CN107929729B - 一种磷酸铝佐剂的制备方法 - Google Patents

一种磷酸铝佐剂的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107929729B
CN107929729B CN201711387856.9A CN201711387856A CN107929729B CN 107929729 B CN107929729 B CN 107929729B CN 201711387856 A CN201711387856 A CN 201711387856A CN 107929729 B CN107929729 B CN 107929729B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
aluminum
phosphate
aluminum phosphate
soluble
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201711387856.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107929729A (zh
Inventor
游哲荣
题靖
何迎枫
杨朝晖
刘建凯
周胜
曾虎
王智
沈林烽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lisure Science Suzhou Co ltd
Beijing Minhai Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Lisure Science Suzhou Co ltd
Beijing Minhai Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lisure Science Suzhou Co ltd, Beijing Minhai Biotechnology Co ltd filed Critical Lisure Science Suzhou Co ltd
Priority to CN202111057764.0A priority Critical patent/CN113975986A/zh
Priority to CN201711387856.9A priority patent/CN107929729B/zh
Publication of CN107929729A publication Critical patent/CN107929729A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107929729B publication Critical patent/CN107929729B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及一种磷酸铝佐剂的制备方法，所述方法包括磷酸铝溶液的配制、磷酸铝溶液的置换处理、磷酸铝溶液的重悬处理。本方法生产工艺易于放大、工艺操作简单、制造成本低，适用于大规模的工业生产。采用本方法可以实现磷酸铝佐剂的粒径均趋于稳定，并且pH值更加接近于人体体液的pH值，适用于一种或多种抗原的吸附，符合多种疫苗在制剂中的应用需求。

Description

一种磷酸铝佐剂的制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种磷酸铝佐剂的制备方法。
背景技术
磷酸铝佐剂(aluminium phosphate)是一种羟基磷酸铝复合物，在疫苗产品中应用于阳离子抗原的吸附。商品磷酸铝佐剂的等电点是5.0，在pH7.4的溶液中呈阴离子形式存在，磷酸基团对羟基的置换程度取决于反应物和制备的条件及其等电点。
铝佐剂具有高度的生物安全性。Stanley等通过同位素标记法证明肌肉注射的铝佐剂在机体内可以被有效的溶解吸收并最终通过尿液排出。此外，铝佐剂可通过多种机制增强抗原的免疫原性提高免疫应答。因此，铝佐剂在疫苗制剂工艺中被广泛应用，特别是含有蛋白或多糖抗原的疫苗中。美国授权的含铝佐剂的儿童用疫苗包括：白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗(DTaP)、b型流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎结合疫苗、乙肝疫苗、人乳头瘤疫苗。
在生理条件下，磷酸铝佐剂适用于吸附阳离子抗原，被应用于多价肺炎结合疫苗中。磷酸铝佐剂的制备，一般方法是将可溶性铝盐溶液和磷酸盐溶液以一定的比例混合。根据混合的方法不同，具体常见包括连续反应法和批量反应法。配制磷酸铝佐剂需要可溶性铝盐溶液，磷酸盐溶液，以及合适的置换缓冲溶液体系。
