CN107828817A - 一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法，所述方法是在农作物中表达Bt抗虫蛋白Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2。经本实验室研究验证，发现了所述的Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2蛋白具有抗半翅目昆虫，特别是飞虱科的活性。将所述Bt抗虫蛋白的编码基因转入农作物，能够使转基因植物(如水稻等)获得抗半翅目、特别是飞虱科昆虫的能力，减少农业生产中的产量损失、降低农业生产成本。

Description

一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法

(一)技术领域

本发明涉及一种将Bt蛋白用于防治农作物半翅目害虫的方法，特别涉及在水稻中表达抗虫蛋白、使水稻获得抗飞虱科昆虫能力，防治水稻飞虱科害虫的方法。

(二)背景技术

害虫给全球农业生产带来每年约80亿美元的损失，害虫的防治目前主要依靠使用化学农药，但是农药的残留会对人体健康和环境带来不良影响。利用生物技术方法培育含有抗虫基因的转基因抗虫农作物，可以大幅度降低化学杀虫剂的使用，有效保护农作物免受害虫为害，目前全球范围内，商业化的转基因抗虫玉米、大豆、棉花等已经大面积推广种植。

在田间，半翅目害虫的种类非常多，如蝽类、螨类、蚜虫、飞虱等。半翅目害虫靠刺吸植物组织汁液来获取营养，危害多种农作物、对农业生产造成巨大损失。比如烟粉虱危害番茄、辣椒、烟草、棉花等农作物，是一种世界性害虫；褐飞虱是水稻上最主要的害虫之一，并且具有长距离迁飞的特性；蚜虫是一种危害非常广泛的害虫。半翅目害虫很难防治，其繁殖力强、虫体小，有些害虫具有迁飞能力；其刺吸式的取食方式使得传统农药对其收效甚微。利用植物转基因技术，将抗虫基因转入农作物中，在农作物中表达抗虫蛋白，是对抗半翅目害虫的可行方法。

转基因作物抗虫的关键技术是获得性能优良的杀虫蛋白质。杀虫蛋白质有多种，比较常见的是Bt杀虫晶体蛋白，如Cry1Ab、Cry1C等，它们已被大量运用于商业化的转基因抗虫作物。Bt杀虫晶体蛋白的种类多达300余种，其中只有一部分蛋白具有杀虫活性。Cry30蛋白是Bt杀虫晶体蛋白中的一类，目前已经发现并命名的有Cry30Aa1、Cry30Ba1等13等种蛋白，其中除了Cry30Fa1外均未见有抗半翅目昆虫活性的报道。经本实验室研究鉴定，Cry30蛋白中Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2具有较高的抗半翅目昆虫(如蚜总科、粉虱科、飞虱科)的活性，将其编码基因cry30Aa1、cry30Db1和cry30Ea2转入植物后获得的转基因植株具有相应的抗虫活性，能够减少田间半翅目害虫对农作物产量造成的损失，具有重要的应用前景。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法，特别是防治蚜总科、粉虱科、飞虱科害虫的方法，该方法将cry30Aa1、cry30Db1和cry30Ea2基因分别独立地导入水稻等农作物中，各自表达Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2蛋白，使农作物获得抗半翅目害虫的能力。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法，所述方法是在农作物中表达Bt抗虫蛋白，所述Bt抗虫蛋白为Bt抗虫蛋白Cry30Aa1(Genbank:CAC80986)、Bt抗虫蛋白Cry30Db1(Genbank:BAE80088)或Bt抗虫蛋白Cry30Ea2(Genbank:ACR15116)中的一种。编码的cry30基因分别是cry30Aa1、cry30Db1和cry30Ea2。根据不同植物的密码子偏好性，编码Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2蛋白的核苷酸序列会有不同；任何能够编码所述Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2蛋白质的编码基因都应视为本发明的内容。

进一步，所述Bt抗虫蛋白Cry30Aa1的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，Bt抗虫蛋白Cry30Db1的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，Bt抗虫蛋白Cry30Ea2的氨基酸序列为SEQ IDNO.3所示。

