CN107937596A - 基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法 - Google Patents
基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107937596A CN107937596A CN201711433654.3A CN201711433654A CN107937596A CN 107937596 A CN107937596 A CN 107937596A CN 201711433654 A CN201711433654 A CN 201711433654A CN 107937596 A CN107937596 A CN 107937596A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seqidno
- primer pair
- sequence
- primer
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定的引物组以及利用上述引物组进行花生真假杂种鉴定的方法。本发明可在一天时间内对最多可对多达384个样品进行68个位点的检测，相对于微卫星检测方法，效率提高50‑100倍。本方法是利用测序技术直接读取单核苷酸多态，结果直观，可靠，不存在样本间干扰问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其方法。
背景技术
花生(Arachis hypogaea L.)是世界第四大油料作物，也是热带、亚热带重要的油料作物，目前已在100多个国家种植，中国是世界最大的花生生产国。花生是严格的自花授粉作物，杂交育种过程中，需要人工完成母本花粉去雄，取父本花粉、授粉等全过程，过程中存在诸多不可控因素，致使杂交产生假杂种的几率很高。及时准确的鉴别杂交F1代的真假杂种是杂交育种成功的关键。传统真假杂交种鉴定工作主要通过田间性状观测和微卫星标记两种方法进行，但是受制于花生育成种间日益狭窄的遗传基础，以及亲本间越来越小的表型差异，这两种方法鉴别杂种的难度不断增大。
传统通过田间性状观测鉴定真假杂种的方案如下：将双亲和F1代杂交种种于同一区域，首先观察双亲间性状差异，锁定3-5个双亲间存在明显差异的性状，然后观察F1代杂交种的性状，如F1杂交种的性状与双亲存在明显差异，或者是双亲的中间表型，则认为F1杂交种为真。如F1杂交种的性状与母本完全一致，则认为F1杂交种为假。
利用微卫星标记检测鉴定真假杂种的方案如下：首选利用已经设计好的微卫星标记对双亲进行筛选，找到在双亲间存在差异，且双亲均为纯合的微卫星标记3-5个，然后利用筛选出的微卫星标记对F1代杂交种进行检测，如微卫星标记结果表现为双亲等位变异同时存在，则认为F1杂交种为真，如F1杂交种的条带与母本完全一致，则认为F1杂交种为假。
在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术存在以下问题：
1、田间性状观测的方法：田间性状观测受小环境、生长周期的影响很大，同时田间性状很多无法准确测定，这些都会影响结果鉴定的准确性。
2、微卫星检测方法：①花生微卫星标记检测流程复杂、通量低、极其费事费力，微卫星的检测流程包括：PCR、制胶、电泳、读带等过程。以1个杂交组合为例，花生材料间5％-10％的多态性计算，该杂交组合需要筛选50-60个标记才能获得足够的差异标记，然后再利用筛选出的标记对F1杂交种进行检测，整个实验需要两天时间才能完成；②微卫星标记的电泳检测分辨率低，检测结果不准确，由此导致的结果是无法准确判断杂合状态，导致鉴定结果准确度降低；③微卫星标记在PCR过程中存在滑峰现象，这样等位变异之间的条带存在重叠可能，从而无法准确判断电泳结果。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效、准确的基于单核苷酸多态性的花生杂种鉴定引物组及利用上述引物组进行鉴定的方法。
本发明采用如下技术方案：
引物的获得：
对18份国内育成花生品种进行全基因组重测序，单份样品测序数据量不少于30G。重测序数据利用BWA-mem(http://bio-bwa.sourceforge.net/)回贴到花生参考基因组上，利用GATK(https://software.broadinstitute.org/gatk/)进行单核苷酸变异鉴定。
鉴定出的单核苷酸变异位点集，通过最小等位变异频率>45％、单核苷酸变异位点位于染色体特异区域(100bp序列与花生基因组上任何其他序列都存在2个碱基以上差别的区域定义为染色体特异区)、均匀分布在基因组上为筛选条件，共筛选出单核苷酸变异位点176个。
对176个单核苷酸变异位点进行引物设计，并对引物特异性进行筛选，共获得染色体特异引物132对。从检测成本和实用角度综合考虑，同样按花生样本间5-10％的多样性原则，我们最终选取其中68对引物混合进行花生真假杂交种鉴定。
鉴定方法：
其包括如下步骤：
(1)对花生基因组DNA进行准确定量；
(2)以花生基因组DNA为模板，用引物混合液进行一轮PCR扩增，获得目标区域；
(3)将所获得的PCR扩增产物，进行产物纯化；
(4)在步骤(3)中获得的体系中，配置二轮PCR体系，进行二轮PCR扩增；
(5)对二轮PCR扩增产物进行纯化，完成测序文库的制备；
(6)将测序文库等质量混合后上机测序，获得测序数据。
(7)识别亲本间差异位点，并识别这些差异位点在F1代种子中的杂合度，位点杂合则认定为真杂种，杂合度低则认定为假杂种。
进一步的，所述步骤(1)用2.0 dsDNA对花生基因组DNA进行准确定量。花生基因组DNA提取采用BioTeke磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒(Cat#AU31111)。
进一步的，所述步骤(2)中，一轮PCR扩增体系为：引物混合液10μl；DNA用量100ng；3*M酶15μl；加水补足45μl；一轮PCR扩增程序为：95℃预变性3min；(95℃变性30s、60℃退火4min，72℃延伸30s)，17个循环；72℃延伸4min。
进一步的，所述引物混合液为68个引物对，SEQIDNo.1～SEQIDNo.136，每条引物取10μl，定容至10ml。
进一步的，所述步骤(3)包括如下步骤：
a)加入一轮PCR体积0.5倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，取上清转移至新的管中；
b)加入一轮PCR体积0.6倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
c)添加一轮PCR体积0.8倍的磁珠悬浮液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
d)加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净。
进一步的，所述步骤(4)中，二轮PCR扩增体系为：3*M酶10μl；Primer F；Primer R；H2O 18μl；二轮PCR扩增程序为：95℃预变性3min；(95℃变性15s、58℃退火15s、72℃延伸30s)，7个循环；72℃延伸4min。
进一步的，所述Primer F的序列如SEQIDNo.137所示，所述Primer R的序列如SEQIDNo.138所示。
进一步的，所述步骤(5)包括如下步骤：
A)加入0.8倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
B)添加等PCR体积的磁珠重悬液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
C)加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净。
D)加入23μl Elution Buffer，充分悬浮磁珠，室温静置2min以洗脱DNA。将磁珠用磁铁吸附，所得到的上清DNA溶液吸至一新的管中，获得测序文库。
进一步的，所述Elution Buffer为10mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5。所述磁珠为AMPure Beads
本发明的有益效果在于：
