CN107807179A - 一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法 - Google Patents

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范航
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刘玉军
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Abstract

本发明涉及一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，所述方法包括：样品的制备、标准曲线的建立和人参皂苷单体含量的测定；所述样品的制备包括人参皂苷对照品混合溶液的制备和人参皂苷样品溶液的制备；所述方法同时定性定量测定的多种人参皂苷单体不少于19种。本发明涉及的方法具有可同时定性定量测定多种人参皂苷单体，测定速率快，测定效率高等优点。属于人参皂苷单体提取技术领域。

Description

一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法
技术领域
本发明属于人参皂苷单体提取技术领域，具体涉及一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法。
背景技术
人参(Panaxginseng C.A.Mey)系五加科(Araliaceae)人参属半阴性多年生宿根草本植物。人参为珍贵药材，具有极高的临床应用价值。研究发现，皂苷类为人参的主要活性成分，具有提高人体抵抗力、抗休克、抗癌等作用。为充分利用人参，近年来对于人参的各部位研究也较为广泛，包括人参茎叶、人参花及人参果实。人参茎叶总皂苷的含量显著高于人参根，其皂苷提取物是《中国药典》收载的品种；人参花用于作为花茶及食品，具有悠久的治疗疾病和保健历史，其总皂苷含量高于人参根达5.06倍；人参果目前报道较少，但有人研究表明，人参果总皂苷具有独特的药理活性，有明确的抗肿瘤作用。
人参常热加工后使用，药典收录的品种有生晒参和红参。其中红参是鲜人参经过蒸制加工而成，颜色由白变红，药典记录其能大补元气、复脉固脱、益气摄血，是阴盛阳虚者的首选补品。近年研究发现，人参热加工成红参过程中，皂苷成分发生复杂的化学变化，由含量高的极性皂苷转化成了低极性皂苷。
皂苷类成分是人参中最主要的有效成分。人参皂苷在液相条件下，按照其极性大小顺序洗脱下来，极性皂苷丰富存在于人参根、人参茎叶、人参花和人参果中，低极性皂苷丰富存在于热加工后的人参和人参花中。低极性皂苷被广泛报道具有明确的抗癌，抗肿瘤作用。极性皂苷包括Rg1、Re、Rf、Rb1、S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd等，低极性皂苷包括F4、S-Rg3、R-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK、Rh2等。部分人参皂苷有C-20位立体构型(S/R)，如S/R-Rg2,S/R-Rg3,S/R-Rh1，S/R-Rh2等。R构型皂苷在自然条件下不易发现，大部分生成于人参加工过程中，并因此具有不同于S型的药理活性。据报道S/R-Rh2具有广谱抗肿瘤作用，且S-Rh2对肿瘤细胞的早期抑制作用明显高于R-Rh2，具有构效效应。
现有的人参皂苷提取方法同时提取的种类较少，且根据现有的提取方法无法定性定量地测定出人参皂苷单体的R和S构型。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其具有可同时定性定量测定多种人参皂苷单体且测定出部分人参皂苷单体的R和S构型，测定速率快，测定效率高等优点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，所述方法包括：样品的制备、标准曲线的建立和人参皂苷单体含量的测定；
所述样品的制备包括人参皂苷对照品混合溶液的制备和人参皂苷样品溶液的制备；
所述方法同时定性定量测定的多种人参皂苷单体不少于19种。
进一步地，测定的所述多种人参皂苷单体为Rg1、Re、Rf、Rb1、S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、S-Rg3、R-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK和Rh2。
进一步地，所述人参皂苷对照品混合溶液的制备具体内容为：选取已知的质量分数含量在98％以上的质量为m0的人参皂苷对照品溶于色谱甲醇中，制得浓度为C0的人参皂苷对照品混合溶液；
所述人参皂苷样品溶液的制备是根据样品原料的不同分为两种制备方式，最终得到所述人参皂苷样品溶液；