进一步，所述表达抗虫蛋白的方法为：将含有启动子、抗虫蛋白编码基因和终止子的表达框导入载体中，构建T-DNA载体；然后将T-DNA载体转化农杆菌，利用农杆菌侵染植物，使植物中表达抗虫蛋白，获得抗半翅目昆虫的能力，减少半翅目害虫对农作物的危害。

进一步，所述农作物半翅目害虫为蚜总科、粉虱科、飞虱科昆虫，所述植物为水稻、玉米、小麦、高粱、大豆、油菜或棉花。

本行业的技术人员均知道以下理论：

(1)Cry蛋白家族种类繁多，但不是所有蛋白都具有杀虫活性，而且每种抗虫蛋白对应的抗虫谱有很大差异。Cry蛋白目前已经发现了300多种，其中很多是具有杀虫活性的，比如对鳞翅目具有很高活性的Cry1Ab/1Ac、对鞘翅目具有活性的Cry3C等。不同的Cry蛋白，其抗虫谱是有显著差异的，所对应的抗虫种类不尽相同；甚至只相差几个氨基酸，都能影响到抗虫蛋白的活性。

(2)并非所有的cry基因转入农作物后，都能使其获得对抗半翅目害虫的能力。一方面，农作物获得抗虫能力依赖于外源的抗虫蛋白对半翅目害虫的活性；另一方面，农作物的抗虫性能取决于外源抗虫蛋白在农作物中的表达量。

与现有技术相比，本发明方法有益效果主要体现在：将抗虫蛋白Cry30Aa1、Cry30Db1和Cry30Ea2的编码基因转入农作物中，能够使农作物获得抗半翅目昆虫，特别是蚜总科、粉虱科和飞虱科的活性，减少农业生产中的产量损失、降低农业生产成本。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

本发明以下实施例中所使用的分子生物学和生物化学方法均为已知的技术。在Ausubel编写的John Wiley and Sons公司出版的Current Protocols in MolecularBiology，和J.Sambrook等编写的Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)出版的Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3^rd ED.等文献均有详细的说明。

实施例1、构建一个农杆菌转化水稻表达抗虫基因的载体

根据水稻密码子偏好性，设计cry30Aa1、cry30Db1、cry30Ea2三个抗虫蛋白编码基因(基因编码蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO.1～3所示，其5’端被设计上BamHI位点，3’端被设计上SacI位点，以BamHI-SacI双酶切可以得到基因片段)，由上海生工人工合成。对于水稻，选用水稻肌动蛋白1启动子(pOsActin1，Genbank:NC_008398)来启动cry30Aa1、cry30Db1、cry30Ea2基因的表达，其5’端被设计上HindIII位点，3’端被设计上BamHI位点，HindIII-BamHI片段；选用玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶终止子(PEPC-ter，Genebank:X15239)作为该基因的终止子，其5’端被设计上SacI位点，3’端被设计上KpnI位点，SacI-KpnI片段。水稻启动子pOsActin1从水稻的基因组中通过PCR获得，使用的引物分别是：pAct-F(5’AAGCTTAGGTCATTCATATGCTTGAGAAGAGTC)；pAct-R(5’GGATCCTCGGCGTCAGCCATCTTCTAC)。

农杆菌转化T-DNA载体是基于pCambia 1300(NCBI序列编号AF234296)载体而构建的。将pCambia 1300以HindIII和KpnI酶切、回收，作为载体片段；将pOsActin1、cry30Aa1(cry30Db1或cry30Ea2)、PEPC-ter分别酶切后得到插入片段，并连接到载体片段中，得到最终载体pCambia1300-pOsActin1-cry30Aa1、pCambia1300-pOsActin1-cry30Db1和pCambia1300-pOsActin1-cry30Ea2。将载体转入农杆菌菌株中，得到含有该T-DNA载体的水稻转化农杆菌。