高效：本发明可在一天时间内对最多可对多达384个样品进行68个位点的检测，相对于微卫星检测方法，效率提高50-100倍(微卫星检测两天可完成80-100个样本的检测)，可直接获取亲本和F1杂交种基因型，省去标记筛选的时间。
准确：微卫星标记电泳检测分辨率低，同时存在滑峰现象，直接影响结果的准确性，本方法是利用测序技术直接读取单核苷酸多态，结果直观，可靠，不存在样本间干扰问题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步的阐述。
1、材料的选取，选取21份花生，提取花生样品的基因组DNA，采用BioTeke磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒(Cat#AU31111)。
2、以花生基因组DNA为模板，用引物混合液进行一轮PCR扩增，获得目标区域；
所述一轮PCR扩增体系：引物混合液10μl；DNA用量100ng；3*M酶15μl；加水补足45μl。
所述一轮PCR扩增体系：95℃3min；(95℃30s，60℃4min，72℃30s)，17个循环；72℃4min。
引物混合液：本发明共计136条引物，如表1所示，每条引物取10μl，定容至10ml。每条引物的浓度0.1μM。
表1引物组
3、将所获得的PCR扩增产物，进行产物纯化；
3.1、加入一轮PCR体积0.5倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，取上清转移至新的管中；
3.2、加入一轮PCR体积0.6倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
3.3添加一轮PCR体积0.8倍的磁珠悬浮液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
3.4加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净；
所述磁珠为：AMPure Beads
4、在步骤3中获得的含磁珠的体系中，配置二轮PCR体系，进行二轮PCR扩增；
所述PCR体系：3*M酶10μl；Primer F；Primer R；H2O 18μl
所述PCR程序：95℃3min；(95℃15s，58℃15s，72℃30s)，7个循环；72℃4min。
所述Primer F的序列如SEQIDNo.137所示：
SEQIDNo.137：
AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCG。
所述Primer R的序列如SEQIDNo.138所示：
SEQIDNo.138：
CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATxxxxxxxxGTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGA。其中“xxxxxxxx”为用于识别样品的唯一条形码Barcode，以区分样本。
本实施例中21个样本的Barcode分别为CGGCTAAA、TCCCCGTG、TCTGGCGC、AGCGATAG、CATCGTTT、TGAGACCA、ACGTCCTG、GTCAGTAC、TACCCTGC、CATTTCCT、TTGACTAT、AGAGTAGA、GTAAGGAG、ACTGCATA、CTAAAGTA、AAGGGCCT、GCGATCTA、CTAGGATA、TATATTAC、AGAGCTCT、GACGCTAT。
5、利用0.80倍的磁珠对二轮PCR扩增产物进行纯化，完成测序文库的制备；
5.1加入0.8倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
5.2添加等PCR体积的磁珠重悬液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
5.3加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净。
5.4加入23μl Elution Buffer，充分悬浮磁珠，室温静置2min以洗脱DNA。将磁珠用磁铁吸附，所得到的上清DNA溶液吸至一新的管中，获得测序文库(Elution Buffer为10mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5)；
6、将测序文库等质量混合后上机测序，获得测序数据。
7、识别亲本间差异位点，并识别这些差异位点在F1代种子中的杂合度，位点杂合则认定为真杂种，杂合度低则认定为假杂种。结果如表2所示。
表2鉴定结果
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，但并不限于此，本领域的技术人员很容易根据上述实施例领会本发明的精神，并作出不同的引申和变化，但只要不脱离本发明的精神，都在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 石家庄博瑞迪生物技术有限公司
<120> 基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法
<141> 2017-12-25
<160> 137
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 1
agtccaaact tgtcttattt g 21
<210> 2
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 2
tggaatatgt ttgaaatttt tgacaaact 29
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 3
atacttcctt tccatcctct a 21
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 4
atgactttga gcatggaggt ttt 23
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 5
aattgttaat gctcagagc 19
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 6
gaattggaaa aattggtcat cg 22
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 7
cgattggcat ccgatctctt c 21
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 8
tgtacccaaa accatccttt atg 23
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 9
tgccaagaga attaacaata t 21
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 10
tttgttgctt gatattaatt tga 23
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 11
gctagggagc taatggtcta a 21
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 12
aaagaaataa agaaggagcg cgt 23
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 13
taagatgagc gataatcact g 21
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 14
aactcggtac tgtctttcag ag 22
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 15
agaatcccgc taaagagtta 20
<210> 16
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 16
aaatggagga tctggacaat gt 22
