CN111175348A - 氢氧化铝佐剂等电点的检测方法及其在制备疫苗中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例公开一种氢氧化铝佐剂等电点的检测方法及其在制备疫苗中的应用，所述方法包括以下步骤：取30体积份待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液20‑25体积份作为稀释液；另取1‑3体积份氢氧化铝佐剂样品，加入15‑20体积份所述稀释液，按照稀释比例为1∶5‑1∶30稀释所述样品并混匀；取10‑20体积份稀释后的样品置于自动滴定仪中，在搅拌条件下，用氢氧化钠滴定溶液进行滴定至多个pH值梯度；利用自动滴定仪将样品泵入样品池中，用Zeta电位仪自动测定每个pH值梯度对应的Zeta电位，根据所述梯度对应的Zeta电位计算出氢氧化铝佐剂的等电点。本发明操作简便、可显著提高取样均匀性、有效降低测量误差、准确反映氢氧化铝佐剂等电点大小。
Description
技术领域
本发明涉及疫苗制剂领域，尤其涉及一种氢氧化铝佐剂等电点的检测方法及其在制备疫苗中的应用。
背景技术
铝佐剂以其对抗原的高吸附能力优势，成为兽用疫苗和人用疫苗上应用最广泛的佐剂。目前使用广泛的铝佐剂包括氢氧化铝佐剂和磷酸铝佐剂两种。
氢氧化铝佐剂作为一种主要的铝佐剂，其吸附能力是疫苗质量标准中最重要的指标之一，而其吸附能力与其对抗原的吸附率密切相关。等电点是指一个分子或者表明不带电荷时的pH值。氢氧化铝佐剂的等电点大小直接反映了其与抗原结合能力的强弱。因此，对氢氧化铝佐剂的等电点进行测定可有效反映其与抗原吸附的能力。
然而，发明人在实施本发明的过程中发现，由于氢氧化铝佐剂易沉降聚集的特性，容易取样不均而导致测定误差较大。
发明内容
本发明所解决的技术问题是，提供一种氢氧化铝佐剂的等电点检测方法，该方法操作简便、可显著提高取样均匀性、有效降低测量误差、准确反映氢氧化铝佐剂等电点大小。
本发明进一步所解决的问题是，提供一种氢氧化铝佐剂的等电点检测方法在制备疫苗中的应用，该应用操作简便、可显著提高取样均匀性、有效降低测量误差、准确反映氢氧化铝佐剂等电点大小。
为了解决上述技术问题，本发明公开了以下方案：
一种氢氧化铝佐剂等电点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
取30体积份待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液20-25体积份作为稀释液；
取1-3体积份氢氧化铝佐剂样品，加入15-20体积份所述稀释液，按照稀释比例为1∶5-1∶30稀释所述样品并混匀；
取10-20体积份稀释后的样品置于自动滴定仪中，在搅拌条件下，用氢氧化钠滴定溶液进行滴定至多个pH值梯度；
利用自动滴定仪将样品泵入样品池中，用Zeta电位仪自动测定每个pH值梯度对应的Zeta电位，根据所述梯度对应的Zeta电位计算出氢氧化铝佐剂的等电点。
在一些可能的实施方式中，滴定以pH值增加0.3-1.0为1个梯度单位，以样品原pH值为滴定起点，以pH值10.5-12.5为滴定终点。
在一些可能的实施方式中，滴定以pH值增加0.4-0.6为1个梯度单位，以样品原pH值为滴定起点，以pH值10-11为滴定终点。
在一些可能的实施方式中，稀释比例为1∶10-1∶25。
在一些可能的实施方式中，初始滴定的稀释样品体积为10-20mL。
在一些可能的实施方式中，所述氢氧化铝滴定溶液的浓度为0.01-0.05mol/L与0.1-0.5mol/L。
在一些可能的实施方式中，所述氢氧化铝滴定溶液的浓度为0.04mol/L与0.4mol/L的氢氧化钠滴定溶液进行滴定。
在一些可能的实施方式中，所述计算出氢氧化铝佐剂的等电点包括：
绘制pH值与Zeta电位的关系曲线，所述Zeta电位为0时对应的pH值即为该氢氧化铝佐剂的等电点。
在一些可能的实施方式中，所述Zeta电位仪为以电泳光散射技术(ELS)为原理基础的Zeta电位仪。
在一些可能的实施方式中，所述待测的氢氧化铝佐剂为采用氢氧化钠法制备的氢氧化铝佐剂。