实施例2、转基因水稻的获得

转基因水稻的获得方法是采用现有技术(卢雄斌、龚祖埙，1998生命科学10：125-131；刘凡等，2003分子植物育种1：108-115)。选取成熟饱满的水稻种子去壳，诱导产生愈伤组织为转化材料。取含有目的基因的农杆菌(实施例1制备的pCambia1300-pOsActin1-cry30Aa1、pCambia1300-pOsActin1-cry30Db1、pCambia1300-pOsActin1-cry30Ea2)划板，挑单克隆菌落接种准备转化农杆菌。将待转化的水稻愈伤组织放入OD₆₀₀在0.3-0.4之间的农杆菌液中(含乙酰丁香酮)，让农杆菌结合到愈伤组织表面，然后把愈伤组织转移到共培养基中，共培养2～3天。用无菌水冲洗转化后的愈伤组织，转移到含抗生素的筛选培养基上，筛选培养(50ng/ml潮霉素)两个月(中间继代一次)。把筛选后生长活力良好的愈伤组织转移到预分化培养基上培养20天左右，然后将预分化好的愈伤组织转移到分化培养基，14小时光照分化发芽。2～3周后，把抗性再生植株转移到生根培养基上壮苗生根，最后将再生植株洗去琼脂移植到温室，作为鉴定材料。

实施例3、转基因农作物抗虫能力的测定

利用褐飞虱和白背飞虱测定实施例2获得的10个转基因水稻株系的抗虫活性，测定方法是：将褐飞虱和白背飞虱的初孵若虫接到转基因水稻和同一生长期的非转基因水稻上，每个株系置于单独的养虫笼中，在恒温25℃、恒湿85％的培养室里培养5至7天，记录数据。测试的10个转基因株系中有8个株系未受到昆虫的危害，昆虫全部死亡；非转基因对照组上的昆虫全部成活，且水稻受害严重。褐飞虱死亡率如表1所示。

表1转基因水稻上褐飞虱生物测定的死亡率

含有抗虫蛋白的转基因水稻	24h	48h	72h	96h	120h
						Cry30Aa1	10％	50％	100％
Cry30Db1	10％	50％	80％	100％
						Cry30Ea2	10％	50％	80％	100％
非转基因对照组	0％	0％	0％	0％	0％

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多延伸和拓展。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接到导出或联想到的所有延伸，均应认为是本发明的保护范围。

序列表

<110> 杭州瑞丰生物科技有限公司

<120> 一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 688

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 1

Met Asn Ser Tyr Glu Asn Lys Asn Glu Tyr Glu Ile Leu Asp Thr Ser

1 5 10 15

Gln Lys Asn Ser Asn Met Ser Asn Arg Tyr Ser Lys Tyr Pro Leu Thr

20 25 30

Asn Asn Pro Lys Val Pro Leu Gln Asn Thr Asn Tyr Lys Asp Trp Leu

35 40 45

Asn Met Cys Gln Thr Ile Thr Pro Leu Cys Thr Pro Ile Asp Thr Asp

50 55 60

Ser Lys Leu Val Ala Thr Ala Ile Lys Val Ile Gly Ala Ile Phe Lys

65 70 75 80

Ser Met Pro Gly Pro Gly Ala Ala Val Gly Leu Val Leu Lys Ser Phe

85 90 95

Ser Thr Ile Ile Pro Ile Leu Trp Pro Asn Asp Lys Thr Pro Ile Trp

100 105 110

Lys Glu Phe Thr Lys Gln Gly Leu Gln Leu Phe Arg Pro Glu Leu Gly

115 120 125

Arg Asp Ala Ile Glu Ile Ile Gly Asn Asp Val Gln Ala Glu Tyr Asn

130 135 140

Ser Leu Glu Ile Met Met Arg Asp Phe Glu Asn Lys Phe Ala Asn Trp

145 150 155 160

Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ala Asn Ala Ile Ala Val Thr Thr Ala Phe