所述标准曲线的建立内容为：首先，将所述人参皂苷对照品混合溶液置于高效液相色谱仪的进样器中，由所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱分离所述人参皂苷对照品混合溶液，并通过检测器检测得到所述人参皂苷对照品混合溶液的HPLC图谱；然后分别以人参皂苷单体的质量为y，所述HPLC图谱上的对峰面积积分值为x计算得到所述人参皂苷对照品混合溶液中每个皂苷单体的线性回归方程；
所述人参皂苷单体含量的测定内容为：首先，将所述人参皂苷样品溶液置于高效液相色谱仪的进样器中，由所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱分离所述人参皂苷样品溶液，并通过检测器检测得到所述人参皂苷样品溶液的HPLC图谱；利用所述每个皂苷单体的线性回归方程，计算所述人参皂苷样品溶液中各人参皂苷单体的含量。
进一步地，所述人参皂苷对照品质量m0为2～8mg。
进一步地，所述人参皂苷对照品混合溶液的浓度C0为0.3～3mg/ml。
进一步地，所述两种制备方式包括：
(1)以人参根或人参茎叶为样品制备所述人参皂苷样品溶液：
首先精密称取人参皂苷样品粉末mx，置于体积浓度为Wx的乙醇溶液Vx中；然后用超声处理时间Tx后摇匀、静置，得到上清液；最后用微孔滤膜过滤所述上清液，得到所述人参皂苷样品溶液；
(2)以人参花、人参果或热加工人参花为样品制备所述人参皂苷样品溶液：
①制备样品的乙醇提取物：首先精密称取人参皂苷样品粉末mx，置于体积浓度为Wx的乙醇溶液Vx中；然后用超声处理时间Tx后摇匀、静置，得到上清液；最后用微孔滤膜过滤所述上清液，得到样品的乙醇提取物；
②制备所述人参皂苷样品溶液：精密称取所述样品的乙醇提取物质量mx’，溶于体积Vx’色谱甲醇中，用微孔滤膜过滤，得到所述人参皂苷样品溶液。
进一步地，所述人参皂苷样品粉末mx为0.1～3g；
进一步地，所述乙醇溶液Vx为1～30ml。
进一步地，所述乙醇的体积浓度Wx为70％～90％。
进一步地，所述超声处理时间Tx为20min～90min。
进一步地，所述超声处理时，超声处理的功率不小于500W。
进一步地，所述超声处理时，超声处理的频率不小于40kHz。
进一步地，所述微孔膜的孔隙直径为0.1～0.22μm。
进一步地，所述乙醇提取物质量mx’为2～4mg。
进一步地，所述体积Vx’为1～2ml。
进一步地，所述高效液相色谱法选取流动相为水和乙腈。
进一步地，所述水为超纯水。
进一步地，所述流动相梯度洗脱条件如下：
0min,21％乙腈；0-14min，21％乙腈；14-24min，30％乙腈；24-55min，32％乙腈；55-75min，33％乙腈；75-100min，35％乙腈；100-120min，37％乙腈；120-130min，60％乙腈；130-140min，70％乙腈；140-150min，80％乙腈；
所述流动相流速为0.5～1ml/min。
进一步地，所述检测器为紫外光检测器。
进一步地，所述检测器检测波长为203nm。
进一步地，所述高效液相色谱柱为5μm250×4.6mm的C18色谱柱。
进一步地，所述高效液相色谱柱使用时的柱温为25～30℃。
进一步地，所述标准曲线的建立内容中，所述人参皂苷对照品混合溶液的进样量从2～20μl中选取6份以上体积不同的所述人参皂苷对照品混合溶液。
进一步地，所述人参皂苷单体含量的测定内容中，所述人参皂苷样品溶液的进样量为2～20μl。
从化合物的极性上来说，化合物的极性大小为：乙醇＜乙腈＜甲醇＜水，甲醇的极性大于乙醇，也就意味着乙醇提取的样品能够溶于甲醇中。
此外，从流动相的使用量方面来说，使用甲醇溶解样品，将会减少所述乙腈(有机相)的用量(乙醇溶解的样品需要更高浓度的乙腈才可以将各物质洗脱下来)，从而降低成本。
本发明的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法具有以下有益技术效果：
(1)本发明的同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，该方法通过改变流动相梯度洗脱条件以及流动相的流速，使检测器可以检测出部分人参皂苷的S和R构型，这是现有的制备方法所不能做到的。
(2)本发明的方法可同时精确地定性定量测定19种人参皂苷单体。
(3)本发明的方法在建立标准曲线时选取的人参皂苷对照品混合溶液选择浓度相同，体积选择6种以上来，使得最终建立的标准曲线精度高，测定的人参皂苷更准确。
(4)本发明的方法具有可同时定性定量测定多种人参皂苷单体，测定速率快，测定效率高等优点。
附图说明
图1为本发明实施例的人参皂苷对照品混合溶液的HPLC图谱。
图2为本发明实施例的人参根的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。
图3为本发明实施例的人参茎叶的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。
图4为本发明实施例的人参花的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。
图5为本发明实施例的人参果的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。
