CN107864861B - 一种多花黄精的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了涉及植物组织培养技术领域，提供了一种多花黄精的组培快繁方法，包括依次进行沙藏、35～40℃温水浸泡和赤霉素处理对多花黄精种子进行预处理，以打破种子休眠；将预处理的种子接种于种子丛生芽诱导培养基中，直接将种子诱导为丛生芽，所述的种子丛生芽诱导培养基的组成包括：MS培养基+6‑BA 1.5～2.5mg/L+GA30.5～1.5mg/L+琼脂6.5～7g/L+蔗糖30～35g/L，pH值为5.5～6.0；将丛生芽分割并进行增殖培养以扩大丛生芽数量，生根培养、炼苗移栽，得到多花黄精种苗。本发明提供的方法能够有效的打破多花黄精种子休眠，将种子的萌芽期缩短至5个月，达到繁殖周期缩短，萌芽率提高到85～90％的效果。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种多花黄精的组培快繁方法。
背景技术
多花黄精(学名：Polygonatum cyrtonema Hua)是百合科黄精属的多年生草本植物，根状茎肥厚，少有近圆柱形，茎高可达100厘米，叶互生，椭圆形、卵状披针形至矩圆状披针形，伞形花序，花被黄绿色，浆果黑色，5～6月开花，8～10月结果。多花黄精的根状茎能够入药，也可作为观赏植物。
多花黄精为《中国药典(2015)》中规定的黄精品种，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾之功效。近年来，随着多花黄精功效的研究深入和黄精保健品、保健药问世，使得多花黄精的市场需求量日渐增加。随之带来的是，对多花黄精的大量采挖已造成野生资源蕴藏量迅速下降和环境的破坏，多花黄精的人工栽培技术成为了解决供需矛盾和保护生态环境的主要方法。
由于多花黄精是多年生植物，其植株生长缓慢、周期长，主要的繁殖方法为种子发芽繁殖和根茎繁殖，其中多花黄精种子收集难度大、自然萌发率极低，出苗率低，生长周期长；所以生产上以根茎繁殖作为多花黄精的主要培养方式。但是，多花黄精的根茎繁殖栽培用种量大、繁殖系数低、经济效益低，限制了大面积的推广种植，而且长期的无性繁殖还容易导致多花黄精的品种退化和药材品质不稳定。传统的根茎繁殖方式难以满足多花黄精的市场需求量。
现有研究中对多花黄精的快速繁殖方法研究多数停留在试验阶段，在生产上应用较少。目前，大多数的多花黄精组织培养方法集中在以黄精根茎为外植体上，比如申请号为201110450738.4的中国专利申请提供了一种以黄精带芽根茎为外植体的组培繁育方法，从块茎培育到生根苗需要7个月时间。授权公告号为CN103535281B的中国专利公开了一种以黄精根茎为外植体的组织培养方法，对诱导培养基、增殖培养基、生根培养基进行了优化，提高了多花黄精组织培养的增殖系数。授权公告号为CN102630562B的中国专利提供了一种以黄精根状茎为外植体，诱导形成丛生芽的组培方法，使每年的扩繁速度提高了106倍。根状茎具有很强的繁殖潜力，能长出幼芽和根系，形成新植株进行无性繁殖，因而现有技术多以多花黄精的根状茎作为外植体研究，容易产生丛生芽或愈伤组织，从而加快培育时间、提高增殖系数。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以多花黄精种子为外植体的组培快繁方法，缩短培育时间并提高繁殖系数。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种多花黄精的组培快繁方法，包括以下步骤：
(1)将沙藏后的多花黄精种子先在35～40℃温水中浸泡，再在赤霉素溶液中浸泡，得到预处理的种子；
(2)将预处理的种子接种到种子丛生芽诱导培养基上诱导培养，得到丛生芽；
所述种子丛生芽诱导培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 1.5～2.5mg、GA30.5～1.5mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述种子丛生芽诱导培养基的pH值为5.5～6.0；