165 170 175

Ser Thr Val Asn Thr Gln Ile Ile Arg Leu Lys Glu Arg Phe Leu Ile

180 185 190

Ala Pro Glu Asn Arg Pro Ala Phe Leu Asn Leu Tyr Ala Gln Thr Ala

195 200 205

Asn Ile Asp Leu Ile Leu Tyr Gln Arg Gly Ser Val Tyr Gly Asp Lys

210 215 220

Trp Val Ala Asp Ile Asn Asn Arg Ser Thr Ser Pro Phe Ser Ser Lys

225 230 235 240

Asp Tyr Tyr Gln Ser Leu Lys Gly Lys Ile Lys Asp Tyr Thr Asn Tyr

245 250 255

Cys Ala Glu Thr Tyr Arg Asn Ser Leu Thr Ile Leu Lys Asn Lys Pro

260 265 270

His Ile Gln Trp Asp Ile Tyr Asn Arg Tyr Arg Arg Glu Ala Ile Leu

275 280 285

Gly Ala Leu Asp Leu Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Cys Ile

290 295 300

Tyr Pro Thr Gln Thr Arg Thr Glu Leu Thr Arg Lys Val Tyr Met Pro

305 310 315 320

Ser Phe Tyr Leu Gln Ala Leu Gln Gln Arg Asp Ile Glu Thr Val Glu

325 330 335

Asn Gln Leu Thr His Pro Pro Ser Leu Phe Thr Trp Leu Asn Glu Leu

340 345 350

Asn Leu Tyr Thr Ile Arg Glu Arg Phe Asn Pro Val Leu Gln Val Ala

355 360 365

Ser Leu Ser Gly Leu Gln Ala Thr Ser Arg Tyr Thr Gln Asn Thr Thr

370 375 380

Thr Ile Ser Asn Pro Val Gln Gly Pro Val Arg Glu Gly Thr Pro Thr

385 390 395 400

Lys Ile Ser Leu Ala Asn Tyr Tyr Ile Tyr Lys Leu Phe Met Ser Gln

405 410 415

Tyr Arg His Pro Asn Asp Cys Leu Pro Ile Ser Gly Ile Asn Glu Met

420 425 430

Ser Phe Tyr Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ala Gly Gly Pro Ala Pro Val