铝佐剂在生产和使用过程中经历了两种环境：佐剂吸附抗原的疫苗环境；皮下或者肌肉注射后的组织间液环境。佐剂吸附抗原的疫苗环境，决定了抗原的吸附率；而吸附率会影响机体对抗原的免疫应答反应。铝佐剂颗粒的大小是铝吸附制品质量评价的重要评价指标，并且可能影响到制品的免疫特性。在疫苗制剂中，典型的铝佐剂粒径大小＜10nm。因此，如何有效的控制磷酸铝佐剂的粒径大小是制备磷酸铝佐剂工艺中的重要环节。
发明内容
本发明目的是提供一种磷酸铝佐剂的制备方法。
本发明技术方案如下：
一种磷酸铝佐剂的制备方法，包括以下步骤：
1)磷酸铝溶液的配制
将碱性可溶性磷酸盐溶液以及可溶性铝盐溶液以一定的流速同时泵入到混合器中，并在所述混合器内充分混合，使反应过程中制得磷酸铝溶液pH恒定，波动偏差不大于±0.02；
其中，所述可溶性磷酸盐包括磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的一种或几种；所述碱性可溶性磷酸盐溶液由所述可溶性磷酸盐溶液和氢氧化钠溶液配制的具有一定酸碱缓冲能力的混合溶液；
所述可溶性铝盐包括硫酸铝钾，硝酸铝，氯化铝中的一种或几种；
2)磷酸铝溶液的置换处理
将步骤1)制得的磷酸铝溶液与置换溶液按体积比1：3-1：5混匀，将所得混合液自然沉降或离心后除去上清，收集磷酸铝沉淀；
3)磷酸铝溶液的重悬处理
将步骤2)所得磷酸铝沉淀样品灭菌，然后进行重悬处理；即得磷酸铝佐剂溶液。
上述制备方法中，
步骤1)使反应过程中制得磷酸铝溶液pH恒定在4.0-6.0。
步骤1)所述可溶性磷酸盐优选为磷酸三钠。
步骤1)所述可溶性铝盐优选为氯化铝。
步骤1)所述可溶性铝盐溶液浓度优选为0.15-0.25mol/L。
步骤1)所述可溶性磷酸盐溶液的浓度为0.1-0.4mol/L，优选为0.15-0.25mol/L。
步骤1)所述碱性可溶性磷酸盐溶液的pH范围11.5-12.5。
步骤1)通过恒流泵控制反应原料流速；进一步地，所述恒流泵，包括柱塞泵、螺杆泵、隔膜泵等，可使用两个恒流泵分别控制两种反应液的输送。
步骤1)控制所述反应液的流速为200-1000mL/min，优选400-600mL/min。
步骤1)所述混合器选自静态混合装置或动态混合装置。
进一步地，所述静态混合装置包括混合腔体，所述混合腔体的一端至少设有二个物料入口，另一端设有物料出口；所述混合腔体内设有一系列叠合在一起的微混合池叠片，每片微混合池叠片上均设有彼此串联的微小腔体(孔道)，使物料流经时在腔体内快速混合。
所述微混合池叠片的数量及所述微混合池叠片上微小腔体(孔道)的大小均可根据需要调节。
进一步地，所述微混合池叠片的数量为1-6对，和/或，所述微混合池叠片上微小腔体(孔道)的大小为0.1-0.8mm。
更进一步地，所述微混合池叠片的数量为4-6对，和/或，所述微混合池叠片上微小腔体(孔道)的大小为0.2mm。
更进一步地，所述微混合池叠片上还设有孔，其作用是使物料(反应液)高速通过腔体，产生涡流剪切力；连续剪切力有效降低颗粒的粒径大小。
进一步地，所述动态混合装置包括混合腔体，所述混合腔体的一端至少设有二个物料入口，另一端设有物料出口；所述混合腔体内还设有高速搅拌混匀装置，使物料流经时在腔体内快速混合。
所述高速搅拌混匀装置的搅拌转速均可根据需要调节，产生不同的剪切力进而控制佐剂的粒径大小。
进一步地，所述动态混合器搅拌转速为200-2000rpm。
更进一步地，所述动态混合器搅拌转速为400-800rpm。
进一步地，步骤1)制得的磷酸铝溶液与置换溶液的体积比为1：3-1：5。步骤2)所述置换溶液为注射用水、生理盐水、磷酸盐缓冲溶液中的一种，优选为生理盐水；所述生理盐水与本领域常规含义相同，优选为0.150mol/L NaCl的溶液；所述磷酸盐缓冲溶液中优选含有0.137mol/L NaCl、2.7mmol/L KCl、10mmol/L Na2HPO4、2mmol/LNaH2PO4。
步骤2)可采用自然沉降或离心的置换处理方法。
步骤2)所述置换比例，制得的磷酸铝溶液与所述置换溶液按体积比为1:2-1:5；所述置换次数为1-4次；优选地，生理盐水，置换体积比例1:3，置换次数3次。
步骤2)置换处理的目的主要是通过改变磷酸铝溶液缓冲体系，去除游离的磷酸根离子和铝离子，获得纯度高的磷酸铝样品。
步骤3)所述灭菌可采用本领域常规方法，例如中国药典中记载的灭菌方法。优选采用高压灭菌，温度121℃，时间为10-30min。
步骤3)所述重悬处理为将灭菌处理后的磷酸铝样品在搅拌速度200-800rpm条件下搅拌1-16h；优选在搅拌速度400-800rpm条件下搅拌4-16h。
具体地，可将步骤2)所得磷酸铝沉淀样品放入无热源的10L蓝盖瓶中，并加入磁力搅拌子，灭菌，然后进行重悬处理；所述搅拌优选采用磁力搅拌器。优选磁力搅拌子的大小为