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 17
aacatgcaaa gccctaaaag t 21
<210> 18
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 18
attcgcttcc atcttccttg ctt 23
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 19
acgtaactct gacgaggact 20
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 20
aacacctttg ccattagtac aca 23
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 21
cccacatttt tgtcctctag t 21
<210> 22
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 22
gggtgctaca tcattactcc ggt 23
<210> 23
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 23
acaggagtgt gttgaaaag 19
<210> 24
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 24
tctcttctcc aacgcaaatc c 21
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 25
tgacgtctga aggttgtaga a 21
<210> 26
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 26
acatgcctgt gtcatctttt tct 23
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 27
gaagagaaaa gcaagcaccg 20
<210> 28
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 28
ccttagaatc aatcggattt ggg 23
<210> 29
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 29
gctctatctt ctgcttcttc c 21
<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 30
accagaagag aggctacctt aca 23
<210> 31
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 31
tgcacaaata cttataaagg c 21
<210> 32
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 32
gcataattgc taactttggt agca 24
<210> 33
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 33
caccgtagaa agctttcgac a 21
<210> 34
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 34
accagcagag aaatgtgaac cat 23
<210> 35
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 35
ctgttgctgc tgtattgac 19
<210> 36
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 36
ttacaagctc caatgtgaac gtg 23
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 37
aaatcggtcg ttaattcgca ac 22
<210> 38
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 38
tgaagggttt tagtttgctc gat 23
<210> 39
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 39
cggtattaat tgcctccct 19
<210> 40
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 40
aggtcaagag ttcgatcttt ggt 23
<210> 41
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 41
cctttactgt tgggtcag 18
<210> 42
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 42
acgcacacca cacctgttaa ata 23
<210> 43
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 43
gcacaaagtt atgtcaagta at 22
<210> 44
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 44
tgctacctca tctaattctc tgttt 25
<210> 45
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 45
tgtcctgaaa attctatatc ggt 23
<210> 46
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 46
catgcatgag tcaccgtttc tt 22
<210> 47
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 47
ttaagaataa gaccggacac gc 22
<210> 48
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 48
tcctgtttca aattctttgc cat 23
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 49
tcagaagaat caaccgcttc 20
<210> 50
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 50
taggcaaaag ttaggcaccg tac 23
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 51
aaaaatagga tagacgtggc c 21
<210> 52
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 52
ttaactccaa gaaaagccta cgc 23
<210> 53
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 53
tcgcaccgca agtaaaat 18
<210> 54
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 54
acaggagtcc tacacactga ga 22
<210> 55
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 55
agacattatt ccacctgtgc a 21
<210> 56
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 56
ggtggatctt ttcaaagtgc ttc 23
<210> 57