图6为本发明实施例的热处理人参花的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。
附图标记说明：1～19分别为人参皂苷单体Rg1、Re、Rf、Rb1、S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、S-Rg3、R-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK和Rh2。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细描述。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
相反，本发明涵盖任何由权利要求定义的在本发明的精髓和范围上做的替代、修改、等效方法以及方案。进一步，为了使公众对本发明有更好的了解，在下文对本发明的细节描述中，详尽描述了一些特定的细节部分。对本领域技术人员来说没有这些细节部分的描述也可以完全理解本发明。
实施例1
本实施例提供一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，如图1～图6所示，所述方法包括：样品的制备、标准曲线的建立和人参皂苷单体含量的测定；
所述样品的制备包括人参皂苷对照品混合溶液的制备和人参皂苷样品溶液的制备；
所述方法同时定性定量测定的多种人参皂苷单体为19种。
测定的所述多种人参皂苷单体为Rg1、Re、Rf、Rb1、S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、S-Rg3、R-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK和Rh2。
所述人参皂苷对照品混合溶液的制备具体内容为：分别精密称取19种人参皂苷单体对照品Rg1、Re、Rf、Rb1、20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK、Rh2各5±0.6mg，同时溶于10ml色谱甲醇中，制成上述19种人参皂苷的质量浓度分别为0.54、0.5、0.53、0.49、0.56、0.44、0.46、0.5、0.49、0.52、0.54、0.52、0.46、0.51、0.5、0.49、0.53、0.54、0.48mg/ml的所述人参皂苷对照品混合溶液，并用孔隙直径0.22μm微孔滤膜过滤，备用。
所述人参皂苷样品溶液的制备是根据样品原料的不同分为两种制备方式，最终得到所述人参皂苷样品溶液；
所述两种制备方式包括：
(1)以人参根或人参茎叶为样品制备所述人参皂苷样品溶液：
首先精密称取人参皂苷样品粉末1g，置于体积浓度为70％的乙醇溶液10ml中；然后用超声处理30min后摇匀、静置，得到上清液；最后用0.22μm的微孔滤膜过滤所述上清液，得到所述人参皂苷样品溶液；
(2)以人参花、人参果或热加工人参花为样品制备所述人参皂苷样品溶液：
①制备样品的乙醇提取物：首先精密称取人参皂苷样品粉末1g，置于体积浓度为70％的乙醇溶液10ml中；然后用超声处理(功率500W，频率40kHz)30min后摇匀、静置，得到上清液；最后用0.22μm的微孔滤膜过滤所述上清液，得到样品的乙醇提取物；
在所述体积浓度为70％的乙醇溶液条件下提取人参样品中的人参皂苷，提取率最高；
②制备所述人参皂苷样品溶液：精密称取所述样品的乙醇提取物质量4mg，溶于体积2ml的色谱甲醇中，用微孔滤膜过滤，得到所述人参皂苷样品溶液。
所述标准曲线的建立内容为：
首先，将所述人参皂苷对照品混合溶液置于高效液相色谱仪的进样器中，由所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱分离所述人参皂苷对照品混合溶液，并通过检测器检测得到如图1所示的所述人参皂苷对照品混合溶液的HPLC图谱；然后分别以人参皂苷单体的质量为y，所述HPLC图谱上的对峰面积积分值为x计算得到如表1所示的所述人参皂苷对照品混合溶液中每个皂苷单体的线性回归方程；
所述人参皂苷单体含量的测定内容为：首先，将所述人参皂苷样品溶液置于高效液相色谱仪的进样器中，由所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱分离所述人参皂苷样品溶液，并通过检测器检测得到所述人参皂苷样品溶液的HPLC图谱；利用所述每个皂苷单体的线性回归方程，计算所述人参皂苷样品溶液中各人参皂苷单体的含量。
所述高效液相色谱仪中选取流动相为水和乙腈。
所述水为哇哈哈超纯水。
所述流动相梯度洗脱条件如下：
0min,21％乙腈；0-14min，21％乙腈；14-24min，30％乙腈；24-55min，32％乙腈；55-75min，33％乙腈；75-100min，35％乙腈；100-120min，37％乙腈；120-130min，60％乙腈；130-140min，70％乙腈；140-150min，80％乙腈；
所述流动相流速为0.8ml/min。
