CN107828687A - 海洋芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域,具体的说是一种海洋芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155和及其应用。Bacillus subtilis BS155,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中国科学院微生物研究所),保藏日期为2017年10月16号,保藏编号:14816。利用本发明获得的海洋芽孢杆菌Bacillussubtilis BS155及其产生的脂肽可用于开发新型海洋病原菌防控制剂用于防治水稻稻瘟病菌和玉米赤霉菌引起的农业病害。

Description

海洋芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体的说是一种海洋芽孢杆菌Bacillus subtilisBS155和及其应用。
背景技术
目前,虽然化学农药的使用极大的提高了粮食的产量,但是随着化学农药的过度使用,其所带来的一些环境问题,污染问题,粮食安全问题等已经引起了人们的强烈关注。化学农药不仅对目标生物具有毒性,还会随着食物链的不断传递在不同生物体内进行富集,而且某些产品对人类也有一定的致癌、致畸和致突变作用等毒性作用[1]。生物农药作为一种新型的绿色农药,具有防治效果好、作用特异性强、对人畜安全、不易产生抗药性、毒性小等优点[2]。
抗菌肽(Antibacterial peptide)是生物在特定外界条件下产生的具有抗菌作用的一种小分子多肽,其组成一般为2-60个氨基酸残基,在细菌、植物、低等动物和人体内均有分布。抗菌肽具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的特点[3]。其中脂肽是一种重要的抗菌肽,它主要是由脂肪酸链和氨基酸组成。目前,微生物来源的脂肽已经在国内外引起了广泛的关注和研究,并且被作为生物农药来防治农业生产中的真菌病害。因此,积极开发抗菌脂肽和宿主菌作为新型生物农药,已经成为未来生物农药发展的一个重要方向。抗菌脂肽在已经获得登记并商业应用的芽胞杆菌的微生物菌剂中占了相当大的比例[4]。
芽孢杆菌是一种重要的产生抗菌肽的微生物,所产生的脂肽主要分为三类。包括surfactin类、iturin类和fengycin类3个主要家族,相关衍生物达到100多种。此外还包括mycosubtilin、lichenysin和pumilacidin等抗菌肽。这些脂肽类的抗生素具有光谱的抗菌活性,对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,真菌和病毒都具有杀菌作用。除此之外,相关的研究表明,脂肽类的抗生素还具有增强植物对相关病原菌的抵抗力[5]。但是目前其作用机理仍然需要进一步的深入研究,特别是是其应用还需要进一步的扩大和产业化。
我国是一个粮食生产和消费的大国,因此保障粮食生产的安全一直是我国头等大事之一。为了解决化学农药滥用带来的环境、污染等问题,需要积极开发环境友好型的绿色生物农药。而且随着国家海洋战略的实施以及海洋生物技术的不断提高,现在已经从海洋环境中分离出多种能够产生脂肽的微生物。这些新型的脂肽抗生素将在提高我国粮食食品安全等领域具有重要的应用前景。
参考文献:
[1]Kavlock R J,Daston G P,Derosa C,et al.Research needs for the riskassessment of health and environmental effects of endocrine disruptors:areport of the U.S.EPA-sponsored workshop[J].Environmental HealthPerspectives,1996,104Suppl 4(Suppl 4):715.
[2]邱德文.生物农药研究进展与未来展望[J].植物保护,2013,39(5):81-89.
[3]赵喜红,何小维,罗志刚.抗菌肽的生物活性、作用机制及应用研究进展[J].中国酿造,2007,26(4):1-5.
[4]Ongena M,Jacques P.Bacillus lipopeptides:versatile weapons forplant disease biocontrol[J].Trends in Microbiology,2008,16(3):115-125.
[5]Ongena M,Jourdan E,Adam A,et al.Surfactin and fengycinlipopeptides of Bacillus subtilis as elicitors of induced systemic resistancein plants.[J].Environmental Microbiology,2007,9(4):1084.
