CN107889988A - 一种功能型饮品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物67‑83、辣木叶酶解产物52‑69、茶树紫芽花青素10‑17、羧甲基纤维素钠3‑6、木糖醇9‑21、柠檬酸5‑9、苹果酸13‑18、蒲公英提取物27‑39、植物菌体粗提物8‑19、水115‑132。本发明采用不同种类的植物成分互相混合,取长补短,可制成品质优良、风味更佳的混合植物型饮料。解决目前市场上单一口味的果汁已经难以满足人们的需求的问题,既可以满足人们对于口感上的追求,也能进一步满足在健康饮食上的追求,有利于缓解现代白领的亚健康问题。
Description
技术领域
本发明涉及食品技术、健康管理领域,具体涉及一种功能型饮品。
背景技术
根据一份涉及我国31个省和直辖市、589个城市、收集到全国各地51.3万份有效调查问卷的结果显示,主流城市的白领亚健康比例达76%,处于过劳状态的接近六成,真正意义上的“健康人”比例极低(不到3%),35-50岁的高收入人群中,“生物年龄”超龄趋势明显加快,平均超过“日历年龄”10年左右。
其中,中国公职人员超重或肥胖比例高达40.7%,后面依次是血脂异常(28.7%),血压异常(14.2%),再就是心电图异常(10.4%)。公职人员脂肪肝和三高问题相对普通脑力劳动者高出4.4%和3.2%;肩颈酸胀(75%)和眼睛酸胀(60%)是公职人员最常见的问题。究其原因是与问卷调查中显示的58%公职人员“每日久坐办公5-8小时”,更有25%的人“每日久坐办公8-12小时”,以及公职人员长期伏案工作、缺少体育锻炼有关,未引起自己对健康的重视也是另一方面原因。
因此,“亚健康”问题正不断侵扰我国的中青年一代,摆脱亚健康状态不能只靠药物和补品,要尝试用健康的生活方式来对抗亚健康。比如合理的工作节奏、适当的运动、有规律的生活方式、充足的睡眠等。长期坚持“食补加运动”,治疗效果会比单纯的药补明显。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种能够解决亚健康带来问题功能型饮品,采用纯天然植物成分作为主要的功能配方,通过各功能性组分间的协效复配,提供一种长期服用能够有效增强免疫力、以及体内抑菌抗炎能力的功能型饮品,为解决亚健康问题提供一种风味独特、色泽和口感较好且具有较高营养价值的复合植物型饮品的新选择。
本发明的技术方案为:一种功能型饮品,其特征在于,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物67-83、辣木叶酶解产物52-69、茶树紫芽花青素10-17、羧甲基纤维素钠3-6、木糖醇9-21、柠檬酸5-9、苹果酸13-18、蒲公英提取物27-39、植物菌体粗提物8-19、水115-132。
进一步的,所述功能型饮品包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物72-78、辣木叶酶解产物57-63、茶树紫芽花青素12-15、羧甲基纤维素钠4-5、木糖醇11-17、柠檬酸6-7、苹果酸15-17、蒲公英提取物29-34、植物菌体粗提物10-13、水120-128。
进一步的,所述功能型饮品包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、辣木叶酶解产物59、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、植物菌体粗提物12、水125。
进一步的,所述荸荠皮提取物的制备方法为:将新鲜马蹄皮洗干净,烘干,粉碎;在料水比m:V=1:20,按原料的质量比加入0.1%-0.6%的果胶酶,在45℃下酶解10-60min;进行灭酶处理,过滤,留取滤液。本发明中,荸荠本身具有一定药用价值,加之荸荠皮中所含有的多种天然活性物质已被证实。经研究表明,与常用的化学防腐剂相比,荸荠皮提取物具有抗细菌能力较强,抗真菌的能力较弱,在近中性基质环境中仍具有较强的抗菌效力,且具有较强的热稳定性等抗菌特性;荸荠皮提取物的清除自由基的能力相当显著,其抗氧化活性随着浓度的增大而增强;荸荠皮提取物中含有多酚类和黄酮类等化合物,具有一定的清除DPPH自由基能力,其清除能力与提取物浓度之间显示出良好的剂量-效应关系。