所述检测器为紫外光检测器。
所述检测器检测波长为203nm。
所述高效液相色谱柱为5μm250×4.6mm的C18色谱柱。
所述高效液相色谱柱使用时的柱温为25℃。
所述标准曲线的建立内容中，所述人参皂苷对照品混合溶液的进样量体积分别为2μl,4μl,6μl,10μl,16μl,20μl的6份体积不同的所述人参皂苷对照品混合溶液。
所述人参皂苷单体含量的测定内容中，所述人参皂苷样品溶液的进样量为20μl。
表1 19种人参皂苷的线性回归方程、线性范围、定量限和检测限
根据上述方法对待测的人参皂苷样品溶液的HPLC色谱图如图2～图6所示，其中，图2为本发明实施例的人参根的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。图3为本发明实施例的人参茎叶的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。图4为本发明实施例的人参花的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。图5为本发明实施例的人参果的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。图6为本发明实施例的热处理人参花的人参皂苷样品溶液的HPLC图谱。图中：1～19分别为人参皂苷单体Rg1、Re、Rf、Rb1、S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、S-Rg3、R-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK和Rh2。
根据表1中的19种人参皂苷单体的线性回归方程计算得到如表2所示的人参皂苷样品中19种人参皂苷的含量。
表2人参皂苷样品中19种人参皂苷的含量
由表2及图2～图6可知，本发明的方法通过改变流动相梯度洗脱条件以及流动相的流速，使色谱柱可以精确分离并由检测器可以检测到部分人参皂苷的S和R构型，这是现有的制备方法和提取条件所无法达到的。
此外，本发明实施例还做了所述人参皂苷对照品混合溶液稳定性实验、所述人参皂苷样品溶液的重复性实验以及人参皂苷样品溶液的回收率实验。
所述人参皂苷对照品混合溶液稳定性实验具体内容如下：
首先，将所述人参皂苷对照品混合溶液分别放置0h、3h、6h、9h、12h和24h。
然后，从放置不同时间的所述人参皂苷对照品混合溶液中取20μl用高效液相色谱法提取并通过紫外检测器检测其中的人参皂苷单体含量。
所述紫外检测器检测得到的Rg1、Re、Rf、Rb1、20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK、Rh2的峰面积的RSD值分别为1.75％，0.70％，0.32％，0.75％，0.44％，0.24％，0.27％，0.27％，0.28％，0.32％，0.25％，0.38％，0.32％，0.32％，0.30％，0.30％，0.27％，0.34％，1.19％。RSD值均小于5％，表明本实施例的人参皂苷对照品混合溶液在24h内稳定。
所述人参皂苷样品溶液的重复性实验具体内容如下：
取同一批人参花样品，按所述人参皂苷样品溶液的制备平行制备人参花样品溶液6份，采用高效液相色谱法提取并通过紫外检测器检测6份人参花样品溶液中人参皂苷单体的HPLC图谱。分别进样20μl。
所述紫外检测器检测得到的Rg1、Re、Rf、Rb1、20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK、Rh2的峰面积的RSD值分别为1.07％，1.52％，4.33％，3.21％，3.00％，2.34％，1.29％，1.38％，1.58％，2.19％，1.27％，3.94％，1.78％，1.62％。RSD值均小于5％，表明本方法重复性较好。
所述人参皂苷样品溶液的回收率实验的具体内容如下：
精密量取1.5ml已知含量的19种所述人参皂苷对照品混合溶液加入到0.5ml人参花样品溶液中，采用高效液相色谱法提取并通过紫外检测器检测，并与人参花样品溶液同时测定。
所述紫外检测器检测得到的Rg1、Re、Rf、Rb1、20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK、Rh2的回收率分别为93.86％，102.99％，95.09％，96.16％，96.60％，97.71％，97.31％，107.46％，98.84％，97.17％，99.36％，102.24％，95.33％，96.14％，105.88％，103.59％，96.53％，96.21％，98.03％，RSD值分别为0.70％，1.86％，1.43％，2.05％，1.76％，3.17％，2.61％，2.44％，1.68％，2.06％，1.45％，2.54％，2.19％，1.04％，1.51％，1.33％，2.16％，1.16％，2.91％，1.16％，2.90％。说明19种人参皂苷的平均回收率均在90％-110％范围内，且其RSD值均小于5％，此方法准确度较好。
实施例2