Figure BDA0001516971290000041
本发明还包括实现上述磷酸铝佐剂制备方法的反应装置，包括连续反应装置。
所述连续反应装置，包括反应容器，分别盛放可溶性磷酸盐溶液及可溶性铝盐溶液的贮存容器，用于分别将可溶性磷酸盐溶液、可溶性铝盐溶液以恒定流速泵入反应容器的恒流泵，在所述恒流泵的输送下，可溶性磷酸盐溶液和可溶性铝盐溶液通过混合器汇入同一管道，然后进入所述反应容器；所述连续反应装置还包括用于检测所述反应容器中反应液pH值的pH计，以及用于搅拌所述反应容器中反应液的磁力搅拌子和/或磁力搅拌器。
进一步地，混合器包括静态混合装置，或动态混合装置。
进一步地，所述反应容器与泵之间，及所述贮存容器与泵之间通过管道连接(优选硅胶管道)。
在一个实施例方案中，连续反应装置是将可溶性铝盐和磷酸盐溶液以恒定速度共同滴加到反应容器中，在制备过程中维持磷酸铝溶液的pH恒定。
进一步地，所述反应容器可事先存放一定体积的可溶性铝盐溶液。
进一步地，所述反应容器与泵之间，及所述贮存容器与泵之间通过管道连接(优选硅胶管道)。
本发明还包括上述方法制备的磷酸铝佐剂(溶液)。
本发明制备的磷酸铝佐剂粒径可以有效的控制在3.5-7.5nm之间；等电点为4.0-6.0；进一步地，所述磷酸铝佐剂的等电点为5.0。
本发明还包括上述磷酸铝佐剂在制备疫苗中的应用。
本发明所制备的磷酸铝佐剂在特定的缓冲溶液体系中应用于吸附一种或者多种抗原。
所述疫苗优选为多价肺炎结合疫苗、白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗(DTaP)、b型流感嗜血杆菌结合疫苗、乙型肝炎DNA疫苗等。其中，优选多价肺炎结合疫苗，包括多种血清型肺炎链球菌荚膜多糖和载体蛋白共价连接形成的复合物，肺炎链球菌荚膜多糖血清型包括1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、18C、19F、19A、和23F，载体蛋白包括DT、TT、CRM197。
其中，优选所述疫苗中磷酸铝佐剂的浓度为0.1-0.4mg/mL。
进一步研究发现，所述疫苗中铝的最终吸附浓度在0.22-0.28mg/mL是磷酸铝佐剂的最佳浓度。
本发明采用不同pH和不同磷酸离子浓度下制备磷酸铝，对磷酸铝的配制工艺和后处理工艺进行了探索改良，以获得吸附能力和外观形态均良好的磷酸铝佐剂，从而满足多价肺炎结合疫苗等制备工艺的要求。
本发明对现有磷酸铝佐剂制备工艺进行改进，采用本发明方法可以实现磷酸铝佐剂表面电荷和粒径趋于稳定，且pH值更加接近于人体体液pH值，适用于一种或多种抗原的吸附，符合多种疫苗在制剂中的应用需求。
附图说明
图1为本发明连续反应装置示意图；
其中，反应容器1，贮存容器2，恒流泵3，混合器4，管道5。
图2为制备的磷酸铝粒径图谱。
图3为制备的磷酸铝佐剂在特定的缓冲溶液体系中应用于吸附一种抗原，吸附后样品粒径图谱。
图4为本发明静态混合装置结构示意图；其中，1为混合腔体；21和22为物料入口；3为物料出口；5、51、52、53为微混合池叠片；6、微混合池叠片上的孔；7、微混合池叠片上的微小腔体(孔道)。
图5为本发明动态混合器照片；其中，8为混合腔体；91和92为物料入口；10为物料出口。
具体实施方式
本发明主要涉及磷酸铝佐剂的配制方法、置换处理、重悬处理以及吸附能力评价等方面。更具体的来说下文所述的本发明针对所属领域中关于使磷酸铝佐剂表面电荷和粒径趋于稳定且适用于一种或多种抗原的吸附。
上面的公开一般性描述了本发明。通过下面的特定实施例可以更加完全的理解本发明。这些实例仅仅用于阐明目的并且不限定本发明的应用范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
以下所述的磷酸铝样品的表面电荷(surface potential)通过Zetasizer NanoZSP设备测定。
实施例1
如图1所示，一种用于制备磷酸铝佐剂的连续反应装置，包括反应容器1，分别盛放可溶性磷酸盐溶液及可溶性铝盐溶液的贮存容器2，用于分别将可溶性磷酸盐溶液、可溶性铝盐溶液以恒定流速泵入反应容器的恒流泵3，在所述恒流泵3的输送下，可溶性磷酸盐溶液和可溶性铝盐溶液通过混合器4汇入同一管道5，然后进入所述反应容器1；所述连续反应装置还包括用于检测所述反应容器中反应液pH值的pH计，以及用于搅拌所述反应容器中反应液的磁力搅拌子和磁力搅拌器。
进一步地，所述混合器为以下实施例2所述的静态混合装置，或实施例3的动态混合装置。
实施例2
如图4所示的一种混合器，其为静态混合装置，该静态混合装置包括混合腔体1，所述混合腔体1的一端至少设有二个物料入口(分别为物料入口21、22)，另一端设有物料出口3；所述混合腔体1内设有一系列叠合在一起的微混合池叠片7，每片微混合池叠片7上均设有彼此串联的微小腔体(孔道)8，使物料流经时在腔体内快速混合。
