CN108260532A - 一种黄精的种子组培繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种黄精的种子组培繁育方法，其包括如下步骤：S1：将成熟的黄精种子依次进行乙烯处理、赤霉素处理和灭菌处理；S2：将步骤S1中灭菌处理后的黄精种子接种于组培培养基中，在23℃的温度、1800lux的光照度、14h的光照时间和40～60％的空气相对湿度的条件下培养；S3：待步骤S2中培养的黄精种子生长出一片叶子后，进行萌动管理，控制所述萌动管理条件为：温度为25℃、光照度为1200lux、光照时间为12h、空气相对湿度为40～60％。本发明方法简单易行，成本低廉，通过激素作用促进种子发芽的育苗方式，使多花黄精种子从接种到长出幼苗植株仅需6个月左右，且发芽率最高可达到95％以上，提高了多花黄精种子的发芽率，缩短了多花黄精种子的出芽时间。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄精的种子组培繁育方法，属于中药材繁育技术领域。
背景技术
黄精(Polygona-tum sibiricumRed.)系百合科黄精属多年生本草植物，集食用、药用和观赏等等价值为一体的林下经济作物。目前在我国，作为中药使用的分别有滇黄精、多花黄精、黄精，黄精可分为姜形黄精、鸡头黄精和大黄精三种。姜形黄精的原植物多花黄精，鸡头黄精的原植物为黄精，而大黄精的原植物为滇黄精。其中以多花黄精质量最佳。黄精含多糖、氨基酸、皂苷、蒽醌类化合物等成分，具有补中益气，滋阴润肺，补肾益精、降脂、降压、降糖，提高人体免疫、抗菌、抗衰老及治疗风湿痛等作用。随着黄精药用价值和营养保健等多功能价值被不断的挖掘，黄精的需求量日益增加，不仅国内市场消费巨大，还销往日本、韩国等国家。仅靠野生黄精的采挖已供不应求，黄精人工栽培已成为解决供需的主要路径。
由于黄精种子育苗时间长，繁殖率低，种子较难收集等因素，导致人工大面积种植的成本大大增加。所以在传统的人工种植中，主要利用无性繁殖，采用根茎繁殖，多代繁殖后退化比较严重、易感染病毒；同时用量大，需大量采挖野生多花黄精，对种源和环境破坏较为严重。采用种子繁殖，存在生长周期长(从播种到采收需4～5年)，种子发芽率低，成苗率低等问题。因此，常规繁殖方法已不适应多花黄精产业迅速发展的需求,迫切需要研究出一种快速且短时间内获得大量种苗、提高发芽率的育苗方法。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种黄精的种子组培繁育方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种黄精的种子组培繁育方法，其包括如下步骤：
S1：将成熟的黄精种子依次进行乙烯处理、赤霉素处理和灭菌处理；
S2：将步骤S1中灭菌处理后的黄精种子接种于组培培养基中，在23℃的温度、1800lux的光照度、14h的光照时间和40～60％的空气相对湿度的条件下培养；
S3：待步骤S2中培养的黄精种子生长出一片叶子后，进行萌动管理，控制所述萌动管理条件为：温度为25℃、光照度为1200lux、光照时间为12h、空气相对湿度为40～60％。
作为优选方案，所述乙烯处理的方法为：
将成熟的黄精种子搓除外皮之后，用清水洗净，置于含有乙烯溶液中浸泡2天，取出晾干。
作为优选方案，所述乙烯溶液的制备方法为：向每升无菌水中通入1000μL的乙烯，即可。
作为优选方案，所述赤霉素处理的方法为：
将乙烯处理后的黄精种子用含有赤霉素和多菌灵的水溶液浸泡1～3h后，在30～50％的相对湿度下静置1～3天，所述含有赤霉素和多菌灵的水溶液中，赤霉素的浓度为10～25mg/L，多菌灵的浓度为50～100mg/L。
作为优选方案，所述灭菌处理的方法为：
将赤霉素处理后的黄精种子用无菌水清洗后，置于0.1wt％的升汞中，振荡灭菌6～10min，再用无菌水清洗6～8遍。