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 57
tatcaagtgc agtagagtt 19
<210> 58
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 58
acaattcgtt cacacactcc tac 23
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 59
atgactgttt aacgtttggt 20
<210> 60
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 60
ggttaaaaag ccttctagct cg 22
<210> 61
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 61
aatcgattgg gctctaatt 19
<210> 62
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 62
gtaatccacg ggtagagtcg ga 22
<210> 63
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 63
ttctagaaac cggactaaac t 21
<210> 64
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 64
cagatgacta ccagatgtcc gac 23
<210> 65
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 65
agttggatcc ctataaaatt aag 23
<210> 66
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 66
aaggttccat taagcaaaag c 21
<210> 67
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 67
tggagatcaa atcacacttg a 21
<210> 68
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 68
ggaacttctc tccggacttc ttt 23
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 69
ctcctccttg atgtcgtcca 20
<210> 70
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 70
ccacgtaatg atctctccat cc 22
<210> 71
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 71
acgtgcccct aatgagtc 18
<210> 72
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 72
aggcctgaaa atcactcaca aa 22
<210> 73
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 73
cctacccaga ctgacaagag a 21
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 74
aagaagagag aaggagagag g 21
<210> 75
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 75
tggtcgattc aaccagat 18
<210> 76
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 76
cccactgcaa aacttcaaca ac 22
<210> 77
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 77
tgtcctcatg ctaaacgaa 19
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 78
agagagttgt gctggtactg ta 22
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 79
gcgggccttt agtaggtttc c 21
<210> 80
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 80
ggaacaatgc cttcctaacg at 22
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 81
atggttgaag cttcttgatg 20
<210> 82
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 82
tccttcaatt tgtaatcaaa cacaa 25
<210> 83
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 83
ttgaggattg tccaaacttt 20
<210> 84
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 84
cattgctggt ttgctagaag gtg 23
<210> 85
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 85
ggacgtgatg aggcagttc 19
<210> 86
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 86
cttgtgagaa gatggggtga ta 22
<210> 87
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 87
cccaccaaca acgtgataag tc 22
<210> 88
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 88
tggttggtta gctcactagt tc 22
<210> 89
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 89
acttccgttg tattgatttg a 21
<210> 90
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 90
cattgacctt ttatctcgcg ga 22
<210> 91
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 91
accaccattt ttaccccgat 20
<210> 92
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 92
ccttgtaaaa atgccaatgt cag 23
<210> 93
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 93
agttgttcta atttactcca acac 24
<210> 94
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 94
tcaaagcaat gcaatatgac caa 23
<210> 95
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 95
gcgcgtacac atccttgatt c 21
<210> 96
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 96
agatgcgcag attagtagag gag 23
<210> 97
