中药多糖为黄精多糖。
作为优选，黄精多糖的来源为炙黄精。
对于制备方法，本发明采用的技术方案是，黄精多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)初步粉碎：取炙黄精饮片，粉碎成药物粗粉。
(2)乙醇加热回流提取：取干燥的黄精粗粉，按药材∶80％乙醇以1∶3的质量比，在80℃条件下回流提取6h；过滤，弃乙醇提取液，取药渣干燥备用。
(3)水浴温浸：取干燥后的药渣，按药渣∶水以1∶10～20的质量比在73℃水浴浸提4h，过滤，取滤液。
(4)滤液浓缩：将上述温浸提取的滤液加热浓缩至原药材相对含量为1g/mL。
(5)乙醇沉淀：将浓缩后的滤液按滤液∶80％乙醇以1∶3的体积比醇沉12h；取沉淀物，挥干乙醇，超纯水定容至原药材相对含量为1g/mL。
此时黄精多糖的提取率为10％。
作为优选，在步骤(1)中，药物粗粉的细度为18～22目。
作为优选，在步骤(3)中，药渣∶水的质量比为1∶19。
黄精(Polygonatum sibiricum)首载于《名医别录》，是一味能补气养阴、健脾、润肺、益肾的常用中药材，具有药食两用的特点。黄精的主要化学成分为多糖、甾体皂苷、蒽醌类，其中(Polygonatum sibiricum polysaccharides，PSP)是黄精的主要功能成分，具有增强免疫、抗肿瘤、抗动脉硬化、抗氧化、调节造血、降血糖等广泛的药理学作用。
本发明经CCl4诱导大鼠肝损伤动物试验表明，CCl4模型组大鼠在CCl4腹腔注射24h后，血清中AST、ALT水平显著上升；肝脏病理学和组织学变化明显，肝脏肿大、发黄、有多量坏死点，肝细胞普遍变性、坏死或细胞核固缩溶解，大量炎细胞浸润。与模型组相比，中、高剂量的黄精多糖给药组血清上述生化水平显著降低，大鼠肝细胞受损程度明显减轻。可见，黄精多糖对CCl4诱导的肝损伤具有明显的保护作用。
本发明的有益效果是：
本发明的中药多糖的药材来源为具有药食两用特点的传统中药黄精，其具有显著的对抗CCl4诱导的肝损伤作用，可以在短时间内促进肝细胞结构及其功能的恢复，解决了临床急性肝损伤治疗难的问题，并且没有任何毒副作用；该中药多糖通过水提醇沉法制成，制备工艺简单，适于工业化批量生产。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明实施例的不同组别的大鼠肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)的变化。
图2是本发明实施例的不同组别的大鼠肝功能指标天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的变化。
图3是本发明实施例的不同组别的大鼠肝功能指标碱性磷酸酶(ALP)的活性的变化。
图4是本发明实施例的不同组别的大鼠肝功能指标直接胆红素(DBIL)的变化。
图5是本发明实施例的不同组别的大鼠肝功能指标总胆红素(TBIL)的含量的变化。
图中标记：相同字母表示差异不显著(P＞0.05)，不同字母表示差异显著(P＜0.05)；图中横轴A-E分别代表对照组、模型组、PSP低剂量组、中剂量组和高剂量组。
具体实施方式
1材料
1.1动物清洁级雄性SD大鼠，体重180～220g，5周龄。购自爱尔麦特科技有限公司，动物许可证号为SCXK(苏)2014～0007。
1.2供试品黄精，合肥深南中药饮片有限公司购买。本发明的中药多糖的制备工艺为：先将黄精饮片进行初步粉碎，制成20目左右的药物粗粉；取干燥的黄精粗粉，按药材∶80％乙醇以1∶3的质量比在80℃条件下回流提取6h，弃乙醇提取液，取药渣并干燥；取干燥后的药渣，按药渣∶水以1∶19的质量比在73℃水浴中浸提4h，过滤，取滤液；将上述滤液加热浓缩至原药材的相对含量为1g/mL；将浓缩后的滤液按滤液∶乙醇80％以1∶3的体积比醇沉12h，取沉淀物，挥干乙醇，超纯水定容至原药材的相对含量为1g/mL；将定容的溶液高压灭菌后，无菌灌装。
此时黄精多糖的提取率为10％。
1.3试剂葡萄糖(AR)，天津市大茂化学仪器供应站；蒽酮(AR)，美仑生物公司；浓硫酸(98％)，上海市振企化学试剂有限公司；乙醇(分析纯)，上海振兴98化工一厂；CCl4(AR)，汕头市西陇化工厂有限公司；血清生化试剂，库贝尔生物科技股份有限公司。
2实验方法
2.1动物分组与处理
将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄精多糖用药组，其中黄精多糖用药组按每天75、150、300mg·kg-1的给药剂量分为低、中、高剂量3个小组。黄精多糖用药组的低、中、高剂量3个小组每天分别按75、150、300mg·kg-1剂量的黄精多糖溶液灌胃，对照组和模型组则每天灌胃等量蒸馏水，连续7d。在末次给药后1h后，模型组与黄精多糖用药组按照1mL·kg-1腹腔注射50％CCl4大豆油溶液，对照组腹腔注射等量大豆油。
