CN107920500A - 具有患者衍生异种移植物的非hla匹配的人源化nsg小鼠模型 - Google Patents
具有患者衍生异种移植物的非hla匹配的人源化nsg小鼠模型 Download PDFInfo
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Abstract
本文所述的发明提供了具有患者衍生异种移植物(PDX)的非HLA匹配的人源化小鼠模型(例如NSG小鼠模型)，以及制备和使用其的方法。
Description
相关申请的引用
本申请根据35USC 119(e)要求于2015年6月23日提交的美国临时专利申请号62/183,386的申请日的权益，其全部内容通过引用并入本文。
背景技术
脊椎动物的免疫系统是非常复杂的，并且免疫系统的紊乱也是复杂的。脊椎动物免疫系统包括先天性免疫系统和适应性免疫系统。先天性免疫系统，也被称为非特异性免疫系统，包括以非特异性方式保护生物体的细胞。先天性免疫系统不同于特异性识别抗原并提供长期保护的适应性免疫系统。先天性免疫系统的特征在于抗原非依赖性应答，并且先天性免疫系统的暴露不导致免疫记忆。先天性免疫系统的细胞包括树突状细胞、肥大细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。
由于脊椎动物免疫系统的复杂性，通常难以表征和治疗疾病和缺陷。持续需要允许分离免疫应答的方方面面的动物模型，提供可用于例如识别免疫系统的疾病和缺陷的有效医学和药物治疗的方法和组合物。
免疫缺陷小鼠经常被用作正常和异常异种细胞的生长和分化的模型。免疫缺陷小鼠特征在于以下中的一种或多种：功能性免疫细胞(例如T细胞和B细胞)的缺乏；DNA修复缺陷；编码淋巴细胞上的抗原特异性受体的基因的重排中的缺陷；以及免疫功能分子(例如IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA)的缺乏。免疫缺陷小鼠可以特征在于参与免疫功能的基因(例如Rag1和Rag2(Oettinger,M.A等.,Science,248:1517-1523,1990；和Schatz,D.G.等.,Cell,59:1035-1048,1989))中的一个或多个缺陷。免疫缺陷小鼠可以具有导致小鼠中的异常免疫功能的这些或其他缺陷中的任一种。
特别有用的免疫缺陷小鼠品系是NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ，通常被称为NOD scidγ(NSG)小鼠，其在Shultz等.,J.Immunol.,174:6477-6489,2005中详述；以及NOD.Cg-Rag1tm1Mom Il2rgtm1Wjl/SzJ，Shultz等.,Clin.Exp.Immunol.,154(2):270-284,2008，通常被称为NRG小鼠。
在一些实验中，通过将人免疫系统的部分移植到免疫缺陷小鼠中而使这样的免疫缺陷小鼠品系人源化。这样的人源化小鼠模型是特别有力的研究工具。虽然大多数实验研究是在啮齿动物例如小鼠中完成，但由鼠科动物研究所预测的结果并不总是代表在人类中的实际结果。创建人源化小鼠模型允许在小鼠中研究人特异性感染和治疗，从而使人细胞、组织和免疫系统的临床相关体内研究成为可能，而不存在使患者处于风险中的缺点。
虽然各种各样的免疫缺陷小鼠品系是可用的，但各自具有使用缺陷和局限性。特别地，免疫缺陷小鼠中的异种干细胞(例如异种造血干细胞(HSC))的有效移植需要照射受体小鼠或用类放射性药物如白消安进行调理。对新生小鼠的照射导致小的、虚弱的小鼠，并且一些经照射小鼠过早死亡。此外，还担心照射对经治疗动物的造血发育的影响。参见例如Nielsen等.,Blood,110(3):1076-1077,2007。
因此，持续需要用于将异种造血干细胞移植到免疫缺陷小鼠品系中和使用其的方法和组合物。
发明内容
本发明的一个方面提供了人源化免疫缺陷非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，其中所述小鼠：(1)对于scid突变是纯合的；(2)具有IL-2受体γ链缺陷；(3)被移植CD34+人造血干细胞(HSC)；(4)被接种人患者衍生异种移植物(patient-derived xenograft，PDX)；其中所述HSC和PDX是非HLA匹配的(例如，仅部分匹配，或不匹配)。
在某些实施方式中，所述scid突变是Cg-Prkdcscid。
在某些实施方式中，IL-2受体γ链缺陷是遗传无效突变(genetic nullmutation)，例如Il2rgtm1Wjl。在其他实施方式中，IL-2受体γ链缺陷是IL-2Rγ链中的截短突变(例如，封锁(latching)细胞外或细胞内的结构域)。
在某些实施方式中，小鼠是NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(即NOD scidγ(NSG))。
在某些实施方式中，小鼠是被进一步手术植入人胸腺和肝碎片的雌性NSG小鼠，例如hu-BLT NSGTM小鼠(BLT小鼠或BLT人源化小鼠)。
在某些实施方式中，小鼠被人外周血单核细胞移植，例如hu-PBMC NSGTM小鼠(或PBMC人源化小鼠)。
在某些实施方式中，小鼠还包含组成型表达人白介素-3(IL-3)、人粒细胞/巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和/或人Steel因子(SF)的转基因。
在某些实施方式中，CD34+人HSC通过尾静脉注射(优选小鼠为雌性)、面部静脉注射、心内注射或肝内注射移植。
在某些实施方式中，CD34+人HSC被移植到约2-4周龄的小鼠，例如约2周龄、3周龄或4周龄。
在某些实施方式中，CD34+人HSC被移植到约24-72小时年龄的小鼠，例如约24小时、36小时、48小时、60小时、72小时或90小时。
在某些实施方式中，CD34ig.+人HSC在小鼠的全身照射(例如以约1、2、3、4、5、10、20、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200或1300cGy的剂量，或在本文的任何两个记载剂量之间，例如100-300cGy或700-1300cGy等)后移植。
在某些实施方式中，人PDX在小鼠被移植CD34+人HSC后约2周被接种至小鼠。在某些实施方式中，人PDX在小鼠被移植CD34+人HSC后约12周被接种至小鼠。在某些实施方式中，人PDX在小鼠被移植CD34+人HSC后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15周(或由任何两个数值限定的范围)被接种至小鼠。
在某些实施方式中，人PDX来自原代患者样品。在某些实施方式中，人PDX来自已经被作为异种移植物传代至少一代的存档的(archived)肿瘤样品。在某些实施方式中，人PDX具有低传代数，例如已经被作为异种移植物或在培养物中传代不超过5、4、3、2或1代。在某些实施方式中，人PDX保留人类癌症的遗传和/或表型异质性，所述人PDX衍生自所述人类癌症。在某些实施方式中，人PDX来自未经治疗的患者。在某些实施方式中，人PDX来自治疗耐受患者。
在某些实施方式中，人PDX是杰克逊实验室维护和可从其获得的PDX LIVETM肿瘤的PDX中的任何一种或多种。杰克逊实验室提供使用更广泛的在更早的传代次数的患者衍生异种移植物(PDX)癌症模型，作为PDX LIVETM肿瘤移植NSG小鼠的集合。可容易获得的、现成的PDX肿瘤的这个集合可以被维持在NSG小鼠背景中，并且任何PDX也可以在本发明的非HLA匹配的人源化免疫缺陷小鼠(例如NSG、NSGS、BLT等)中。
例如，在某些实施方式中，PDX肿瘤是乳腺肿瘤，包括浸润性导管瘤。代表性乳腺肿瘤包括TM00089、TM00095-TM00099、TM00103和TM00129(TM数值代表tumor.informatics.jax.org/mtbwi/index.do的小鼠肿瘤生物学数据库中的PDX模型ID)。在某些实施方式中，PDX肿瘤是肺癌，例如在ALK、KRAS、TP53、EGFR或其组合中具有突变的肺癌。参见TM00046、TM00186、TM00192-TM00194、TM00200、TM00202-TM00204、TM00206、TM00208、TM00213、TM00214、TM00219、TM00222、TM00226、TM00233、TM00253、TM00302、TM00355、TM00784、TM00832。在某些实施方式中，PDX肿瘤是膀胱癌(例如TM00015)。在某些实施方式中，PDX肿瘤是脑癌(例如TM00058和TM01087)。在某些实施方式中，PDX肿瘤是结肠癌(例如TM00164和TM00165)。在某些实施方式中，PDX肿瘤是卵巢癌(例如TM00334、TM00335、TM00391)。
在某些实施方式中，人PDX是来自卵巢癌、肺癌例如非小细胞肺癌(NSCLC)、膀胱癌、淋巴瘤(例如AML、CML、ALL、CLL、DLBCL(弥漫性大B细胞淋巴瘤))、乳腺癌例如三阴性乳腺癌(TNBC)、脑癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胃/GIST癌、肝细胞癌、肾脏/肾癌、皮肤癌(例如黑素瘤)、软组织癌、肉瘤或癌细胞系的异种移植物。
在某些实施方式中，人PDX是来自表达PD-L1和/或PD-L2的肿瘤/癌症的异种移植物。
在某些实施方式中，约0.5-10×106细胞(例如约1-9×106细胞、约2-8×106细胞、约3-7×106细胞、约4-6×106细胞或约5×106细胞)的人PDX被接种。
在某些实施方式中，在PDX接种后约50天(或在HSC移植后约9周)，在小鼠的外周血中的人CD45+细胞的百分比达到约20-30％。
在某些实施方式中，小鼠被施用抗癌化合物。例如，抗癌化合物可以是5-FU、阿瓦斯汀(Avastin)、顺铂、卡铂、keytruda、多西他赛或其组合。在某些实施方式中，抗癌化合物是化疗剂。在某些实施方式中，抗癌化合物是临床前药物。在某些实施方式中，抗癌化合物是免疫调节剂，例如PD-1或其配体/受体的调节剂，或CTLA-4或其配体/受体的调节剂。在某些实施方式中，抗癌化合物是抗PD-1和/或抗PD-L1试剂，例如抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体。
抗PD-1抗体阻断PD-1与其配体PD-L1和PD-L2之间的相互作用，而抗PD-L1抗体阻断PD-L1与PD-1和B7-1(CD80)两者之间的相互作用，其涉及T细胞应答的下调。
多种PD-1和PD-L1抑制剂在广泛癌症的早期和晚期临床试验的临床开发中。任何一种或多种PD-1和PD-L1抑制剂可用作本发明的抗癌剂。
代表性的抗PD-L1试剂包括表1中的下列试剂，而代表性的抗PD-1试剂包括表2中的下列试剂，两者均改编自Dolan和Gupta，Cancer Control，21(3):231-7,2014(通过引用并入本文)。