作为优选方案，所述组培培养基是在MS基础培养基中加入6-BA、KT和2,4-D得到的，其中，6-BA、KT和2,4-D的加入量以每升MS基础培养基计，分别为1.5mg、0.5mg和0.5mg。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明方法简单易行，成本低廉，通过激素组合作用促进种子发芽的育苗方式。乙烯是一种植物内源激素，黄精种子在休眠阶段脱落酸含量增加，适量的乙烯能促使脱落酸含量降低，打破植物种子和芽的休眠；赤霉素能迅速打破种子、块茎和鳞茎等器官休眠，使黄精种子从接种到长出幼苗植株仅需6个月左右，且发芽率最高可达到90％以上，提高了黄精种子的发芽率，缩短了黄精种子的出芽时间，能在短时间内获得大量的多花黄精种苗，克服了传统技术中多花黄精种子育苗存在的发芽慢且发芽率低的问题，能满足大面积、规模化种植多花黄精的需要，具有生产与经济上的双重意义。本发明方法对于黄精属其他植物同样适用。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为本发明实施例1中的多花黄精的种子在组培25天后的生长状态；
图2为本发明实施例1中的多花黄精的种子在组培30天后的生长状态；
图3为本发明实施例1中的多花黄精的种子在组培35天后的生长状态；
图4为本发明实施例1中的多花黄精的种子在组培45天后的生长状态；
图5为本发明对比例1中的多花黄精的种子在组培25天后的生长状态；
图6为本发明对比例1中的多花黄精的种子在组培30天后的生长状态；
图7为本发明对比例1中的多花黄精的种子在组培35天后的生长状态；
图8为本发明对比例1中的多花黄精的种子在组培40天后的生长状态。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例提供了一种多花黄精的种子组培繁育方法，具体包括如下步骤：
1、多花黄精种子的乙烯处理
在10月份左右，采收成熟多花黄精种子，搓除果皮，然后用清水洗净，同时按照每升无菌水中通入1000uL乙烯的比例制备含有乙烯的溶液，将种子置于含有的乙烯溶液中浸泡2d，取出晾干。
2、多花黄精种子的赤霉素处理
将40mg/L赤霉素水溶液和150mg/L的多菌灵水溶液等体积混合均匀后，将步骤1处理的多花黄精种子浸泡于其中1～3h后，滤出，将种子置于纱布中在30～50％的湿度下静置1～3天。
3、多花黄精种子的灭菌处理
将步骤2处理的多花黄精种子，先用无菌水清洗，置于0.1％升汞中，振荡灭菌6～10min，在将种子用无菌水清洗6～8遍，备用。
4、多花黄精种子的接种
将步骤3的多花黄精种子接种于制备好的组培培养基中，控制组培培养基的配方为MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.5mg/L2,4-D，每瓶接种15个，置于温度23℃、光照度1800lux、光照时间14h、空气相对湿度40～60％的条件下置于培养架上培养。
5、萌动管理
待多花黄精种子生长出1片叶子，置于温度25℃、光照度1200lux、光照时间12h、空气相对湿度40～60％的条件下置于培养架上培养。
上述步骤2中，优选将40mg/L赤霉素、150mg/L的多菌灵水溶液等体积混合均匀，湿度控制在60％左右。
本实施例中预处理过的多花黄精种子接种于培养基上培养，第15天观察到部分嫩芽长出，颜色淡黄绿色；第25天观察到种子基本都发芽，并且根长出，嫩芽由淡黄绿色变成绿色。35天观察到嫩芽与根均生长旺盛，第40天统计出芽率95％，芽的平均长度4.2cm，平均根长度2.8cm。
实施例2
本实施例提供了一种多花黄精的种子组培繁育方法，具体包括如下步骤：
1、多花黄精种子的乙烯处理
在10月份左右，采收成熟多花黄精种子，搓除果皮，然后用清水洗净，同时按照每升无菌水中通入1000uL乙烯的比例制备含有乙烯的溶液，将种子置于含有的乙烯溶液中浸泡2d，取出晾干。
2、多花黄精种子的赤霉素处理
将40mg/L赤霉素水溶液和150mg/L的多菌灵水溶液等体积混合均匀后，将步骤1处理的多花黄精种子浸泡于其中1～3h后，滤出，将种子置于纱布中在30～50％的湿度下静置1～3天。
3、多花黄精种子的灭菌处理
将步骤2处理的多花黄精种子，先用无菌水清洗，置于0.1％升汞中，振荡灭菌6～10min，在将种子用无菌水清洗6～8遍，备用。
4、多花黄精种子的接种
将步骤3的多花黄精种子接种于制备好的组培培养基中，控制组培培养基的配方为MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.5mg/L2,4-D，每瓶接种15个，置于温度23℃、光照度1800lux、光照时间14h、空气相对湿度40～60％的条件下置于培养架上培养。
5、萌动管理
待多花黄精种子生长出1片叶子，置于温度25℃、光照度1200lux、光照时间12h、空气相对湿度40～60％的条件下置于培养架上培养。
本实施例的多花黄精种子组培25天后，发芽率可达到86％以上，且80％以上已生长出1片叶子，多花黄精种苗长势好。
实施例3
本实施例提供了一种多花黄精的种子组培繁育方法，具体包括如下步骤：
1、多花黄精种子的乙烯处理
在10月份左右，采收成熟多花黄精种子，搓除果皮，然后用清水洗净，同时按照每升无菌水中通入1000uL乙烯的比例制备含有乙烯的溶液，将种子置于含有的乙烯溶液中浸泡2d，取出晾干。
2、多花黄精种子的赤霉素处理
将40mg/L赤霉素水溶液和150mg/L的多菌灵水溶液等体积混合均匀后，将步骤1处理的多花黄精种子浸泡于其中1～3h后，滤出，将种子置于纱布中在30～50％的湿度下静置1～3天。
3、多花黄精种子的灭菌处理
将步骤2处理的多花黄精种子，先用无菌水清洗，置于0.1％升汞中，振荡灭菌6～10min，在将种子用无菌水清洗6～8遍，备用。
4、多花黄精种子的接种
将步骤3的多花黄精种子接种于制备好的组培培养基中，控制组培培养基的配方为MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.5mg/L2,4-D，每瓶接种15个，置于温度23℃、光照度1800lux、光照时间14h、空气相对湿度40～60％的条件下置于培养架上培养。
5、萌动管理
待多花黄精种子生长出1片叶子，置于温度25℃、光照度1200lux、光照时间12h、空气相对湿度40～60％的条件下置于培养架上培养。
本实施例的多花黄精种子组培25天后，发芽率可达到90％以上，且78％以上已生长出1片叶子，多花黄精种苗长势较好。
对比例1
本对比例提供了一种多花黄精的种子组培繁育方法，与实施例1相比，区别仅在于多花黄精种子未经过赤霉素处理。
将本对比例中预处理过的黄精种子接种于培养基上培养，如图5～8所示，第15天观察到部分嫩芽长出，颜色淡黄绿色；第25天观察到种子基本都发芽，并且根长出，嫩芽由淡黄绿色变成绿色，35天观察到嫩芽与根均生长旺盛，第40天统计出芽率80％，芽的平均长度3.8cm，平均根长度2.5cm。
对比例2
本对比例提供了一种多花黄精的种子组培繁育方法，与实施例1相比，区别仅在于多花黄精种子未经过乙烯处理。
对比例3
本对比例提供了一种多花黄精的种子组培繁育方法，与实施例1相比，区别仅在于多花黄精种子未经过乙烯处理和赤霉素处理。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
Claims (6)
1.一种黄精的种子组培繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将成熟的黄精种子依次进行乙烯处理、赤霉素处理和灭菌处理；
S2：将步骤S1中灭菌处理后的黄精种子接种于组培培养基中，在22～26℃的温度、暗培养和40～60％的空气相对湿度的条件下培养；
S3：待步骤S2中培养的黄精种子生长出一片叶子后，进行萌动管理，控制所述萌动管理条件为：温度为24～28℃、光照度为1000～1400lux、光照时间为10～14h、空气相对湿度为40～60％。
2.如权利要求1所述的黄精的种子组培繁育方法，其特征在于，所述乙烯处理的方法为：
将成熟的黄精种子搓除外皮之后，用清水洗净，置于含有乙烯溶液中浸泡2天，取出晾干。
3.如权利要求2所述的黄精的种子组培繁育方法，其特征在于，所述乙烯溶液的制备方法为：向每升无菌水中通入1000μL的乙烯，即可。
4.如权利要求1所述的黄精的种子组培繁育方法，其特征在于，所述赤霉素处理的方法为：
将乙烯处理后的黄精种子用含有赤霉素和多菌灵的水溶液浸泡1～3h后，在30～50％的相对湿度下静置1～3天，所述含有赤霉素和多菌灵的水溶液中，赤霉素的浓度为10～25mg/L，多菌灵的浓度为50～100mg/L。
5.如权利要求1所述的黄精的种子组培繁育方法，其特征在于，所述灭菌处理的方法为：
将赤霉素处理后的黄精种子用无菌水清洗后，置于0.1wt％的升汞中，振荡灭菌6～10min，再用无菌水清洗6～8遍。
6.如权利要求1所述的黄精的种子组培繁育方法，其特征在于，所述组培培养基是在MS基础培养基中加入6-BA、KT和2,4-D得到的，其中，6-BA、KT和2,4-D的加入量以每升MS基础培养基计，分别为1.0～2.0mg、0.3～0.8mg和0.3～0.8mg。
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