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 97
aggttttgtc tctcaaatta ag 22
<210> 98
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 98
gcgacccatt tagacctagc ct 22
<210> 99
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 99
ggacagacaa tgaaagctgc t 21
<210> 100
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 100
cctcggtggg cattacaaaa gta 23
<210> 101
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 101
tgcgaagacc ttttgcttct t 21
<210> 102
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 102
cactcttaga agcatgccac atc 23
<210> 103
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 103
acaccatttg attaagttca tc 22
<210> 104
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 104
aaagagatag agtttcatgt gattat 26
<210> 105
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 105
ccgaattcgc taataaatct g 21
<210> 106
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 106
gtgccaaacg aatcaccatg ta 22
<210> 107
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 107
aatgacgaag aaggttgagg c 21
<210> 108
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 108
aaaaactccc acaaaagacc tcg 23
<210> 109
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 109
acattggtga gacgagttgg 20
<210> 110
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 110
tgacagtaac aatatatgca ctact 25
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 111
atgcattacc gtcgaattta t 21
<210> 112
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 112
tgaggtaatg aaacacgatt cac 23
<210> 113
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 113
acttcttgct tctttgagtt tc 22
<210> 114
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 114
agactcacaa gaacacaaaa gaa 23
<210> 115
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 115
tcttgtgtcc tgtgtactc 19
<210> 116
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 116
cgccgcacct ctgaattttt agt 23
<210> 117
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 117
gcgaggttgc atttgataga 20
<210> 118
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 118
ccgtcccctt ccatgaaaat cct 23
<210> 119
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 119
acacttaaac atcaagagcc c 21
<210> 120
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 120
cagactgtgt gttgtggatg aac 23
<210> 121
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 121
tgtaacatag aattatagac acaaag 26
<210> 122
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 122
actgagatac aacttgtgag aca 23
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 123
tatgcgtcac ttcaaacttt 20
<210> 124
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 124
agctcttggc aaggtatgag aa 22
<210> 125
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 125
acttagctct caatcccaat tc 22
<210> 126
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 126
accaaactgc aagcaaattt ctc 23
<210> 127
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 127
aggggtcttt tgggtagcct 20
<210> 128
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 128
ccccggatct cgaccaatat aac 23
<210> 129
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 129
caaaccgaac gattgtgtgt ct 22
<210> 130
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 130
ggtgaagaaa gcaacgaatc a 21
<210> 131
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 131
aaatagtcaa agatgggctg c 21
<210> 132
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 132
tacgcggata tcaacacaaa atc 23
<210> 133
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 133
acaatacggt taatatggtt aatatgt 27
<210> 134
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 134
gcatttcagg aatcgatagt ggg 23
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 135