所述微混合池叠片的数量及所述微混合池叠片上微小腔体(孔道)的大小均可根据需要调节。
进一步地，所述微混合池叠片的数量为1-6对，和/或，所述微混合池叠片上微小腔体(孔道)的大小为0.1-0.8mm。
更进一步地，所述微混合池叠片的数量为4-6对，和/或，所述微混合池叠片上微小腔体(孔道)的大小为0.2mm。
图4A为静态混合装置结构示意图，图4B为微混合池叠片结构示意图(编号51、52、53)，图4C为微混合池叠片照片。
实施例3
如图5所示的一种混合器，其为动态混合装置。
该动态混合装置包括混合腔体8，所述混合腔体8的一端至少设有二个物料入口(分别为物料入口91、92)，另一端设有物料出口10；所述混合腔体8内设有高速搅拌混匀装置，使物料流经时在腔体内快速混合。
所述高速搅拌混匀装置的搅拌转速均可根据需要调节，产生不同的剪切力进而控制佐剂的粒径大小。
进一步地，所述动态混合器搅拌转速为200-2000rpm。
更进一步地，所述动态混合器搅拌转速为400-800rpm。
实验例1静态混合器磷酸铝溶液的配制方法研究
本实验例通过实施例2静态混合器制备磷酸铝溶液。
制备磷酸铝溶液的方法包括：在连续反应容器装置中，以恒定的流速400mL/min混合可溶性铝盐溶液和碱性可溶性磷酸盐溶液，在配制过程中维持反应体系的pH在5.0±0.1；利用蠕动泵以恒定的流速从反应容器溶液中泵出已制备的磷酸铝溶液样品，维持反应容器中恒定的溶液体积；连续收集制备条件稳定后的磷酸铝样品，使用磁力搅拌器继续搅拌1h混合均匀。
如图1所示，连续反应容器装置包括：反应容器(5L密闭容器)，用于分别将碱性可溶性磷酸盐溶液、可溶性铝盐溶液以恒定流速泵入反应容器的泵(本实施例采用的是螺杆泵)，硅胶管道，实施例2所述静态混合装置(叠片涡流孔径为0.2μm，叠片数量为4对)，实验室pH计(本实验例采用的是METTLER TOLEDO型号FE20)，磁力搅拌子(本实验例采用的是型号
Figure BDA0001516971290000091
)，磁力搅拌器(本实验例采用的是IKA型号RCT BS25)。
本实验例制备所述磷酸铝溶液的体积是20L。在制备过程中，磷酸根离子作为缓冲体系，使磷酸铝溶液的pH维持可以维持在某一恒定值。
实验材料：
可溶性铝盐溶液即氯化铝溶液，浓度0.15-0.25mol/L，体积10L。
碱性可溶性磷酸盐溶液，为由磷酸氢二钠溶液和氢氧化钠溶液配制的具有一定酸碱缓冲能力的混合溶液，pH为12.5，磷酸根离子的浓度为0.15-0.25mol/L，体积10L。
实验例2动态混合器制备磷酸铝溶液的方法研究
本实验例通过实施例3动态混合器制备磷酸铝溶液。
制备磷酸铝溶液的方法包括：在连续反应容器装置中，以恒定的流速600mL/min混合可溶性铝盐溶液和碱性可溶性磷酸盐溶液，在配制过程中维持反应体系的pH在6.0±0.1；利用蠕动泵以恒定的流速从反应容器溶液中泵出已制备的磷酸铝溶液样品，维持反应容器中恒定的溶液体积；连续收集制备条件稳定后的磷酸铝样品，使用磁力搅拌器继续搅拌1h混合均匀。
如图1所示，连续反应容器装置包括：用于分别将可溶性磷酸盐溶液、可溶性铝盐溶液以恒定流速泵入反应容器的泵(本实验例采用的是隔膜泵)，硅胶管道，动态混合装置(转速600rpm)，实验室pH计(本实验例采用的是METTLER TOLEDO型号FE20)，磁力搅拌子(本实验例采用的是型号
Figure BDA0001516971290000092
)，磁力搅拌器(本实验例采用的是IKA型号RCT BS25)。
本实验例制备所述磷酸铝溶液的体积是80L。在制备过程中，磷酸根离子作为缓冲体系，使磷酸铝溶液的pH维持可以维持在某一恒定值。
实验材料：
氯化铝溶液，浓度0.15-0.25mol/L，体积40L。
磷酸三钠溶液，浓度浓度0.15-0.25mol/L，体积40L。
实验例3磷酸铝样品置换处理方法研究
本实验例磷酸铝样品置换处理是指将制备的磷酸铝溶液通过离心或超滤的方法改变磷酸铝沉淀的缓冲体系，置换去除游离的磷酸根离子以及其他盐离子。
磷酸铝溶液样品1.1-1.3采用静态混合器连续磷酸铝的方法制备(同实验例1)；磷酸铝溶液样品1.4-1.6采用动态混合器连续磷酸铝的方法制备(同实验例2)。
将以上制得的磷酸铝溶液样品分别进行置换处理，即将磷酸铝溶液样品与置换溶液按照体积比1:3在容器中混匀、自然沉降后除去上清；重复3次，收集磷酸铝沉淀。
其中，样品1.1、1.4采用注射用水(S1)为置换溶液；
样品1.2、1.5采用生理盐水(S2，即0.150mol/L NaCl溶液)为置换溶液；
样品1.3、1.6采用磷酸盐缓冲溶液(S3)为置换溶液；所述磷酸盐缓冲溶液成分：0.137mol/L NaCl，2.7mmol/L KCl，10mmol/LNa2HPO4，2mmol/L NaH2PO4。