进一步的,所述辣木叶酶解产物的制备方法为:将新鲜辣木叶洗净,将辣木叶和纯净水按照m:V=1:5的比例混合,使用搅拌机搅碎,按原料的原始质量加入1.7%-2.5%的果胶酶,采用柠檬酸调节pH达到3.5,在50℃下酶解8-12min,酶解后得初步酶解液,将初步酶解液煮沸10min灭酶,冷却至50-55℃,采用三聚磷酸钠将初步酶解液的pH调至6.5,按原料的原始质量加入0.5%-0.9%的复合风味蛋白酶,酶解0.8-1.5h,酶解结束后煮沸20min灭酶,用200目的尼龙布过滤,再将滤液通过截留分子量为5kDa超滤膜设备过滤,获得澄清的辣木叶酶解产物。本发明中,所述辣木(Moringa)原产于印度,因其叶、花、树皮、根、种子、枝和茎均具有较高的药效成分和营养价值,被西方科学家誉为“奇迹之树”。其中每100g辣木叶粉中含有的矿物质、维生素和人体必需氨基酸含量高于世界卫生组织推荐的每日摄入标准。研究发现,辣木叶具有降血糖、降血压、降血脂、降低胆固醇、抗氧化、抗衰老、增强免疫力等功效作用。通过本发明的制备方法从辣木叶中提取的功能组分,对于本发明的增强免疫力、体内抑菌抗炎能力有很好的促进作用。
进一步的,所述蒲公英提取物的制备方法为:取干蒲公英全草,粉碎至40目,将无水乙醇配制为70%体积浓度,作为浸提剂,按照料液比m:V为1:25投料,在水浴锅内100℃回流提取2h,结束后进行过滤浓缩,制成浓度为1g/mL的浸提液,冷冻干燥获得蒲公英提取物干粉。本发明中,蒲公英属菊科多年生草本植物,蒲公英植物体中含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分,具有广谱抑菌效果,对肺炎双球菌、脑膜炎球菌、白喉杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等有较强的抑菌活性,本发明中的蒲公英提取物具有优异的抑菌调节性。
进一步的,植物菌体粗提物的制备方法为:取新鲜杜仲皮洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至PDA(分离内生真菌)和高氏一号培养基(分离内生放线菌)上培养2-5d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有发酵培养基的锥形瓶中,置37℃,100r/min摇床振荡培养5d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,50℃减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量95%食用乙醇冷凝回流3次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为植物菌体粗提物。植物内生菌是一个庞大的微生物类群,其种类繁多,分布于不同寄主植物的不同部位,因此能产生多种不同的代谢产物,具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、杀虫、免疫抑制、抗氧化和降糖等活性。同时,由于植物自身对毒性分子充当了天然选择系统,造成植物内生菌来源的活性物质毒性相对较低。本发明经过大量实验证明,通过本发明的方法制备的植物菌体粗提物,采用的是杜仲皮的内生菌群,而杜仲EucommiaulmoidesOliv.为杜仲科(Eucommiaceae)杜仲属(Eucommia)植物,为我国特有的第三纪孑遗植物,也是我国特有的经济树种资源;不仅是重要的药用植物,也是亚热带和暖温带最具开发前景的胶源树种,目前已成为我国重要的战略资源。杜仲皮入药已有2000多年的历史,《神农本草经》就将杜仲列为上品,其中记载有“杜仲味辛平,主腰膝痛,补中益精气,坚筋骨,久服轻身耐老”。2015年版《中国药典》已将杜仲皮和杜仲叶作为两味药材。杜仲皮入药称为杜仲,具有补肝肾、强筋骨,安胎的功效;用于肝肾不足,腰膝酸痛、筋骨无力,头晕目眩,妊娠漏血,胎动不安等症。杜仲干燥叶入药称为杜仲叶,具有补肝肾、强筋骨的功效;用于肝肾不足,腰膝酸痛、筋骨萎软,头晕目眩等症。本发明制备的植物菌体粗提物对于动物体具有优异的抗菌活性,同时几乎没有生物毒性,低剂量的情况下既能够发挥生物活性,适合长时间食用。
本发明中,所述茶树紫芽花青素,所采用的茶树紫芽作为特异性茶树资源,在地方茶树有性品种中占有很大的比例。中国代表性品种主要有云南省农科院茶叶研究所选育的“紫娟”、浙江省选育的“苔香紫”、福建的“红芽佛手”等。在春季普通群体品种中,30%左右的芽叶呈现红紫色,在夏季则有88.7%呈现不同程度的红紫色,茶树上的红紫色芽叶较纯绿色芽叶含有较多的茶多酚、儿茶素和黄酮类化合物,其中花青素含量高是它呈红紫色的主要原因。经研究发现,茶树紫芽花青素作为一种强自由基清除剂,具有抗氧化、降血糖、抗炎、降压等多种保健功能。本发明中,所述茶树紫芽花青素赋予本发明饮料良好的色泽。特别的,所述茶树紫芽花青素可通过本领域任一现有技术实现。