2.2样品采集与处理
CClL注射24h后，大鼠腹腔注射10％水合氯醛(3.5mL·kg-1)麻醉。心脏采血，置于非抗凝管中，离心(598g，10min)吸取上清液，采用全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性和直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)的含量。取不同大鼠肝右侧叶(具最大横截面，有门脉区和中央静脉区)的肝组织，固定于4％多聚甲醛中；经过洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、HE染色、脱水、透明、封片等步骤制成石蜡切片，于光学显微镜下进行组织学病变观察。
2.3数据分析
响应面结果采用Design-Expert 8.0软件进行分析。所有试验数据应用SPASS20.0进行单因素方差分析(One-way-ANOVA)，采用Duncan进行多重比较，以平均值±标准差(Mean±SD)表示，P＜0.05表示差异显著有统计学意义。
3结果
3.1对肝损伤大鼠肝功能指标的影响
在图1中，模型组ALP活性显著高于对照组和黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组(P＜0.05)，且对照组与黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组组之间无显著差异(P＞0.05)。
在图2中，模型组ALT活性显著高于对照组和黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组(P＜0.05)，低、中剂量小组ALT活性显著高于对照组和高剂量小组(P＜0.05)，高剂量小组ALT活性显著高于对照组(P＜0.05)。
在图3中，模型组AST活性显著高于对照组和黄精多糖给药组的中、高剂量小组(P＜0.05)，黄精多糖给药组的低、中剂量小组AST活性显著高于对照组和和黄精多糖给药组的高剂量小组(P＜0.05)。
在图4中，模型组DBIL含量显著高于对照组和黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组(P＜0.05)，而黄精多糖给药组的低、中剂量小组DBIL含量显著高于对照组。
在图5中，模型组TBIL含量显著高于对照组和黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组(P＜0.05)，黄精多糖给药组的低剂量小组TBIL含量显著高于对照组。
4总结
生化检查发现，模型组大鼠在CCl4腹腔注射24h后，血清中AST、ALT水平显著上升；模型组的5个肝功能指标与对照组相比均有显著差异(P＜0.05)，黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组相对于模型组均有改善作用，且黄精多糖给药组的中、高剂量小组改善效果较为明显。
肝脏病理学和组织学检查发现，模型组肝脏肿大，发黄，有多量坏死点；肝细胞普遍变性，坏死或细胞核固缩溶解，大量炎细胞浸润；与模型组相比，黄精多糖给药组的低、中、高剂量小组的血清生化水平显著降低，大鼠肝细胞受损程度明显减少。表明黄精多糖对CCl4诱导的肝损伤具有明显的保护作用，有望在肝损伤疾病方面成为新的治疗药物，甚至是首选药物。
以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。

Claims (5)

1.用于急性肝损伤治疗的中药多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）初步粉碎：取炙黄精饮片，粉碎成药物粗粉；
（2）乙醇加热回流提取：取干燥的炙黄精粗粉，按药材∶80%乙醇以1∶3的质量比，在80℃条件下回流提取6 h；过滤，取药渣并干燥；
（3）水浴温浸：取干燥后的药渣，按药渣∶水以1∶10～20的质量比在73℃水浴浸提4 h，过滤，取滤液；
（4）滤液浓缩：将上述温浸提取的滤液加热浓缩至原药材相对含量为1g/mL；
（5）乙醇沉淀：将浓缩后的滤液按滤液∶80%乙醇以1∶3的体积比醇沉12 h；取沉淀物，挥干乙醇，超纯水定容至原药材相对含量为1g/mL。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述粗粉的细度为18～22目。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述药渣∶水的质量比为1∶19。
4.如权利要求1所述方法所获得的黄精多糖在制备治疗急性肝损伤药物中的应用。
5.一种急性肝损伤治疗的黄精多糖，其由权利要求1所述方法制备得到。
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