例如，BMS-936559/MDX-1105是针对PD-L1的全人、高亲和力免疫球蛋白(Ig)G4单克隆抗体。MPDL3280A是靶向PD-L1的工程化人单克隆抗体。CT-011/pidilizumab是与PD-1结合的人源化IgG1单克隆抗体。BMS-936558/MDX-1106/nivolumab是针对PD-1的全人IgG4单克隆抗体。Pembrolizumab是具有针对PD-1的活性的高选择性、人源化IgG4-κ单克隆抗体。
在某些实施方式中，抗癌剂是CTLA-4拮抗剂，例如抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗(ipilimumab)——FDA批准用于治疗黑素瘤的CTLA-4抑制剂；和Tremelimumab，原名为ticilimumab或CP-675,206，是由辉瑞生产的全人IgG2单克隆抗体，并且目前正在进行癌症治疗的人体临床试验)。
在某些实施方式中，抗癌剂是CTLA-4拮抗剂和PD-1拮抗剂/PD-L1拮抗剂的组合。由于CTLA-4和PD-1调节不同的免疫抑制通路，同时抑制免疫抑制通路两者可以比抑制单独任一者更有效。
CTLA-4是T细胞上的关键抑制性细胞表面蛋白，并且癌症生长可能与调节免疫应答的天然反馈机制中的不平衡有关。例如，肿瘤可能下调T细胞活化的共刺激通路，包括CD28、CD40、OX40和CD137。同时或替代性地，肿瘤可能上调抑制性免疫检查点通路，包括LAG-3、CTLA-4和B7-H3。临床前和/或临床证据表明晚期癌症已经与以下有关：OX40的降低的T细胞表达；通过CTLA-4免疫检查点通路的利用的正常免疫攻击的肿瘤逃逸；CTLA-4的T细胞表达通过限制T细胞活化和增殖而抑制抗肿瘤应答；免疫检查点LAG-3的增加的T细胞表达(从而增加对T细胞活化和功能的抑制作用)；和B7-H3的肿瘤细胞表达，其可能损害T细胞介导的免疫应答。因此，本发明的小鼠可用于确定上调CD28、CD40、OX40和/或CD137共刺激通路，或下调LAG-3、CTLA-4和/或B7-H3抑制性免疫检查点通路，是否可以治疗任何PDX肿瘤。
肿瘤还使用除了由CTLA-4和PD-1介导的这些以外的机制以逃避免疫应答。例如，多种髓性生长因子在许多肿瘤的微环境中被释放，以发信号通知具有独特免疫抑制能力的未成熟髓性细胞扩增，包括被称为肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的髓性细胞亚群。TAM是实体瘤中的白细胞的丰富群体，其在许多情况下通过例如抑制TIL活性和增加肿瘤血管生成促进而非限制肿瘤进展。
由TAM促进的调节性T细胞(Treg)和T辅助2细胞(TH2)在肿瘤中产生强烈的免疫抑制作用。这些细胞通常与免疫耐受的维持相关。
在肿瘤中发现的其他髓性细胞包括骨髓衍生抑制性细胞(MDSC)，其代表包含巨噬细胞、粒细胞和树突状细胞(由其抑制T细胞增殖和促进血管生成的能力定义)的前体的未成熟细胞的异质组。MDSC使用一系列免疫抑制机制以帮助肿瘤逃避免疫，其大部分作用是针对抑制T细胞。
在肿瘤免疫中重要的其他免疫细胞群包括树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞。DC是“专职性抗原提呈细胞”并且能够处理独特的肿瘤特异性抗原以激活T和B细胞。因此，DC处于致力于开发肿瘤疫苗和扩大离体肿瘤特异性CTLS用于后续过继性免疫疗法的研究的中心。
NK细胞具有对于自身组织的免疫监视重要的独特细胞表面受体，并且其活性由在大多数正常细胞和肿瘤上发现的HLA I类抗原提呈分子的结合介导。保留HLA I类表达的肿瘤逃避NK细胞介导的细胞毒性，但失去表达的那些不再被NK细胞识别为“自体”并被杀死。促进NK细胞活化的化合物和使用异体NK细胞的过继性免疫疗法是临床前和临床研究的活跃领域。
在某些实施方式中，抗癌剂是抗体(例如单克隆抗体或mAb)或其抗原结合片段。在某些实施方式中，抗原阻断或增强细胞之间(例如肿瘤细胞和免疫细胞(例如T细胞、TAM、MDSC、DC、NK细胞等)之间)的配体-受体相互作用。在某些实施方式中，抗体充当细胞之间(例如肿瘤细胞和免疫细胞(例如T细胞、TAM、MDSC、DC、NK细胞等)之间)的配体-受体相互作用的激动剂或拮抗剂。在某些实施方式中，抗体通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)靶向细胞破坏。在某些实施方式中，抗体将缀合的药物有效载荷递送至特定靶细胞。
在某些实施方式中，抗癌剂是表达常规T细胞受体或嵌合抗原受体(CAR)的基因工程化淋巴细胞，其可用于过继性细胞转移免疫疗法。在某些实施方式中，基因工程化淋巴细胞是表达针对癌症相关抗原的抗体的T细胞，其中所述抗体与CAR的跨膜和/或信号传导结构域连接或融合。这样的T细胞可用于过继性T细胞治疗。
在某些实施方式中，抗癌剂是双特异性T细胞衔接子(BiTE)，其包含来自融合成单个分子的两个抗体的结合特异性区域，以将CTL直接结合至肿瘤细胞上的抗原以增强肿瘤杀伤。
在某些实施方式中，抗癌剂是离体扩增的再输注TIL，其中所述TIL被基因工程化以表达对独特肿瘤抗原具有特异性的T细胞受体(TCR)。在某些实施方式中，肿瘤是子宫颈癌、淋巴瘤或白血病。在某些实施方式中，抗癌剂还包含免疫检查点的抑制剂，例如抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、或抗PD-L1抗体。
在某些实施方式中，抗癌剂是异体供体淋巴细胞输注(DLI)或异体NK细胞输注。
在某些实施方式中，抗癌剂被过继性地转移至在过继性转移之前已被肿瘤特异性抗原刺激(prime)的树突状细胞。
在某些实施方式中，抗癌剂是包含肿瘤特异性抗原的疫苗，其中所述疫苗增加内源性肿瘤特异性T细胞应答。
在某些实施方式中，小鼠对于IL-2受体γ链缺陷是纯合的或半合的。
本发明的另一个方面提供了产生具有患者衍生异种移植物的人源化免疫缺陷非肥胖糖尿病小鼠的方法，所述方法包括：(1)向免疫缺陷非肥胖糖尿病小鼠中引入CD34+人造血干细胞(HSC)，其中所述小鼠：(a)对于scid突变是纯合的；和(b)具有IL-2受体γ链缺陷；(2)用人患者衍生异种移植物(PDX)接种所述小鼠，其中所述HSC和所述PDX是非HLA匹配的。
本发明的另一个方面提供了用于在具有严重联合免疫缺陷的免疫缺陷非肥胖糖尿病小鼠中的异种干细胞植入的方法，其包括：向所述小鼠施用异种干细胞。
本发明的另一个方面提供了预测多种抗肿瘤试剂治疗肿瘤的功效等级顺序的方法，所述方法包括：(1)将所述多种抗肿瘤试剂中的每一种作为单一试剂施用于本发明的(非HLA匹配的PDX)小鼠(例如NSG小鼠)，并测定功效，其中所述PDX代表所述肿瘤；(2)对所述多种抗肿瘤试剂中的每一种的功效进行比较和/或分级，由此预测所述多种抗肿瘤试剂治疗所述肿瘤的功效等级顺序。
本发明的另一个方面提供了测试用于使用两种或更多种候选试剂治疗肿瘤的组合疗法的方法，所述方法包括：(1)将所述两种或更多种候选试剂作为单一试剂或作为组合施用于权利要求1所述的小鼠，并测定功效，其中所述PDX代表所述肿瘤；(2)对所述组合的功效和所述单一试剂的功效进行比较，其中与所述单一试剂的加和功效相比，所述组合的更高功效表明所述组合是更好的。
本发明的另一个方面提供了测定用于使用试剂治疗肿瘤的给药方案的功效和/或安全性的方法，所述方法包括：(1)将所述试剂施用于权利要求1所述的小鼠，其中所述PDX代表所述肿瘤，并且其中所述试剂根据所述给药方案施用。(2)测定功效和/或安全性。
预期的是，本文所述的任何一个实施方式，包括仅在实施例中描述的那些和仅根据本发明的一个方面描述的那些，可以与任何一个或多个其他实施方式组合，除非明确放弃或如本领域技术人员理解的不适用。
附图说明
图1显示人源化NSG小鼠中非HLA匹配肿瘤的生长曲线。
图2显示人源化NSG小鼠(n＝7)中非HLA匹配的SKOV3卵巢癌异种移植物的生长曲线。
图3显示在SKOV3癌细胞接种后50天，外周血中的hCD45+细胞(％)。
图4A-4C显示在NSG相对于人源化NSG小鼠中，非HLA匹配肿瘤(分别为BR0744、LG0977和SA0209)的生长曲线。
图5A-5C显示在NSG相对于人源化NSG模型中，hCD45+细胞相对于总肿瘤(分别为BR0744、LG0977和SA0209)群的百分比。
图6A-6C显示在三种非HLA匹配肿瘤PDX(分别为BR0744、LG0977和SA0209)中总浸润CD45+细胞的人淋巴细胞百分比。
图7A显示以指定给药方案的5-FU、阿瓦斯汀和载体对照处理的非HLA匹配人源化NSG模型中的结肠癌CN1572P5PDX的肿瘤体积曲线。图7B显示三个组中在第21个研究日的平均肿瘤体积。
图8A显示以指定给药方案的顺铂、pembrolizumab(Keytruda)和载体对照处理的非HLA匹配人源化NSG模型中的乳腺癌MDA-MB-231PDX的肿瘤体积曲线。图8B显示pembrolizumab(Keytruda)和载体组中在第20个研究日的平均肿瘤体积。运行与图8A类似的实验，结果显示在图8C中。
图9A-9D显示人T细胞(CD3+CD4+和CD3+CD8+两者)和B细胞(CD19+)存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配MDA-MB-231PDX小鼠的外周血中。
图10A-10C显示人T细胞存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配MDA-MB-231PDX小鼠的肿瘤组织中。
图11A显示以指定给药方案的顺铂、pembrolizumab(Keytruda)和载体对照处理的非HLA匹配人源化NSG模型中的乳腺癌BR1126PDX的肿瘤体积曲线。图11B显示三个组中第17个研究日的平均肿瘤体积。运行与图11A类似的实验，结果显示在图11C中。
图12A-12D显示人T细胞(CD3+CD4+和CD3+CD8+两者)和B细胞(CD19+)存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配BR1126PDX小鼠的外周血中。
图13A-13D显示人T和B细胞存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配BR1126PDX小鼠的肿瘤组织中。图13E-13H显示人T和B细胞存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配BR1126PDX小鼠的脾脏中。
图14A显示以指定给药方案的pembrolizumab(Keytruda)、有或没有多西他赛、和载体对照处理的非HLA匹配人源化NSG模型中的肺癌LG1306PDX的肿瘤体积曲线。图14B显示三个组中第24个研究日的平均肿瘤体积。运行与图14A类似的实验，结果显示在图14C中。