发明内容
本发明目的在于提供一种海洋芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155及其应用。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案为:
一种海洋芽孢杆菌,海洋芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中国科学院微生物研究所),保藏日期为2017年10月16号,保藏编号:14816。
所述海洋芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155菌株分离自东海沉积物,其可在28℃下,LB固体培养基(蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,蒸馏水1L,琼脂20g,pH 7.0)固体培养2天,即可生长出菌株。
一种海洋芽孢杆菌的应用,所述海洋芽孢杆菌在对农业病害中的水稻稻瘟病菌或玉米赤霉菌中的应用。
所述海洋芽孢杆菌为海洋芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155营养细胞或完整培养物。
一种海洋芽孢杆菌的应用,所述海洋芽孢杆菌在制备脂肽分子Fengycins及其衍生物中的应用。
进一步的说:将上述菌株在液体培养基中发酵培养,发酵后离心收集发酵上清液,上清液经酸化、冷冻干燥,甲醇抽提以及旋转真空蒸发得粗提物;将粗提物进一步通过高效液相色谱分离和纯化,纯化后活性物质即得为Fengycins类化合物。
其中,发酵培养为:将单菌落接种于液体培养基中(蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,蒸馏水1L,pH 7.0),然后在28℃,150rpm摇床发酵48h。
所述分离纯化是HPLC使用安捷伦1260系列,流动相为甲醇/水,采用梯度洗脱,从10%的甲醇到100%甲醇,洗脱时间为20min,色谱柱为C18制备柱,流速为2mL/min,检测波长为210nm,Fengycins及其衍生物的出峰时间为9.809min。
所述将上述获得Fengycins类化合物经过高效液相二级质谱联用技术(HPLC-MS/MS)进行结构分析,Fengycins类化合物为Fengycins及其衍生物,衍生物为Fengycin A、Fengycin B、Fengycin B2和Fengycin C。
一种海洋芽孢杆菌获得脂肽分子的应用,所述海洋芽孢杆菌在制备脂肽分子Fengycins及其衍生物在对农业病害中的水稻稻瘟病菌或玉米赤霉菌中的应用。
一种植物病害防治剂,包括所述的保藏编号为14816的海洋芽孢杆菌。
进一步的说,包括保藏编号为14816的海洋芽孢杆菌菌株营养细胞或完整培养物。
再进一步的说,包括保藏编号为14816的海洋芽孢杆菌菌株的培养物浓缩物或细菌悬液或发酵液或发酵清液。
本发明所具有的优点:
本发明中芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155分离我国东海海底沉积物,属于海洋微生物,该菌产生的脂肽具有抑制稻瘟病菌和玉米赤霉菌的活性,通过分析,Bacillussubtilis BS155中的四个脂肽Fengycin A,Fengycin B,Fengycin B2及Fengycin C是其抑制病原真菌的关键活性分子。该芽孢杆菌及其产生的脂肽在开发广谱抗真菌类生物农药、改善粮食食品安全等方面具有潜在应用价值。
附图说明
图1为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155抑制稻瘟病菌和玉米赤霉菌的活性图(a:Bacillus subtilis BS155;b:稻瘟病菌;c:玉米赤霉菌)。
图2为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155的活性物质在高效液相色谱仪器(HPLC)的分离和出峰时间。
图3为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155所产活性物质抑制稻瘟病菌和玉米赤霉菌的活性图(a:分离的活性物质;b:稻瘟病菌;c:玉米赤霉菌)。
图4为本发明实施提供的从Bacillus subtilis BS155的发酵液中提取得到的活性物质的二级质谱图信息。活性物质被鉴定为四种Fengycins衍生物。图4-a为活性产物的液质联用质谱图,图4-b为Fengycin A的二级质谱图,图4-c为Fengycin B的二级质谱图,图4-d为Fengycin B2的二级质谱图,图4-e为Fengycin C的二级质谱图。
图5为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155四种Fengycins衍生物的脂肽分子结构图(5-a:Fengycin A;5-b:Fengycin B;5-c:Fengycin B2;5-d:Fengycin C)。
图6为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155的脂肽分子导致稻瘟病菌的菌丝中染色体发生变化(6-a:自然光下0μg/mL Fengycins处理48h后正常的稻瘟病菌菌丝;6-b:荧光下0μg/mL Fengycins处理48h后正常的稻瘟病菌菌丝;6-c:自然光下20μg/mLFengycins处理48h后的稻瘟病菌菌丝;6-d:荧光下20μg/mL Fengycins处理48h后的稻瘟病菌菌丝)。