本发明中,在食品存放或加工过程中,由于细菌作用的结果,从蛋白质或氨基酸分解,大多呈碱性的如胺类、氨气、含氮杂环化合物等不良风味的物质,采用柠檬酸和苹果酸分配,可以达到中和去味的效果。本发明中,采用羧甲基纤维素钠可作为稳定剂使本发明可得到较理想的感官效果。特别的,本发明中的功能组分具有天然的抗氧化功能,不需额外添加抗氧化剂,既能具有天然的防腐性能,具有较长保质期。
本发明功能饮料的制备方法为:S1.制备荸荠皮提取物、辣木叶酶解产物、蒲公英提取物、植物菌体粗提物等活性成分;S2.将各组分按比例混合调配, 所述混合液高速离心分离,获得备用分离液;S3.将所述分离液用均质机均质,得到均质液,均质压力为25MPa;流速为10dm3/h;S4.将均质后的饮料采用循环水泵脱气,在0.09 Mpa真空度下,脱气5分钟;S5.采用微孔滤膜对脱气后的饮料进行过滤除菌;S6.将经过滤的饮料灌装至玻璃瓶中,然后封盖。
特别的,本发明中所采用的试剂均为食品级。
本发明通过荸荠皮提取物、辣木叶酶解产物、茶树紫芽花青素、蒲公英提取物、植物菌体粗提物组分之间的协效复配,达到良好的抗炎抑菌以及免疫调节作用,其抗炎抑菌作用主要通过以下几方面的途径之一达到:抑制白细胞向炎症部位的游走;活化巨噬细胞产生一氧化氮,一氧化氮是免疫反应和炎症反应的介质分子,参与机体炎症反应和免疫调节,参与机体多个系统的生理和病理过程,抑制病原微生物的生长或杀灭细胞内病原体;抑制毛细血管的通透性,减少渗出液体积;能抑制IL-6的产生,并下调NF-κB的核转位,抑制Th2产生IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子,抑制前炎症细胞因子的释放,调节一些炎症相关因子的生成而发挥抗炎作用;增强巨噬细胞的吞噬活性。
本发明中,配合从植物体内提取出的活性菌体粗提物,活性菌体成分进入肠道内,一方面可以在肠道内定殖,维持肠道微生物菌群的平衡;另一方面是活性菌体成分与荸荠皮提取物、辣木叶酶解产物、茶树紫芽花青素、蒲公英提取物共同作用于宿主的免疫系统,诱发肠道免疫,并刺激胸腺,脾脏等免疫器官,促进巨噬细胞活性,通过增强B、T淋巴细胞对抗原刺激的反应性,发挥特异性免疫活性,从而增强机体的免疫功能,易于被人体吸收,条件95% 人群长期服用无不适症状。
本发明的有益效果在于:
本发明采用不同种类的植物成分互相混合,取长补短,可制成品质优良、风味更佳的混合植物型饮料。解决目前市场上单一口味的果汁已经难以满足人们的需求的问题,既可以满足人们对于口感上的追求,也能进一步满足在健康饮食上的追求,有利于缓解现代白领的亚健康问题。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
实施例1
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、辣木叶酶解产物59、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、植物菌体粗提物12、水125。
所述荸荠皮提取物的制备方法为:将新鲜马蹄皮洗干净,烘干,粉碎;在料水比m:V=1:20,按原料的质量比加入0.3%的果胶酶,在45℃下酶解35min;进行灭酶处理,过滤,留取滤液。
所述辣木叶酶解产物的制备方法为:将新鲜辣木叶洗净,将辣木叶和纯净水按照m:V=1:5的比例混合,使用搅拌机搅碎,按原料的原始质量加入2.1%的果胶酶,采用柠檬酸调节pH达到3.5,在50℃下酶解9min,酶解后得初步酶解液,将初步酶解液煮沸10min灭酶,冷却至52℃,采用三聚磷酸钠将初步酶解液的pH调至6.5,按原料的原始质量加入0.7%的复合风味蛋白酶,酶解1.1h,酶解结束后煮沸20min灭酶,用200目的尼龙布过滤,再将滤液通过截留分子量为5kDa超滤膜设备过滤,获得澄清的辣木叶酶解产物。
所述蒲公英提取物的制备方法为:取干蒲公英全草,粉碎至40目,将无水乙醇配制为70%体积浓度,作为浸提剂,按照料液比m:V为1:25投料,在水浴锅内100℃回流提取2h,结束后进行过滤浓缩,制成浓度为1g/mL的浸提液,冷冻干燥获得蒲公英提取物干粉。
所述植物菌体粗提物的制备方法为:取新鲜杜仲皮洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至PDA和高氏一号培养基上培养4d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有发酵培养基的锥形瓶中,置37℃,100r/min摇床振荡培养5d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,50℃减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量95%食用乙醇冷凝回流3次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为植物菌体粗提物。特别的,所述植物菌体粗提物的混合菌落总数为1.7*106cfu/g。