atgagaggat ttcaggctgg c 21
<210> 136
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 136
cttttaagca ttttggcgcc aaa 23
<210> 137
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列(Arachis hypogaea)
<400> 137
aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct tccg 54
Claims (10)
1.一种基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定的引物组，其特征在于，其包括引物对1F/R、引物对2F/R、引物对3F/R、引物对4F/R、引物对5F/R、引物对6F/R、引物对7F/R、引物对8F/R、引物对9F/R、引物对10F/R、引物对11F/R、引物对12F/R、引物对13F/R、引物对14F/R、引物对15F/R、引物对16F/R、引物对17F/R、引物对18F/R、引物对19F/R、引物对20F/R、引物对21F/R、引物对22F/R、引物对23F/R、引物对24F/R、引物对25F/R、引物对26F/R、引物对27F/R、引物对28F/R、引物对29F/R、引物对30F/R、引物对31F/R、引物对32F/R、引物对33F/R、引物对34F/R、引物对35F/R、引物对36F/R、引物对37F/R、引物对38F/R、引物对39F/R、引物对40F/R、引物对41F/R、引物对42F/R、引物对43F/R、引物对44F/R、引物对45F/R、引物对46F/R、引物对47F/R、引物对48F/R、引物对49F/R、引物对50F/R、引物对51F/R、引物对52F/R、引物对53F/R、引物对54F/R、引物对55F/R、引物对56F/R、引物对57F/R、引物对58F/R、引物对59F/R、引物对60F/R、引物对61F/R、引物对62F/R、引物对63F/R、引物对64F/R、引物对65F/R、引物对66F/R、引物对67F/R、引物对68F/R；
所述引物对1F/R的序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；
所述引物对2F/R的序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示；
所述引物对3F/R的序列如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示；
所述引物对4F/R的序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示；
所述引物对5F/R的序列如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示；
所述引物对6F/R的序列如SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示；
所述引物对7F/R的序列如SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示；
所述引物对8F/R的序列如SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示；
所述引物对9F/R的序列如SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示；
所述引物对10F/R的序列如SEQIDNo.19和SEQIDNo.20所示；
所述引物对11F/R的序列如SEQIDNo.21和SEQIDNo.22所示；
所述引物对12F/R的序列如SEQIDNo.23和SEQIDNo.24所示；
所述引物对13F/R的序列如SEQIDNo.25和SEQIDNo.26所示；
所述引物对14F/R的序列如SEQIDNo.27和SEQIDNo.28所示；
所述引物对15F/R的序列如SEQIDNo.29和SEQIDNo.30所示；
所述引物对16F/R的序列如SEQIDNo.31和SEQIDNo.32所示；
所述引物对17F/R的序列如SEQIDNo.33和SEQIDNo.34所示；
所述引物对18F/R的序列如SEQIDNo.35和SEQIDNo.36所示；
所述引物对19F/R的序列如SEQIDNo.37和SEQIDNo.38所示；
所述引物对20F/R的序列如SEQIDNo.39和SEQIDNo.40所示；
所述引物对21F/R的序列如SEQIDNo.41和SEQIDNo.42所示；
所述引物对22F/R的序列如SEQIDNo.43和SEQIDNo.44所示；
所述引物对23F/R的序列如SEQIDNo.45和SEQIDNo.46所示；
所述引物对24F/R的序列如SEQIDNo.47和SEQIDNo.48所示；
所述引物对25F/R的序列如SEQIDNo.49和SEQIDNo.50所示；
所述引物对26F/R的序列如SEQIDNo.51和SEQIDNo.52所示；
所述引物对27F/R的序列如SEQIDNo.53和SEQIDNo.54所示；
所述引物对28F/R的序列如SEQIDNo.55和SEQIDNo.56所示；
所述引物对29F/R的序列如SEQIDNo.57和SEQIDNo.58所示；
所述引物对30F/R的序列如SEQIDNo.59和SEQIDNo.60所示；
所述引物对31F/R的序列如SEQIDNo.61和SEQIDNo.62所示；
所述引物对32F/R的序列如SEQIDNo.63和SEQIDNo.64所示；
所述引物对33F/R的序列如SEQIDNo.65和SEQIDNo.66所示；
所述引物对34F/R的序列如SEQIDNo.67和SEQIDNo.68所示；
所述引物对35F/R的序列如SEQIDNo.69和SEQIDNo.70所示；
所述引物对36F/R的序列如SEQIDNo.71和SEQIDNo.72所示；
所述引物对37F/R的序列如SEQIDNo.73和SEQIDNo.74所示；
所述引物对38F/R的序列如SEQIDNo.75和SEQIDNo.76所示；
所述引物对39F/R的序列如SEQIDNo.77和SEQIDNo.78所示；
所述引物对40F/R的序列如SEQIDNo.79和SEQIDNo.80所示；
所述引物对41F/R的序列如SEQIDNo.81和SEQIDNo.82所示；
所述引物对42F/R的序列如SEQIDNo.83和SEQIDNo.84所示；
所述引物对43F/R的序列如SEQIDNo.85和SEQIDNo.86所示；
所述引物对44F/R的序列如SEQIDNo.87和SEQIDNo.88所示；
所述引物对45F/R的序列如SEQIDNo.89和SEQIDNo.90所示；
所述引物对46F/R的序列如SEQIDNo.91和SEQIDNo.92所示；
所述引物对47F/R的序列如SEQIDNo.93和SEQIDNo.94所示；
所述引物对48F/R的序列如SEQIDNo.95和SEQIDNo.96所示；
所述引物对49F/R的序列如SEQIDNo.97和SEQIDNo.98所示；
所述引物对50F/R的序列如SEQIDNo.99和SEQIDNo.100所示；
所述引物对51F/R的序列如SEQIDNo.101和SEQIDNo.102所示；
所述引物对52F/R的序列如SEQIDNo.103和SEQIDNo.104所示；
所述引物对53F/R的序列如SEQIDNo.105和SEQIDNo.106所示；
所述引物对54F/R的序列如SEQIDNo.107和SEQIDNo.108所示；
所述引物对55F/R的序列如SEQIDNo.109和SEQIDNo.110所示；
所述引物对56F/R的序列如SEQIDNo.111和SEQIDNo.112所示；
所述引物对57F/R的序列如SEQIDNo.113和SEQIDNo.114所示；
所述引物对58F/R的序列如SEQIDNo.115和SEQIDNo.116所示；
所述引物对59F/R的序列如SEQIDNo.117和SEQIDNo.118所示；
所述引物对60F/R的序列如SEQIDNo.119和SEQIDNo.120所示；
所述引物对61F/R的序列如SEQIDNo.121和SEQIDNo.122所示；