分别检测磷酸铝溶液在置换过程中三个阶段的pH，包括：1.制备容器中样品pH，2.置换前收集容器中样品pH，3.置换后收集容器中样品pH。结果见表1。
从表1中可以看出，相对其他置换溶液条件使用生理盐水处理的样品pH更加恒定不变，有利于维持磷酸铝佐剂结构和吸附能力的稳定性。
表1：磷酸铝佐剂样品的置换处理
Figure BDA0001516971290000111
表1中磷酸铝溶液制备阶段的pH是指所制得的磷酸铝溶液样品的等电点；置换阶段的pH是指所置换后所得的磷酸铝溶液样品的等电点。
实验例4磷酸铝佐剂的重悬处理研究
本实验例所述磷酸铝佐剂的重悬处理是指将置换后的磷酸铝样品高压灭菌处理，冷却后以不同的搅拌速度重悬处理。
1)磷酸铝溶液的配制方法同实验例3，样品编号1.5。
2)磷酸铝溶液的置换处理
将步骤1)制备的磷酸铝溶液与生理盐水按体积比1:3混匀，将所得混合液自然沉降后除去上清，重复3次，收集磷酸铝沉淀。
3)将步骤2)所得磷酸铝沉淀样品于121℃高压灭菌30min后，冷却至常温，指用磁力搅拌子重悬，搅拌速度200-1600rpm，搅拌时间1-16h。结果见表2。
从表2中可以看出，重悬处理的搅拌速度和搅拌时间是影响磷酸铝粒径的两个关键因素。其中，在搅拌速度为400-800rpm搅拌时间为4-16h条件下，磷酸铝佐剂的粒径可以有效的控制在7.5-10nm之间。
表2：磷酸铝佐剂样品的重悬条件
样品编号 搅拌速度(rpm) 搅拌时间(h) 粒径(nm)
1.5-1 200 1 12.562
1.5-2 200 4 11.337
1.5-3 200 16 10.287
1.5-4 400 1 14.556
1.5-5 400 4 9.424
1.5-6 400 16 9.573
1.5-7 800 1 12.281
1.5-8 800 4 9.742
1.5-9 800 16 8.688
1.5-10 1600 1 6.638
1.5-11 1600 4 6.246
1.5-12 1600 16 5.641
实验例5磷酸铝佐剂吸附评价
采用吸附蛋白的方法评价磷酸铝佐剂的吸附能力，其中铝佐剂吸附为磷酸铝佐剂在特定的缓冲溶液体系中应用于用来吸附一种或者多种抗原。
实验样品：实施例4样品编号为1.5-8的磷酸铝佐剂。实验方法：将一种或者多种抗原(本实验例使用的是破伤风类毒素蛋白)加入到特定的缓冲溶液中，再按表3加入不同浓度的磷酸铝佐剂，搅拌吸附，测定磷酸铝吸附率；吸附率％＝1-上清蛋白/总蛋白。
所述特定的缓冲溶液包含以下组分：最终浓度0.150mol/L的氯化钠溶液、最终浓度为5mmol/L且pH为6.1-6.5的琥珀酸盐溶液以及最终质量百分比为0.02％的聚山梨醇酯80溶液。
表3：磷酸铝佐剂吸附评价
Figure BDA0001516971290000121
Figure BDA0001516971290000131
从表3中可以看出，磷酸铝佐剂的吸附率和铝的最终浓度呈正相关关系；当铝的最终浓度高于0.28mg/mL时，吸附率增加缓慢达到了平台期；铝的最终浓度在0.22-0.28mg/mL是磷酸铝佐剂的最佳浓度。
吸附前磷酸铝粒径图谱见图2，吸附样品图谱见图3。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种磷酸铝佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)磷酸铝溶液的配制
将碱性可溶性磷酸盐溶液以及可溶性铝盐溶液以流速200-1000mL/min同时泵入到混合器中，并在所述混合器内充分混合，使反应过程中制得磷酸铝溶液pH恒定在4.0-6.0，波动偏差不大于±0.02；
所述碱性可溶性磷酸盐溶液的pH范围11.5-12.5；
所述混合器为动态混合装置；
所述动态混合装置包括混合腔体，所述混合腔体的一端至少设有二个物料入口，另一端设有物料出口；所述混合腔体内还设有高速搅拌混匀装置，使物料流经时在腔体内快速混合；
控制所述动态混合器搅拌转速为200-2000rpm；其中，所述可溶性磷酸盐包括磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的一种或几种；所述碱性可溶性磷酸盐溶液由所述可溶性磷酸盐溶液和氢氧化钠溶液配制的具有一定酸碱缓冲能力的混合溶液；
所述可溶性铝盐包括硫酸铝钾，硝酸铝，氯化铝中的一种或几种；
2)磷酸铝溶液的置换处理
将步骤1)制得的磷酸铝溶液与置换溶液生理盐水按体积比为1:2-1:5混匀，将所得混合液自然沉降或离心后除去上清，收集磷酸铝沉淀；
3)磷酸铝溶液的重悬处理
将步骤2)所得磷酸铝沉淀样品灭菌，在搅拌速度200-800rpm条件下搅拌1-16h进行重悬处理；即得磷酸铝佐剂溶液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述可溶性铝盐溶液浓度为0.15-0.25mol/L；和/或，