实施例2
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物72、辣木叶酶解产物57、茶树紫芽花青素12、羧甲基纤维素钠4、木糖醇11、柠檬酸6、苹果酸15、蒲公英提取物29、植物菌体粗提物10、水120。
所述荸荠皮提取物的制备方法为:将新鲜马蹄皮洗干净,烘干,粉碎;在料水比m:V=1:20,按原料的质量比加入0.1%的果胶酶,在45℃下酶解60min;进行灭酶处理,过滤,留取滤液。
所述辣木叶酶解产物的制备方法为:将新鲜辣木叶洗净,将辣木叶和纯净水按照m:V=1:5的比例混合,使用搅拌机搅碎,按原料的原始质量加入1.7%的果胶酶,采用柠檬酸调节pH达到3.5,在50℃下酶解12min,酶解后得初步酶解液,将初步酶解液煮沸10min灭酶,冷却至50℃,采用三聚磷酸钠将初步酶解液的pH调至6.5,按原料的原始质量加入0.5%的复合风味蛋白酶,酶解1.5h,酶解结束后煮沸20min灭酶,用200目的尼龙布过滤,再将滤液通过截留分子量为5kDa超滤膜设备过滤,获得澄清的辣木叶酶解产物。
所述蒲公英提取物的制备方法为:取干蒲公英全草,粉碎至40目,将无水乙醇配制为70%体积浓度,作为浸提剂,按照料液比m:V为1:25投料,在水浴锅内100℃回流提取2h,结束后进行过滤浓缩,制成浓度为1g/mL的浸提液,冷冻干燥获得蒲公英提取物干粉。
所述植物菌体粗提物的制备方法为:取新鲜杜仲皮洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至PDA和高氏一号培养基上培养2d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有发酵培养基的锥形瓶中,置37℃,100r/min摇床振荡培养5d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,50℃减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量95%食用乙醇冷凝回流3次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为植物菌体粗提物。特别的,所述植物菌体粗提物的混合菌落总数为2.5*105cfu/g。
实施例3
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物78、辣木叶酶解产物63、茶树紫芽花青素15、羧甲基纤维素钠5、木糖醇17、柠檬酸7、苹果酸17、蒲公英提取物34、植物菌体粗提物13、水128。
所述荸荠皮提取物的制备方法为:将新鲜马蹄皮洗干净,烘干,粉碎;在料水比m:V=1:20,按原料的质量比加入0.6%的果胶酶,在45℃下酶解10min;进行灭酶处理,过滤,留取滤液。
所述辣木叶酶解产物的制备方法为:将新鲜辣木叶洗净,将辣木叶和纯净水按照m:V=1:5的比例混合,使用搅拌机搅碎,按原料的原始质量加入2.5%的果胶酶,采用柠檬酸调节pH达到3.5,在50℃下酶解8min,酶解后得初步酶解液,将初步酶解液煮沸10min灭酶,冷却至55℃,采用三聚磷酸钠将初步酶解液的pH调至6.5,按原料的原始质量加入0.9%的复合风味蛋白酶,酶解0.8h,酶解结束后煮沸20min灭酶,用200目的尼龙布过滤,再将滤液通过截留分子量为5kDa超滤膜设备过滤,获得澄清的辣木叶酶解产物。
所述蒲公英提取物的制备方法为:取干蒲公英全草,粉碎至40目,将无水乙醇配制为70%体积浓度,作为浸提剂,按照料液比m:V为1:25投料,在水浴锅内100℃回流提取2h,结束后进行过滤浓缩,制成浓度为1g/mL的浸提液,冷冻干燥获得蒲公英提取物干粉。
所述植物菌体粗提物的制备方法为:取新鲜杜仲皮洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至PDA和高氏一号培养基上培养5d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有发酵培养基的锥形瓶中,置37℃,100r/min摇床振荡培养5d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,50℃减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量95%食用乙醇冷凝回流3次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为植物菌体粗提物。特别的,所述植物菌体粗提物的混合菌落总数为1.2*107cfu/g。