435 440 445

His Tyr Ser Ala Gly Glu Ser Pro Thr Asn Val Ile Lys Thr Tyr Met

450 455 460

Asn Gly Pro Gln Asn Ala Leu Ile Ser Asn Asp Ile Ser Ile Asn Glu

465 470 475 480

Thr Ser His Ile Leu Ser Asp Ile Lys Met Asn Tyr Ser Arg Thr Gly

485 490 495

Gly Val Tyr Pro Leu Tyr Asp Phe Gly Tyr Ser Phe Ala Trp Thr His

500 505 510

Thr Ser Val Asp Pro Asp Asn Leu Ile Val Pro Asn Arg Ile Thr Gln

515 520 525

Ile Pro Ala Val Lys Ala Tyr Ser Leu Thr Ser Pro Ala Arg Val Ile

530 535 540

Val Gly Pro Gly His Thr Gly Gly Asp Leu Val Ala Leu Leu Asn Ser

545 550 555 560

Gly Thr Gln Ser Gly Thr Met Gln Ile Gln Cys Lys Thr Gly Ser Phe

565 570 575

Thr Gly Pro Ser Arg Gln Tyr Gly Leu Arg Met Arg Tyr Ala Ala Asn

580 585 590

Ser Ala Phe Thr Val Ser Leu Ser Tyr Thr Leu Leu Gly Gln Thr Arg

595 600 605

Gly Thr Ser Phe Val Thr Glu Asn Thr Phe Ser Arg Ser Asn Asn Ile

610 615 620

Ile Pro Thr Asp Leu Lys Tyr Glu Glu Phe Lys Tyr Lys Asp Tyr Leu

625 630 635 640

Gln Ile Ile Thr Met Thr Leu Pro Ala Asn Thr Ile Ile Thr Ile Ser

645 650 655

Met Gln Gln Ala Thr Gly Leu Leu Asn Asn Gln Leu Ile Ile Asp Arg

660 665 670

Ile Glu Phe Tyr Pro Met Asp Gln Gly Val Val Ala Cys Thr Val Asn

675 680 685

<210> 2

<211> 684

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 2

Met Asn Pro Tyr Gln Asn Thr Asn Glu Cys Glu Ile Leu Asp Ala Ser

1 5 10 15

Pro Asn Tyr Ser Lys Met Gly Asn Ala Tyr Ser Arg Tyr Pro Leu Ala

20 25 30

Asn Asn Pro Gln Val Pro Leu Gln Asn Thr Ser Tyr Lys Asp Trp Leu

35 40 45

Asn Met Cys Gln Thr Ile Thr Pro Leu Cys Thr Pro Ile Asp Pro Asp

50 55 60

Ile Asn Ser Val Ala Ala Ala Ile Gly Val Ile Gly Ser Ile Ile Gly

65 70 75 80

Leu Ile Pro Gly Pro Gly Glu Ala Ile Gly Leu Ile Leu Gly Thr Phe

85 90 95

Ser Ser Ile Ile Pro Phe Leu Trp Pro Glu Asn Lys Thr Ile Ile Trp

100 105 110

Glu Glu Phe Thr His Arg Gly Leu His Leu Ile Arg Pro Glu Leu Thr

115 120 125

Pro Thr Glu Ile Glu Ile Ile Val Asn Pro Leu Lys Gly Tyr Tyr Asn

130 135 140

Ala Leu Arg Glu Gln Leu Glu Asn Phe Glu Ser Glu Phe Ala Ile Trp

145 150 155 160

Ala Arg Asn Lys Asn Ala Ala Thr Thr Gly Asp Val Leu Arg Arg Phe

165 170 175

Ser Asn Ile Asp Ala Asp Ile Ile Arg Leu Lys His Gln Leu Thr Val

180 185 190

Asp Val Arg Asn Lys Pro Ala Leu Leu Ser Leu Tyr Ala Gln Thr Ala

195 200 205

Asn Ile Asp Leu Ile Leu Phe Gln Arg Gly Ala Lys Tyr Gly Asp Glu

210 215 220

Trp Ala Arg Tyr Ala Arg Asn Gln Pro Ile Pro Phe Lys Thr Ser Gln

225 230 235 240

Glu Tyr Tyr Asp Ser Leu Lys Glu Lys Ile Glu Asn Tyr Thr Asn Asp

245 250 255

Ile Ala Ala Thr Tyr Arg Asn Gly Leu Asn Ile Ile Lys Asn Ile Pro

260 265 270

Lys Ile Ser Trp Asp Val Phe Asn Leu Tyr Arg Arg Glu Met Thr Leu

275 280 285

Ser Ala Leu Asp Leu Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Cys Arg

290 295 300

Tyr Pro Ile Ser Thr Lys Thr Glu Leu Thr Arg Lys Val Tyr Met Ser

305 310 315 320

Ser Phe Tyr Leu Gln Ala Leu Glu Leu Asn Glu Ser Leu Glu Ser Leu

325 330 335

Glu Asn Lys Leu Thr His Pro Pro Ser Leu Phe Thr Trp Leu Lys Arg

340 345 350

Leu Asn Leu Tyr Thr Ile Ser Glu Asn Tyr Ser Ser Pro Leu Arg Val

355 360 365

Ser Ser Leu Ser Gly Leu Ser Ala Val Tyr Ser His Thr His Gln Gln

370 375 380

Gln Ala Leu Tyr Val Gly Pro Pro Gln Gly Ile Thr Gly Gly Ser Pro

385 390 395 400

Gln Glu Ile Arg Phe Asp Gly Phe Val Tyr Lys Leu Phe Met Ser Gln

405 410 415

Asn Ile Ser Pro Asn Gly Cys Tyr Pro Ile Gly Gly Ile Pro Gln Met

420 425 430

Ser Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Ser Gly Ser Pro Arg Pro Asn Lys Asp