所述引物对62F/R的序列如SEQIDNo.123和SEQIDNo.124所示；
所述引物对63F/R的序列如SEQIDNo.125和SEQIDNo.126所示；
所述引物对64F/R的序列如SEQIDNo.127和SEQIDNo.128所示；
所述引物对65F/R的序列如SEQIDNo.129和SEQIDNo.130所示；
所述引物对66F/R的序列如SEQIDNo.131和SEQIDNo.132所示；
所述引物对67F/R的序列如SEQIDNo.133和SEQIDNo.134所示；
所述引物对68F/R的序列如SEQIDNo.135和SEQIDNo.136所示。
2.一种根据权利要求1所述的引物组进行花生真假杂种鉴定的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
(1)对花生基因组DNA进行准确定量；
(2)以花生基因组DNA为模板，用引物混合液进行一轮PCR扩增，获得目标区域；
(3)将所获得的PCR扩增产物，进行产物纯化；
(4)在步骤(3)中获得的体系中，配置二轮PCR体系，进行二轮PCR扩增；
(5)对二轮PCR扩增产物进行纯化，完成测序文库的制备；
(6)将测序文库等质量混合后上机测序，获得测序数据；
(7)识别亲本间差异位点，并识别这些差异位点在F1代种子中的杂合度，位点杂合则认定为真杂种，杂合度低则认定为假杂种。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)用2.0dsDNA对花生基因组DNA进行准确定量。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，一轮PCR扩增体系为：引物混合液10μl；DNA用量100ng；3*M酶15μl；加水补足45μl；一轮PCR扩增程序为：95℃预变性3min；(95℃变性30s、60℃退火4min，72℃延伸30s)，17个循环；72℃延伸4min。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述引物混合液为SEQIDNo.1～SEQIDNo.136每条引物取10μl，定容至10ml。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)包括如下步骤：
a)加入一轮PCR体积0.5倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，取上清转移至新的管中；
b)加入一轮PCR体积0.6倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
c)添加一轮PCR体积0.8倍的磁珠悬浮液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
d)加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，二轮PCR扩增体系为：3*M酶10μl；Primer F；Primer R；H2O 18μl；二轮PCR扩增程序为：95℃预变性3min；(95℃变性15s、58℃退火15s、72℃延伸30s)，7个循环；72℃延伸4min。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述Primer F的序列如SEQIDNo.137所示。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)包括如下步骤：
A)加入0.8倍的磁珠，用移液器上下吹打混匀，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
B)添加等PCR体积的磁珠重悬液，重悬磁珠，静置2min，用磁力架吸附，至溶液澄清，去除上清；
C)加入100μl的80％乙醇，用磁力架反复在不同的两面吸附磁珠，使磁珠得到充分的洗涤。用磁力架吸附2min，去除上清，室温放置至乙醇挥发干净。
D)加入23μl Elution Buffer，充分悬浮磁珠，室温静置2min以洗脱DNA。将磁珠用磁铁吸附，所得到的上清DNA溶液吸至一新的管中，获得测序文库。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述Elution Buffer为10mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711433654.3A CN107937596B (zh) | 2017-12-26 | 2017-12-26 | 基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711433654.3A CN107937596B (zh) | 2017-12-26 | 2017-12-26 | 基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107937596A true CN107937596A (zh) | 2018-04-20 |
| CN107937596B CN107937596B (zh) | 2018-08-28 |
Family
ID=61939244
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711433654.3A Active CN107937596B (zh) | 2017-12-26 | 2017-12-26 | 基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107937596B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111020015A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-04-17 | 广东省农业科学院作物研究所 | 一种快速检测花生真假杂种的方法 |
| CN113736905A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-03 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测西瓜种子纯度的混样检测方法 |
| CN113755631A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-07 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测西葫芦种子纯度的混样检测方法 |
| CN113832250A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-24 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测玉米种子纯度的混样检测方法 |
| CN113832250B (zh) * | 2021-09-29 | 2024-06-07 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测玉米种子纯度的混样检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103060318A (zh) * | 2013-01-11 | 2013-04-24 | 山东省农业科学院作物研究所 | 基于谷子全基因组序列开发的ssr核心引物组及其应用 |
| CN105400777A (zh) * | 2015-09-18 | 2016-03-16 | 山东省花生研究所 | 栽培花生ssr分子标记引物组及其在品种鉴定中的应用 |
| CN105525012A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-04-27 | 山东省农业科学院生物技术研究中心 | 一种花生杂交种的分子鉴定方法 |
-
2017
- 2017-12-26 CN CN201711433654.3A patent/CN107937596B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103060318A (zh) * | 2013-01-11 | 2013-04-24 | 山东省农业科学院作物研究所 | 基于谷子全基因组序列开发的ssr核心引物组及其应用 |