实施例4
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物67、辣木叶酶解产物52、茶树紫芽花青素10、羧甲基纤维素钠3、木糖醇9、柠檬酸5、苹果酸13、蒲公英提取物27、植物菌体粗提物8、水115。
实施例5
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物83、辣木叶酶解产物69、茶树紫芽花青素17、羧甲基纤维素钠6、木糖醇21、柠檬酸9、苹果酸18、蒲公英提取物39、植物菌体粗提物19、水132。
对比例1
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:辣木叶酶解产物59、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、植物菌体粗提物12、水125。特别的,本实施例所述辣木叶酶解产物、蒲公英提取物、植物菌体粗提物的制备方法与实施例1一致。
对比例2
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、植物菌体粗提物12、水125。特别的,本实施例所述荸荠皮提取物、蒲公英提取物、植物菌体粗提物的制备方法与实施例1一致。
对比例3
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、辣木叶酶解产物59、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、植物菌体粗提物12、水125。特别的,本实施例所述荸荠皮提取物、辣木叶酶解产物、植物菌体粗提物的制备方法与实施例1一致。
对比例4
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、辣木叶酶解产物59、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、植物菌体粗提物12、水125。特别的,本实施例所述荸荠皮提取物、辣木叶酶解产物、蒲公英提取物、植物菌体粗提物的制备方法与实施例1一致。
对比例5
一种功能型饮品,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、辣木叶酶解产物59、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、水125。特别的,本实施例所述荸荠皮提取物、辣木叶酶解产物、蒲公英提取物的制备方法与实施例1一致。
效果测试
本发明中的测试方法是参考《保健食品检验与评价技术规范实施手册》,根据相关的国家标准制定,本发明中所有实验数据的处理采用SPSS 16.0软件进行统计分析,所有功能测试效果的数据采用()表示。
饮料感官评价
采用感官评价法,对荸荠皮风味饮料的色泽、风味、口感为评定指标进行评分,请8名具有资深饮料品评经验的专家品尝,对照感官评判表鉴定后打分,满分100分,去掉一个最高分和一个最低分,然后取平均值作为评价结果。评分标准如下表。
经过感官评价试验,各实施例和对比例的感官评价得分如下表。
2.抗炎效果实验
对实施例1-5和对比例1-5进行抗炎效果测试,筛选小鼠72只,随机平分为12组。设定一组空白对照组,给予0.2mL/20g生理盐水;一阳性药物对照组,1次性给予0.2mL/20g氢化可的松注射液。实施例1-5和对比例1-5为试验组,给药量为0.2mL/20g,连续给药10d。末次给药1h,小鼠右耳廓涂二甲苯致炎。1h后将小鼠处死,剪下双耳用直径9mm的打孔器在同一部位打下耳片,称重并记录。实验结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
抗炎效果验证实验
2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验
小鼠50只,随机分为5组。A组为空白对照组,给予0.2mL/20g生理盐水,B、C、D组为试验组,分别给予实施例1溶液0.1mL/20g、0.2mL/20g和0.4mL/20g,连续给药10d。E组为阳性药物对照组,一次性给予0.2mL/20g氢化可的松注射液,结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
2.2大鼠棉球肉芽肿试验