(3)将步骤(2)得到的丛生芽分割成带有一个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中增殖培养；
(4)从步骤(3)增殖培养的丛生芽中分离单个不定芽，接种于生根培养基上生根培养，得到生根苗；
(5)将步骤(4)得到的生根苗炼苗后移栽，得到多花黄精种苗。
优选的，所述步骤(1)中，所述沙藏的多花黄精种子为去除外果皮的多花黄精种子。
优选的，所述步骤(1)中多花黄精种子沙藏的温度为4～15℃，沙藏的时间为30～120d。
优选的，所述步骤(1)中赤霉素浓度为50～160mg/L，赤霉素浸泡时间为20～24h。
优选的，所述步骤(2)中诱导培养条件为：培养温度20～30℃、光照时间10～14h/d、光照强度为1200～2000lx，所述诱导培养发时间为30～45d。
优选的，所述步骤(3)中丛生芽增殖培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 0.5～2.5mg、GA30.5～1.5mg、NAA0.1～0.2mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述丛生芽增殖培养基的pH值为5.5～6.0。
优选的，所述步骤(3)中增殖培养的条件为：培养温度为20～30℃，光照时间为10～14h/d，光照强度为1200～2000lx，所述增殖培养的时间为30～45d。
优选的，所述步骤(4)中生根培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 0.1～0.5mg、NAA 0.5～0.8mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述生根培养基的pH值为5.5～6.0。
优选的，所述步骤(4)中生根培养的条件为：培养温度为20～30℃，光照时间为10～14h/d，光照强度为1200～2000lx，所述生根培养的时间为20～30d。
优选的，所述步骤(5)中移栽的基质为混合土，所述混合土包括：体积比为3:1～1.5:0.5～1的营养土、蛭石和河沙。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明提供了一种多花黄精的组培快繁方法，包括依次进行沙藏、35～40℃温水浸泡和赤霉素处理对多花黄精种子进行预处理，以打破种子休眠；将预处理的种子接种于种子丛生芽诱导培养基中，直接将种子诱导为丛生芽，所述的种子丛生芽诱导培养基的组成包括：MS培养基+6-BA1.5～2.5mg/L+GA30.5～1.5mg/L+琼脂6.5～7g/L+蔗糖30～35g/L，pH值为5.5～6.0；将丛生芽分割并进行增殖培养以扩大丛生芽数量，生根培养、炼苗移栽，得到多花黄精种苗。本发明提供的多花黄精组培快繁方法中，沙藏使种子进入被迫休眠，能够提高种子的萌发率；将沙藏后的多花黄精种子以温水浸泡，激活种子的活性，使多花黄精种子从休眠状态部分恢复，再以赤霉素浸泡彻底打破休眠。本发明依次采用沙藏、35～40℃温水浸泡以及赤霉素浸泡的处理方式，能够有效的打破多花黄精种子的休眠状态，提高萌发率，并为多花黄精种子直接诱导成为丛生芽提供必要条件。本发明提供的方法从种子接种到种子丛生芽诱导培养基开始到移栽成活得到多花黄精种苗为止仅需要130～145d，将种子的萌芽期缩短至5个月，繁殖周期缩短，萌芽率提高到85～90％。
本发明所述的多花黄精组培快繁方法省略了将根状茎离体诱导、培养愈伤组织等复杂工序，通过种子丛生芽诱导培养基直接将种子诱导为丛生芽，有效的缩短了组织培育时间、简化操作步骤；本发明提供的方法可以使一粒种子扩繁成多株种苗，突破了一粒种子只能繁育一株种苗的局限，一粒种子的年增殖数可达143株。
在本发明提供的多花黄精的组培快繁方法中，采用本发明提供的种子丛生芽诱导培养基进行诱导时，预处理后的多花黄精种子先萌发形成球茎，球茎再生长出丛生芽。本发明仅需30～45d即可从预处理后的多花黄精种子诱导得到丛生芽，显著缩短了组织培养时间，并且直接从种子诱导得到的丛生芽可以继续增殖形成新的丛生芽；进而实现从一颗种子培养得到多株种苗的目的，提高了增殖系数。