图15A-15D显示人T细胞(CD3+CD4+和CD3+CD8+两者)和B细胞(CD19+)存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配LG1306PDX小鼠的外周血中。图15E-15H显示人T和B细胞存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配LG1306PDX小鼠的脾脏中。图15I-15K显示人T和B细胞存在于本发明的Hu-CD34NSGTM非HLA匹配LG1306PDX小鼠的肿瘤组织中。
图16显示针对由载体(对照)、单独化疗、抗PD1(Keytruda)和抗CTLA4剂(伊匹单抗)处理的PDX样品中CD45+CD8+浸润T细胞的存在的免疫染色。数据显示抗PD1和抗CTLA4疗法导致PDX肿瘤中浸润T细胞的强烈存在。
具体实施方式
1.概述
传统癌症治疗方法利用对快速分裂细胞(例如肿瘤/癌细胞)具有毒性的广泛作用性化学试剂。这种化疗方法可以是成功的，但是可能由于各种各样的脱靶毒性而变得复杂，并且具有诱导耐药性的风险。哺乳动物免疫系统已经发展出许多有效的、高度特异性的用于消除靶细胞(包括被病原体感染的细胞和已经变成癌性的那些)的机制。作为回应，肿瘤细胞已经发展出其自身的一系列用于逃避免疫检测的机制。因此，对免疫效应细胞与肿瘤之间的相互作用获得更好的理解开辟了用于临床使用的刺激持久的、免疫介导的肿瘤消退的治疗策略的新的和有前途的大道。这类新的免疫-肿瘤治疗策略是非常令人鼓舞的，但该领域中的进一步研究可以获益于本发明的人源化的、基于小动物模型的(例如基于小鼠的)体内测试平台，其允许洞察人免疫和肿瘤细胞相互作用的更好的生物学理解，并且使当被转化成临床应用时具有较高成功可能性的新疗法的临床前测试成为可能。
本文所述的发明部分地基于人CD34+移植NSG小鼠中的患者衍生异种移植物(PDX)的生长速率不需要PDX和移植的人免疫细胞之间的完全HLA型匹配的令人惊讶的发现。
本文所述的发明还部分地基于癌细胞系移植的时机相对于人源化对异种移植物生长没有显著影响的令人惊讶的发现。另一方面，癌细胞系移植的时机对CD45+细胞群也没有显著影响。
因此，本发明的一个方面提供了人源化免疫缺陷非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，其中所述小鼠：(1)对于scid突变是纯合的；(2)具有IL-2受体γ链缺陷；(3)被移植CD34+人造血干细胞(HSC)；(4)被接种人患者衍生异种移植物(PDX)；其中所述HSC和PDX是非HLA匹配的。
如本文所用，“非HLA匹配”是指不完全HLA匹配，包括仅部分HLA匹配，或非HLA匹配。在某些实施方式中，HSC和PDX之间仅部分HLA匹配。在某些实施方式中，HSC和PDX之间非HLA匹配。
在某些实施方式中，小鼠是NSG小鼠，或紧密相关的衍生物，例如NSGS小鼠、NSG-SGM3小鼠或人CD34+移植BLT小鼠。
本发明的人源化小鼠可用于广泛的生物学、医学和临床研究，包括，仅举几例，癌症生物学、免疫-肿瘤学、再生医学、人类造血、感染性疾病、移植、临床前药物功效测试研究以及免疫和自体免疫。
例如，本发明的人源化小鼠模型可用于研究癌症治疗中的免疫应答、感染性疾病的治疗、基因疗法和大分子药物的免疫原性等。
本发明的人源化小鼠模型也可以用于临床前预测研究，使得在移植的人造血系统的存在下，可以在本发明的小鼠模型中研究患者特异性异种移植物(例如来自癌症的PDX)。可以通过按照一种或多种给药方案向本发明的小鼠模型施用这样的测试化合物或药物而研究任何测试化合物或药物的效果、安全性(例如对免疫系统的任何相关副作用)和功效。这在研究免疫-肿瘤学或免疫调节剂中，或者涉及患病组织(例如癌症、自身免疫病)和免疫系统之间的相互作用的任何研究中特别有用。
本发明的人源化小鼠模型还可以用于在移植的人造血系统的存在下研究任何PDX。这包括进行肿瘤组织学研究、组学研究或谱分析(profiling)(蛋白质组学、基因组学、代谢组学等)。在某些实施方式中，关于所研究的PDX的信息可以从小鼠肿瘤生物学数据库(MTB)获得，其被设计成在选择实验模型、审查特定癌症中的突变模式和识别在一系列癌症中普遍突变的基因等领域中帮助研究者。
本发明的人源化小鼠模型也可用于研究人免疫系统发育和功能，包括人源化小鼠模型的发育、先天性免疫细胞功能的分析、T细胞体内平衡的检查、和/或BLT(胎儿胸腺/胎儿肝脏)小鼠模型的特征。
通过上文所述的本发明的大体方面，在下面的部分中进一步描述本发明的某些方面或实施方式。
2.定义
除非另有说明，否则本文所用的科学和技术术语旨在具有本领域普通技术人员通常理解的含义。这样的术语被发现在说明性地包括以下的各种标准参考文献的上下文中定义和使用：J.Sambrook和D.W.Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory Press；3rd Ed.,2001；F.M.Ausubel,Ed.,Short Protocolsin Molecular Biology,Current Protocols；5th Ed.,2002；B.Alberts等.,MolecularBiology of the Cell,4th Ed.,Garland,2002；D.L.Nelson和M.M.Cox,LehningerPrinciples of Biochemistry,4th Ed.,W.H.Freeman&Company,2004；Herdewijn,P.(Ed.),Oligonucleotide Synthesis:Methods and Applications,Methods in MolecularBiology,Humana Press,2004；A.Nagy,M.Gertsenstein,K.Vintersten,R.Behringer(Eds.)2002,Manipulating the Mouse Embryo:A Laboratory Manual,3rd edition,ColdSpring Harbor Laboratory Press,ISBN-10:0879695919；和K.Turksen(Ed.),“EmbryonicStem Cells:Methods And Protocols in Methods,”Mol.Biol.,185:499,2002,HumanaPress；Current Protocols in Stem Cell Biology,ISBN:9780470151808。
单数术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“所述/该(the)”不旨在是限制性的，并且包括复数指代物，除非另有明确说明或上下文另有明确指出。
关于基因的术语“表达(express)”、“表达(expression)”、“表达(expressing)”和“表达(expresses)”是指基因转录以产生相应的mRNA和/或mRNA翻译以产生功能性相关的编码蛋白质。
术语“免疫缺陷非人类动物”是指特征为以下中的一种或多种的非人类动物(例如小鼠)：功能性免疫细胞(例如T细胞和B细胞)的缺乏；DNA修复缺陷；编码淋巴细胞上的抗原特异性受体的基因的重排中的缺陷；以及免疫功能分子(例如IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA)的缺乏。
术语“免疫缺陷小鼠”是指特征在于以下中的一种或多种的小鼠：功能性免疫细胞(例如T细胞和B细胞)的缺乏；DNA修复缺陷；编码淋巴细胞上的抗原特异性受体的基因的重排中的缺陷；以及免疫功能分子(例如IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA)的缺乏。免疫缺陷小鼠可以特征在于通过参与免疫功能的基因(例如Rag1和Rga2(Oettinger等.,Science,248:1517-1523,1990；和Schatz等.,Cell,59:1035-1048,1989))中的一个或多个缺陷。免疫缺陷小鼠可以具有导致小鼠中的异常免疫功能的任何这些或其他缺陷。
特别有用的免疫缺陷小鼠品系是NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ，通常被称为NOD scidγ(NSG)小鼠，其在Shultz等.,J.Immunol.,174:6477-6489,2005中详述；以及NOD.Cg-Rag1tm1MomIl2rgtm1Wjl/SzJ，Shultz等.,Clin.Exp.Immunol.,154(2):270-284,2008，通常被称为NRG小鼠。
术语“严重联合免疫缺陷(SCID)”是指特征在于T细胞的不存在和B细胞功能的缺乏的病症。
SCID的常见形式包括：X连锁SCID，其特征在于IL2RG基因中的γ链基因突变和淋巴细胞表型T(-)B(+)NK(-)；和常染色体隐性SCID，其特征在于Jak3基因突变和淋巴细胞表型T(-)B(+)NK(-)，ADA基因突变和淋巴细胞表型T(-)B(-)NK(-)，IL-7Rα链突变和淋巴细胞表型T(-)B(+)NK(+)，CD3δ或ε突变和淋巴细胞表型T(-)B(+)NK(+)，RAG1/RAG2突变和淋巴细胞表型T(-)B(-)NK(+)，Artemis基因突变和淋巴细胞表型T(-)B(-)NK(+)，CD45基因突变和淋巴细胞表型T(-)B(+)NK(+)。
根据本发明的方方面面的基因修饰的小鼠具有严重联合免疫缺陷突变(Prkdcscid)，通常被称为scid突变。scid突变是众所周知的，并如Bosma等.,Immunogenetics,29:54-56,1989中所述位于小鼠染色体16上。对于scid突变纯合的小鼠特征在于功能性T细胞和B细胞的不存在、淋巴细胞减少症、低球蛋白血症和正常造血微环境。scid突变可以例如通过使用公知方法(如PCR或流式细胞术)检测用于scid突变的标志物而检测。
根据本发明的方方面面的基因修饰的小鼠具有IL2受体γ链缺陷。术语“IL2受体γ链缺陷”是指减少的IL2受体γ链。减少的IL2受体γ链可能是由于基因缺失或突变。减少的IL2受体γ链可以例如通过使用公知方法检测IL2受体γ链基因缺失或突变和/或检测减少的IL2受体γ链表达而检测。在某些实施方式中，IL2受体γ链缺陷是IL2受体γ链基因的无效突变。在某些实施方式中，具有IL2受体γ链缺陷的动物是对IL2受体γ链纯合的突变体。
根据本发明的方方面面，提供了具有scid突变或与scid突变组合的IL2受体γ链缺陷的基因修饰的免疫缺陷小鼠。根据本发明的方方面面，提供了基因修饰的NOD scidγ小鼠。
术语“NOD scidγ”和“NSG”在本文中可互换地使用以指众所周知的免疫缺陷小鼠品系NOD.Cg-Prkdcscid NSG小鼠，其结合来自NOD/ShiLtJ背景的多种免疫缺陷、严重联合免疫缺陷(scid)突变、和白介素-2受体γ链的完全敲除。因此，NSG小鼠缺乏成熟T、B和NK细胞，并且具有细胞因子信号传导缺陷。NSG小鼠的特征在于IL2R-γ(γc)表达的缺乏，没有可检测的血清免疫球蛋白、没有溶血补体、没有成熟T淋巴细胞、以及没有成熟自然杀伤细胞。
