CN107936074B - 一种泰万菌素的纯化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种泰万菌素的纯化方法，其特征在于：步骤包括：(1)将泰万菌素粗品使用溶剂溶解后加入石油醚进行结晶，过滤干燥得到泰万菌素结晶；其中溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃中的一种或几种；(2)将步骤(1)所得泰万菌素结晶加入异丙醇溶解，滴加石油醚进行再结晶，过滤干燥后得到高纯度的泰万菌素。本发明简单易操作，条件温和，产率较高，以结晶方式代替过柱，大大节约时间和洗脱剂，所得泰万菌素的纯度可达到95％以上。

Description

一种泰万菌素的纯化方法
技术领域
本发明涉及抗生素纯化技术领域，具体涉及一种泰万菌素的纯化方法。
背景技术
泰万菌素，化学名为3-O-乙酰-4”-O-异戊酰泰乐菌素，是泰乐菌素经耐热链霉菌生物转化而来的。泰万菌素在药效上大大高于泰乐菌素，在药物残留方面比泰乐菌素表现出很大的优势。泰万菌素对支原体、螺旋体、大部分格兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎球菌等)和部分格兰氏阴性菌有较强的抗菌活性。
目前国内的泰万菌素生产企业多采用酸提碱沉的方法提取泰万菌素，但在提取过程中产生较多杂质，结晶效果差，纯度一般仅有85％左右。中国专利文件CN104610403A公开了一种硅胶层析纯化泰万菌素的方法，虽然该方法得到的泰万菌素纯度可以达到97％，但是柱层析的时间较长，使用试剂量较大，工艺繁琐，成本较高。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种高效结晶提纯泰万菌素的方法，以克服现有泰万菌素精制工艺复杂、成本较高的问题。
本发明提供了一种泰万菌素的纯化方法，步骤包括：
(1)将泰万菌素粗品使用溶剂溶解后加入石油醚进行结晶，过滤干燥得到泰万菌素结晶；其中溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃中的一种或几种；
(2)将步骤(1)所得泰万菌素结晶加入异丙醇溶解，滴加石油醚进行再结晶，过滤干燥后得到高纯度的泰万菌素。
本发明的有益效果是：
1、为了解决现有技术中高纯度泰万菌素产品的工业生产难题，本发明提出了一种新的泰万菌素结晶提纯的方法，本方法所得酒石酸泰万菌素产品HPLC检测含量可达95％以上，适于配制高端制剂。
2、本发明的精制方法采用了较为简单的工艺，相对于过硅胶柱纯化方法成本大大降低，且能够方便地进行大规模工业化生产。工艺重复性好，所得产品质量稳定。
附图说明
图1是实施例1所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图2是实施例2所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图3是实施例3所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图4是实施例4所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图5是实施例5所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图6是实施例6所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图7是实施例7所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图8是实施例8所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图9是实施例9所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
图10是实施例10所得泰万菌素产品的液相检测图谱；
具体实施方式
本发明提供了一种泰万菌素的纯化方法，步骤包括：
(1)将泰万菌素粗品使用溶剂溶解后加入石油醚进行结晶，过滤干燥得到泰万菌素结晶；其中溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃中的一种或几种；
(2)将步骤(1)所得泰万菌素结晶加入异丙醇溶解，滴加石油醚进行再结晶，过滤干燥后得到高纯度的泰万菌素。
优选的，步骤(1)中，所述泰万菌素粗品与溶剂的质量体积比为1:1～1:6，所述溶剂与石油醚的体积比为1:0.2～1:1.5。；
优选的，步骤(2)中，所述泰万菌素结晶与异丙醇的质量比为1:2～1:5，所述异丙醇与石油醚的体积比为1:0.5～1:2.5。
在泰万菌素的重结晶过程中，溶剂比例对于提纯效果具有较大的影响，因此本发明中使用的溶剂比例是有一定的要求的，不在给定的溶剂比例下结晶得到的纯度达不到很好的效果。
优选的，步骤(1)中，溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃中的一种。
优选的，步骤(1)中，所述溶解温度为20～60℃，结晶温度为20～40℃。
优选的，步骤(2)中，所述溶解温度为40～60℃，所述结晶温度为20～55℃。
下面将结合具体实施例对本发明提供的一种泰万菌素的纯化方法予以进一步说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。所用到的泰万菌素粗品是由泰乐菌素经耐热链霉菌对其3位乙酰化，4”位异戊酰化得到的，纯度为83～84％。
实施例一
(1)将发酵得到的100g粗泰万菌素加600ml乙酸乙酯于温度20℃完全溶解后，滴加石油醚895ml至液体有少量混浊现象出现后停止滴加开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样74g。将得到的一次结晶样用300ml异丙醇40℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚580ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.1％，对应的液相检测结果如附图1所示，附图1中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表1所示。
表1附图1中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000031
Figure BDA0001524294690000041
实施例二
(2)将发酵得到的100g粗泰万菌素加400ml乙酸乙酯于温度60℃完全溶解后，搅拌降温至40℃，滴加石油醚605ml至液体有少量混浊现象出现后停止滴加开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样70g。将得到的一次结晶样用280ml异丙醇45℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚315ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.3％，对应的液相检测结果如附图2所示，附图2中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表2所示。
表2附图2中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000042
实施例三
(3)将发酵得到的100g粗泰万菌素加200ml乙酸乙酯于温度60℃完全溶解后，搅拌降温至40℃，滴加石油醚95ml至液体有少量混浊现象出现后停止滴加开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样78g。将得到的一次结晶样用310ml异丙醇60℃完全溶解后，降温至40℃，滴加石油醚605ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.4％，对应的液相检测结果如附图3所示，附图3中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表3所示。
表3附图3中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000051
实施例四