图7为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155脂肽分子作用于稻瘟病菌的扫描电子显微镜(SEM)图(7-a:0μg/mL Fengycins处理48h后正常的稻瘟病菌菌丝;7-b:20μg/mL Fengycins处理48h后的稻瘟病菌菌丝)。
图8为本发明实施提供的Bacillus subtilis BS155脂肽分子作用于稻瘟病菌的透射电子显微镜(TEM)图(8-a:0μg/mL Fengycins处理48h后Fengycins处理过的稻瘟病菌菌丝;8-b:20μg/mL Fengycins处理48h后Fengycins处理过的稻瘟病菌菌丝)。
具体实施方式
下面的实验例中将对本发明作进一步的阐述,但本发明不限于此。
实施例1:
海洋芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155分离自我国东海海底沉积物,海洋细菌Bacillus subtilis BS155的16S rDNA序列参见SEQ ID NO.1。
该菌株在LB固体培养基生长2day后,菌落呈现白色,生长方向为放射状生长,菌落边缘呈现不规则形状,表面出现许多不规则褶皱。
所述Bacillus subtilis BS155的16S rDNA(SEQ ID NO.1)序列为:AAGGGCGGGGTGCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTAGGAGCCAGCCGCCCGAAAAGGG
上述产脂肽海洋细菌为Bacillus subtilis BS155,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中国科学院微生物研究所),保藏日期为2017年10月16号,保藏编号:14816。
实施例2Bacillus subtilis BS155对稻瘟病菌和玉米赤霉菌的抑制作用。
将稻瘟病菌和玉米赤霉菌菌块分别接种于马铃薯葡萄糖固体培养基(PDA)上在28℃条件下培养2-5天,然后将所述芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155在距菌块1cm处接种。在28℃条件下培养5-7天。培养结束后,观察到在接种芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155一侧的培养基上(a处),稻瘟病菌和玉米赤霉菌菌落的生长受到了明显的抑制,而没有接种的一侧(b,c处),稻瘟病菌和玉米赤霉菌生长良好,没有受到抑制。实验结果说明海洋细菌Bacillus subtilis BS155对稻瘟病菌和玉米赤霉菌有明显的抑制作用。(图3,其中a:Bacillus subtilis BS155菌落;b:稻瘟病菌;c:玉米赤霉菌)。
实施例3Bacillus subtilis BS155所产活性物质的发酵和分离
将上述菌株在28℃,150rpm液体培养基中(蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,蒸馏水1L,pH 7.0)发酵培养48h,发酵结束后,8000rpm离心15min、收集发酵上清液,上清液用盐酸将pH调至2.0、然后在4℃过夜,收集酸化沉淀产物,用甲醇抽提,将获得的抽提产物用旋转真空蒸发仪器进行真空蒸发处理,获得Bacillus subtilis BS155活性物质的粗提物。
将粗提物进一步通过高效液相色谱(HPLC,UV 210nm)进行了分离和纯化。通过HPLC共分离获得活性物质馏分,HPLC使用安捷伦1260系列,流动相为甲醇/水,采用梯度洗脱,从10%的甲醇到100%甲醇,洗脱时间为20min,色谱柱为C18制备柱,流速为2mL/min,检测波长为210nm;收集9.809min组分即为活性组分(参见图2)。
实验结果如图2所示,活性产物的出峰时间为9.809min,将获得的活性产物收集。
将上述从HPLC中获得的活性物质经过高效液相二级质谱联用技术(HPLC-MS/MS)进行结构分析,发现它们的分子量从1478Da到1534Da之间,如图4-a,4-b,4-c,4-d所示:其中Fengycin A的二级质谱中含有特异性的离子碎片966,1080;Fengycin B的二级质谱中含有特异性的离子碎片994,1108;Fengycin B2的二级质谱中含有特异性的离子碎片990,1087;Fengycin C的二级质谱中含有特异性的离子碎片1008,1122;并且它们具有相似的氨基酸和脂肪酸链的组成形式。说明这种活性物质均为脂肽分子,并且属于Fengycins类衍生物。
上述培养后的胞外活性物质通过参考相关文献,发现二级质谱信息与Fengycins的结果信息吻合,因此被鉴定为四种脂肽分子。包括Fengycin A(图5-a),Fengycin B(图5-b),Fengycin B 2(图5-c),Fengycin C(图5-d)。Fengcyins是由一段β-羟基脂肪酸链和10个氨基酸组成的脂肽类化合物。其中,脂肪酸链的长度为16-19,Fengycin脂肽中氨基酸包括L-Glu、D-Orn、L-Tyr、D-allo-Thr、L-Glu、D-Ala(or D-Val)、L-Pro、L-Glu、D-Tyr和L-Ile,在第3个氨基酸L-Tyr及第10个氨基酸L-Ile会形成内酯键。它们之间区别是在于第六,十位的氨基酸Fengycin A分别是Ala,Ile,Fengycin B是Val,Ile,而Fengycin B 2第六,十位氨基酸分别是Val,Val,Fengycin C是Ile,Ile。
实施例4:Bacillus subtilis BS155所产活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)对稻瘟病菌和玉米赤霉菌的抑制作用。