根据本发明的方方面面，提供了具有严重联合免疫缺陷或与严重联合免疫缺陷结合的IL2受体γ链缺陷的遗传修饰的免疫缺陷非人类动物(例如小鼠)
遗传修饰的免疫缺陷非人类动物的产生可以通过将基因靶向载体引入植入前胚胎或干细胞(例如胚胎干(ES)细胞或诱导多能干(iPS)细胞)而实现。
术语“基因靶向载体”是指双链重组DNA分子，其起到与特定染色体基因座重组并使其突变的作用，例如通过插入或置换靶向的基因。
术语“野生型”是指天然存在的或未突变的生物体、蛋白或核酸。
任选地，本发明的遗传修饰的免疫缺陷非人类动物(例如小鼠)通过选择性繁殖而生产。具有第一期望基因型的非人类动物的第一亲本品系可以与具有第二期望基因型的非人类动物的第二亲本品系繁殖以产生后代，其是具有第一和第二期望基因型的遗传修饰的非人类动物。
本发明的遗传修饰的免疫缺陷非人类动物优选地是非人类哺乳动物，特别是啮齿动物，例如小鼠、大鼠或豚鼠。
根据本发明的方方面面提供的具有与scid突变组合的IL2受体γ链缺陷的遗传修饰的免疫缺陷小鼠可以是NSG小鼠、NSGS小鼠、人CD34+HSC移植的NSG/NSGS小鼠、或人CD34+移植的BLT-小鼠。
关于宿主细胞或生物体的术语“异种”在本文中用于表示被称为“异种”的材料来源于除宿主细胞或生物体以外的另外的物种。
如在本文中所使用的术语“造血干细胞”是指起到产生免疫系统的作用的多能干细胞。来自小鼠的造血干细胞表达c-Kit受体。C-Kit受体是本领域中众所周知的，例如如Vandenbark等.,“Cloning and structural analysis of the human c-kit gene,”Oncogene,7(7):1259-1266,1992；以及Edling&Hallberg,“c-Kit--a hematopoietic cellessential receptor tyrosine kinase,”Int.J.Biochem.Cell Biol.,39(11):1995-1998,2007中描述的。人造血干细胞表达CD34。CD34是众所周知的蛋白质，例如如Simmons等.,“Molecular cloning of a cDNA encoding CD34,a sialomucin of humanhematopoietic stem cells,”J.Immunol.,148(1):267-271,1992中描述的。
根据本发明的方方面面，将异种(例如人)造血干细胞施用于本发明的基因修饰的免疫缺陷非人类动物(例如小鼠)，其中在基因修饰的免疫缺陷非人类动物中异种造血干细胞分化成异种免疫细胞。
根据本发明的方方面面，将人造血干细胞施用于本发明的基因修饰的免疫缺陷小鼠，其中在基因修饰的免疫缺陷小鼠中人造血干细胞分化成人免疫细胞。
用于施用于基因修饰的免疫缺陷动物的造血干细胞可以从含有HSC的任何组织获得，例如但不限于脐带血、骨髓、GM-CSF-动员的外周血和胎儿肝脏。
任选地，用于施用于基因修饰的免疫缺陷动物的造血干细胞可以作为在施用之前体外培养以扩增从含有HSC的一种或多种组织(例如但不限于脐带血、骨髓、GM-CSF-动员的外周血和胎儿肝脏)获得的细胞群的细胞获得。
HSC可以通过各种途径施用例如但不限于至心脏(心内注射)、肝脏(肝内注射)和/或面部静脉中而施用至新生动物中。HSC可以通过各种途径施用至成年动物中，例如但不限于施用至尾静脉中、股骨骨髓腔中或脾脏中。在另一个实例中，作为胎儿肝脏和/或胎儿胸腺的HSC可以被移植到肾小囊下(例如，作为BLT小鼠中的1mm3立方体类器官)。
任选地，将HSC施用于调理的动物。准备接受HSC的受体动物的调理在接受异种HSC之前进行，以耗竭或抑制对受体动物内源性的HSC和祖细胞。受体动物的调理包括辐射和/或一种或多种化学试剂的施用，其起到在接受异种HSC之前耗竭或抑制对受体动物内源性的HSC和祖细胞的作用。白消安是起到在接受异种HSC之前耗竭或抑制对受体动物内源性的HSC和祖细胞的作用的化学试剂的众所周知的实例。根据众所周知的方案进行起到在接受异种HSC之前耗竭或抑制对受体动物内源性的HSC和祖细胞的作用的辐射和/或一种或多种化学试剂的调理以产生调理的动物。
异种HSC的移植可以通过各种方法中的任一种评估，例如但不限于，在HSC施用之后在一个或多个时间点向其施用异种HSC的动物中的细胞的流式细胞术分析。
用于异种HSC的分离、将异种HSC施用于宿主生物体的示例性方法以及评估其移植的方法描述于本文以及T.Pearson等.,Curr.Protoc.Immunol.,81:15.21.1-15.21.21,2008；Ito等.,Blood,100:3175-3182,2002；Traggiai等.,Science,304:104-107,2004；Ishikawa等.,Blood,106:1565-1573,2005；Shultz等.,J.Immunol.174:6477-6489,2005；Holyoake等.,Exp Hematol.,27(9):1418-1427,1999中，全部通过引用并入。
施用的HSC是从原始来源材料中分离以获得富含HSC的细胞群。分离的HSC可以是纯的，或者可以是不纯的。
在某些实施方式中，HSC是通过针对细胞标志物(例如CD34)进行选择而纯化。
在某些实施方式中，施用的人HSC是人细胞群，其中CD34+细胞构成总细胞的约1-100％，尽管可以使用其中CD34+细胞构成总细胞的少于1％的人细胞群。在某些实施方式中，施用的人HSC是其中CD34+构成总细胞的约1-3％的T细胞耗竭的脐带血细胞、其中CD34+细胞构成总细胞的约50％的谱系耗竭脐带血细胞、或其中CD34+细胞构成总细胞的约90％的CD34+阳性选择细胞。
关于在免疫缺陷小鼠中异种免疫系统的产生，施用的HSC的数量不被认为是限制性的。单个HSC可以产生免疫系统的细胞。因此，尽管可以使用更多，但施用的HSC的数量通常在1-10×106HSC的范围内，其中受体是小鼠。对于其他物种，如果有必要，细胞数量可以仅使用常规实验调整。
通常，HSC作为CD34+细胞的亚群存在于CD34+的更大的群体中。因此，从含有HSC的任何组织(例如但不限于脐带血、骨髓、GM-CSF-动员的外周血和胎儿肝脏)获得的CD34+细胞群的施用被施用以将HSC亚群递送至受体动物以被移植。被施用以将HSC亚群递送至受体动物以被移植的从含有HSC的任何组织(例如但不限于脐带血、骨髓、GM-CSF-动员的外周血和胎儿肝脏)获得的CD34+细胞的数量是没有限制的，并且可以在1个细胞-10亿个细胞的范围内，例如1个细胞-5亿个细胞、1个细胞-1亿个细胞、1个细胞-10百万个细胞、1个细胞-5百万个细胞、1个细胞-1百万个细胞、1个细胞-500,000个细胞、1个细胞-100,000个细胞、1个细胞-50,000个细胞、1个细胞-10,000个细胞、1个细胞-1,000个细胞的这样的CD34+细胞。进一步地，施用的CD34+细胞的数量在100个细胞-10百万个细胞、100个细胞-5百万个细胞、100个细胞-1百万个细胞、100个细胞-500,000个细胞、100个细胞-100,000个细胞、100个细胞-50,000个细胞、100个细胞-10,000个细胞或100个细胞-1,000个细胞的范围内。更进一步地，施用的CD34+细胞的数量在1000个细胞-10百万个细胞、1000个细胞-5百万个细胞、1000个细胞-1百万个细胞、1000个细胞-500,000个细胞、1000个细胞-100,000个细胞、1000个细胞-50,000个细胞或1000个细胞-10,000个细胞的范围内。
移植是成功的，其中在任何施用的非HSC中的大多数已经退化的时间检测到受体动物中从HSC分化的异种HSC和细胞。成功的人HSC移植的标志是多谱系人免疫细胞分化和归巢至骨髓、胸腺、脾脏和PBL等。NSG小鼠支持多谱系移植和免疫细胞归巢至几乎所有的适当的器官和组织中。在hu-CD34NSG小鼠中检测到的全范围的人免疫细胞群在Ishikawa等(Blood,106(5):1565-1573,2005)；和Tanaka等(J.Immunol.,188(12):6145-6155,2012)中总结。
分化的HSC细胞的检测可以例如通过受体动物中异种DNA的检测或者完整异种HSC和从HSC分化的细胞的检测而实现。CD34+细胞连续转移到次要受体中和异种造血系统的移植是主要受体中的HSC移植的进一步测试。移植可以通过流式细胞术检测为HSC施用后10-12周时血液中0.05％或更多的异种CD45+细胞。
根据本发明的方方面面提供了方法，其包括将异种干细胞因子(SCF)递送至免疫缺陷动物中的异种造血干细胞。SCF可以被急性或慢性地递送给动物。根据本发明的方方面面，免疫缺陷非人类动物可以进一步包括编码与启动子可操作地连接的异种SCF的转基因。在进一步的选择中，在动物表达异种SCF的情况下，在施用异种干细胞之前，动物不通过拟辐射剂的施用而调理。
根据本发明的方方面面用于鉴定免疫系统应答的调节剂的方法包括提供基因修饰的非人类免疫缺陷动物；将异种造血干细胞施用于基因修饰的非人类免疫缺陷动物，其中异种造血干细胞在基因修饰的非人类免疫缺陷动物中分化以产生异种免疫细胞；将免疫系统刺激剂施用于于动物；将测试化合物施用于动物；分析异种免疫细胞对免疫系统刺激剂的应答；和比较应答与标准以测定测试化合物对异种免疫细胞对刺激剂的应答的作用，其中测试物质的作用识别动物中的异种免疫系统的调节剂。
用于本发明的方法中的测试化合物可以是任何化学实体，说明性地包括合成的或天然存在的化合物或合成的或天然存在的化合物的组合、小的有机或无机分子、蛋白质、肽、核酸、碳水化合物、寡糖、脂质或任何这些的组合。
如在本文中所使用的样品可以是从非人类动物获得的样品，说明性地包括脾脏、骨髓、血液、血浆和血清。
任选地，免疫系统的特定细胞群被分析，例如树突状细胞、浆细胞样树突状细胞、髓性树突状细胞、肥大细胞、单核细胞/巨噬细胞、自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞(CD3+CD4+或CD3+CD8+T细胞)、B淋巴细胞(例如CD19+B细胞)。
本发明提供了具有移植的人免疫系统的基因修饰的免疫缺陷非人类动物的分离的骨髓细胞。本发明提供了具有移植的人免疫系统的基因修饰的免疫缺陷非人类动物的分离的骨髓细胞。
本发明提供了基因修饰的免疫缺陷非人类动物的分离的细胞。这样的分离的细胞可以体外培养以用于各种测定。例如，这样的分离的细胞可用作用于评估测试物质以测定测试物质的活性的试验中的对照。在另一个实例中，这样的分离的骨髓细胞可用于测定测试物质对免疫系统活性的活性。