(4)将发酵得到的100g粗泰万菌素加400ml四氢呋喃于温度60℃完全溶解后，搅拌降温至20℃，滴加石油醚580ml至液体有少量混浊现象出现后停止滴加开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样71g。将得到的一次结晶样用150ml异丙醇60℃完全溶解后，降温至40℃，滴加石油醚73ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.1％，对应的液相检测结果如附图4所示，附图4中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表4所示。
表4附图4中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000052
Figure BDA0001524294690000061
实施例五
(5)将发酵得到的100g粗泰万菌素加400ml乙酸乙酯于温度40℃完全溶解后，45℃真空旋转浓缩至原有体积的1/4，搅拌降温至20℃后，滴加石油醚22ml至液体有少量混浊后开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样70g。将得到的一次结晶样用350ml异丙醇60℃完全溶解后，降温至55℃，滴加石油醚880ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.7％，对应的液相检测结果如附图5所示，附图5中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表5所示。
表5附图5中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000062
实施例六
(6)将发酵得到的100g粗泰万菌素加500ml乙酸丁酯于温度50℃完全溶解后，搅拌降温至20℃后，滴加石油醚660ml至有少量混浊现象出现开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样72g。将得到的一次结晶样用350ml异丙醇60℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚630ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.3％，对应的液相检测结果如附图6所示，附图6中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表6所示。
表6附图6中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000071
实施例七
(7)将发酵得到的100g粗泰万菌素加200ml乙酸乙酯和200ml四氢呋喃于温度40℃搅拌溶解后，降温至温度20℃后，滴加石油醚545ml至有少量混浊现象时开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体出现后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样73.5g。将得到的一次结晶样用280ml异丙醇45℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚465ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，搅拌至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.6％，对应的液相检测结果如附图7所示，附图7中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表7所示。
表7附图7中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000072
Figure BDA0001524294690000081
实施例八
(8)将发酵得到的100g粗泰万菌素加150ml乙酸丁酯和250ml四氢呋喃于温度40℃搅拌溶解后，降温至温度20℃后，滴加石油醚555ml至有少量混浊现象时开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体出现后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样72.5g。将得到的一次结晶样用270ml异丙醇45℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚470ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，搅拌至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.5％对应的液相检测结果如附图8所示，附图8中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表8所示。
表8附图8中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000082
实施例九
(9)将发酵得到的100g粗泰万菌素加300ml乙酸乙酯和100ml乙酸丁酯于温度40℃搅拌溶解后，降温至温度20℃后，滴加石油醚574ml至有少量混浊现象时开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体出现后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样75.5g。将得到的一次结晶样用280ml异丙醇45℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚475ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，搅拌至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.6％对应的液相检测结果如附图9所示，附图9中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表9所示。
表9附图9中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000091
实施例十
(10)将发酵得到的100g粗泰万菌素加100ml乙酸乙酯、100ml乙酸丁酯和100ml四氢呋喃于温度40℃搅拌溶解后，降温至温度20℃后，滴加石油醚525ml至有少量混浊现象时开始析出晶体，继续搅拌至有大量晶体出现后，抽滤分离得到一次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到一次结晶样68.5g。将得到的一次结晶样用275ml异丙醇40℃完全溶解后，降温至20℃，滴加石油醚415ml至液体有少量混浊后停止滴加开始结晶，搅拌至有大量晶体后，抽滤得到二次结晶湿粉，40℃真空干燥2h后得到二次结晶样泰万菌素，经高效液相色谱检测纯度达到95.1％，对应的液相检测结果如附图10所示，附图10中各峰对应的保留时间及相对峰面积如表10所示。
表10附图10中各峰对应的保留时间及相对峰面积
Figure BDA0001524294690000092
Figure BDA0001524294690000101
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种泰万菌素的纯化方法，其特征在于：步骤包括：
（1）将泰万菌素粗品使用乙酸乙酯溶解后加入石油醚进行结晶，过滤干燥得到泰万菌素结晶；其中，石油醚的加入方式为滴加；石油醚加至有少量混浊现象出现时停止；
（2）将步骤（1）所得泰万菌素结晶加入异丙醇溶解，滴加石油醚进行再结晶，过滤干燥后得到高纯度的泰万菌素。
2.如权利要求1所述的泰万菌素的纯化方法，其特征在于：步骤（1）中，所述泰万菌素粗品质量与乙酸乙酯体积之比为1:1~1:6g/mL，所述乙酸乙酯与石油醚的体积比为1: 0.2~1:1.5。
3.如权利要求1所述的泰万菌素的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中，所述泰万菌素结晶与异丙醇的质量比为1:2~1:5，所述异丙醇与石油醚的体积比为1: 0.5~1:2.5。
4.如权利要求1所述的泰万菌素的纯化方法，其特征在于：步骤（1）中，所述溶解温度为20~60℃，结晶温度为20~40℃。
5.如权利要求1所述的泰万菌素的纯化方法，其特征在于：步骤（2）中，所述溶解温度为40~60℃，所述结晶温度为20~55℃。
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