CN107875157A - 常春藤皂苷元及其糖苷在制备防治脑卒中的药物中的应用 - Google Patents

常春藤皂苷元及其糖苷在制备防治脑卒中的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了常春藤皂苷元及其糖苷在制备防治脑卒中的药物中的应用。本发明提供了序号1‑15的常春藤皂苷元或皂苷在制备防治脑卒中的药物中的应用，给予序号1‑15的常春藤皂苷元或皂苷处理的小鼠经双侧结扎颈总动脉及迷走神经致全脑缺血后，小鼠的存活时间比模型组显著延长；在线栓法MCAO模型中，用序号1‑15的常春藤皂苷元或皂苷干预后大鼠脑缺血体积比显著改善，结果显示：序号1‑15的常春藤皂苷元或皂苷对小鼠全脑缺血和大鼠局灶性脑缺血均具有良好的保护作用，因此，本领域技术人员有充分的理由相信序号1‑15的常春藤皂苷元或皂苷对缺血性脑卒中具有良好的防治作用。

Description

常春藤皂苷元及其糖苷在制备防治脑卒中的药物中的应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及已知天然产物的新用途，具体涉及常春藤皂苷元及其糖苷在制备防治脑卒中的药物中的应用。
背景技术
常春藤皂苷元(hederagenin)为一种五环三萜类化合物，化学名称为(3β,4α)-3,23-二羟基齐墩果-12-烯-28-酸，分子式为C30H48O4。常春藤皂苷为常春藤皂苷元的糖苷化产物。
常春藤皂苷元及常春藤皂苷在自然界中资源较为丰富，广泛分布于川续断科、忍冬科、毛茛科、五加科及败酱科等多种植物中，具有较好的开发优势。申请人对常春藤皂苷元及常春藤皂苷进行了系统的研究，发现常春藤皂苷元及常春藤皂苷具有多种药理作用，对多种疾病具有防治价值，具有广阔的临床开发应用前景。
缺血性脑卒中又称脑梗死，是由于脑动脉血流短暂或持久减少引起的，其病理机制较为复杂，基本过程是由于脑动脉形成栓塞或血栓等导致血液中断，局部脑组织发生缺血缺氧，导致脑部能量耗竭，产生兴奋性氨基酸毒性、急性炎症反应和梗死灶周边半暗带去极化等，最终引起神经功能缺损。
目前尚未见常春藤皂苷元及其糖苷用于防治脑卒中的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供常春藤皂苷元及其糖苷在制备防治脑卒中的药物中的应用。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
如下化学结构所示的常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种形成的组合物在制备防治脑卒中的药物中的应用，
其中，R1和R2代表的糖单元及其连接方式如下所示：
一种用于防治脑卒中的药物制剂，含有上述常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种形成的组合物，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。
优选地，所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。
优选地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。
一种提取物在制备防治脑卒中的药物中的应用，该提取物以新鲜或干燥的植物的整体或局部为原料提取制备得到，或以中药材、中药饮片为原料提取制备得到，所述提取物中含有上述常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种，所述常春藤皂苷元及其糖苷的含量占所述提取物的质量百分含量不低于50％。
一种用于防治脑卒中的药物制剂，含有上述提取物，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。
优选地，所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。
优选地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。
给予序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷处理的小鼠经双侧结扎颈总动脉及迷走神经致全脑缺血后，小鼠的存活时间比模型组显著延长；在线栓法MCAO模型中，用序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷干预后大鼠脑缺血体积比显著改善，结果显示：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷对小鼠全脑缺血和大鼠局灶性脑缺血均具有良好的保护作用，因此，本领域技术人员有充分的理由相信序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷对缺血性脑卒中具有良好的防治作用。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
本发明涉及到的常春藤皂苷元及其糖苷的化学名称、化学结构及相关参考文献如下，这些常春藤皂苷元及其糖苷通过购买或者由申请人自制，纯度不低于95％。
参考文献信息：
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实施例1：常春藤皂苷元及其糖苷的药理作用
1、对双侧结扎颈总动脉及迷走神经致小鼠脑缺血后存活时间的影响
将昆明种小鼠160只，按体重和性别随机均分为16组：模型组和序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组。给药组小鼠分别灌胃给予50mg/kg/d的常春藤皂苷元或皂苷，模型组灌胃给予等体积溶媒0.5％CMC-Na，连续灌胃2周。于末次灌胃后0.5h，用乙醚浅表麻醉，迅速结扎双侧颈总动脉和迷走神经，观察并记录小鼠存活时间，比较各组小鼠存活时间的差异。
实验结果：模型组小鼠的存活时间为128.6±31.5s；序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组小鼠的存活时间均在200s以上，显著优于模型组(P＜0.05)。该结果证明序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷均能延长小鼠脑缺血后的存活时间。各组小鼠具体存活时间如下表。
组别 存活时间(s) 组别 存活时间(s)
模型组 128.6±31.5 序号8给药组 212.2±35.5
序号1给药组 207.5±35.7 序号9给药组 206.8±28.9
序号2给药组 213.4±30.6 序号10给药组 204.5±30.3
序号3给药组 238.8±32.8 序号11给药组 221.7±36.7
序号4给药组 235.2±34.6 序号12给药组 208.9±28.8
序号5给药组 212.9±30.9 序号13给药组 213.1±32.4
序号6给药组 209.7±29.5 序号14给药组 202.4±31.8
序号7给药组 229.4±31.4 序号15给药组 217.6±33.0
2、对线栓法致局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响
将SD大鼠170只，按体重和性别随机均分为17组：正常对照组、模型组和序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组。给药组大鼠分别灌胃给予50mg/kg/d的常春藤皂苷元或皂苷，正常对照组、模型组灌胃给予等体积溶媒0.5％CMC-Na，连续灌胃4周。末次给药后1h，ip30mg/kg 10％戊巴比妥钠麻醉大鼠，仰卧位固定，于颈部正中切口，分离并暴露左侧颈总动脉及颈内、外动脉，结扎颈总动脉及颈外动脉近心端，于颈总动脉远心端剪一V形切口，插入MCAO栓线并固定插线，缝合皮肤。阻断血流2h后，拔线实现再灌注，大鼠在脑缺血再灌注48h断头处死大鼠，迅速取出大脑置-20℃冰箱中速冻约15min，取冠状面均匀切成2mm厚的脑片，迅速放入2％TTC溶液中，于37℃避光孵育15min，染色后取出脑片并摄片，采用ImagePlus 6.0测量梗死面积并计算梗死体积与大脑总体积比。
实验结果：模型组大鼠脑缺血体积比为35.5±8.2％，正常对照组大鼠未见明显脑缺血区，证明脑缺血造模成功。与模型组相比，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组大鼠脑缺血体积比均在10％以内，个别给药组甚至低于5％，证明序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷均对大鼠局灶性脑缺血均具有良好的保护作用。各组大鼠脑缺血体积比具体如下表。
组别 脑缺血体积比(％) 序号7给药组 5.5±1.5
正常对照组 未见明显脑缺血区 序号8给药组 8.4±2.1
模型组 35.5±8.2 序号9给药组 9.1±2.0
序号1给药组 7.2±2.4 序号10给药组 7.5±1.8
序号2给药组 4.8±1.3 序号11给药组 4.7±1.1
序号3给药组 5.3±1.5 序号12给药组 4.9±1.4
序号4给药组 4.2±1.2 序号13给药组 6.1±1.6
序号5给药组 6.9±1.7 序号14给药组 5.5±1.3
序号6给药组 5.8±1.6 序号15给药组 6.8±1.9
给予序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷处理的小鼠经双侧结扎颈总动脉及迷走神经致全脑缺血后，小鼠的存活时间比模型组显著延长；在线栓法MCAO模型中，用序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷干预后大鼠脑缺血体积比显著改善，结果显示：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷对小鼠全脑缺血和大鼠局灶性脑缺血均具有良好的保护作用，因此，本领域技术人员有充分的理由相信序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷以及这些皂苷元或皂苷的任意组合形成的组合物对缺血性脑卒中具有良好的防治作用。
实施例2：含有常春藤皂苷元或其糖苷的提取物的制备及药理作用
第一部分：提取物的制备
制备方法一：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物1)，加适量水混悬，过滤，上样于D101大孔树脂，从10％、30％、50％、70％、90％乙醇开始梯度洗脱，根据薄层板TLC显色法监控洗脱液中是否含有Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从树脂上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物1。
制备方法二：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用90％乙醇浸泡24h，过滤，收集滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物2)，加适量水混悬，过滤，上样于AB-8大孔树脂，从10％、30％、50％、70％、90％乙醇开始梯度洗脱，根据薄层板TLC显色法监控洗脱液中是否含有Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从树脂上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物2。
制备方法三：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，水煮6h，过滤，收集滤液，减压浓缩得到浸膏(取部分干燥得总提取物3)，过滤，上样于LX-38大孔树脂，从10％、30％、50％、70％、90％乙醇开始梯度洗脱，根据薄层板TLC显色法监控洗脱液中是否含有Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从树脂上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物3。
制备方法四：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物4)，加适量水混悬，依次以石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。正丁醇部位浸膏进行正相硅胶柱层析(200-300目)，以氯仿-甲醇梯度洗脱(20:1、10:1、5:1、2:1)，根据薄层板TLC显色法监控洗脱液中是否含有Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从硅胶上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物4。
制备方法五：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物5)，加适量水混悬，依次以石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。正丁醇部位浸膏进行ODS反相硅胶柱层析，依次用20％、30％、40％、50％甲醇水梯度洗脱，根据薄层板TLC显色法监控洗脱液中是否含有Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从ODS上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物5。
用HPLC-ELSD法测定上述5种不同制备方法制备的总提取物1-5以及富含DecaisosideE、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的黄褐毛忍冬提取物1-5中的Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总质量百分含量，结果如下表。
由此可见，制备方法一至五可以有效对Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙进行富集，得到富含Decaisoside E、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙这三种常春藤皂苷的黄褐毛忍冬提取物1-5。在下述药理作用中，为了便于黄褐毛忍冬提取物1-5药效强度的比较，给药剂量均以其中所含三种皂苷总和进行换算。
第二部分：提取物的防治脑卒中作用
1、对双侧结扎颈总动脉及迷走神经致小鼠脑缺血后存活时间的影响
将昆明种小鼠60只，按体重和性别随机均分为6组：模型组和黄褐毛忍冬提取物1-5给药组。给药组小鼠分别灌胃给予含50mg/kg/d三种总皂苷的提取物量，模型组灌胃给予等体积溶媒0.5％CMC-Na，连续灌胃2周。于末次灌胃后0.5h，用乙醚浅表麻醉，迅速结扎双侧颈总动脉和迷走神经，观察并记录小鼠存活时间，比较各组小鼠存活时间的差异。
实验结果：模型组小鼠的存活时间为128.6±31.5s；黄褐毛忍冬提取物1-5给药组小鼠的存活时间均在200s以上，显著优于模型组(P＜0.05)，但是各给药组的存活时间无显著性差异(P＞0.05)。该结果证明黄褐毛忍冬提取物1-5均能延长小鼠脑缺血后的存活时间。
各组小鼠具体存活时间如下表。
组别 存活时间(s) 组别 存活时间(s)
模型组 128.6±31.5 提取物3给药组 231.5±30.4
提取物1给药组 230.7±35.7 提取物4给药组 234.8±35.1
提取物2给药组 234.3±33.9 提取物5给药组 232.9±33.2
2、对线栓法致局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响
将SD大鼠70只，按体重和性别随机均分为7组：正常对照组、模型组和黄褐毛忍冬提取物1-5给药组。给药组大鼠分别灌胃给予含50mg/kg/d三种总皂苷的提取物量，正常对照组、模型组灌胃给予等体积溶媒0.5％CMC-Na，连续灌胃4周。末次给药后1h，ip 30mg/kg10％戊巴比妥钠麻醉大鼠，仰卧位固定，于颈部正中切口，分离并暴露左侧颈总动脉及颈内、外动脉，结扎颈总动脉及颈外动脉近心端，于颈总动脉远心端剪一V形切口，插入MCAO栓线并固定插线，缝合皮肤。阻断血流2h后，拔线实现再灌注，大鼠在脑缺血再灌注48h断头处死大鼠，迅速取出大脑置-20℃冰箱中速冻约15min，取冠状面均匀切成2mm厚的脑片，迅速放入2％TTC溶液中，于37℃避光孵育15min，染色后取出脑片并摄片，采用ImagePlus6.0测量梗死面积并计算梗死体积与大脑总体积比。
实验结果：模型组大鼠脑缺血体积比为35.5±8.2％，正常对照组大鼠未见明显脑缺血区，证明脑缺血造模成功。与模型组相比，黄褐毛忍冬提取物1-5给药组大鼠脑缺血体积比均在5％左右，各给药组之间无显著性差异(P＞0.05)，证明黄褐毛忍冬提取物1-5均对大鼠局灶性脑缺血均具有良好的保护作用。各组大鼠脑缺血体积比具体如下表。
给予黄褐毛忍冬提取物1-5处理的小鼠经双侧结扎颈总动脉及迷走神经致全脑缺血后，
小鼠的存活时间比模型组显著延长；在线栓法MCAO模型中，用黄褐毛忍冬提取物1-5干预后大鼠脑缺血体积比显著改善，结果显示：黄褐毛忍冬提取物1-5对小鼠全脑缺血和大鼠局灶性脑缺血均具有良好的保护作用，可以开发成防治脑卒中的药物。
实施例3：药物制剂
1、片剂：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物5g，淀粉50g，硬脂酸镁3g。制备工艺：取序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片。
2、胶囊：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物5g，淀粉50g，硬脂酸镁3g。制备工艺：取序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊。
3、注射液：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物1g，注射用氯化钠适量。制备工艺：取序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物加注射用水溶解，加入注射用氯化钠至等渗，调节pH值至7-7.1，滤过，冷藏24小时，加注射用水至规定量，滤过，灌封，灭菌，即得。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims (8)

1.如下化学结构所示的常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种形成的组合物在制备防治脑卒中的药物中的应用，
其中，R1和R2代表的糖单元及其连接方式如下所示：
2.一种用于防治脑卒中的药物制剂，其特征在于：含有权利要求1所述的常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种形成的组合物，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。
3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于：所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。
4.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于：所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。
5.一种提取物在制备防治脑卒中的药物中的应用，该提取物以新鲜或干燥的植物的整体或局部为原料提取制备得到，或以中药材、中药饮片为原料提取制备得到，其特征在于：所述提取物中含有权利要求1所述常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种，所述常春藤皂苷元及其糖苷的含量占所述提取物的质量百分含量不低于50％。
6.一种用于防治脑卒中的药物制剂，其特征在于：含有权利要求5所述的提取物，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。
7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于：所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。
8.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于：所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。
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