| CN105400777A (zh) * | 2015-09-18 | 2016-03-16 | 山东省花生研究所 | 栽培花生ssr分子标记引物组及其在品种鉴定中的应用 |
| CN105525012A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-04-27 | 山东省农业科学院生物技术研究中心 | 一种花生杂交种的分子鉴定方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| XIAOJING ZHOU ET AL.: "Construction of a SNP-based genetic linkage map in cultivated peanut based on large scale marker development using next-generation double-digest restriction-site-associated DNA sequencing (ddRADseq)", 《BMC GENOMICS》 * |
| 刘伟等: "利用SNP标记鉴定荔枝杂种后代", 《分子植物育种》 * |
| 韩燕等: "利用特异性SNP位点鉴定花生杂交F1代真假杂种", 《山东农业科学》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111020015A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-04-17 | 广东省农业科学院作物研究所 | 一种快速检测花生真假杂种的方法 |
| CN111020015B (zh) * | 2019-11-20 | 2024-05-14 | 广东省农业科学院作物研究所 | 一种快速检测花生真假杂种的方法 |
| CN113736905A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-03 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测西瓜种子纯度的混样检测方法 |
| CN113755631A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-07 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测西葫芦种子纯度的混样检测方法 |
| CN113832250A (zh) * | 2021-09-29 | 2021-12-24 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测玉米种子纯度的混样检测方法 |
| CN113755631B (zh) * | 2021-09-29 | 2024-05-24 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测西葫芦种子纯度的混样检测方法 |
| CN113832250B (zh) * | 2021-09-29 | 2024-06-07 | 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 | 一种基于mSNP技术检测玉米种子纯度的混样检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107937596B (zh) | 2018-08-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cipriani et al. | Grapevine fingerprinting using microsatellite repeats | |
| CN107937596B (zh) | 基于单核苷酸多态性的花生真假杂种鉴定引物组及其鉴定方法 | |
| CN105256035B (zh) | 用于鉴别金华两头乌和杜洛克猪遗传背景的分子标记及其应用 | |
| CN109628628B (zh) | 水稻抗稻瘟病基因Pi2的SNP标记的开发和应用 | |
| KR20140039866A (ko) | 참외 계통 또는 품종의 구별을 위한 ｓｓｒ 프라이머 세트 및 이들의 용도 | |
| CN103667427B (zh) | 用于鉴定草莓种质资源炭疽病抗性的引物序列及其鉴定方法 | |
| CN107858447B (zh) | 用于鉴定桃花单瓣/重瓣性状的单核苷酸多态性标记位点、引物对、试剂盒及应用 | |
| CN106350601A (zh) | 高通量检测玉米轴色基因分型的方法及其试剂盒 | |
| CN113755630A (zh) | 一种基于mSNP技术检测胡萝卜种子纯度的混样检测方法 | |
| CN108118100B (zh) | 一种鉴定控制白菜叶片低温黄化性状形成的snp分子标记及其应用 | |
| CN113832251B (zh) | 用于检测番茄花叶病毒病抗性的snp位点组合及其应用 | |
| AU2020103461A4 (en) | Molecular marker of rice amylose content micro-control gene SSIIIb and application thereof | |
| CN113528702B (zh) | 与胡萝卜中番茄红素主效qtl紧密连锁的kasp标记及其引物和应用 | |
| CN114752702A (zh) | 一种与油菜钙含量性状QTL紧密连锁的分子标记BnCa-2C2及其应用 | |
| CN110564886B (zh) | 金花茶ssr标记引物及其在杂种鉴定中的应用 | |
| CN108546778B (zh) | 一种用于检测黄瓜抗白粉病性状的snp分子标记及其应用 | |
| CN113755631B (zh) | 一种基于mSNP技术检测西葫芦种子纯度的混样检测方法 | |
| CN113832250B (zh) | 一种基于mSNP技术检测玉米种子纯度的混样检测方法 | |
| CN107653338B (zh) | 一种影响牡丹品种和花色相关性状的分子标记及其应用 | |
| KR20160146034A (ko) | 초위성체 마커를 이용한 블루베리 품종식별 방법 | |
| CN110106281A (zh) | 六倍体I.trifida基因组特异SNP分子标记引物及应用 | |
| CN113667770A (zh) | 一种基于mSNP技术检测黄瓜种子纯度的混样检测方法 | |
| CN114058734B (zh) | 一种检测油菜品种的snp分子标记组合及其应用 | |
| CN113652501A (zh) | 一种基于mSNP技术检测大白菜种子纯度的混样检测方法 | |
| CN109055605B (zh) | 大籽猕猴桃est-ssr分子标记及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 050000 504, Building B (A12), Building 202, Jingshi Collaborative Innovation Demonstration Park, No. 769, Taihang South Street, High tech Zone, Shijiazhuang, Hebei Patentee after: SHIJIAZHUANG BREEDING BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 050000 room 611, Zone C, 6th floor, science and technology center, 136 Huanghe Avenue, high tech Zone, Shijiazhuang City, Hebei Province Patentee before: SHIJIAZHUANG BREEDING BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| CP02 | Change in the address of a patent holder |