CN107881141A - 一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，包括以下重量份配比的原料：麦芽、土豆、玉米粉、葡萄糖、甘油、琼脂、乳酸、无水乙醇、乙酸钠、大豆蛋白胨、磷酸盐、氯化钙、紫苏叶浓缩液、功能酵母、多菌复合酶和无菌冰醋酸；本申请通过甘油诱导由麦芽、土豆和琼脂为主要成分制成的混合浓浆，通过葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度生长，然后通过甘油诱导浓浆进行自我蛋白表达，进一步促进细胞生长，增加蛋白表达量，在培育红曲菌株时可提高培养基中红曲的活性，从而有效地促进莫纳克林K的代谢，提高莫纳克林K的产量。

Description

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基

技术领域

本发明涉及一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基。

背景技术

当前癌症已成为威胁全球人类健康的一大杀手，主要治疗手段以西医方法 为主，包括手术、放疗化疗等等，均具有较强的副作用。然而到现在为止，癌 症依然只能靠药物控制，而新研发的抗癌功能性红曲产品与以往的抗癌类药物 相比较，能在体内维持较高的血药浓度，从而提高抗癌活性。并且没有任何药 物毒性，给药方便，只需口服给药，患者无需住院，提高了生活质量。抗癌功 能性红曲具有显著的疗效，是一种安全、有效、天然、绿色、零毒的口服抗癌 药物。

目前，功能性红曲传统上都是利用大米作为基质进行发酵培养的，也有利 用燕麦、青稞或山药为基质进行培养的，但是，单一基质的营养成分并不能完 全适合红曲菌种的生长和莫纳克林K的代谢，而粉状物料容易造成固体培养基 在发酵过程中结块，不利于培养基的基质散热和透气，使得培养基发酵结束后 还会存在部分生料存在，导致红曲菌株产量低，进而影响莫纳克林K的代谢速 度慢，降低莫纳克林K的产量。

发明内容

有鉴于此，本发明目的是提供一种有效地促进莫纳克林K的代谢，提高莫 纳克林产量的红曲菌株培养基。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，包括以下重量份配比的原 料：麦芽14-19份、土豆29-37份、玉米粉14-18份、葡萄糖9-14份、甘油7-11份、琼脂4-6份、乳酸9-13份、无水乙醇14-16份、乙酸钠3-5份、大 豆蛋白胨3-5份、磷酸盐1-2份、氯化钙6-8份、紫苏叶浓缩液3-5份、功能 酵母2-4份、多菌复合酶2-4份和无菌冰醋酸6-8份。

进一步的，包括以下重量份配比的原料：麦芽19份、土豆29份、玉米粉 14份、葡萄糖9份、甘油7份、琼脂4份、乳酸9份、无水乙醇14份、乙酸 钠3份、大豆蛋白胨3份、磷酸盐1份、氯化钙6份、紫苏叶浓缩液3份、功 能酵母2份、多菌复合酶2份和无菌冰醋酸6份。

进一步的，包括以下重量份配比的原料：麦芽14份、土豆37份、玉米粉 18份、葡萄糖14份、甘油11份、琼脂6份、乳酸13份、无水乙醇16份、乙 酸钠5份、大豆蛋白胨5份、磷酸盐2份、氯化钙8份、紫苏叶浓缩液5份、 功能酵母4份、多菌复合酶4份和无菌冰醋酸8份。

进一步的，包括以下重量份配比的原料：麦芽16.5份、土豆33份、玉米 粉16份、葡萄糖11.5份、甘油9份、琼脂5份、乳酸11份、无水乙醇15 份、乙酸钠4份、大豆蛋白胨4份、磷酸盐1.5份、氯化钙7份、紫苏叶浓缩 液4份、功能酵母3份、多菌复合酶3份和无菌冰醋酸7份。

进一步的，所述功能酵母为硒酵母、铁酵母、锌酵母中的一种或两种以上 的混合物。

进一步的，所述多菌复合霉为黑曲霉、米曲酶、枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌 中的一种或两种以上的混合物。