相应地，本发明还公开了如上所述的氢氧化铝佐剂等电点的检测方法在制备疫苗中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明的实施例通过将待测的氢氧化铝佐剂离心后取上清液稀释氢氧化铝佐剂样品，并通过滴定多个pH值梯度测量其Zeta电位，从而显著提高了取样均匀性、有效降低了测量误差、准确地反映了氢氧化铝佐剂等电点大小。
具体实施方式
下面详细描述本发明提供的氢氧化铝佐剂等电点的检测方法的实施例，所述方法主要包括以下步骤：
取30体积份待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液20-25体积份作为稀释液；
取1-3体积份氢氧化铝佐剂样品，加入15-20体积份所述稀释液，按照稀释比例为1∶5-1∶30稀释所述样品并混匀；
取10-20体积份稀释后的样品置于自动滴定仪中，在搅拌条件下，用氢氧化钠滴定溶液进行滴定至多个pH值梯度；
利用自动滴定仪将样品泵入样品池中，用Zeta电位仪自动测定每个pH值梯度对应的Zeta电位，根据所述梯度对应的Zeta电位计算出氢氧化铝佐剂的等电点。
在一些可能的实施方式中，滴定以pH值增加0.3-1.0为1个梯度单位，以样品原pH值为滴定起点，以pH值10.5-12.5为滴定终点。
在一些可能的实施方式中，滴定以pH值增加0.4-0.6为1个梯度单位，以样品原pH值为滴定起点，以pH值10-11为滴定终点。
在一些可能的实施方式中，稀释比例为1∶10-1∶25。
在一些可能的实施方式中，初始滴定的稀释样品体积为10-20mL。
在一些可能的实施方式中，所述氢氧化铝滴定溶液的浓度为0.01-0.05mol/L与0.1-0.5mol/L。
在一些可能的实施方式中，所述氢氧化铝滴定溶液的浓度为0.04mol/L与0.4mol/L的氢氧化钠滴定溶液进行滴定。
在一些可能的实施方式中，所述计算出氢氧化铝佐剂的等电点包括：
绘制pH值与Zeta电位的关系曲线，所述Zeta电位为0时对应的pH值即为该氢氧化铝佐剂的等电点。
在一些可能的实施方式中，所述Zeta电位仪为以电泳光散射技术(ELS)为原理基础的Zeta电位仪。
在一些可能的实施方式中，所述待测的氢氧化铝佐剂为采用氢氧化钠法制备的氢氧化铝佐剂。
为了更进一步阐释本实施例为达成预定发明目的所采取的的技术手段和效果，对本实施例氢氧化铝佐剂等电点的检测方法的具体步骤，通过实例数据详细说明如下。
实施例1
仪器：
英国马尔文Zeta电位仪，Eppendorf Minispin Plus高速离心机，英国马尔文MPT-2自动滴定仪。
流程：
取30mL待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液25mL。
取3mL氢氧化铝佐剂，加入15mL稀释液稀释并混匀，稀释样品制备三份。
取一份稀释后的样品10mL置于自动滴定仪中，并用0.01mol/L与0.1mol/L的氢氧化钠滴定溶液进行滴定。
滴定以pH值增加0.3为1个梯度单位，以样品原pH为滴定起始点，滴定终点设置为11。每滴定至一个pH梯度，自动滴定仪将样品泵入样品池中并于Zeta电位仪自动测定Zeta电位。
绘制pH值与Zeta电位的关系曲线，当Zeta电位为0时所对应的pH值即为该氢氧化铝佐剂的等电点，样品平行测定三次。
实施例2
仪器：
英国马尔文Zeta电位仪，Eppendorf Minispin Plus高速离心机，英国马尔文MPT-2自动滴定仪。
流程：
取30mL待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液25mL。
取1mL氢氧化铝佐剂，加入20mL稀释液稀释并混匀，得到样品2。
取一份稀释后的样品15mL置于自动滴定仪中，并用0.04mol/L与0.4mol/L的氢氧化钠滴定溶液进行滴定。
滴定以pH值增加0.5为1个梯度单位，以样品原pH为滴定起始点，滴定终点设置为10.5。每滴定至一个pH梯度，自动滴定仪将样品泵入样品池中并于Zeta电位仪自动测定Zeta电位。
绘制pH值与Zeta电位的关系曲线，当Zeta电位为0时所对应的pH值即为该氢氧化铝佐剂的等电点。
实施例3
仪器：
英国马尔文Zeta电位仪，Eppendorf Minispin Plus高速离心机，英国马尔文MPT-2自动滴定仪。
流程：
取30mL待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液25mL。
取2mL氢氧化铝佐剂，加入20mL稀释液稀释并混匀，得到样品3。
取一份稀释后的样品15mL置于自动滴定仪中，并用0.05mol/L与0.5mol/L的氢氧化钠滴定溶液进行滴定。
滴定以pH值增加1.0为1个梯度单位，以样品原pH为滴定起始点，滴定终点设置为12.5。每滴定至一个pH梯度，自动滴定仪将样品泵入样品池中并于Zeta电位仪自动测定Zeta电位。
绘制pH值与Zeta电位的关系曲线，当Zeta电位为0时所对应的pH值即为该氢氧化铝佐剂的等电点，样品平行测定三次。
试验结果如下表：
试验结果表明，采用本实施例的检测方法的三次测试结果较为稳定，符合预期结果范围(8.2-8.5)内，可有效且精确测定氢氧化钠佐剂的等电点。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种氢氧化铝佐剂等电点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
取30体积份待测的氢氧化铝佐剂，离心后取其上清液20-25体积份作为稀释液；
另取1-3体积份氢氧化铝佐剂样品，加入15-20体积份所述稀释液，按照稀释比例为1∶5-1∶30稀释所述样品并混匀；
取10-20体积份稀释后的样品置于自动滴定仪中，在搅拌条件下，用氢氧化钠滴定溶液进行滴定至多个pH值梯度；
利用自动滴定仪将样品泵入样品池中，用Zeta电位仪自动测定每个pH值梯度对应的Zeta电位，根据所述梯度对应的Zeta电位计算出氢氧化铝佐剂的等电点。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，滴定以pH值增加0.3-1.0为1个梯度单位，以样品原pH值为滴定起点，以pH值10.5-12.5为滴定终点。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，滴定以pH值增加0.4-0.6为1个梯度单位，以样品原pH值为滴定起点，以pH值10-11为滴定终点。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，稀释比例为1∶10-1∶25。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，初始滴定的稀释样品体积为10-20mL。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氢氧化铝滴定溶液的浓度为0.01-0.05mol/L与0.1-0.5mol/L。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氢氧化铝滴定溶液的浓度为0.02-0.04mol/L与0.2-0.4mol/L。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述计算出氢氧化铝佐剂的等电点包括：
绘制pH值与Zeta电位的关系曲线，所述Zeta电位为0时对应的pH值即为该氢氧化铝佐剂的等电点。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Zeta电位仪为以电泳光散射技术(ELS)为原理基础的Zeta电位仪。
10.如权利要求1-9中任一项所述的氢氧化铝佐剂等电点的检测方法在制备疫苗中的应用。
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| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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