取大鼠25只,用1%戊巴比妥麻醉,下腹部去毛消毒,将50mg的无菌棉球植入左侧腹股沟皮下,缝合伤口。术后随机分为5组,每组5只,1h后开始给药,分组及给药同2.1,连续给药10d。第11天取出棉球肉芽肿组织,于烘干箱中60℃烘干,称重并记录,结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
3.免疫调节效果实验
将通过实施例1制得的功能饮料浓缩脱水干燥,制备成粉末状,作为测试样品。阳性对照品:天美健牌大豆肽蛋白粉;来源:北京同仁堂健康药业股份有限公司;成人临床推荐用量:0.167g.kg-1.d-1。
受试动物品系和级别:BALB/c小鼠,Hartley豚鼠,SPF级;数量及性别:BALB/c 小鼠60只,雄性; Hartley豚鼠6只,均可。购入体重BALB/c小鼠17-19g,Hartley豚鼠250-350g。实验期间,小鼠自由进食饮水,每天观察小鼠状态。
根据样品的基本情况进行剂量设计,样品低、中、高按成人临床用量的5倍、10倍、20倍设计剂量,分别为0.15g.kg-1.d-1、 0.30g.kg-1.d-1 、0.60g.kg-1.d-1;阳性组剂量按成人推荐剂量的5倍设计,为0.835g.kg-1.d-1。将60只雄性小鼠随机各分为5组(空白对照组、阳性对照组、受试样品低、中、高剂量组),每组12只,其中2只作为备用动物。各组小鼠每天按0.1mL/10g体重灌胃相应样品液,空白组给予等量纯净水,每天1次,连续给药30天。试验开始、试验结束均称量体重1次,试验期间每周称量体重1次。
3.1小鼠淋巴细胞转化实验
末次给药1h,无菌取脾置于盛有RPMI-1640培养液的培养皿中,并放置200目筛网,用注射器活塞在其上方研磨制成脾细胞悬液,分装脾细胞悬液至加有淋巴细胞分离液的离心管中。400g,20℃下离心20min,离心完毕,取出离心管中淋巴细胞层离心管,加入RPMI-1640培养液洗涤数次,250g,4℃下离心10min。洗涤完毕后,弃去上清液,加入完全培养基,吹打均匀,用台盼兰染色计数保证95%以上活细胞率,将细胞浓度调整为2.5×105个/ml。
将每份脾细胞悬液分两孔加入48孔培养板中,每孔0.5ml,一孔加25 ul ConA液(相当于5ug/ml),另一孔作为对照,置于5%CO2,37℃ CO2孵箱中培养48h后每孔轻轻吸去上清液0.3 ml,加入0.3 ml RPMI-1640培养液,同时加入CCK 8 试剂50 ul/孔,继续培养2 h。结束培养后,吹打均匀,然后分装到96孔培养板中,每孔作3个平行实验,用酶标仪测450 nm波长下的光密度值。淋巴细胞的增殖能力由加ConA孔的光密度值与不加ConA 孔的光密度值的差值表示。实验结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
3.2小鼠体液免疫功能(血清溶血素)影响
给药25天,用生理盐水洗涤(2000r/min,10min)已脱纤维的羊血3次,在压积SRBC中加入生理盐水配成2%(v/v)的细胞悬液,每只小鼠腹腔注射0.2ml,第30天时,给药1h后,称重,所有小鼠摘除眼球取血0.8ml于离心管,静置1h,离心2000r/min,10min,收集血清。颈椎脱臼处死小鼠。用SA缓冲液稀释300倍的血清取1ml置试管内,再一次加入10%(v/v)SRBC0.5ml、用SA缓冲液稀释9倍的补体1ml,设置对照管(用SA代替血清),37℃恒温水浴20min,再冰浴,然后离心2000r/min,10min。取上清液1ml于新试管,加3.75ml都氏试剂、0.25ml 10%(v/v)SRBC,充分混匀,静置10min,以对照管为空白,540nm处分别测定各管光密度值,溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示。结果如下表所示。实验结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
3.3小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能及免疫器官影响的测定
末次给药1h,按体重从尾静脉注射用生理盐水1:3稀释的印度墨汁(10mL/kg),待墨汁注入,立即计时。注入墨汁后2、10min,分别从眼眶静脉丛采血20µL,并立即加到2mL 0.1%Na2CO3溶液中,以Na2CO3溶液作空白对照,用分光光度计在600nm波长处测定光密度值(OD),计算吞噬指数a。
小鼠采血后脱臼处死,解剖取肝脏、脾脏和胸腺,滤纸吸干脏器周围血液后,精密称重,计算脏器/体重比值。实验结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
3.4 NK细胞活性测定