435 440 445

Tyr Tyr Ser Ala Ser Ala Ile Gln Tyr Ile Ser Ile Asn Ser Tyr Met

450 455 460

Asn Gly Pro Gln Asn Ala Thr Lys Ser Asn Asn Ile Ser Ile Arg Glu

465 470 475 480

Thr Lys His Ile Leu Ser Asp Ile Lys Met Asn Tyr Ser Gln Thr Gly

485 490 495

Gly Phe Tyr Pro Phe His Ser Phe Gly Tyr Ser Phe Ala Trp Thr His

500 505 510

Thr Ser Val Asp Pro Asp Asn Leu Ile Val Pro Asn Arg Ile Thr Gln

515 520 525

Ile Pro Ala Val Lys Ala His Ile Leu Ser Thr Thr Ala Lys Val Ile

530 535 540

Ala Gly Pro Gly His Thr Gly Gly Asp Leu Val Ala Leu Leu Asn Asp

545 550 555 560

Asp Pro Arg Ile Gly Thr Met Ser Ile Glu Cys Lys Thr Gly Ser Phe

565 570 575

Thr Gln Pro Ser Arg Arg Tyr Gly Leu Arg Met Arg Tyr Ala Ala Asn

580 585 590

Asn Gln Phe Ser Val Ser Ile Ser Arg Asn Asp Gln Gly Val Ala Ser

595 600 605

Phe Val Thr Glu Arg Thr Phe Ser Arg Thr Asn Asn Ile Ile Pro Thr

610 615 620

Asp Leu Lys Tyr Asn Glu Phe Lys Tyr Asn Asn Tyr Asp Gln Ile Ile

625 630 635 640

Met Asp Leu Pro Pro Asn Thr Ile Ile Asn Ile Gly Ile Arg Gln Thr

645 650 655

Asn Ala Leu Ser Ile Asn Gln Phe Ile Ile Asp Arg Ile Glu Phe Tyr

660 665 670

Pro Met Asp Gln Gly Val Glu Ala Cys Lys Met Gln

675 680

<210> 3

<211> 688

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 3

Met Asn Ser Tyr Gln Asn Thr Asn Glu Tyr Glu Ile Leu Asp Ala Ser

1 5 10 15

Gln Lys Asn Ser Thr Met Ser Asn Arg Tyr Pro Arg Cys Pro Leu Ala

20 25 30

Asn Asn Pro Gln Val Pro Leu Gln Asn Thr Ser Tyr Lys Asp Trp Leu

35 40 45

Asn Met Cys Gln Thr Ile Thr Pro Leu Cys Thr Pro Val Glu Thr Asp

50 55 60

Ser Asp Tyr Val Ala Ala Phe Ile Gly Val Leu Gly Ser Ile Phe Gly

65 70 75 80

Ala Met Pro Gly Pro Gly Ala Ala Val Gly Leu Phe Leu Ser Ser Phe

85 90 95

Ser Thr Ile Ile Pro Ile Leu Trp Pro Asn Asp Thr Thr Pro Ile Trp

100 105 110

Lys Glu Phe Thr Lys Gln Gly Leu Gln Leu Phe Arg Pro Glu Leu Gly

115 120 125

Arg Asp Ala Ile Glu Ile Ile Gly Asn Asp Val Gln Ala Glu Tyr Asn

130 135 140

Ala Leu Lys Thr Met Met Gln Asp Phe Glu Thr Lys Phe Ala Thr Trp

145 150 155 160

Asp Leu Asn Arg Thr Arg Ala Asn Ala Ile Ala Val Thr Thr Glu Phe

165 170 175

Asn Ser Val Lys Asn Gln Ile Ile Arg Leu Gln Glu Arg Phe Leu Ile

180 185 190

Ala Ala Glu Asn Arg Pro Ala Phe Leu Asn Leu Tyr Ala Gln Thr Ala

195 200 205

Asn Ile Asp Leu Ile Leu Tyr Gln Arg Gly Ala Ala Asn Gly Asp Lys

210 215 220

Trp Leu Glu Asp Ile Asn Asn Arg Ser Ile Ser Pro Phe Ser Ser Lys

225 230 235 240

Asp Tyr Tyr Gln Asp Leu Lys Leu Lys Ile Lys Asn Tyr Thr Asn Tyr

245 250 255

Cys Ala Glu Thr Tyr Arg Asn Ser Leu Asn Ile Leu Lys Asn Lys Ser

260 265 270