免疫测定方法可用于测定样品中的靶分析物或免疫细胞应答的指示剂，包括但不限于酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫过滤试验(ELIFA)、流式细胞术、免疫印迹、免疫沉淀、免疫组织化学、免疫细胞化学、发光免疫测定(LIA)、荧光免疫测定(FIA)和放射免疫测定。可以使用测定方法以获得定性和/或定量结果。用于样品的定性和定量测定两者的合适的测定方法的具体细节描述在说明性地包括以下的标准参考文献中：E.Harlow和D.Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988；F.Breitling和S.Dubel,Recombinant Antibodies,John Wiley&Sons,New York,1999；H.Zola,Monoclonal Antibodies:Preparation and Use of MonoclonalAntibodies and Engineered Antibody Derivatives,Basics:From Background toBench,BIOS Scientific Publishers,2000；B.K.C.Lo,Antibody Engineering:Methodsand Protocols,Methods in Molecular Biology,Humana Press,2003；F.M.Ausubel etal.,Eds.,Short Protocols in Molecular Biology,Current Protocols,Wiley,2002；S.Klussman,Ed.,The Aptamer Handbook:Functional Oligonucleotides and TheirApplications,Wiley,2006；Ormerod,M.G.,Flow Cytometry:A Practical Approach,Oxford University Press,2000；Givan,A.L.,Flow Cytometry:First Principles,Wiley,New York,2001；Gorczyca,W.,Flow Cytometry in Neoplastic Hematology:Morphologic-Immunophenotypic Correlation,Taylor&Francis,2006；Crowther,J.R.,The ELISA Guidebook(Methods in Molecular Biology),Humana Press,2000；Wild,D.,The Immunoassay Handbook,3rd Edition,Elsevier Science,2005；以及J.Sambrook和D.W.Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory Press,3rd Ed.,2001。
抗体和用于制备抗体的方法是本领域众所周知的。如在本文中所使用的，术语“抗体”和“抗体”包括单克隆抗体、多克隆抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、骆驼化抗体(camelized antibody)、单结构域抗体、单链Fvs(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fvs(sdFv)和抗个体基因型(抗-Id)抗体和上述的任一种的抗原结合片段。特别地，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子具有任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
如在本文中所使用的，术语“抗体片段”和“抗原结合片段”定义了免疫特异性地结合靶分析物的抗体的片段。抗体片段可以通过本领域技术人员已知的任何技术产生。例如，Fab和F(ab’)2片段可以通过使用酶例如木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab’)2片段)蛋白水解切割免疫球蛋白分子而产生。抗体片段也通过重组DNA技术产生。
抗体、抗原结合片段、其产生方法和用于筛选产生的抗体以基本上特异性结合抗原的方法是本领域已知的，并且这样的抗体、抗原结合片段和方法进一步详细描述于例如Antibody Engineering,Kontermann,R.和Dubel,S.(Eds.),Springer,2001；Harlow,E.和Lane,D.,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988；F.Breitling和S.Dubel,Recombinant Antibodies,John Wiley&Sons,New York,1999；H.Zola,Monoclonal Antibodies:Preparation and Use of MonoclonalAntibodies and Engineered Antibody Derivatives,Basics:From Background toBench,BIOS Scientific Publishers,2000；Ausubel,F.等，(Eds.),Short Protocols inMolecular Biology,Wiley,2002；J.D.Pound(Ed.)Immunochemical Protocols,Methodsin Molecular Biology,Humana Press,2nd ed.,1998；B.K.C.Lo(Ed.),AntibodyEngineering:Methods and Protocols,Methods in Molecular Biology,Humana Press,2003；和Kohler,G.和Milstein,C.,Nature,256:495-497(1975)。针对靶分析物(例如toll样受体4或先天性免疫细胞应答的指示物)的抗体可以在动物中产生、合成、通过重组方法产生和/或商业地获得。
检测样品中存在的靶分析物与结合配偶体之间的结合是通过本领域已知的各种方法中的任一种实现，说明性地包括直接或间接连接至靶分析物或结合配偶体的可检测标记的检测。术语“可检测标记”是指能够通过说明性地包括光谱学、光学、光化学、生物化学、酶学、电学和/或免疫化学的任何合适的方法产生指示可检测标记的存在的信号的材料。可检测标记的实例说明性地包括荧光部分、化学发光部分、生物发光部分、电子致密颗粒、磁性颗粒、酶、底物、放射性同位素和发色团。
所用的一个或多个特定可检测标记的特性(identify)取决于所用的检测方法。这样的检测方法被结合到说明性地包括ELISA、蛋白质印迹法、免疫沉淀、免疫细胞化学、免疫荧光测定、液相质谱、流式细胞术、本领域已知的其他检测方法或其组合的特定测定形式中。
结合测定可以包括附着于载体的结合配偶体。用于结合测定的具有附着的结合配偶体的载体可以是固体或半固体，并且可以是各种材料(例如玻璃、硅、纸、合成或天然存在的聚合物如聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯、PVDF、尼龙、纤维素、琼脂糖、葡聚糖和聚丙烯酰胺或结合配偶体可以稳定附着用于结合测定的任何其他材料)中的任一种。
所使用的载体可以包括用于与结合配偶体结合的官能团，例如但不限于羧基、胺、氨基、羧酸酯、卤化物、酯、醇、尿素、醛、氯甲基、氧化硫、氮氧化物、环氧和/或甲苯磺酰基官能团。结合配偶体附着于载体是通过说明性地包括吸附和化学键合的各种方法中的任一种实现。在一个实例中，1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸盐、EDC或EDAC化学可用于附着结合配偶体至颗粒。结合配偶体可以直接或间接结合至载体的材料，例如通过结合至设置在载体上的涂层或接头。官能团、其修饰、和结合配偶体与载体的附着是本领域中已知的，例如在Fitch,R.M.,Polymer Colloids:A Comprehensive Introduction,Academic Press,1997中描述的。
这样的载体可以是包括但不限于微量滴定板、微滴定孔、针、纤维、珠、载玻片、硅片和膜(如硝酸纤维膜或PVDF膜)的多种形式和形状中的任一种。
根据本发明的方方面面，各种光谱学方法中的任一种可以用于测定靶分析物，例如toll样受体4或先天性免疫细胞应答的指示剂，包括但不限于气相色谱法、液相色谱法、离子迁移谱法、质谱法、液相色谱法-质谱法(LC-MS或HPLC-MS)、离子迁移谱法-质谱法、串联质谱法、气相色谱法-质谱法、基质辅助解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱法、表面增强激光解吸电离(SELDI)和核磁共振谱法，所有这些是技术人员公知的。
任选地，使用光谱测定分析测定样品中的靶分析物，例如toll样受体4或先天性免疫细胞应答的指示剂。质量分析可用于根据本发明的方方面面的测定中。使用例如飞行时间(TOF)质谱法或傅里叶变换离子回旋共振质谱法进行质量分析。质谱技术是本领域已知的，并且用于蛋白质和/或肽测定的方法的示例性详细描述见于Li J.,等,Clin Chem.,48(8):1296-1304,2002；Hortin,G.L.,Clinical Chemistry,52:1223-1237,2006；A.L.Burlingame等(Eds.),Mass Spectrometry in Biology and Medicine,HumanaPress,2000；和D.M.Desiderio,Mass Spectrometry of Peptides,CRC Press,1990。
3.人源化肿瘤携带NSG小鼠
杰克逊实验室NSG小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ，库存号005557)也通常被称为NOD scidγ；NSG；NOD-scid IL2Rγnull；和NOD-scid IL2Rgnull。它们结合了NOD/ShiLtJ背景(杰克逊实验室库存号001976)，严重联合免疫缺陷突变(scid)和IL2受体γ链缺陷的特征。因此，NSG小鼠缺乏成熟的T细胞、B细胞(并因此不产生小鼠抗体)，以及功能性NK细胞，没有补体系统，并且具有细胞因子信号传导缺陷，导致比任何其他公布的小鼠品系更好的人造血干细胞(HSC)和外周血单核细胞(PBMC)的移植。NSG小鼠也具有缺陷性巨噬细胞和树突状细胞。最近的出版物已经证实该品系在胰岛移植、造血干细胞和癌症干细胞的研究中的突出效用。
具体地，NSG小鼠不表达Prkdc基因和X连锁的Il2rg基因。NSG小鼠是能活的、能生育的、大小正常的，并且不表现出任何严重的身体或行为异常。淋巴样组织的组织学检查显示胸腺中淋巴样细胞和一些囊状结构的不存在，脾脏中卵泡的不存在和淋巴结的明显减少的细胞性。NSG小鼠在成熟T淋巴细胞和B淋巴细胞方面具有缺陷，血清Ig是不可检测的，以及自然杀伤(NK)细胞的细胞毒性活性是非常低的。即使在亚致死照射处理后，这些小鼠对淋巴瘤发生也具有抗性。已经显示这些突变小鼠容易地支持人CD34+造血干细胞的移植，并代表适用于使用异种移植策略的研究的优越的、长寿的(生存中值超过89周)模型。