末次给药1h,无菌取脾,无菌取脾置于盛有RPMI-1640培养液的培养皿中,并放置200目筛网,用注射器活塞在其上方研磨制成脾细胞悬液,分装脾细胞悬液至加有淋巴细胞分离液的离心管中。400g,20℃下离心20min,离心完毕,取出离心管中淋巴细胞层离心管,加入RPMI-1640培养液洗涤数次,250g,4℃下离心10min。洗涤完毕后,弃去上清液,加入完全培养基,吹打均匀,用台盼兰染色计数活细胞数(应在95%以上),最后用RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。
按比例将效应细胞和靶细胞(50:1)各100ul加入U型96孔板;靶细胞和培养液各100ul加入靶细胞自然释放孔;靶细胞和0.25%Triton各100ul加入靶细胞最大释放孔。每组均设3个平行孔,37℃,5%CO2培养箱培养4h后,离心1500rpm,5min。每孔吸取上清液100ul于平底96孔板,加入LDH基质液100ul/孔,反应3-10min,加入1mol/ml HCL 30ul/孔,酶标490nm测定光密度值。实验结果如下表所示。
注:“a”表示与空白组具有显著差异;“b”表示与阳性组具有显著差异。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。需注意的是,本发明中所未详细描述的技术特征,均可以通过本领域任一现有技术实现。
Claims (7)
1.一种功能型饮品,其特征在于,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物67-83、辣木叶酶解产物52-69、茶树紫芽花青素10-17、羧甲基纤维素钠3-6、木糖醇9-21、柠檬酸5-9、苹果酸13-18、蒲公英提取物27-39、植物菌体粗提物8-19、水115-132。
2.根据权利要求1所述的功能型饮品,其特征在于,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物72-78、辣木叶酶解产物57-63、茶树紫芽花青素12-15、羧甲基纤维素钠4-5、木糖醇11-17、柠檬酸6-7、苹果酸15-17、蒲公英提取物29-34、植物菌体粗提物10-13、水120-128。
3.根据权利要求2所述的功能型饮品,其特征在于,包括以下重量组份的原料:荸荠皮提取物75、辣木叶酶解产物59、茶树紫芽花青素14、羧甲基纤维素钠4、木糖醇13、柠檬酸6、苹果酸16、蒲公英提取物31、植物菌体粗提物12、水125。
4.根据权利要求1所述的功能型饮品,其特征在于,所述荸荠皮提取物的制备方法为:将新鲜马蹄皮洗干净,烘干,粉碎;在料水比m:V=1:20,按原料的质量比加入0.1%-0.6%的果胶酶,在45℃下酶解10-60min;进行灭酶处理,过滤,留取滤液。
5.根据权利要求1所述的功能型饮品,其特征在于,所述辣木叶酶解产物的制备方法为:将新鲜辣木叶洗净,将辣木叶和纯净水按照m:V=1:5的比例混合,使用搅拌机搅碎,按原料的原始质量加入1.7%-2.5%的果胶酶,采用柠檬酸调节pH达到3.5,在50℃下酶解8-12min,酶解后得初步酶解液,将初步酶解液煮沸10min灭酶,冷却至50-55℃,采用三聚磷酸钠将初步酶解液的pH调至6.5,按原料的原始质量加入0.5%-0.9%的复合风味蛋白酶,酶解0.8-1.5h,酶解结束后煮沸20min灭酶,用200目的尼龙布过滤,再将滤液通过截留分子量为5kDa超滤膜设备过滤,获得澄清的辣木叶酶解产物。
6.根据权利要求1所述的功能型饮品,其特征在于,所述蒲公英提取物的制备方法为:取干蒲公英全草,粉碎至40目,将无水乙醇配制为70%体积浓度,作为浸提剂,按照料液比m:V为1:25投料,在水浴锅内100℃回流提取2h,结束后进行过滤浓缩,制成浓度为1g/mL的浸提液,冷冻干燥获得蒲公英提取物干粉。
7.根据权利要求1所述的功能型饮品,其特征在于,植物菌体粗提物的制备方法为:取新鲜杜仲皮洗净至没有明显的杂质,表面消毒处理后,接种至PDA和高氏一号培养基上培养2-5d,然后分离获取菌落;从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有发酵培养基的锥形瓶中,置37℃,100r/min摇床振荡培养5d;发酵培养物除去菌体,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,50℃减压浓缩蒸干,即为混合菌液粗提物;离心和过滤得到的菌体,用适量95%食用乙醇冷凝回流3次,合并乙醇相,减压浓缩蒸干,即为植物菌体粗提物。
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