步骤1)所述可溶性磷酸盐溶液的浓度为0.1-0.4mol/L；和/或，
步骤1)控制所述反应液的流速为400-600mL/min。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述可溶性磷酸盐溶液的浓度为0.15-0.25mol/L。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述置换处理的置换次数为1-4次。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述重悬处理为将灭菌处理后的磷酸铝样品在搅拌速度400-800rpm条件下搅拌4-16h。
6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，控制所述动态混合器搅拌转速为400-800rpm。
CN201711387856.9A 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法 Active CN107929729B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111057764.0A CN113975986A (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法及装置
CN201711387856.9A CN107929729B (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711387856.9A CN107929729B (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111057764.0A Division CN113975986A (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法及装置

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107929729A CN107929729A (zh) 2018-04-20
CN107929729B true CN107929729B (zh) 2021-10-08

Family

ID=61941490

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711387856.9A Active CN107929729B (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法
CN202111057764.0A Pending CN113975986A (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法及装置

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111057764.0A Pending CN113975986A (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种磷酸铝佐剂的制备方法及装置

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN107929729B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109432418A (zh) * 2018-11-01 2019-03-08 大连理工大学 一种等电点可控的磷酸铝纳米佐剂及其制备方法
CN112138155B (zh) * 2019-06-28 2022-04-12 怡道生物科技(苏州)有限公司 一种复合佐剂系统及制备该佐剂的方法
CN111175348A (zh) * 2019-12-27 2020-05-19 深圳康泰生物制品股份有限公司 氢氧化铝佐剂等电点的检测方法及其在制备疫苗中的应用
CN114163045B (zh) * 2021-12-09 2024-02-20 潍坊科技学院 一种利用微混合器连续处理含镍废水的工艺
CN114177815B (zh) * 2021-12-09 2024-02-02 潍坊科技学院 一种微混合器及利用微混合器连续处理含镍废水的装置

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7520661B1 (en) * 2006-11-20 2009-04-21 Aeromed Technologies Llc Static mixer