Asp Ile Gln Trp Ser Ile Tyr Asn Gly Tyr Arg Arg Val Ala Thr Leu

275 280 285

Gly Ala Leu Asp Leu Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Cys Ile

290 295 300

Tyr Pro Ile Gln Thr Gln Thr Glu Leu Thr Arg Lys Val Tyr Met Pro

305 310 315 320

Ser Phe Tyr Ser Glu Arg Leu Pro Lys Gly Asn Ile Glu Thr Trp Glu

325 330 335

Asn Ser Leu Thr His Pro Pro Ser Leu Phe Thr Trp Leu Lys Lys Leu

340 345 350

Asp Pro Tyr Thr Lys Ser Glu Arg Phe Asn Pro Ala Leu Glu Val Ala

355 360 365

Ser Leu Cys Gly Leu His Ala Ala Leu Ser Tyr Thr Pro Gln Asn Gly

370 375 380

Pro Glu Phe Ala Gly Pro Phe Gln Gly Ile Leu Gly Thr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Leu Ile Ser Phe Asp Asn Gln Phe Val Tyr Lys Leu Phe Leu Thr

405 410 415

Gln Tyr Arg His Pro Asn Asp Cys Tyr Ser Ile Ser Gly Ile Pro Lys

420 425 430

Ile Thr Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Gly Asn Ser Arg Pro Asn Lys

435 440 445

Glu Tyr Ser Ser Asn Ile Gln Leu Ser Ser Val Ile Thr Ser Tyr Met

450 455 460

Asn Gly Pro Gln Asn Ala Ser Thr Ser Asn Asn Ile Ser Ile Lys Gln

465 470 475 480

Thr Lys His Ile Leu Ser Asp Ile Lys Ile Ile Tyr Thr Gln Ile Gly

485 490 495

Gly Ile Tyr Pro Ser His Asp Phe Gly Tyr Ser Phe Ala Trp Thr His

500 505 510

Thr Ser Val Asp Pro Asp Asn Leu Ile Val Pro Asn Arg Ile Thr Gln

515 520 525

Ile Pro Ala Val Lys Ala Tyr Ser Leu Thr Ser Pro Ala Arg Val Ile

530 535 540

Ala Gly Pro Gly His Thr Gly Gly Asp Leu Val Ala Leu Leu Asn Asn

545 550 555 560

Asn Leu Glu Ala Gly Arg Met Gln Ile Gln Cys Lys Thr Gly Ser Leu

565 570 575

Thr Gly Ala Ser Arg Arg Tyr Gly Leu Arg Met Arg Tyr Ala Ala Asn

580 585 590

Ser Gln Phe Thr Val Asn Leu Ser Tyr Val Leu Ser Gly Thr Thr Tyr

595 600 605

Gly Thr Ser Phe Ile Thr Glu Ser Thr Phe Ser Arg Leu Asn Asn Ile

610 615 620

Ile Pro Thr Asp Leu Lys Tyr Glu Glu Phe Lys Tyr Lys Glu Tyr Ser

625 630 635 640

Gln Ile Ile Thr Met Thr Leu Pro Ala Asn Thr Ile Ile Thr Ile Ser

645 650 655

Ile Gln Gln Ala Val Ala Ser Ser Asn Tyr Gln Leu Ile Ile Asp Arg

660 665 670

Ile Glu Phe Tyr Pro Met Asp Gln Gly Val Val Ala Cys Thr Val Asn

675 680 685

Claims (6)

1.一种利用Bt蛋白防治农作物半翅目害虫的方法，其特征在于所述方法是在农作物中表达Bt抗虫蛋白，所述Bt抗虫蛋白为Bt抗虫蛋白Cry30Aa1或Bt抗虫蛋白Cry30Db1或Bt抗虫蛋白Cry30Ea2中的一种。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述Bt抗虫蛋白Cry30Aa1的氨基酸序列为SEQID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述Bt抗虫蛋白Cry30Db1的氨基酸序列为SEQID NO.2所示。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述Bt抗虫蛋白Cry30Ea2的氨基酸序列为SEQID NO.3所示。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述农作物半翅目害虫为蚜总科、粉虱科、飞虱科昆虫。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述农作物为水稻、玉米、小麦、高粱、大豆、油菜或棉花。