NSG小鼠携带真实无效白介素-2受体γ链突变，与表达截短的白介素-2受体γ链的其他品系相反(参见Ohbo等,Blood,87:956-967,1996)。NSG小鼠根据材料转让协议(MTA)对于非营利性研究机构是可获得的，并且杰克逊实验室根据与NIH的协议分发NSG小鼠。
为了创建本发明的人源化NSG小鼠(HU-NSGTM)，造血干细胞例如人CD34+HSC通过例如尾静脉注射、心内注射或肝内注射被引入至杰克逊实验室NSG小鼠中。HSC可以被引入至约2周龄、3周龄或4周龄的NSG小鼠中。通常，25号针头可用于尾静脉注射。也可以使用较小规格的针头，可能增加接种物中的细胞的剪切。
用于HSC递送的替代性位点包括眶后静脉窦、骨髓腔本身、和脾脏。注射到眶后窦中比使用尾静脉更容易执行，但是更具有侵入性，并且其需要受体小鼠被麻醉。干细胞归巢至骨髓依赖于引导干细胞从外周血至骨髓腔的分子，例如基质衍生因子1和干细胞。因此，干细胞递送到循环中(或原位地到骨髓中)增加了细胞将建立在新宿主的骨髓中的驻留的可能性。
任选地，就在引入HSC之前，将NSG小鼠暴露于全身照射(TBI)以清髓，其可以通过将NSG小鼠置于特别设计的照射器中，用设计成导致动物变得暂时性或慢性免疫抑制的一定剂量的全身γ照射而实现。
人免疫系统在NSG小鼠中的成功存活可能需要以某种方式抑制宿主免疫系统以预防HVG(宿主对移植物)排斥。除了抑制宿主免疫系统之外，照射还帮助耗竭宿主祖细胞的骨髓生态位，从而允许用于供体干细胞的移植的空间。对于NSG小鼠，这种准备通常通过全身γ照射完成。照射器的尺寸可以不同，取决于其预期用途。小型照射器(例如来自JLShepherd and Associates,San Fernando,CA的Mark-I照射器)具有冰箱的尺寸，并通常用于照射细胞和少量小鼠两者。相比之下，一种常用的更大(6600磅)的γ照射器(Gammacell-40,MDS Nordion,Ottawa,ON)可用于一次照射几十只小鼠。动物通常被短时间照射(少于15分钟)。在照射器内花费的时间量根据放射性同位素衰变图、所需照射量、和电离能量的来源(即，X射线相对于γ射线，其需要铯或钴源)而变化。如果有必要，也可以使用更大的照射器，例如Clinac 4/80直线加速器(Varian Medical Systems,Palo Alto,CA)。通常，小鼠不需要出于照射而被麻醉。
清髓性照射剂量通常为700至1300cGy，尽管在一些实施方式中，也可以使用更低剂量，例如1-100cGy(例如，约2、5或10cGy)，或300-700cGy。它可以是铯或X射线照射。
在某些实施方式中，雌性NSG小鼠被手术植入人胸腺和肝碎片，并被注射供体匹配的人CD34+造血干细胞(人源化BLT NSG小鼠)。这样的人源化BLT-小鼠(hu-BLT)具有目前任何人源化小鼠模型的功能最强的免疫系统，并在某些研究例如基于粘膜的免疫应答中提供明显的优势和改善的性能。
在某些实施方式中，可以使用NSGS或NSG-SGM3小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1WjlTg(CMV-IL3、CSF2、KITLG)1Eav/MloySzJ，杰克逊实验室库存号013062，也通常被称为NOD-scid IL2Rgnull-3/GM/SF)代替使用NSG小鼠进行人源化。这是多等位基因小鼠系，其结合免疫缺陷环境与支持人髓性细胞扩增的多种转基因人细胞因子的存在，并代表用于容纳异种移植物的特别有用的模型。特别地，这些小鼠具有三个转基因：人白介素-3(IL-3)、人粒细胞/巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和人Steel因子(SF)基因，各自由人巨细胞病毒启动子/增强子序列驱动。这些小鼠被维持在NSG(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠背景上，并且组成性地产生2-4ng/mL血清水平的人IL-3、GM-CSF和SF。Il2rg-/-特异性NOD.SCID背景支持人类和鼠类造血细胞移植，并在人骨髓或胎儿肝脏细胞移植后在小鼠中抑制人红细胞生成，增强人骨髓生成，并减低人B淋巴细胞生成。
在某些实施方式中，小鼠被移植人外周血单核细胞，例如hu-PBMC NSGTM小鼠(或PBMC人源化小鼠)。
为了简单起见，在某些实施方式中，各种各样的NSG或NSG衍生的小鼠品系可以被统称为NSG小鼠。
在某些实施方式中，当小鼠为约3周龄时，人CD34+HSC被引入至NSG小鼠(或NSGS小鼠，或BLT-NSG小鼠)中，并且成熟的人B细胞在约第12周出现，和成熟的人T细胞在约第15周出现。
在某些实施方式中，在HSC移植后约12周，人CD34+移植的NSG小鼠(或NSGS小鼠，或BLT-NSG小鼠)在小鼠的外周血中具有至少约20％、25％、30％或更多的人CD45+细胞。
为了用患者衍生异种移植物(PDX)创建本发明的人源化NSG小鼠(或NSGS小鼠，或BLT-NSG小鼠)，人CD34+HSC重新入住的NSG小鼠(或NSGS小鼠，或BLT-NSG小鼠)被注射合适量的患者衍生细胞，例如1-10×106个人癌细胞。癌细胞的人来源可以通过Ki67染色验证。在某些实施方式中，PDX在HSC移植后约2周被引入至小鼠。在某些实施方式中，PDX在HSC移植后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15周被引入至小鼠。在某些实施方式中，PDX在移植的人免疫细胞(例如人B或T细胞或NK细胞)出现前被引入至小鼠。
在某些实施方式中，PDX的HLA型与供体人HSC的HLA型不匹配。
实施例
本说明书中提到的任何专利或出版物通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物被具体地和单独地指出被通过引用并入。
本文所述的本发明的非人类动物(例如小鼠)、组合物和方法目前代表某些说明性实施方式、示例性实施方式，并且另外并非旨在作为对本发明的范围的限制。本领域技术人员将想到其中的改变和其他用途。这样的改变和其他用途可以在不脱离如权利要求中阐述的本发明的范围的情况下作出。
实施例1 小鼠
NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtml Wjl/SzJ(NOD-scid IL2rγnull，NSG)小鼠是从在杰克逊实验室(Bar Harbor,ME)发育并维持的集群获得。所有动物在无特定病原体设施中、在微型隔离笼中居住，并被给予高压灭菌食物和在交替的星期用磺胺甲噁唑-甲氧苄氨嘧啶药水(Goldline Laboratories,Ft.Lauderdale,Fla.)和酸化的高压灭菌水供养。
实施例2 将人造血干细胞(HSC)移植到小鼠
如Pearson等(Curr.Protoc.Immunol.81:15.21.1-15.21.21,2008)所述用100cGy照射24至72小时龄(新生)NSG小鼠组。用含3×104CD34+造血干细胞(HSC)的CD3T细胞耗竭的人脐带血(UCB)以25-50μL体积通过心内注射注射照射的小鼠，如Brehm等(Clinic.Immunol.135(1):84-98,2010)所述。12周后，HSC受体的血液的流式细胞术分析量化人免疫系统的移植。对于实验性研究，仅使用具有>20％外周人CD45+细胞和>5％人CD3+T细胞的小鼠。
类似地，还可以用含3×104CD34+造血干细胞(HSC)的CD3T细胞耗竭的人脐带血(UCB)通过肝内注射或通过面部静脉注射注射亚致死照射的新生NSG小鼠，如Brehm等(Clinic.Immunol.,135(1):84-98,2010)所述。
此外，在使用标准技术通过侧尾静脉注射0.2-1×106CD34+HSC之前，约3周龄的NSG小鼠组可以以约200至1300cGy剂量进行全身亚致死照射。例如，在注射前称重每只动物，并且每次注射可以施用按体积计动物体重的至多约1％。在注射之前，温热动物5-10分钟(例如，在可商购加温盒中，或在顶置式加热灯下，或使用置于笼下的温水循环垫)以扩张静脉。然后将轻度麻醉的动物放置在其侧面上、在可再充电热袋或循环温水垫上以在麻醉期间保持它们温暖。然后插入小号(28-30)针头，斜向上，朝着动物头部方向进入静脉，尽量保持针头和注射器平行于尾部。针头应当顺利地前进到静脉中。注射之后，将动物关在笼子中并观察5-10分钟以确保出血没有重新开始。
对于BLT(骨髓/肝脏/胸腺)小鼠模型，约1mm3立方体的胎儿肝脏和胎儿胸腺被作为类器官植入至宿主NSG小鼠，其先前已经经受约200cGy的全身照射。然后使用标准技术通过侧尾静脉注射约0.2-1×106CD34+HSC。BLT小鼠模型允许稳健和一致的异种移植物(例如人)免疫系统发育，包含多种造血谱系；呈现持续的高水平T细胞发育；和T细胞在自体胸腺组织上被培育。这样的小鼠模型通常对病毒感染(例如EBV和HIV)具有可检测的T和B细胞应答。
在任何合适的人源化小鼠模型中，例如在人源化NSG小鼠中，患者衍生异种移植物(PDX)或癌细胞系在特定时间点(例如人CD34+细胞注射后2周或12周)被接种。异种移植物被允许生长，例如约7周，频繁监测体重和肿瘤体积(例如每周两次)。
在研究结束时可以从小鼠收集外周血，用于分析人CD45+供体细胞移植的程度。优选地，人CD45+供体细胞在外周血中必须达到至少约20-30％。
实施例3 预期的PDX生长速率的重演不需要HLA型匹配
基本上如上文实施例2所述进行NSG小鼠的人源化。简而言之，在使用标准技术通过侧尾静脉注射约0.2-1×106CD34+HSC之前，约3周龄的NSG小鼠组进行全身照射(约200cGy)。使用三种不同癌症样品(乳腺癌细胞BR0620、肺癌细胞LG1208和膀胱癌细胞BL0440)的PDX异种移植物被皮下植入到本发明的人源化NSG小鼠模型中，即具有来源于HLA错配的人HSC供体的已建立的且功能成熟的人免疫细胞的hu-CD34NSG小鼠，并在PDX移植后监测PDX移植的生长至多约55天。所有三种肿瘤显示稳健生长并且没有明显的排斥迹象(图1)。
结果显示在本发明的人源化NSG小鼠模型中重演预期的PDX生长速率不需要HLA型匹配。
实施例4 Hu-CD34NSGTM小鼠中PDX移植对肿瘤生长的时间评估
为了评估非HLA匹配的人源化hCD34+NSG小鼠中对PDX异种移植肿瘤生长的任何时间效应，根据基本上如上文实施例2或3所述的程序，在非HLA匹配的人CD34+细胞注射至NSG小鼠中2周或12周后，约5×106人SKOV3卵巢癌细胞被接种。异种移植物被允许生长约7周以上，每周两次监测体重和肿瘤体积。在研究结束时从小鼠收集外周血，用于分析人CD45+供体细胞移植的程度。每组7只小鼠的两个组(2周相对于12周)的平均结果显示在图2中。
在移植后2周时，人免疫力尚未显现。事实上，成熟的人T和B细胞需要至少12周以变得在hu-CD34NSG小鼠的PBL中可检测。然而，在肿瘤移植研究中，肿瘤成活(tumor take)在两组中均为100％(两者均为N＝7)，并且肿瘤体积随时间的增加在2周组中略微超过12周组(图2)。