CN103949170A (zh) * 2014-05-04 2014-07-30 聊城大学 一种分流汇流型混合器及混合方法
CN106729702A (zh) * 2016-12-28 2017-05-31 北京民海生物科技有限公司 一种磷酸铝佐剂及其制备方法与应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102188701A (zh) * 2010-03-12 2011-09-21 上海泽润生物科技有限公司 一种磷酸铝佐剂及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7520661B1 (en) * 2006-11-20 2009-04-21 Aeromed Technologies Llc Static mixer
CN103949170A (zh) * 2014-05-04 2014-07-30 聊城大学 一种分流汇流型混合器及混合方法
CN106729702A (zh) * 2016-12-28 2017-05-31 北京民海生物科技有限公司 一种磷酸铝佐剂及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107929729A (zh) 2018-04-20
CN113975986A (zh) 2022-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107929729B (zh) 一种磷酸铝佐剂的制备方法
AU2008339553B2 (en) Fermentation processes for cultivating Streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
CN106729702B (zh) 一种磷酸铝佐剂及其制备方法与应用
US8093034B2 (en) Fed batch culture methods for streptococci
EP2782594B1 (en) Method for preparation of aluminum hydroxyphosphate adjuvant
JP4971997B2 (ja) プラスミドｄｎａの精製方法
CN1709505B (zh) 多价细菌荚膜多糖-蛋白质结合物联合疫苗
CN107835821B (zh) 用于从微生物荚膜多糖分离蛋白质和其他杂质的方法
CN109576210A (zh) 一种快速分离外泌体的方法
CN102188701A (zh) 一种磷酸铝佐剂及其制备方法
JP3977257B2 (ja) 混合ワクチンの製造方法
CN104974343B (zh) 改性聚乙烯亚胺及其在制备基因转染载体试剂中的应用
CN106399206A (zh) 一种牛支原体培养基及制备方法
CN109504725A (zh) 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基
WO2017036143A1 (zh) 一种a群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗及其制备方法
CN112295476A (zh) 静态微混合芯片装置、磷酸铝佐剂的制备方法及其应用
CN116970095A (zh) 一种肺炎球菌荚膜多糖的制备方法
CN101254207A (zh) 补铁剂脂质体铁及其制备方法
CN114106210A (zh) 一种23价肺炎球菌多糖疫苗的生产工艺
CN106635895A (zh) 一种绵羊肺炎支原体低血清高效培养基及其制备方法
EP3233927B1 (en) Purification of streptococcal capsular polysaccharide
RU2770877C1 (ru) Способ получения антигенной конъюгированной субстанции гемофильного типа b микроба для создания вакцинных препаратов
CN105755075A (zh) 一种高纯度白喉类毒素原液的制备方法
RU2089215C1 (ru) Способ получения менингококкового серогруппы в липоолигосахарида
CN116271004A (zh) 一种山药多糖脂质体纳米免疫增强佐剂、应用及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant