CN107858339B - 一种抑制淀粉酶活性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，采用回生法和反溶剂法制备淀粉纳米颗粒，并且用其作为抑制α‑淀粉酶活性的材料，即淀粉和甲壳素制成纳米颗粒，在最适pH值下纳米颗粒吸附α‑淀粉酶，抑制α‑淀粉酶的活性。通过采用稳定性好、分布均匀的淀粉纳米颗粒和甲壳素晶须吸附α‑淀粉酶，淀粉纳米颗粒与α‑淀粉酶的活性中心快速结合，形成α‑淀粉酶‑淀粉纳米颗粒复合物，从而阻碍了α‑淀粉酶与可溶性淀粉的结合。因此与可溶性淀粉底物结合的α‑淀粉酶的含量降低，从而抑制α‑淀粉酶的活性。制备低活性的α‑淀粉酶方法简单，易操作，成本较低，适合大规模生产，可应用于食品医药行业。

Description

一种抑制淀粉酶活性的方法
技术领域
本发明属于食品医药酶活提高技术领域，具体涉及一种抑制淀粉酶活性的方法。
背景技术
随着人们生活水平不断提高，受糖尿病、高血压、肥胖症等困扰的人群越来越多，人们的健康受到严重威胁。其中，2型糖尿病患病率越来越高，且趋于低龄化，糖尿病正成为影响人们健康和生活质量的重要社会问题之一。2型糖尿病是一种由于体内胰岛素分泌不足而引起的血糖升高为主的全身性疾病。国家卫生部统计显示，我国20岁以上的成人，2型糖尿病患病率已高达9.7％，前期患病率高达15.5％。根据世界卫生组织(WHO)2016年最新公布的全球糖尿病报告显示，我国已成为头号糖尿病大国，2型糖尿病患者约有1.1亿名，约占成年人总数的1/10，居全球首位。如不尽快采取行动遏制糖尿病不断增加的势头，预计该数字在2040年会增至1.5亿，给国民健康和社会经济带来严重影响。2型糖尿病是以持续高血糖水平为生化特征的综合病症，主要是由于体内糖代谢紊乱而致。而餐后血糖升高主要是消化液中淀粉酶(α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶)活性强，将淀粉快速水解产生葡萄糖，导致血糖水平持续升高。近年来，临床上降糖最常用手段是胰岛素注射，但皮下注射会给患者带来诸多疼痛和不便，且过量会导致低血糖等不良反应。口服降糖药物(二甲双胍、阿卡波糖和格列奈类)等，通过特异性地抑制淀粉酶活性，阻碍碳水化合物水解和消化，降低血糖、血脂水平来预防糖尿病、肥胖症等疾病的发病率。然而，这些药物会产生恶心、腹泻、视网膜病变等毒副作用。因此，研究天然、安全和高效的淀粉酶抑制剂对维护我国糖尿病、肥胖症等人群健康具有重大意义。
研究发现，天然生物活性成分包括黄酮类、生物碱类和多酚类在体外具有较好的淀粉酶抑制活性。这类生物活性成分对淀粉酶活性的抑制，主要是与酶活性位点上的氨基酸残基产生非共价键(氢键、疏水相互作用等)或共价键(π-π键等)，导致酶活性位点掩盖或构象改变。然而，黄酮、多酚类等成分在胃肠道中易分解，稳定性差，体外发现的对淀粉酶活性的抑制特性在体内实验中未获得显著效果。
纳米技术作为一种新兴的前沿技术，在新材料、生物、医药和农业等领域得到深入研究和广泛应用。近年来，纳米材料具有尺寸小，比表面积大，吸附力强等特点，对生物酶的活性产生显著影响，引起国内外医药和食品领域学者的极大关注。由于无机纳米颗粒存在潜在的毒性，近年来，具有生物相容性的天然生物大分子纳米颗粒作为生物酶抑制剂受到广大学者的广泛关注。天然多糖(淀粉、纤维素、甲壳素和壳聚糖等)具有可降解、可再生和生物相容性等优点，被大量应用于纳米颗粒的制备和活性成分的装载。然而，多糖纳米颗粒对淀粉酶活性的影响尚未见报道。实验发现淀粉纳米颗粒、甲壳素晶须对α-淀粉酶活性有显著的抑制效果。实验研究的天然多糖纳米颗粒作为一种新型淀粉酶抑制剂，对2型糖尿病、肥胖症等控制和预防具有巨大的应用价值和潜在的应用前景。
发明内容
针对现有技术中的2型糖尿病、肥胖症等人群，本发明的目的在于提供一种抑制淀粉酶活性的方法，利用淀粉纳米颗粒和甲壳素晶须与α-淀粉酶相互作用，对α-淀粉酶活性抑制作用。
本发明采取的技术方案为：
一种抑制淀粉酶活性的方法，采用回生法和反溶剂法制备淀粉纳米颗粒，并且用其作为抑制α-淀粉酶活性的材料，其具体制备步骤为：
(1)回生法淀粉纳米颗粒的制备：
向糊化淀粉乳中加入一定量的普鲁兰酶在55℃-60℃条件下使淀粉脱支酶解5-7h，离心取上清液，加入上清液质量浓度为0.5-1‰Tween 80(w/v)将脱支后的淀粉酶解液置于4℃回生11-13h制备淀粉纳米颗粒，冷冻干燥；
(2)甲壳素晶须的制备：
将甲壳素和浓度为1-3M的HCl按照质量比1:20-25混合溶解，在100-110℃下剧烈搅拌 1.5-2.5h；酸水解后悬浊液离心并水洗，再将得到的悬浊液重新分散到透析膜中透析4-6天；透析后得到的样品真空冷冻干燥得到纳米甲壳素；
(3)低活性α-淀粉酶的制备：
称取淀粉纳米颗粒或甲壳素晶须溶于磷酸缓冲溶液中，并超声使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，搅拌形成淀粉纳米颗粒/α-淀粉酶复合体系。
进一步的，所述步骤(1)中淀粉纳米颗粒采用反溶剂法制备：向糊化淀粉乳中逐滴加入四倍体积的无水乙醇，滴完后搅拌3-5h，悬浊液离心后，冷冻干燥。
进一步的，所述糊化淀粉乳为蜡质玉米淀粉和pH为5的磷酸缓冲溶液按照质量g/体积 mL比为1:100搅拌均匀后沸水浴糊化制备而成。
进一步的，所述淀粉纳米颗粒在冷冻干燥前，将得到的淀粉纳米颗粒用蒸馏水水洗3-5 次。
进一步的，所述步骤(2)中透析膜的截留分子量为10000-12000，透析过程中每12h换一次水。
进一步的，所述步骤(2)中透析后得到的样品放置于-70℃的冰箱中冻结进行真空冷冻干燥。
进一步的，所述步骤(3)中淀粉纳米颗粒或甲壳素晶须与磷酸缓冲溶液按照质量/体积比为1-100g:50mL，超声2-4min分散均匀。
进一步的，所述步骤(3)中搅拌时控制转速为200-500rpm/min搅拌0.5-2.0h。
进一步的，所述步骤(3)中磷酸缓冲溶液的pH值为6-7。
进一步的，所述步骤(3)中α-淀粉酶的活性菌抑制率为20％-70％。
本发明的有益结果为：
本发明采用纳米吸附制备方法，即淀粉和甲壳素制成纳米颗粒，在最适pH值下纳米颗粒吸附α-淀粉酶，显著抑制α-淀粉酶的活性，回生法和反溶剂法制备的纳米颗粒对α-淀粉酶的抑制作用明显，其半抑制浓度(IC50)分别为0.304mg/mL和0.019mg/mL。
本发明中制备淀粉纳米颗粒的工艺，通过采用酶解脱支回生法、反溶剂法制备淀粉纳米颗粒，此方法制备的淀粉纳米颗粒稳定性好、分布均匀。
本发明中制备纳米甲壳素的工艺，通过采用酸水解、透析的方法制备纳米甲壳素，此方法制备的纳米甲壳素产率高，稳定性好、分布均匀。
本发明研究探究了不同种类和形貌的天然多糖纳米颗粒对α-淀粉酶活性的抑制效果和抑制规律；与传统的黄酮、多酚类等小分子活性物质相比，天然多糖纳米颗粒在胃肠道中具有抗消化、稳定性好的特点，同时天然多糖对α-淀粉酶的抑制效果比部分多酚更显著，因此天然多糖纳米颗粒作为一种新型淀粉酶抑制剂，对延缓淀粉消化、维持血糖稳定和改善人体健康水平具有巨大的应用价值和潜在应用背景。
本发明中制备低活性α-淀粉酶的方法，通过采用稳定性好、分布均匀的淀粉纳米颗粒和甲壳素晶须等天然多糖制备的纳米颗粒吸附α-淀粉酶，纳米颗粒与α-淀粉酶的活性中心快速结合，形成α-淀粉酶-淀粉纳米颗粒复合物，从而阻碍了α-淀粉酶与可溶性淀粉的结合。因此与可溶性淀粉底物结合的α-淀粉酶的含量降低，从而抑制α-淀粉酶的活性。
本发明中制备低活性的α-淀粉酶方法简单，易操作，成本较低，适合大规模生产，可应用于食品医药行业。
附图说明
图1为本发明中淀粉纳米颗粒和甲壳素晶须对α-淀粉酶活性的影响；
图2(A)为回生法制备的淀粉纳米颗粒对α-淀粉酶的抑制类型；
图2(B)为反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒对α-淀粉酶的抑制类型；
图3(A)回生法制备的淀粉纳米颗粒透射电镜图；
图3(B)回生法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用后的样品形貌图；
图3(C)回生法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用后的样品形貌图；
图3(D)反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒透射电镜图；
图3(E)反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用后的样品形貌图；
图3(F)反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用后的样品形貌图；
图4(A)用回生法制备制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用紫外吸收光谱；
图4(B)为用反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用紫外吸收光谱；
图5(A)为回生法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用的荧光光谱图；
图5(B)为反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用的荧光光谱图；
图5(C)为回生法制备的淀粉纳米颗粒对α-淀粉酶的Stern-Volmer曲线图；
图5(D)为反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒对α-淀粉酶的Stern-Volmer曲线图；
图6(A)为回生法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用红外吸收光谱；
图6(B)为反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用红外吸收光谱；
图7为本发明中淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用圆二色谱图；
图8(A)为反溶剂法制备的淀粉颗粒抑制α-淀粉酶的机理示意图；
图8(B)为和回生法制备的淀粉颗粒抑制α-淀粉酶的机理示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的阐述。
实施例1
(1)①回生法淀粉纳米颗粒的制备
称取1g蜡质玉米淀粉溶于100mL缓冲溶液搅拌均匀后沸水浴糊化，加入一定量的普鲁兰酶在58℃条件下使淀粉脱支酶解6h，离心取上清液，加入上清液质量浓度为1‰Tween 80(w/v)将淀粉酶解液置于4℃回生12h制备淀粉纳米颗粒，得到的淀粉纳米颗粒用蒸馏水水洗几次，冷冻干燥。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取10mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声2min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，500rpm/min搅拌1.5h，形成淀粉纳米颗粒/α-淀粉酶复合体系。
实施例2
(2)①回生法淀粉纳米颗粒的制备
称取1g蜡质玉米淀粉溶于100mL缓冲溶液搅拌均匀后沸水浴糊化，加入一定量的普鲁兰酶在55℃条件下使淀粉脱支酶解7h，离心取上清液，加入上清液质量浓度为0.5‰Tween 80(w/v)将淀粉酶解液置于4℃回生11h制备淀粉纳米颗粒，得到的淀粉纳米颗粒用蒸馏水水洗几次，冷冻干燥。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取100mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声3min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，400rpm/min搅拌1.0h，形成淀粉纳米颗粒/ α-淀粉酶复合体系。
实施例3
(2)①回生法淀粉纳米颗粒的制备
称取1g蜡质玉米淀粉溶于100mL缓冲溶液搅拌均匀后沸水浴糊化，加入一定量的普鲁兰酶在60℃条件下使淀粉脱支酶解5h，离心取上清液，加入上清液质量浓度为0.8‰Tween 80(w/v)将淀粉酶解液置于4℃回生13h制备淀粉纳米颗粒，得到的淀粉纳米颗粒用蒸馏水水洗几次，冷冻干燥。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取100mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声4min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，400rpm/min搅拌1.0h，形成淀粉纳米颗粒/ α-淀粉酶复合体系。
实施例4
(3)①反溶剂法淀粉纳米颗粒的制备
称取1g玉米淀粉溶于100mL缓冲溶液搅拌均匀后沸水浴糊化，逐滴加入四倍体积的无水乙醇，滴完后搅拌4h，悬浊液离心后水洗数次，冷冻干燥。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取100mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声2min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，200rpm/min搅拌1.5h，形成淀粉纳米颗粒/α-淀粉酶复合体系。
实施例5
(3)①甲壳素晶须的制备
将5g甲壳素溶于150mL，3M的HCl，在100℃下剧烈搅拌2h；酸水解后悬浊液离心并水洗，再将得到的悬浊液重新分散到透析膜中(截留分子量为10000-12000)透析5天，每12h换一次水；透析后得到的样品放置于-70℃的冰箱中冻结，真空冷冻干燥得到纳米甲壳素。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取1mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声2min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，500rpm/min搅拌0.5h，形成淀粉纳米颗粒/α- 淀粉酶复合体系。
实施例6
(5)①甲壳素晶须的制备
将5g甲壳素溶于150mL，3M的HCl，在105℃下剧烈搅拌2.5h；酸水解后悬浊液离心并水洗，再将得到的悬浊液重新分散到透析膜中(截留分子量为10000-12000)透析4天，每12h换一次水；透析后得到的样品放置于-70℃的冰箱中冻结，真空冷冻干燥得到纳米甲壳素。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取10mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声2min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，400rpm/min搅拌1.0h，形成淀粉纳米颗粒/α-淀粉酶复合体系。
实施例7
(6)①甲壳素晶须的制备
将5g甲壳素溶于150mL，3M的HCl，在110℃下剧烈搅拌1.5h；酸水解后悬浊液离心并水洗，再将得到的悬浊液重新分散到透析膜中(截留分子量为10000-12000)透析6天，每12h换一次水；透析后得到的样品放置于-70℃的冰箱中冻结，真空冷冻干燥得到纳米甲壳素。
②低活性α-淀粉酶的制备
称取100mg的淀粉纳米颗粒溶于50mL磷酸缓冲溶液(pH6.0)中，并超声2min使其分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，200rpm/min搅拌2h，形成淀粉纳米颗粒/α- 淀粉酶复合体系。
以实施例1回生法、实施例4反溶剂法制备的纳米淀粉颗粒，以实施例5制备的甲壳素晶须为实验对象。
结果说明
1.α-淀粉酶的相对酶活
不同种类纳米颗粒和甲壳素晶须对α-淀粉酶活性的抑制作用如图1所示，三种天然多糖纳米颗粒对α-淀粉酶都具有抑制性。回生法和反溶剂法制备的纳米颗粒对α-淀粉酶的抑制作用明显，其半抑制浓度(IC50)分别为0.304mg/mL和0.019mg/mL(表1)。如图所示，随着纳米颗粒浓度的增加，α-淀粉酶活性逐渐降低。如下表1为：不同物质对α-淀粉酶的半抑制浓度。
表1
Figure GDA0002421537500000071
2.淀粉纳米颗粒对α-淀粉酶的抑制类型分析
图2(A)回生法制备的淀粉纳米颗粒和图2(B)反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒对α-淀粉酶的抑制类型；α-淀粉酶浓度为0.25mg/mL，从图2(A)可以看出，对照组(α-淀粉酶) 与实验组(添加回生法制备的淀粉纳米颗粒)得到的一系列拟合曲线相交于Y轴，这说明回生法制备的淀粉纳米颗粒(RSNPs)对α-淀粉酶的抑制类型为竞争性抑制。这主要是由于添加的淀粉纳米颗粒与淀粉结构相似，其与α-淀粉酶结合抑制了底物的结合，从而降低了淀粉酶的活性。图2(B)显示对照组与实验组(添加反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒(ASNPs) ) 得到的一系列拟合曲线相交于第二象限，这说明ASNPs对α-淀粉酶的抑制类型为混合型抑制。
3.不同淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用透射电镜图
图3(A),(D)是RSNPs和ASNPs透射图，从图中可以看出，RSNPs呈球形或椭球形，粒径为50-80nm左右，而ASNPs呈不规则的多边形，粒径为40-100nm左右。与α-淀粉酶作用后，一部分的纳米颗粒粒径增大，RSNPs(图3(B))仍保持原先的形貌但周围出现浅颜色的环，而ASNPs(图3(E))表面颜色变深，周围也出现浅色的阴影，这可能是由于α-淀粉酶成功吸附到纳米颗粒表面。另一部分纳米颗粒出现不规则的孔洞(图3(C),(F))，可能是由于淀粉纳米颗粒被α-淀粉酶缓慢水解造成的现象。
4.α-淀粉酶与淀粉纳米颗粒相互作用
4.1紫外图谱分析
如图4(A)所示，随着RSNPs浓度的增加，280nm处的吸收峰逐渐增强，说明α-淀粉酶和淀粉纳米颗粒形成复合物。与游离的α-淀粉酶相比，添加RSNPs后淀粉酶的最大吸收峰从282nm移动到285nm，这说明α-淀粉酶色氨酸残基的微环境发生了变化，RSNPs位于色氨酸残基的附近。ASNPs与α-淀粉酶相互作用后吸光值下降(图4(B))，这可能是由于反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒结构相对疏松，酶进入淀粉纳米颗粒的内部，从而影响了紫外吸收峰的强度。
4.2荧光图谱分析
图5(A)-(D)中α-淀粉酶的浓度为0.25mg/mL，淀粉纳米颗粒(SNPs)的浓度为0.00-1.00 mg/mL；图5(A)中的SNPs用回生法制备，图5(B)中的SNPs用反溶剂法制备。α-淀粉酶的荧光强度随着淀粉纳米颗粒浓度增加而降低，说明淀粉纳米颗粒引起了α-淀粉酶结构的变化，使淀粉酶中的色氨酸和酪氨酸周围的极性发生了改变，最终影响其荧光光谱强度。图5(C),(D)是纳米颗粒对α-淀粉酶的Stern-Volmer曲线。F0/F与淀粉纳米颗粒的浓度呈线性关系(图5(C),图5(D))。根据公式求得，回生法和反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒的 Ksv分别为1.01×108Lmol-1s-1和2.10×107Lmol-1s-1。此外，回生法和反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒的Kq分别为1.77×1016Lmol-1s-1和3.68×1015Lmol-1s-1，二者的Kq值明显大于最大扩散碰撞猝灭速率常数约为2.0×1010L mol-1s-189，所以可以推测SNPs与α-淀粉酶作用体系为分子之间结合形成了化合物引起的静态猝灭。
4.3红外光谱分析
图6(A)-(B)中α-淀粉酶的浓度为0.25mg/mL，1为淀粉纳米颗粒，2-7与α-淀粉酶结合的淀粉纳米颗粒的浓度为0,0.01,0.05,0.10,0.50,and 1.00mg/mL。α-淀粉酶和α -淀粉酶-淀粉纳米颗粒在1625cm-1(c＝o键)和1520cm-1(N-H键)具有特征峰。在2927cm -1的特征峰对应的是α-淀粉酶-淀粉纳米颗粒C-H伸缩振动。α-淀粉酶-淀粉纳米颗粒在 1364cm-1处对应的是C-O-H键的伸缩振动，这个特征峰的强度随着RSNPs浓度的增加向低波长移动，说明α-淀粉酶和淀粉纳米颗粒之间发生相互作用。此外，与α-淀粉酶相比，α- 淀粉酶-淀粉纳米颗粒在1100cm-1处出现一个新的特征峰，这是由于α-淀粉酶的羟基与淀粉纳米颗粒的氧原子之间相互作用产生的。
4.4圆二色谱分析
图7淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶相互作用圆二色谱图(α-淀粉酶的浓度为0.25mg/mL，淀粉纳米颗粒的浓度为0,0.01,0.05,0.10,0.50,and 1.00mg/mL)。图7所示，α-淀粉酶在190nm附近有一个正峰，在中210nm和222nm处的两个负峰，是酶的α-螺旋结构的典型特征峰。随着SNPs浓度的增大，CD图谱中α-螺旋结构特征峰降低，说明SNPs与α- 淀粉酶发生了相互作用，使α-淀粉酶肽链伸展，导致α-螺旋结构减少。
5.抑制机理图
图8(A)-(B)为反溶剂法和回生法制备的淀粉颗粒抑制α-淀粉酶的机理示意图。如淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶混合时，淀粉纳米颗粒与α-淀粉酶的活性中心快速结合，形成α-淀粉酶-淀粉纳米颗粒复合物，从而阻碍了α-淀粉酶与可溶性淀粉的结合。因此与可溶性淀粉底物结合的α-淀粉酶的含量降低，导致酶活降低。此外，与回生法制备的淀粉纳米颗粒相比，反溶剂法制备的淀粉纳米颗粒由于结构较为疏松，除了与底物具有竞争性外，酶还会进入其内部，致使反溶剂法制备的纳米颗粒对α-淀粉酶的活性具有更强的抑制能力。
以上所述并非是对本发明的限制，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明实质范围的前提下，还可以做出若干变化、改型、添加或替换，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，采用反溶剂法制备淀粉纳米颗粒，并且用其作为抑制α-淀粉酶活性的材料，其具体制备步骤为：
（1）反溶剂法淀粉纳米颗粒的制备：
向糊化淀粉乳中逐滴加入四倍体积的无水乙醇，滴完后搅拌3-5h，悬浊液离心后，冷冻干燥；
（2）低活性α-淀粉酶的制备：
称取淀粉纳米颗粒溶于磷酸缓冲溶液中，淀粉纳米颗粒与磷酸缓冲溶液按照质量/体积比为1-100mg:50mL，超声2-4min分散均匀；再加入等体积0.5mg/mL的α-淀粉酶，搅拌形成淀粉纳米颗粒/α-淀粉酶复合体系。
2.根据权利要求1所述一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，所述步骤（1）糊化淀粉乳为蜡质玉米淀粉和pH为5的磷酸缓冲溶液按照质量g/体积mL比为1:100搅拌均匀后沸水浴糊化制备而成。
3.根据权利要求1所述一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，所述步骤（1）淀粉纳米颗粒在冷冻干燥前，将得到的淀粉纳米颗粒用蒸馏水水洗3-5次。
4.根据权利要求1所述一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，所述步骤（2）中搅拌时控制转速为200-500rpm/min搅拌0.5-2.0h。
5.根据权利要求1所述一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，所述步骤（2）中磷酸缓冲溶液的pH值为6-7。
6.根据权利要求1所述一种抑制淀粉酶活性的方法，其特征在于，所述步骤（2）中α-淀粉酶的活性菌抑制率为20%-70%。
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Zinc oxide nanoparticles as novel alpha-amylase inhibitors;Sandip Dhobale等;《JOURNAL OF APPLIED PHYSICS》;20081231;第104卷;第094907-1-5页，尤其是摘要部分 *

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