结果显示两组小鼠之间没有显著差异，表明癌细胞系移植的时机相对于人源化对SKOV3卵巢癌细胞的生长没有显著的(如果有的话)影响。
在癌细胞接种50天后测试小鼠的人造血嵌合，并且在PBL中全部显示25-50％的huCD45+细胞，指示成功的移植(图3)。结果显示在非HLA匹配的人源化NSG PDX模型中癌细胞系移植的时机对CD45+细胞群没有显著的(如果有的话)影响。
实施例5 人源化对PDX生长动力学无显著影响
上述这些实验没有解决的一个重要问题是当与在正常、非人源化NSG小鼠中的生长速率相比时，人免疫细胞的存在是否影响肿瘤生长速率。
为了确定NSG小鼠模型中的人源化是否对非HLA匹配的PDX的生长动力学具有任何显著影响，使用与上述基本上相同的方法，三种新鲜的PDX肿瘤样品(乳腺癌BR0744(图4A)、肺癌LG0977(图4B)和软组织肉瘤SA0209(图4C))被独立地平行移植到NSG小鼠模型或huCD34-人源化NSG小鼠模型中，并相应地测量PDX生长曲线并绘图。
在NSG和人源化NSG模型两者中，所有三种肿瘤的成活率(take rate)为100％，并且肿瘤在每个移植宿主中发育。在NSG相对于hu-CD34NSG受体中，只有乳腺肿瘤以略微更快的速率生长(图4A)，其他两种肿瘤在宿主两者中以相同的速率生长(图4B和4C)。但总的来说，在移植实验期间后的整个40-70天内，在NSG相对于hNSG模型中，PDX肿瘤的肿瘤生长曲线没有显著差异。
在所有hNSG实验组中，外周血中的hCD45+细胞为高于20％，表明人源化是成功的。还参见图5A-5C，显示在非人源化NSG小鼠中没有观察到hCD45+细胞。
在肿瘤生长研究结束时，还收集肿瘤并通过流式细胞术分析TIL的存在。所有三种肿瘤含有人CD4+和CD8+T细胞，但检测到很少CD19+B细胞(参见图6A-6C)。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但TIL在hu-CD34NSG受体中减缓肿瘤生长的失败表明识别肿瘤的T细胞可能已经变得无变应性。
总的来说，这些结果证实hu-CD34NSG小鼠支持非HLA匹配的肿瘤生长，并且人免疫细胞的存在不显著影响肿瘤成活或生长速率。
实施例6 Hu-CD34NSGTM PDX小鼠是用于评价药物功效的功能平台
人源化NSG小鼠支持非HLA匹配的人肿瘤的生长的能力，如上文所证实的，是在该临床前测试平台的开发中的重要发现。
为了测试具有非HLA匹配的PDX的本发明的Hu-CD34 NSGTM小鼠是否可用于评估针对PDX的药物功效，使用临床相关标准护理(SOC)治疗，对阴性对照/载体组以及分别使用5-FU和阿瓦斯汀对抗结肠癌CN1572P5PDX的两个治疗组，获得在21天内的肿瘤生长曲线。具体地，5-FU以约20mg/kg体重的剂量静脉内施用，Q7d×2(每7天，总共2剂量)。阿瓦斯汀以约10mg/kg体重的剂量腹腔内施用，每周两次，总共5剂量。载体(D5W)被静脉内施用，Q7d×3。
图7A和7B中的结果显示，在本发明的人源化NSG模型中，5-FU和阿瓦斯汀两者均对非HLA匹配的结肠癌PDX有效。这证实本发明的非HLA匹配的Hu-CD34NSG PDX模型是用于评估临床相关标准护理(SOC)药物的功效的功能平台。
实施例7 Keytruda和顺铂抑制Hu-CD34 NSGTM中PD-L1+ MDA-MB-231乳腺癌肿瘤模型的生长
程序性细胞死亡蛋白1(也被称为PD-1和CD279)是人体中由PDCD1基因编码的蛋白质。PD-1是免疫抑制性细胞表面受体，其属于免疫球蛋白(Ig)超家族的CD28家族，并表达在T细胞、前B细胞、单核细胞、自然杀伤细胞和许多肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上。它是抑制T细胞应答的重要免疫"检查点"受体，并在调节T细胞功能中起到关键作用。
PD-1与两种配体PD-L1和PD-L2结合，其两者已经在肿瘤细胞上发现，并且其两者已经被肿瘤细胞用于衔接活化的T细胞上的PD-1受体以抑制活化的T细胞的功能，从而逃避针对肿瘤细胞的免疫应答。因此，PD-1及其配体通过阻止T细胞的活化而在下调免疫系统中发挥重要作用，其进而下调针对癌症的免疫应答，但也降低自身免疫力并促进自身耐受。PD-1的抑制作用被认为是通过促进淋巴结中的抗原特异性T细胞的凋亡(程序性细胞死亡)，同时减少调节性T细胞(抑制性T细胞)的凋亡的双重机制而实现。
阻断PD-1的新一类药物，PD-1抑制剂，激活免疫系统以攻击肿瘤并因此可用于治疗癌症。例如，针对PD-1的单克隆抗体可以增强免疫系统，从而可用于治疗癌症。此外，许多肿瘤细胞表达免疫抑制性PD-1配体PD-L1。因此，抑制PD-1和PD-L1之间的相互作用可以增强体外T细胞应答并介导临床前抗肿瘤活性。
在共有296名患者的临床试验中，一种这样的抗PD-1抗体药物nivolumab(Opdivo-Bristol Myers Squibb)在非小细胞肺癌、黑素瘤和肾细胞癌中产生完全或部分的应答。Nivolumab也靶向PD-1受体，并于2014年7月在日本和2014年12月由美国FDA批准用于治疗转移性黑素瘤。
另一个这样的抗PD-1抗体药物pembrolizumab(Keytruda,MK-3475,Merck)靶向PD-1受体，并于2014年9月由FDA批准用于治疗转移性黑素瘤。在2015年3月已经通过英国早期获得药物计划(Early Access to Medicines Scheme，EAMS)使英国晚期黑素瘤患者可获得Pembrolizumab。它也正在美国被用于肺癌和间皮瘤的临床试验。
在早期开发中靶向PD-1受体的其他药物包括Pidilizumab(CT-011，Cure Tech)、BMS 936559(Bristol Myers Squibb)和MPDL328OA(Roche)。
另一方面，顺铂是现在是一类的含铂抗癌化疗药物中的第一个成员，该类别也包括卡铂和奥沙利铂。这些铂络合物在体内反应，结合DNA并引起DNA交联，这最终触发细胞凋亡(程序性细胞死亡)。
为了确定移植的PDX肿瘤是否也响应于临床相关免疫-肿瘤学检查点抑制剂，或者这样的检查点抑制剂是否可以在驻留的人免疫细胞中重新激活抗肿瘤应答，设计和进行一系列实验以解决这些问题。
首先，为了确定检查点抑制剂pembrolizumab(Keytruda)是否在本发明的非HLA匹配的PDX人源化NSG模型中有效，根据本发明的方法建立PDX huNSG模型。具体地，通过用基质胶皮下接种，人源化NSG小鼠(人CD45+细胞被发现在hNSG小鼠的外周血中超过25％，证实成功的huCD34移植)被移植每只小鼠5×106的非HLA匹配的PD-L1-阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞。这个细胞系在肿瘤细胞表面表达非常高水平的PD-L1，其可以结合T细胞上的PD-1并诱导无变应性——约94.3％的MDA-MB-231细胞表达的PD-L1。然后用载体、顺铂或Prembrolizumab(Keytruda)处理肿瘤移植的人源化NSG小鼠。
对阴性对照/载体组以及分别使用顺铂和Pembrolizumab(Keytruda)对抗MDA-MB-231PDX的两个治疗组，获得在21天内的肿瘤生长曲线。具体地，顺铂以约2mg/kg体重的剂量静脉内施用，Q7d×2(每7天，总共2剂量)。Pembrolizumab(Keytruda)以约5-10mg/kg体重的剂量腹腔内施用，Q5d×4(每5天，总共4剂量)。载体(盐水)被腹腔内施用，Q5d×4。
顺铂是含铂的化学治疗剂，其在快速分裂的细胞中引起DNA交联和细胞凋亡。顺铂治疗仅少量降低人源化小鼠中MDA-MB-231肿瘤的生长速率。相反，Keytruda在开始治疗后约2周内显著延迟肿瘤生长(图8A和8B)。
在生长研究结束时，收集实验小鼠的外周血并分析人CD19+B细胞和人CD4+和CD8+T细胞。图9A-9D显示人T细胞，包括CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞两者，以及CD19+B细胞，存在于本发明的Hu-CD34 NSGTM非HLA匹配的MDA-MB-231 PDX小鼠的外周血中。
还收集肿瘤并分析人CD4+和CD8+浸润T细胞。图10A-10C显示人T细胞(CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞两者)存在于本发明的Hu-CD34 NSGTM非HLA匹配的MDA-MB-231 PDX小鼠的肿瘤组织中。
因此所有三个治疗组显示这些细胞与治疗无关的相似百分比。Keytruda处理的肿瘤中不存在额外的TIL表明较慢的肿瘤生长是由于驻留的TIL的重新激活而不是来自PBL或脾脏的TIL浸润的额外刺激。
数据再次证实本发明的非HLA匹配的Hu-CD34 NSG PDX模型是用于评估药物功效(包括可能依赖于移植的人免疫细胞的功能的免疫调节药物)的功能平台。
实施例8 Keytruda和顺铂抑制Hu-CD34 NSGTM中PD-L1+TNBC BR1126乳腺癌肿瘤模型的生长
在本实施例中获得与实施例7基本上相同的结果，其中非HLA匹配的PD-L1-阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞被非HLA匹配的PD-L1-阳性乳腺癌细胞系BR1126细胞(三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系)代替。三阴性乳腺癌是乳腺癌的侵袭性亚型，治疗选择有限。PD-L1表达已经在TNBC患者中被报道。当PD-L1表达在TIL中被评估时，其与较高等级和较大尺寸的肿瘤相关。肿瘤PD-L1表达也与TNBC中T调节细胞的浸润相关，这些发现表明PD-L1表达肿瘤和PD-1/PD-L1表达TIL在调节TNBC中的免疫应答中的作用。
具体地，通过皮下接种，人源化NSG小鼠被移植每只小鼠5×106的非HLA匹配的PD-L1-阳性乳腺癌细胞系BR1126细胞。这可以通过基质胶的存在而完成。约56.9％的BR1126细胞表达PD-L1。人CD45+细胞被发现在hNSG小鼠的外周血中超过25％。
对阴性对照/载体组，以及分别使用顺铂和Pembrolizumab(Keytruda)对抗BR1126PDX的两个治疗组，获得在21天内的肿瘤生长曲线。具体地，顺铂以约2mg/kg体重的剂量静脉内施用，Q7d×3(每7天，总共3剂量)。Pembrolizumab(Keytruda)以约5-10mg/kg体重的剂量腹腔内施用，Q5d×4(每5天，总共4剂量)。载体(盐水)被腹腔内施用，Q5d×4。
图11A和11B中的结果显示，针对本发明的人源化NSG模型中的非HLA匹配的PD-L1+乳腺癌PDX，与载体对照相比，顺铂和Keytruda两者显著降低肿瘤生长。
图12A-12D进一步显示，人T细胞，包括CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞两者，以及CD19+B细胞，存在于本发明的Hu-CD34 NSGTM非HLA匹配的BR1126 PDX小鼠的外周血中。
在研究结束时收集来自Keytruda处理的小鼠的肿瘤，并检查淋巴细胞浸润。图13A-13D显示人T细胞(CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞两者)以及CD19+B细胞存在于本发明的Hu-CD34 NSGTM非HLA匹配的BR1126 PDX小鼠的肿瘤组织中。因此，如在癌细胞系实验中那样，肿瘤也被人CD4+和CD8+T细胞以及人B细胞浸润，并且与载体处理的小鼠相比，用Keytruda处理不增加肿瘤浸润，再次表明较慢的肿瘤生长是由于驻留的免疫效应细胞的重新激活。
图13E-13H进一步显示，人T细胞(CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞两者)以及CD19+B细胞存在于本发明的Hu-CD34 NSGTM非HLA匹配的BR1126 PDX小鼠的脾脏中。
在类似的实验中，对单独化疗、抗PD-1剂Keytruda和抗CTLA4剂伊匹单抗治疗的PDX肿瘤样品进行免疫染色，针对CD45+CD8+浸润T淋巴细胞的存在。图16显示，与单独化疗相比，使用抗PD1剂Keytruda和抗CTLA4剂伊匹单抗的治疗导致浸润性CD45+CD8+T淋巴细胞的强烈存在。
这再次证实本发明的非HLA匹配的Hu-CD34 NSG PDX模型是用于评估药物功效(包括可能依赖于移植的人免疫细胞的功能的免疫调节药物)的功能平台。
实施例9 Keytruda+/-多西他赛抑制Hu-CD34NSGTM中PD-L1+LG1306肺癌肿瘤模型的生长
进行实验以确定hu-CD34 NSG小鼠中的肿瘤的组合治疗是否显示比任一单一试剂疗法更高的功效。
在本实施例中获得与实施例7和8基本相同上的结果，其中非HLA匹配的PD-L1-阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞或BR1126细胞被非HLA匹配的PD-L1-阳性肺癌细胞系LG1306代替。
具体地，人源化NSG小鼠被移植每只小鼠5×106的非HLA匹配的PD-L1-阳性PDX肺癌细胞系LG1306。约89.1％的LG1306细胞表达PD-L1。人CD45+细胞被发现在hNSG小鼠的外周血中超过20％。
对阴性对照/载体组，以及使用Pembrolizumab(Keytruda)、有或没有抗有丝分裂化疗剂多西他赛对抗LG1306PDX的两个治疗组，获得在24天内的肿瘤生长曲线。具体地，多西他赛当存在时以约10mg/kg体重的剂量静脉内施用，Q7d×4(每7天，总共4剂量)。Pembrolizumab(Keytruda)以约5mg/kg体重的剂量腹腔内施用，Q5d×6(每5天，总共6剂量)。载体(盐水)被腹腔内施用，Q5d×6。
来自单独用Keytruda治疗的小鼠的肿瘤显示与来自载体处理的对照的肿瘤相比降低的生长，但是由于10只小鼠中的一只不应答Keytruda，它们的应答是高度可变的。当Keytruda与多西他赛组合时，肿瘤生长在治疗后10天内被显著抑制，小鼠-至-小鼠(肿瘤-至-肿瘤)变化性很低。然而，当一个不应答Keytruda的小鼠被剔除出计算时，在Keytruda组和组合组之间没有差别。两组均显示肿瘤生长的显著降低，并且在组合Keytruda和多西他赛时没有观察到加和效应。
因此，图14A和14B所示的结果显示，Pembrolizumab(Keytruda)、有或没有多西他赛，对本发明的人源化NSG模型中非HLA匹配的PD-L1+乳腺癌PDX是有效的。
总的来说，本文所述的实验，特别是实施例6-9中的实验，证实被移植到hu-CD34NSG小鼠中的人肿瘤能够应答标准护理化学疗法。然而，甚至更重要的发现是，被移植的肿瘤似乎逃避人免疫力，非常像它们在从其获得它们的患者中所做的那样。此外，用TIL检查点抑制剂治疗推测性地从无变应性释放T细胞并刺激其对肿瘤的细胞毒性。
数据证实hu-CD34 NSG小鼠是用于收集对人免疫细胞和肿瘤的相互作用的新洞察，并用于测试免疫-肿瘤学和组合疗法的有力平台。
总的来说，本文实施例中证实的结果证实本发明的人源化小鼠(例如NSG小鼠)中PDX肿瘤的移植和生长，移植的小鼠对标准护理(SOC)治疗的应答，以及在用检查点抑制剂治疗后免疫介导的肿瘤消退。这些结果支持本发明的人源化小鼠(例如NSG小鼠)作为用于免疫-肿瘤学疗法的新的临床前桥梁的用途。
本文引用的所有参考文献(包括专利文献)通过引用并入本文。
Claims (23)
1.一种人源化免疫缺陷非肥胖糖尿病小鼠，其中所述小鼠：
(1)对于scid突变是纯合的；
(2)具有IL-2受体γ链缺陷；
(3)被移植CD34+人造血干细胞(HSC)；
(4)被接种人患者衍生异种移植物(PDX)；
其中所述HSC和所述PDX是非HLA匹配的。
2.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠是被进一步手术植入人胸腺和肝碎片的雌性NSG小鼠。
3.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠还包含组成型表达人白介素-3(IL-3)、人粒细胞/巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和/或人Steel因子(SF)的转基因。
4.权利要求1所述的小鼠，其中所述scid突变是Cg-Prkdcscid。
5.权利要求1所述的小鼠，其中所述IL-2受体γ链缺陷是Il2rgtm1Wjl。
6.权利要求1所述的小鼠，其为NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(即NOD scidγ(NSG))。
7.权利要求1所述的小鼠，其中所述CD34+人HSC通过尾静脉注射移植(优选所述小鼠为雌性)。
8.权利要求1所述的小鼠，其中所述CD34+人HSC被移植到约3周龄的所述小鼠。
9.权利要求1所述的小鼠，其中所述CD34+人HSC在所述小鼠的全身照射(例如，以约700至1300cGy的剂量)后移植。
10.权利要求1所述的小鼠，其中所述人PDX在所述小鼠被移植所述CD34+人HSC后约2周后被接种至所述小鼠。
11.权利要求1所述的小鼠，其中所述人PDX在所述小鼠被移植所述CD34+人HSC后约12周后被接种至所述小鼠。
12.权利要求1所述的小鼠，其中所述人PDX来自原代患者样品。
13.权利要求1所述的小鼠，其中所述人PDX来自已经被作为异种移植物传代至少一代的存档的肿瘤样品。
14.权利要求1所述的小鼠，其中所述人PDX是来自卵巢癌、肺癌例如非小细胞肺癌(NSCLC)、膀胱癌、淋巴瘤(例如AML、CML、ALL、CLL、DLBCL(弥漫性大B细胞淋巴瘤))、乳腺癌例如三阴性乳腺癌(TNBC)、脑癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胃/GIST癌、肝细胞癌、肾脏/肾癌、皮肤癌(例如黑素瘤)、软组织癌、肉瘤或癌细胞系的异种移植物。
15.权利要求1所述的小鼠，其中约5×106个细胞的所述人PDX被接种。
16.权利要求1所述的小鼠，其中在PDX接种后约50天(或在HSC移植后约9周)，所述小鼠的外周血中的人CD45+细胞的百分比达到约20-30％。
17.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠被施用抗癌化合物。
18.权利要求17所述的小鼠，其中所述抗癌化合物是5-FU、阿瓦斯汀、顺铂、卡铂、keytruda、多西他赛或其组合。
19.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠对于所述IL-2受体γ链缺陷是纯合的或半合的。
20.一种产生具有患者衍生异种移植物的人源化免疫缺陷非肥胖糖尿病小鼠的方法，所述方法包括：
(1)向免疫缺陷非肥胖糖尿病小鼠中引入CD34+人造血干细胞(HSC)，其中所述小鼠：
(a)对于scid突变是纯合的；和
(b)具有IL-2受体γ链缺陷；
(2)用人患者衍生异种移植物(PDX)接种所述小鼠，
其中所述HSC和所述PDX是非HLA匹配的。
21.一种预测多种抗肿瘤试剂治疗肿瘤的功效等级顺序的方法，所述方法包括：
(1)将所述多种抗肿瘤试剂中的每一种作为单一试剂施用于权利要求1所述的小鼠，并测定功效，其中所述PDX代表所述肿瘤；
(2)对所述多种抗肿瘤试剂中的每一种的功效进行比较和/或分级，由此预测所述多种抗肿瘤试剂治疗所述肿瘤的功效等级顺序。
22.一种测试用于使用两种或更多种候选试剂治疗肿瘤的组合疗法的方法，所述方法包括：
(1)将所述两种或更多种候选试剂作为单一试剂或作为组合施用于权利要求1所述的小鼠，并测定功效，其中所述PDX代表所述肿瘤；
(2)对所述组合的功效和所述单一试剂的功效进行比较，
其中与所述单一试剂的加和功效相比，所述组合的更高功效表明所述组合是更好的。
23.一种测定用于使用试剂治疗肿瘤的给药方案的功效和/或安全性的方法，所述方法包括：
(1)将所述试剂施用于权利要求1所述的小鼠，其中所述PDX代表所述肿瘤，并且其中所述试剂根据所述给药方案施用；
(2)测定功效和/或安全性。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2388330A1 (en) * | 2001-06-22 | 2011-11-23 | StemCells, Inc. | Liver engrafting cells, assays, and uses thereof |
| US20130042330A1 (en) * | 2011-02-15 | 2013-02-14 | Regeneron Pharmaceuticals | Humanized m-csf mice |
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 孙丽娜；孙晨鸣；赵勇: "免疫系统人源化小鼠模型的现状及应用", 《实验动物科学》 * |
| 路杰；崔凌凌: "人源化小鼠模型研究及应用进展", 《医学综述》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111485001A (zh) * | 2020-04-14 | 2020-08-04 | 澎立生物医药技术（上海）有限公司 | 具有nk细胞及adcc能力的人源化免疫系统小鼠的构建方法 |
| CN113264996A (zh) * | 2020-04-30 | 2021-08-17 | 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 | 一种人源化的非人动物及其制备方法和应用 |
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