将稻瘟病菌和玉米赤霉菌菌块接种于马铃薯葡萄糖固体培养基(PDA)上,然后将上述实施例获得的纯化后的活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)溶解于DMSO中制备成脂肽溶液。取直径为10mm的灭菌滤纸片,在a处的滤纸片上加入终浓度为50μg的Fengycins衍生物溶液,在b和c处加入不含有Fengycins的DMSO对照溶液,放置于距离菌块1-2cm处,28℃培养5-7天。然后可以观察到稻瘟病菌和玉米赤霉菌的生长受到明显抑制,说明活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)对稻瘟病菌和玉米赤霉菌有明显的抑制作用(图3)。
实施例5:四种Fengycins及其衍生物对稻瘟病菌菌丝中染色体的破坏作用
将稻瘟病菌在PDA固体培养基上培养7天后,用无菌水滴在培养基上,然后用灭菌的毛刷从培养基表面上刷下菌丝,然后接种于25mL液体马铃薯葡萄糖培养基上。28℃下摇床培养48h,收集菌体,分别加入不同终浓度的上述实施例获得的纯化后的活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)(0μg/μL,20μg/mL)。在28℃,100rpm条件下处理12h,收集菌丝,用PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)洗三遍,然后用特异性染料Hoechst33258(10μg/mL)在28℃,100rpm和避光条件下染色30min。染色后用PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)将染料洗掉。收集菌丝,加入PBS缓冲液。用移液器将菌丝滴在载玻片上,然后在荧光显微镜下进行观察(参见图6)。
由图6可见,未经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理的稻瘟病菌在荧光下没有出现蓝色荧光(图6-a,b),而经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理的稻瘟病菌在荧光下出现蓝色荧光(图6-c,d),蓝色荧光的出现说明经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理的稻瘟病菌的染色体已经明显被破坏。实验结果说明活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)会破坏稻瘟病菌的染色体结构,使其失去生物活性。。
实施例6:SEM和TEM下观察活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)对稻瘟病菌的抑制作用。
按照实施例5中记载的方式获得菌丝样品,收集菌丝,分别用不同浓度的活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)(0μg/μL,20μg/mL)对获得的菌丝进行处理。具体处理方式为:在28℃,100rpm条件下处理菌丝48h,收集菌丝,用PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)洗三遍,然后用5%的戊二醛进行固定1h,固定后依次用不同浓度的30%,50%,70%,80%,90%和100%酒精将样品进行脱水处理,每个浓度处理10min,将样品按照常规方式分别制备成SEM样品,然后在扫描电子显微镜下进行观察。
按照实施例6中记载的方式获得菌丝样品,收集菌丝,分别用不同浓度的活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)(0μg/μL,20μg/mL)对获得的菌丝进行处理。在28℃,100rpm条件下处理48h,收集菌丝,用PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)洗三遍,然后用2.5%的戊二醛进行固定2h,然后将样品经过相关处理后,制成TEM样品,然后在透射电子显微镜下进行观察。
对上述制备获得的样品进行观察,参见扫描电子显微镜观察图(图7)和透射电子显微镜观察图(图8),从图7-a可以看出,没有经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理的稻瘟病菌菌丝生长正常,细胞器完整,细胞壁和细胞膜生长完整,而图7-b中,经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理过的稻瘟病菌菌丝出现明显的膨大和聚集,并且表面干瘪。从图8-a可以看出,没有经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理的稻瘟病菌菌丝生长正常,细胞内容物丰富完整,而图8-b中,经过活性组分(Fengycins及其衍生物脂肽)处理过的稻瘟病菌菌丝细胞内容物物质外泄,细胞器明显缺失,从而导致病菌死亡。
序列表
<110> 中国科学院海洋研究所
<120> 海洋芽孢杆菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgcctg taagactggg ataactccgg 120
gaaaccgggg ctaataccgg atggttgttt gaaccgcatg gttcaaacat aaaaggtggc 180
ttcggctacc acttacagat ggacccgcgg cgcattagct agttggtgag gtaatggctc 240
accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300
cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360
cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgt aaagctctgt tgttagggaa 420
gaacaagtac cgttcgaata gggcggtacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct 480
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg aattattggg 540
cgtaaagggc tcgcaggcgg tttcttaagt ctgatgtgaa agcccccggc tcaaccgggg 600
agggtcattg gaaactgggg aacttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag 660
cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaaca ccagtggcga aggcgactct ctggtctgta 720
actgacgctg aggagcgaaa gcgtggggag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac 780
gccgtaaacg atgagtgcta agtgttaggg ggtttccgcc ccttagtgct gcagctaacg 840
cattaagcac tccgcctggg gagtacggtc gcaagactga aactcaaagg aattgacggg 900
ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 960
gtcttgacat cctctgacaa tcctagagat aggacgtccc cttcgggggc agagtgacag 1020
gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1080
gcaacccttg atcttagttg ccagcattca gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac 1140
aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1200
acgtgctaca atggacagaa caaagggcag cgaaaccgcg aggttaagcc aatcccacaa 1260
atctgttctc agttcggatc gcagtctgca actcgactgc gtgaagctgg aatcgctagt 1320
aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380
caccacgaga gtttgtaaca cccgaagtcg gtgaggtaac ctttaggagc cagccgcccg 1440
aaaaggg 1447

Claims (10)

1.一种海洋芽孢杆菌,其特征在于:海洋芽孢杆菌为Bacillus subtilis BS155,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中国科学院微生物研究所),保藏日期为2017年10月16号,保藏编号:14816。
2.一种权利要求1所述的海洋芽孢杆菌的应用,其特征在于:所述海洋芽孢杆菌在对农业病害中的水稻稻瘟病菌或玉米赤霉菌中的应用。
3.按权利要求2所述的权利要求1所述的海洋芽孢杆菌的应用,其特征在于:所述海洋芽孢杆菌为海洋芽孢杆菌Bacillus subtilis BS155营养细胞或完整培养物。
4.一种权利要求1所述的海洋芽孢杆菌的应用,其特征在于:所述海洋芽孢杆菌在制备脂肽分子Fengycins及其衍生物中的应用。
5.按权利要求4所述的Fengycins及其衍生物的制备方法,其特征在于:将上述菌株在液体培养基中发酵培养,发酵后离心收集发酵上清液,上清液经酸化、冷冻干燥,甲醇抽提以及旋转真空蒸发得粗提物;将粗提物进一步通过高效液相色谱分离和纯化,纯化后活性物质即得为Fengycins类化合物。
6.按权利要求5所述的Fengycins及其衍生物的制备方法,其特征在于:将上述获得Fengycins类化合物经过高效液相二级质谱联用技术(HPLC-MS/MS)进行结构分析,Fengycins类化合物为Fengycins及其衍生物,衍生物为Fengycin A、Fengycin B、FengycinB2和Fengycin C。
7.一种权利要求6所述的海洋芽孢杆菌获得脂肽分子的应用,其特征在于:所述海洋芽孢杆菌在制备脂肽分子Fengycins及其衍生物在对农业病害中的水稻稻瘟病菌或玉米赤霉菌中的应用。
8.一种植物病害防治剂,其特征在于,包括权利要求1所述的保藏编号为14816的海洋芽孢杆菌。
9.根据权利要求8所述的植物病害防治剂,其特征在于,包括保藏编号为14816。的海洋芽孢杆菌菌株营养细胞或完整培养物。
10.根据权利要求9所述的植物病害防治剂,其特征在于,包括保藏编号为14816的海洋芽孢杆菌菌株的培养物浓缩物或细菌悬液或发酵液或发酵清液。
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