附图说明
图1为接种的多花黄精种子；
图2为预处理的多花黄精种子诱导得到的丛生芽；
图3为多花黄精丛生芽增殖图；
图4为多花黄精的生根苗；
图5为混合土培养得到的多花黄精种苗。
具体实施方式
本发明提供了一种多花黄精的组培快繁方法，包括以下步骤：
(1)将沙藏后的多花黄精种子先在35～40℃温水中浸泡，再在赤霉素溶液中浸泡，得到预处理的种子；
(2)将预处理的种子接种到种子丛生芽诱导培养基上诱导培养，得到丛生芽；
所述种子丛生芽诱导培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 1.5～2.5mg、GA30.5～1.5mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述种子丛生芽诱导培养基的pH值为5.5～6.0；
(3)将步骤(2)得到的丛生芽分割成带有一个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中增殖培养；
(4)从步骤(3)增殖培养的丛生芽中分离单个不定芽，接种于生根培养基上生根培养，得到生根苗；
(5)将步骤(4)得到的生根苗炼苗后移栽，得到多花黄精种苗。
本发明将沙藏的多花黄精种子先在30～40℃的水中浸泡，再在赤霉素溶液中浸泡，得到预处理的种子。本发明首先利用低温沙藏促进多花黄精种子的后熟，打破种子休眠，再依次用温水浸泡、激素进一步打破多花黄精种子的休眠状态，促使其萌发。采用本发明提供的预处理方式处理多花黄精种子能够将多花黄精种子的萌芽期从2年缩短到5个月，显著缩短繁殖周期；同时，经过本发明所述预处理的多花黄精种子萌芽率提高到85～90％。
本发明所述沙藏的多花黄精种子为去除外果皮的多花黄精种子；优选的，去除外果皮的方式为：将采收的成熟多花黄精种子密闭放置2～3周，搓去外果皮后阴干，得到去除果皮的多花黄精种子。常规的多花黄精种皮去除方法往往需要2～3个月的时间才能够得到去皮的干燥种子，采用本发明提供的外果皮去除方法能够进一步缩短整个多花黄精从采收种子到得到快繁苗的时间。
在本发明中，所述沙藏时间优选为30～120d，更优选为50～80d，最优选为60d；所述沙藏温度优选为4～15℃，更优选为5～10℃。本发明在沙藏多花黄精种子时，优选的将沙藏湿度保持在40～60％；更优选为50～55％。
在本发明中，所述沙藏后的多花黄精种子优选的在30～40℃的水中浸泡12～36h；更优选为24h。
在本发明中，所述水浸泡后的多花黄精种子优选的在赤霉素溶液中浸泡20～24h，更优选为22h。在本发明中，所述赤霉素溶液的浓度优选为50～160mg/L，更优选为100～150mg/L。
得到所述预处理的种子后，本发明将预处理的种子接种到种子丛生芽诱导培养基上诱导培养，得到丛生芽。本发明所述种子丛生芽诱导培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 1.5～2.5mg、GA30.5～1.5mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述种子丛生芽诱导培养基的pH值为5.5～6.0；优选的，以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA2.0mg、GA31.0mg、琼脂6.8g和蔗糖32g。
本发明所述对pH值的调整没有特殊限定，采用本领域常用的酸或碱进行调节即可。
在本发明中，所述丛生芽诱导培养的温度优选为20～30℃，更优选为25±2℃；光照时间优选为10～14h/d，更优选为12h/d；光照强度优选为1200～2000lx，更优选为1400～1600lx；诱导培养的时间优选为30～45d，更优选为35～40d。
在本发明所述种子丛生芽诱导培养基中，经过预处理的多花黄精种子仅需要30～45d即可快速萌发为丛生芽。所述预处理的多花黄精种子在种子丛生芽诱导培养基中先生长形成球茎，继而球茎上分生出多个丛生芽，即本发明提供的方法能够省略传统的块茎离体诱导、培养愈伤组织等复杂工序，直接诱导种子萌发成丛生芽，精简了繁育步骤。同时，如附图2所示多花黄精种子诱导得到的丛生芽，本发明提供的方法使得一粒种子即可直接诱导得到多个丛生芽，提高了繁殖系数。
诱导得到丛生芽后，本发明将得到的丛生芽分割成带有一个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中增殖培养。在本发明中，所述丛生芽增殖培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 0.5～2.5mg、GA30.5～1.5mg、NAA0.1～0.2mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述丛生芽增殖培养基的pH值为5.5～6.0；优选的，以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 1.5mg、GA31.0mg、NAA 0.15mg、琼脂6.8g和蔗糖32g。
在本发明中，所述增殖培养的温度优选为20～30℃，更优选为25±2℃；光照时间优选为10～14h/d，更优选为12h/d；光照强度优选为1200～2000lx，更优选为1400～1600lx；增殖培养的时间优选为35～40d。
本发明从增殖培养得到的丛生芽基部剪下单个不定芽，接种于生根培养基，得到生根苗。本发明所述生根培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 0.1～0.5mg、NAA 0.5～0.8mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述生根培养基的pH值为5.5～6.0；优选的，以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括MS培养基、6-BA 0.2～0.3mg、NAA 0.6mg、琼脂6.8g和蔗糖32g。
在本发明，所述生根培养的条件，培养温度优选为20～30℃，更优选为25±2℃；光照时间优选为10～14h/d，更优选为12h/d；光照强度优选为1200～2000lx，更优选为1400～1600lx；生根培养的时间优选为20～30d，更优选为25d。
得到生根苗后，本发明对得到的生根苗进行炼苗，炼苗后移栽至混合土中培养，即得多花黄精种苗。本发明优选的将生根苗置于1800～2500lx光照下炼苗2～5d；所述光照条件更优选为2000lx；所述炼苗时间更优选为3d。
在本发明中，所述混合土包括：体积比为3:1～1.5:0.5～1的营养土、蛭石和河沙；更优选为体积比3:1.2:0.8的营养土、蛭石和河沙。本发明所述营养土优选为黑土，所述黑土是指由泥炭土、腐殖质等多种有机质积累滞水而成的；更优选的，所述黑土中的有机质含量优选为4～10％。本发明对所述营养土、蛭石和河沙的来源无特殊限定，采用符合上述标准的市售商品即可。
在本发明中，所述移栽后的培养温度优选为15～26℃，更优选为20～25℃；培养湿度优选为60～80％，更优选为65～70％。本发明优选的移栽培养的前5～7d内防止直射光照射移栽的生根苗。
采用本发明提供的方法一粒多花黄精种子的年增殖数可达到143株组培苗。本发明提供的方法有效的解决了生产中多花黄精繁殖长期依赖根茎繁殖的限制，本发明所述以黄精种子为外植体的快繁方法成本低、繁殖时间短、增殖系数高，为多花黄精生产繁殖和规模化种植提供了技术保障，克服了根茎繁殖栽培用种量大、繁殖系数低的问题。
下面结合实施例对本发明提供的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
取9～11月份采集的成熟黄精种子，置于塑料袋中密封放置2周，种皮即可软化，搓去果皮，清洗干净后将种子置于阴凉处自然晾干。将去除果皮的干燥多花黄精种子与沙子混合，在5℃下沙藏60d，沙藏期间定期喷水使湿度保持在50～55％。
将沙藏后的多花黄精种子在35～40℃的温水中浸泡24h，再在浓度为100mg/L的赤霉素溶液中浸泡22h后取出。在超净台中将赤霉素溶液浸泡后的多花黄精种子置于烧杯中，用体积分数75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，用质量分数0.1％的HgCl2溶液浸泡10min，再用无菌水冲洗5次后将多花黄精种子接种于种子丛生芽诱导培养基中(附图1)。所述的种子丛生芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+GA31.0mg/L+琼脂6.8g+蔗糖32g，培养基的pH值为5.5～6.0。在培养温度25±2℃、光照时间12h/d、光照强度1600lx的条件下，对接种后的种子丛生芽诱导培养基培养35～40d，种子先萌发为球茎，球茎再分化生长，即得多花黄精的丛生芽(附图2)。
将得到的丛生芽切成保留一个侧芽的茎段，分别接种于增殖培养基上，在培养温度25±2℃、光照时间12h/d、光照强度1600lx的条件下培养35～40d，得到增殖后的丛生芽(附图3)。所述增殖培养基为：MS+6-BA 1.5mg/L+GA31.0mg/L+NAA0.15mg/L+琼脂6.8g+蔗糖32g，培养基的pH值为5.5～6.0。
从增殖后的丛生芽基部剪下单个健壮不定芽，接种于生根培养基上，在培养温度25±2℃、光照时间12h/d、光照强度1600lx的条件下培养25d，得到生根苗(附图4)。所述生根培养基为：MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.6mg/L+琼脂6.8g+蔗糖32g，培养基的pH值为5.5～6.0。
得到生根苗后，将培养瓶打开，置于2000lx的光照下炼苗3d，取出生根苗，洗净培养基后移栽至混合土中，覆盖薄膜。移栽后7d内保持没有直射照射，使薄膜内温度保持在20～25℃、湿度65～70％，移栽7d后去膜，即得多花黄精种苗。所述混合土由体积比为3:1.2:0.8的黑土、蛭石和河沙混合而成。
本次试验中，多花黄精种子在种子丛生芽诱导培养基中的萌发率为90％，从种子接种到种子丛生芽诱导培养基开始到移栽成活得到多花黄精种苗为止仅需要140d，全年可增殖5次。
所述全年可增殖次数，是指从第一次诱导得到种子丛生芽为基础进行扩繁培养，能够连续扩繁培养的次数。
按照如下所示的公式计算，一粒多花黄精种子的年增殖数可以达到143组培苗。
种子年增殖数的计算公式为：
Y＝m×(X×Pe)n，
其中，m：种子个数；
X：每个培养周期增殖的丛生芽数；
Pe：指有效苗在繁殖得到的新苗数中所占的比率；
n：全年可增殖的周期次数。
本次试验中，当m＝1，每个周期增殖倍数X＝3，Pe＝90％，n＝5，一粒多花黄精种子全年所得种苗数为Y＝1×(3×90％)×5≈143株。
对比例1
除将去除果皮的干燥多花黄精种子在5℃下低温保存60d，定期喷水使湿度保持在50～55％外，其他步骤与实施例1相同。
结果显示，对比例1的试验中多花黄精种子在种子丛生芽诱导培养基上的萌发率为25％，在种子丛生芽诱导培养基上诱导为丛生芽的时间需要60～70d。
由实施例1与对比例1的试验可以看出，本发明对多花黄精种子进行沙藏能够有效的缩短种子诱导为丛生芽的时间，缩短了繁殖周期。
对比例2
除种子丛生芽诱导培养基的组成为：MS+6-BA 2.0mg/L+琼脂6.8g+蔗糖32g(缺少GA3)，培养基的pH值为5.5～6.0外，其他均与实施例1的步骤相同。
结果显示，对比例2的试验中多花黄精种子在缺少GA3的种子丛生芽诱导培养基中的萌发率为85％，但是种子萌发后根本无法形成丛生芽，只能生长为幼苗。
由实施例1与对比例2的试验可以看出，本申请提供的种子丛生芽诱导培养基有利于诱导多花黄精的种子形成丛生芽，而其他培养基则无法实现丛生芽诱导功能，也就是说本发明提供的方法解决了一粒种子只能萌发成一株组培苗的问题。
实施例2
取9～11月份采集的成熟黄精种子，置于塑料袋中密封发酵3周，种皮即可软化，搓去果皮，清洗干净后将种子置于阴凉处自然晾干。将去除果皮的干燥多花黄精种子与沙子混合，在4℃下沙藏50d，沙藏期间定期喷水使湿度保持在40～60％。
将沙藏后的多花黄精种子在30～40℃的温水中浸泡18h，再在浓度为50mg/L的赤霉素溶液中浸泡24h后取出。在超净台中将赤霉素溶液浸泡后的多花黄精种子置于烧杯中，用体积分数75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，用质量分数0.1％的HgCl2溶液浸泡10min，再用无菌水冲洗5次后将多花黄精种子接种于种子丛生芽诱导培养基中。所述的种子丛生芽诱导培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+GA30.5mg/L+琼脂6.5g+蔗糖30g，培养基的pH值为5.5～6.0。在培养温度27±2℃、光照时间14h/d、光照强度1300lx的条件下，对接种后的种子丛生芽诱导培养基培养40～45d，种子先萌发为球茎，球茎再分化生长，即得多花黄精的丛生芽。
将得到的丛生芽切成保留一个侧芽的茎段，分别接种于增殖培养基上，在培养温度27±2℃、光照时间14h/d、光照强度1300lx的条件下培养40～45d，得到增殖后的丛生芽。所述增殖培养基为：MS+6-BA 0.5mg/L+GA30.5mg/L+NAA0.10mg/L+琼脂6.5g+蔗糖30g，培养基的pH值为5.5～6.0。
从增殖后的丛生芽基部剪下单个健壮不定芽，接种于生根培养基上，在培养温度27±2℃、光照时间14h/d、光照强度1300lx的条件下培养30d，得到生根苗。所述生根培养基为：MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.5mg/L+琼脂6.5g+蔗糖30g，培养基的pH值为5.5～6.0。
得到生根苗后，将培养瓶打开，置于1800lx的光照下炼苗5d，取出生根苗，洗净培养基后移栽至混合土中，覆盖薄膜。移栽后8d内保持没有直射照射，使薄膜内温度保持在15～18℃、湿度60～70％，移栽8d后去膜，即得多花黄精种苗。所述混合土由体积比为3:1:0.5的黑土、蛭石和河沙混合而成。
本次试验中，多花黄精种子在种子丛生芽诱导培养基中的萌发率为85％，从种子接种到种子丛生芽诱导培养基开始到移栽成活得到多花黄精种苗为止仅需要145d，全年可增殖5次。
实施例3
取9～11月份采集的成熟黄精种子，置于塑料袋中密封发酵2周，种皮即可软化，搓去果皮，清洗干净后将种子置于阴凉处自然晾干。将去除果皮的干燥多花黄精种子与沙子混合，在8℃下沙藏80d，沙藏期间定期喷水使湿度保持在50～60％。
将沙藏后的多花黄精种子在30～35℃的温水中浸泡32h，再在浓度为150mg/L的赤霉素溶液中浸泡20h后取出。在超净台中将赤霉素溶液浸泡后的多花黄精种子置于烧杯中，用体积分数75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，用质量分数0.1％的HgCl2溶液浸泡10min，再用无菌水冲洗5次后将多花黄精种子接种于种子丛生芽诱导培养基中。所述的种子丛生芽诱导培养基为MS+6-BA 2.5mg/L+GA31.5mg/L+琼脂7g+蔗糖35g，培养基的pH值为5.5～6.0。在培养温度24±2℃、光照时间10h/d、光照强度1800lx的条件下，对接种后的种子丛生芽诱导培养基培养30～35d，种子先萌发为球茎，球茎再分化生长，即得多花黄精的丛生芽。
将得到的丛生芽切成保留一个侧芽的茎段，分别接种于增殖培养基上，在培养温度24±2℃、光照时间10h/d、光照强度1800lx的条件下培养30～35d，得到增殖后的丛生芽。所述增殖培养基为：MS+6-BA 2.5mg/L+GA31.5mg/L+NAA0.20mg/L+琼脂7g+蔗糖35g，培养基的pH值为5.5～6.0。
从增殖后的丛生芽基部剪下单个健壮不定芽，接种于生根培养基上，在培养温度24±2℃、光照时间10h/d、光照强度1800lx的条件下培养20d，得到生根苗。所述生根培养基为：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.8mg/L+琼脂7g+蔗糖35g，培养基的pH值为5.5～6.0。
得到生根苗后，将培养瓶打开，置于2100lx的光照下炼苗4d，取出生根苗，洗净培养基后移栽至混合土中，覆盖薄膜。移栽后7d内保持没有直射照射，使薄膜内温度保持在15～18℃、湿度60～70％，移栽7d后去膜，即得多花黄精种苗。所述混合土由体积比为3:1.5:1的黑土、蛭石和河沙混合而成。
本次试验中，多花黄精种子在种子丛生芽诱导培养基中的萌发率为87％，从种子接种到种子丛生芽诱导培养基开始到移栽成活得到多花黄精种苗为止仅需要130d，全年可增殖5次。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种多花黄精的组培快繁方法，包括以下步骤：
(1)将沙藏后的多花黄精种子先在35～40℃温水中浸泡，再在赤霉素溶液中浸泡，得到预处理的种子；
所述沙藏的多花黄精种子为去除外果皮的多花黄精种子；
所述多花黄精种子沙藏的温度为4～15℃，沙藏的时间为30～120d；
所述赤霉素浓度为50～160mg/L，赤霉素浸泡时间为20～24h；
(2)将所述预处理的种子接种到种子丛生芽诱导培养基上诱导培养，得到丛生芽；
所述种子丛生芽诱导培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 1.5～2.5mg、GA3 0.5～1.5mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述种子丛生芽诱导培养基的pH值为5.5～6.0；
(3)将步骤(2)得到的丛生芽分割成带有一个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中增殖培养；
所述丛生芽增殖培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA0.5～2.5mg、GA3 0.5～1.5mg、NAA 0.1～0.2mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g；所述丛生芽增殖培养基的pH值为5.5～6.0；
(4)从步骤(3)增殖培养的丛生芽中分离单个不定芽，接种于生根培养基上生根培养，得到生根苗；
所述生根培养基的组成包括：以MS培养基为基准，每升MS培养基中还包括6-BA 0.1～0.5mg、NAA 0.5～0.8mg、琼脂6.5～7g和蔗糖30～35g，所述生根培养基的pH值为5.5～6.0；
(5)将步骤(4)得到的生根苗炼苗后移栽，得到多花黄精种苗。
2.根据权利要求1所述多花黄精的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤(2)中诱导培养的条件为：培养温度20～30℃、光照时间10～14h/d、光照强度为1200～2000lx，所述诱导培养的时间为30～45d。
3.根据权利要求1所述多花黄精的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤(3)中增殖培养的条件为：培养温度为20～30℃，光照时间为10～14h/d，光照强度为1200～2000lx，所述增殖培养的时间为30～45d。
4.根据权利要求1所述多花黄精的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤(4)中生根培养的条件为：培养温度为20～30℃，光照时间为10～14h/d，光照强度为1200～2000lx，所述生根培养的时间为20～30d。
5.根据权利要求1所述多花黄精的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤(5)中移栽的基质为混合土，所述混合土包括：体积比为3:1～1.5:0.5～1的营养土、蛭石和河沙。
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