本发明要解决的另一技术问题为提供一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌 株培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)将麦芽14-19份和土豆29-37份通过研磨机研磨成混合浆，并将研磨得 到的混合浆按重量比例1∶4添加净水搅拌，制成混合浆液，并置于60-65℃的 水浴锅内持续加热4小时，然后用5层纱布叠加起来对混合浆液进行过滤，制 得过滤液用大烧杯储存，备用；

2)取玉米粉14-18份添加到步骤1)的大烧杯中与制得的混合浆液混合， 并用玻璃棒通过手动搅拌，使得玉米粉溶于混合浆液中，增加混合浆液的粘稠 度，备用；

3)取琼脂4-6份置于不锈钢莴中，并置于高压蒸汽灭菌器进行溶化，在 溶化琼脂过程中，先向不锈钢莴内加入温水并用搅拌棒持续搅拌，避免琼脂在 不锈钢莴的边缘焦化，然后以100-130℃的高温蒸煮灭菌10-20分钟，使得部 分琼脂溶化，然后将温度降至95-103℃蒸煮灭菌5-9分钟，使得剩余的琼脂完 全溶化，备用；

4)将步骤3)溶化制得的琼脂加入步骤2)大烧杯中与制得的混合浆液 中，并用搅拌棒通过手工将溶化的琼脂与混合浆液混合均匀，并在混合过程 中，依次添加甘油7-11份、乳酸9-13份、无水乙醇14-16份和乙酸钠3-5 份，使得混合浆液逐渐变稠，制得浓浆，备用；

5)取磷酸盐1-2份、氯化钙6-8份和无菌冰醋酸6-8份混合，并按2∶1 的比例与蒸馏水在无菌状态下混合溶解，然后混合紫苏叶浓缩液3-5份、功能 酵母2-4份和多菌复合酶2-4份，制得混合溶液，并注入步骤4)的大烧杯 中，与浓浆充分混合，然后通过酒精灯对大烧杯进行加热10-15分钟，使得浓 浆温度保持95-103℃，并在加热的时间内通过混合溶液将浓浆的PH值调整至 4.0，并持续加热5-7分钟，使得浓浆中水分蒸发，备用；

6)取葡萄糖9-14份和大豆蛋白胨3-5份添加到步骤5)制得的浓浆中， 通过葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度生长，当葡萄糖被利用完全，使得浓 浆中的细胞密度达到饱和，混合浓浆中的甘油作为诱导的碳源开启基因的大量 转录，诱导目的蛋白的表达，进一步促进细胞生长，增加蛋白表达量，最后将 基因表达后的浓浆置于恒温箱内，控制恒温箱的温度为30-33℃，并持续发酵 3-5天，使得面团完全发酵，制得培养基本体，备用；

7)将步骤6)制得的培养基本体裁切成小团，并将小团置于培养皿中，挤 压小团，使其摊开在培养皿中，制得培养基，然后培养基置于高温杀菌箱内， 在121℃的高温以及0.1MPa下灭菌20-25min，然后取出，通过压块将培养基 的基质压料，置于30℃的恒温箱内保存，即得。

本发明的有益效果：本申请通过将麦芽、土豆、玉米粉、葡萄糖和琼脂作 为培养基的主要成分制成浓浆，然后通过葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度 生长，然后通过甘油诱导浓浆进行自我蛋白表达，进一步促进细胞生长，增加 蛋白表达量，在培育红曲菌株时可提高培养基中红曲的活性，从而有效地促进 莫纳克林K的代谢，提高莫纳克林K的产量。

具体实施方式

实施例1

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，包括以下重量份配比的原 料：包括以下重量份配比的原料：麦芽19份、土豆29份、玉米粉14份、葡 萄糖9份、甘油7份、琼脂4份、乳酸9份、无水乙醇14份、乙酸钠3份、 大豆蛋白胨3份、磷酸盐1份、氯化钙6份、紫苏叶浓缩液3份、功能酵母2 份、多菌复合酶2份和无菌冰醋酸6份。

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基的制备方法，包括以下步 骤：

1)将麦芽19份和土豆29份通过研磨机研磨成混合浆，并将研磨得到的混 合浆按重量比例1∶4添加净水搅拌，制成混合浆液，并置于60℃的水浴锅内持 续加热4小时，然后用5层纱布叠加起来对混合浆液进行过滤，制得过滤液用 大烧杯储存，备用；

2)取玉米粉14份添加到步骤1)的大烧杯中与制得的混合浆液混合，并用 玻璃棒通过手动搅拌，使得玉米粉溶于混合浆液中，增加混合浆液的粘稠度， 备用；

3)取琼脂4份置于不锈钢莴中，并置于高压蒸汽灭菌器进行溶化，在溶 化琼脂过程中，先向不锈钢莴内加入温水并用搅拌棒持续搅拌，避免琼脂在不 锈钢莴的边缘焦化，然后以100℃的高温蒸煮灭菌10分钟，使得部分琼脂溶 化，然后将温度降至95℃蒸煮灭菌5分钟，使得剩余的琼脂完全溶化，备用；

4)将步骤3)溶化制得的琼脂加入步骤2)大烧杯中与制得的混合浆液 中，并用搅拌棒通过手工将溶化的琼脂与混合浆液混合均匀，并在混合过程 中，依次添加甘油7份、乳酸9份、无水乙醇14份和乙酸钠3份，使得混合 浆液逐渐变稠，制得浓浆，备用；

5)取磷酸盐1份、氯化钙6份和无菌冰醋酸6份混合，并按2∶1的比例 与蒸馏水在无菌状态下混合溶解，然后混合紫苏叶浓缩液3份、功能酵母2份 和多菌复合酶2份，制得混合溶液，并注入步骤4)的大烧杯中，与浓浆充分 混合，然后通过酒精灯对大烧杯进行加热10分钟，使得浓浆温度保持95℃， 并在加热的时间内通过混合溶液将浓浆的PH值调整至4.0，并持续加热5分 钟，使得浓浆中水分蒸发，备用；

6)取葡萄糖9份和大豆蛋白胨3份添加到步骤5)制得的浓浆中，通过葡 萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度生长，当葡萄糖被利用完全，使得浓浆中的 细胞密度达到饱和，混合浓浆中的甘油作为诱导的碳源开启基因的大量转录， 诱导目的蛋白的表达，进一步促进细胞生长，增加蛋白表达量，最后将基因表 达后的浓浆置于恒温箱内，控制恒温箱的温度为30℃，并持续发酵3天，使得 面团完全发酵，制得培养基本体，备用；

7)将步骤6)制得的培养基本体裁切成小团，并将小团置于培养皿中，挤 压小团，使其摊开在培养皿中，制得培养基，然后培养基置于高温杀菌箱内， 在121℃的高温以及0.1MPa下灭菌20min，然后取出，通过压块将培养基的基 质压料，置于30℃的恒温箱内保存，即得。

在本实施例中，所述功能酵母为硒酵母。所述多菌复合霉为黑曲霉和米曲 酶的混合物。

实施例2

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，包括以下重量份配比的原 料：包括以下重量份配比的原料：麦芽14份、土豆37份、玉米粉18份、葡 萄糖14份、甘油11份、琼脂6份、乳酸13份、无水乙醇16份、乙酸钠5 份、大豆蛋白胨5份、磷酸盐2份、氯化钙8份、紫苏叶浓缩液5份、功能酵 母4份、多菌复合酶4份和无菌冰醋酸8份。

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基的制备方法，包括以下步 骤：

1)将麦芽14份和土豆37份通过研磨机研磨成混合浆，并将研磨得到的混 合浆按重量比例1∶4添加净水搅拌，制成混合浆液，并置于65℃的水浴锅内持 续加热4小时，然后用5层纱布叠加起来对混合浆液进行过滤，制得过滤液用 大烧杯储存，备用；

2)取玉米粉18份添加到步骤1)的大烧杯中与制得的混合浆液混合，并用 玻璃棒通过手动搅拌，使得玉米粉溶于混合浆液中，增加混合浆液的粘稠度， 备用；

3)取琼脂6份置于不锈钢莴中，并置于高压蒸汽灭菌器进行溶化，在溶 化琼脂过程中，先向不锈钢莴内加入温水并用搅拌棒持续搅拌，避免琼脂在不 锈钢莴的边缘焦化，然后以130℃的高温蒸煮灭菌20分钟，使得部分琼脂溶 化，然后将温度降至103℃蒸煮灭菌9分钟，使得剩余的琼脂完全溶化，备 用；

4)将步骤3)溶化制得的琼脂加入步骤2)大烧杯中与制得的混合浆液 中，并用搅拌棒通过手工将溶化的琼脂与混合浆液混合均匀，并在混合过程 中，依次添加甘油11份、乳酸13份、无水乙醇16份和乙酸钠5份，使得混 合浆液逐渐变稠，制得浓浆，备用；

5)取磷酸盐2份、氯化钙8份和无菌冰醋酸8份混合，并按2∶1的比例 与蒸馏水在无菌状态下混合溶解，然后混合紫苏叶浓缩液5份、功能酵母4份 和多菌复合酶4份，制得混合溶液，并注入步骤4)的大烧杯中，与浓浆充分 混合，然后通过酒精灯对大烧杯进行加热15分钟，使得浓浆温度保持103℃， 并在加热的时间内通过混合溶液将浓浆的PH值调整至4.0，并持续加热7分 钟，使得浓浆中水分蒸发，备用；

6)取葡萄糖14份和大豆蛋白胨5份添加到步骤5)制得的浓浆中，通过 葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度生长，当葡萄糖被利用完全，使得浓浆中 的细胞密度达到饱和，混合浓浆中的甘油作为诱导的碳源开启基因的大量转 录，诱导目的蛋白的表达，进一步促进细胞生长，增加蛋白表达量，最后将基 因表达后的浓浆置于恒温箱内，控制恒温箱的温度为33℃，并持续发酵5天， 使得面团完全发酵，制得培养基本体，备用；

7)将步骤6)制得的培养基本体裁切成小团，并将小团置于培养皿中，挤 压小团，使其摊开在培养皿中，制得培养基，然后培养基置于高温杀菌箱内， 在121℃的高温以及0.1MPa下灭菌25min，然后取出，通过压块将培养基的基 质压料，置于30℃的恒温箱内保存，即得。

在本实施例中，所述功能酵母为硒酵母和铁酵母混合物。所述多菌复合霉 为枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的混合物。

实施例3

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，包括以下重量份配比的原 料：包括以下重量份配比的原料：麦芽16.5份、土豆33份、玉米粉16份、 葡萄糖11.5份、甘油9份、琼脂5份、乳酸11份、无水乙醇15份、乙酸钠4 份、大豆蛋白胨4份、磷酸盐1.5份、氯化钙7份、紫苏叶浓缩液4份、功能 酵母3份、多菌复合酶3份和无菌冰醋酸7份。

一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基的制备方法，包括以下步 骤：

1)将麦芽16.5份和土豆33份通过研磨机研磨成混合浆，并将研磨得到的 混合浆按重量比例1∶4添加净水搅拌，制成混合浆液，并置于63℃的水浴锅内 持续加热4小时，然后用5层纱布叠加起来对混合浆液进行过滤，制得过滤液 用大烧杯储存，备用；

2)取玉米粉16份添加到步骤1)的大烧杯中与制得的混合浆液混合，并用 玻璃棒通过手动搅拌，使得玉米粉溶于混合浆液中，增加混合浆液的粘稠度， 备用；

3)取琼脂5份置于不锈钢莴中，并置于高压蒸汽灭菌器进行溶化，在溶 化琼脂过程中，先向不锈钢莴内加入温水并用搅拌棒持续搅拌，避免琼脂在不 锈钢莴的边缘焦化，然后以115℃的高温蒸煮灭菌15分钟，使得部分琼脂溶 化，然后将温度降至99℃蒸煮灭菌7分钟，使得剩余的琼脂完全溶化，备用；

4)将步骤3)溶化制得的琼脂加入步骤2)大烧杯中与制得的混合浆液 中，并用搅拌棒通过手工将溶化的琼脂与混合浆液混合均匀，并在混合过程 中，依次添加甘油9份、乳酸11份、无水乙醇15份和乙酸钠4份，使得混合 浆液逐渐变稠，制得浓浆，备用；

5)取磷酸盐1.5份、氯化钙7份和无菌冰醋酸7份混合，并按2∶1的比 例与蒸馏水在无菌状态下混合溶解，然后混合紫苏叶浓缩液4份、功能酵母3 份和多菌复合酶2份，制得混合溶液，并注入步骤4)的大烧杯中，与浓浆充 分混合，然后通过酒精灯对大烧杯进行加热12分钟，使得浓浆温度保持99 ℃，并在加热的时间内通过混合溶液将浓浆的PH值调整至4.0，并持续加热 5-7分钟，使得浓浆中水分蒸发，备用；

6)取葡萄糖11.5份和大豆蛋白胨4份添加到步骤5)制得的浓浆中，通 过葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度生长，当葡萄糖被利用完全，使得浓浆 中的细胞密度达到饱和，混合浓浆中的甘油作为诱导的碳源开启基因的大量转 录，诱导目的蛋白的表达，进一步促进细胞生长，增加蛋白表达量，最后将基 因表达后的浓浆置于恒温箱内，控制恒温箱的温度为32℃，并持续发酵4天， 使得面团完全发酵，制得培养基本体，备用；

7)将步骤6)制得的培养基本体裁切成小团，并将小团置于培养皿中，挤 压小团，使其摊开在培养皿中，制得培养基，然后培养基置于高温杀菌箱内， 在121℃的高温以及0.1MPa下灭菌23min，然后取出，通过压块将培养基的基 质压料，置于30℃的恒温箱内保存，即得。

在本实施例中，所述功能酵母为硒酵母、铁酵母和锌酵母的混合物。所述 多菌复合霉为黑曲霉、米曲酶、枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌的混合物。

实验例

实验方法：目前制成红曲霉的培养基的基质多为有机物，因此在本实施例 中，以单一大米粉制成的培养基为对照组一，以单一大豆粉制成的培养基为对 照组二，本申请的培养基为对照组。

实验要求：三组实验皆采用等量的原料在同样的温度下制成培养基。并在 接种后通过紫外诱变。在本实施例中，根据培养基的物理情况判断其透气和散 热效果，另外对比莫纳克林K的代谢速度以及含量。

上表为三组培养基的对比数据

根据上表，对比以单一大米粉制成的培养基为对照组一，以单一大豆粉制 成的培养基为对照组二和本申请的培养基为对照组在同样的紫外诱变试验后测 得的数据，结果表明，在上表的数据中，本申请的培养基的物理特性突出了散 热和透气，使得莫纳克林K的代谢快以及含量高，因此使得红曲菌株的产量 高。

本发明的有益效果：本申请通过将麦芽、土豆、玉米粉、葡萄糖和琼脂作 为培养基的主要成分制成浓浆，然后通过葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度 生长，然后通过甘油诱导浓浆进行自我蛋白表达，进一步促进细胞生长，增加 蛋白表达量，在培育红曲菌株时可提高培养基中红曲的活性，从而有效地促进 莫纳克林K的代谢，提高莫纳克林K的产量。

当然，以上只是本发明的典型实例，除此之外，本发明还可以有其它多种 具体实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要 求保护的范围之内。

Claims (7)

1.一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，其特征在于：包括以下重量份配比的原料：麦芽14-19份、土豆29-37份、玉米粉14-18份、葡萄糖9-14份、甘油7-11份、琼脂4-6份、乳酸9-13份、无水乙醇14-16份、乙酸钠3-5份、大豆蛋白胨3-5份、磷酸盐1-2份、氯化钙6-8份、紫苏叶浓缩液3-5份、功能酵母2-4份、多菌复合酶2-4份和无菌冰醋酸6-8份。

2.如权利要求1所述的一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，其特征在于：包括以下重量份配比的原料：麦芽19份、土豆29份、玉米粉14份、葡萄糖9份、甘油7份、琼脂4份、乳酸9份、无水乙醇14份、乙酸钠3份、大豆蛋白胨3份、磷酸盐1份、氯化钙6份、紫苏叶浓缩液3份、功能酵母2份、多菌复合酶2份和无菌冰醋酸6份。

3.如权利要求1所述的一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，其特征在于：包括以下重量份配比的原料：麦芽14份、土豆37份、玉米粉18份、葡萄糖14份、甘油11份、琼脂6份、乳酸13份、无水乙醇16份、乙酸钠5份、大豆蛋白胨5份、磷酸盐2份、氯化钙8份、紫苏叶浓缩液5份、功能酵母4份、多菌复合酶4份和无菌冰醋酸8份。

4.如权利要求1所述的一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，其特征在于：包括以下重量份配比的原料：麦芽16.5份、土豆33份、玉米粉16份、葡萄糖11.5份、甘油9份、琼脂5份、乳酸11份、无水乙醇15份、乙酸钠4份、大豆蛋白胨4份、磷酸盐1.5份、氯化钙7份、紫苏叶浓缩液4份、功能酵母3份、多菌复合酶3份和无菌冰醋酸7份。

5.如权利要求1所述的一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，其特征在于：所述功能酵母为硒酵母、铁酵母、锌酵母中的一种或两种以上的混合物。

6.如权利要求1所述的一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基，其特征在于：所述多菌复合霉为黑曲霉、米曲酶、枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌中的一种或两种以上的混合物。

7.一种用于提高莫纳克林产量的红曲菌株培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将麦芽14-19份和土豆29-37份通过研磨机研磨成混合浆，并将研磨得到的混合浆按重量比例1：4添加净水搅拌，制成混合浆液，并置于60-65℃的水浴锅内持续加热4小时，然后用5层纱布叠加起来对混合浆液进行过滤，制得过滤液用大烧杯储存，备用；

2)取玉米粉14-18份添加到步骤1)的大烧杯中与制得的混合浆液混合，并用玻璃棒通过手动搅拌，使得玉米粉溶于混合浆液中，增加混合浆液的粘稠度，备用；

3)取琼脂4-6份置于不锈钢莴中，并置于高压蒸汽灭菌器进行溶化，在溶化琼脂过程中，先向不锈钢莴内加入温水并用搅拌棒持续搅拌，避免琼脂在不锈钢莴的边缘焦化，然后以100-130℃的高温蒸煮灭菌10-20分钟，使得部分琼脂溶化，然后将温度降至95-103℃蒸煮灭菌5-9分钟，使得剩余的琼脂完全溶化，备用；

4)将步骤3)溶化制得的琼脂加入步骤2)大烧杯中与制得的混合浆液中，并用搅拌棒通过手工将溶化的琼脂与混合浆液混合均匀，并在混合过程中，依次添加甘油7-11份、乳酸9-13份、无水乙醇14-16份和乙酸钠3-5份，使得混合浆液逐渐变稠，制得浓浆，备用；

5)取磷酸盐1-2份、氯化钙6-8份和无菌冰醋酸6-8份混合，并按2：1的比例与蒸馏水在无菌状态下混合溶解，然后混合紫苏叶浓缩液3-5份、功能酵母2-4份和多菌复合酶2-4份，制得混合溶液，并注入步骤4)的大烧杯中，与浓浆充分混合，然后通过酒精灯对大烧杯进行加热10-15分钟，使得浓浆温度保持95-103℃，并在加热的时间内通过混合溶液将浓浆的PH值调整至4.0，并持续加热5-7分钟，使得浓浆中水分蒸发，备用；

6)取葡萄糖9-14份和大豆蛋白胨3-5份添加到步骤5)制得的浓浆中，通过葡萄糖促使浓浆中的细胞进行高密度生长，当葡萄糖被利用完全，使得浓浆中的细胞密度达到饱和，混合浓浆中的甘油作为诱导的碳源开启基因的大量转录，诱导目的蛋白的表达，进一步促进细胞生长，增加蛋白表达量，最后将基因表达后的浓浆置于恒温箱内，控制恒温箱的温度为30-33℃，并持续发酵3-5天，使得面团完全发酵，制得培养基本体，备用；

7)将步骤6)制得的培养基本体裁切成小团，并将小团置于培养皿中，挤压小团，使其摊开在培养皿中，制得培养基，然后培养基置于高温杀菌箱内，在121℃的高温以及0.1MPa下灭菌20-25min，然后取出，通过压块将培养基的基质压料，置于30℃的恒温箱内保存，即得。