本实施例与实施例1的测定多种人参皂苷单体的方法及其结果、所述人参皂苷对照品混合溶液稳定性实验、所述人参皂苷样品溶液的重复性实验以及人参皂苷样品溶液的回收率实验基本相同，唯不同的是：所述流动相流速为0.5ml/min。
实施例3
本实施例与实施例1的测定多种人参皂苷单体的方法及其结果、所述人参皂苷对照品混合溶液稳定性实验、所述人参皂苷样品溶液的重复性实验以及人参皂苷样品溶液的回收率实验基本相同，唯不同的是：所述流动相流速为1ml/min。
实施例4
本实施例与实施例1的测定多种人参皂苷单体的方法、所述人参皂苷对照品混合溶液稳定性实验、所述人参皂苷样品溶液的重复性实验以及人参皂苷样品溶液的回收率实验基本相同，唯不同的是：
所述流动相流速为0.4ml/min，在该流速下得到的人参皂苷单体，检测器无法检测到部分人参皂苷单体的R和S构型。
实施例5
本实施例与实施例1的测定多种人参皂苷单体的方法、所述人参皂苷对照品混合溶液稳定性实验、所述人参皂苷样品溶液的重复性实验以及人参皂苷样品溶液的回收率实验基本相同，唯不同的是：
所述流动相流速为1.1ml/min，在该流速下得到的人参皂苷单体，检测器无法检测到部分人参皂苷单体的R和S构型。

Claims (10)

1.一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述方法包括：样品的制备、标准曲线的建立和人参皂苷单体含量的测定；
所述样品的制备包括人参皂苷对照品混合溶液的制备和人参皂苷样品溶液的制备；
所述方法同时定性定量测定的多种人参皂苷单体不少于19种。
2.根据权利要求1所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述多种人参皂苷单体为Rg1、Re、Rf、Rb1、S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F4、S-Rg3、R-Rg3、S-protopanaxatriol、Rg5、CK和Rh2。
3.根据权利要求1所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述人参皂苷对照品混合溶液的制备具体内容为：选取已知的质量分数含量在98％以上的质量为m0的人参皂苷对照品溶于色谱甲醇中，制得浓度为C0的人参皂苷对照品混合溶液；
所述人参皂苷样品溶液的制备是根据样品原料的不同分为两种制备方式，最终得到所述人参皂苷样品溶液；
所述标准曲线的建立内容为：首先，将所述人参皂苷样品溶液置于高效液相色谱仪的进样器中，由所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱分离人参皂苷对照品混合溶液，并通过检测器检测得到人参皂苷对照品混合溶液的HPLC图谱；然后分别以人参皂苷单体的质量为y，所述HPLC图谱上的对峰面积积分值为x计算得到所述人参皂苷对照品混合溶液中每个皂苷单体的线性回归方程；
所述人参皂苷单体含量的测定内容为：首先，将所述人参皂苷样品溶液置于高效液相色谱仪的进样器中，由所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱分离所述人参皂苷样品溶液，并通过检测器检测得到所述人参皂苷样品溶液的HPLC图谱；利用所述每个皂苷单体的线性回归方程，计算所述人参皂苷样品溶液中各人参皂苷单体的含量。
4.根据权利要求3所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪中选取的流动相为水和乙腈；
所述流动相梯度洗脱条件如下：
0min,21％乙腈；0-14min，21％乙腈；14-24min，30％乙腈；24-55min，32％乙腈；55-75min，33％乙腈；75-100min，35％乙腈；100-120min，37％乙腈；120-130min，60％乙腈；130-140min，70％乙腈；140-150min，80％乙腈；
所述流动相流速为0.5～1ml/min。
5.根据权利要求3所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述人参皂苷对照品质量m0为2～8mg。
6.根据权利要求3所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述人参皂苷对照品混合溶液的浓度C0为0.3～3mg/ml。
7.根据权利要求3所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述两种制备方式包括：
(1)以人参根、人参茎叶为样品制备所述人参皂苷样品溶液：
首先精密称取人参皂苷样品粉末mx，置于体积浓度为Wx的乙醇溶液Vx中；然后用超声处理时间Tx后摇匀、静置，得到上清液；最后用微孔滤膜过滤所述上清液，得到所述人参皂苷样品溶液；
(2)以人参根、人参茎叶为样品制备所述人参皂苷样品溶液：
①制备样品的乙醇提取物：首先精密称取人参皂苷样品粉末mx，置于体积浓度为Wx的乙醇溶液Vx中；然后用超声处理时间Tx后摇匀、静置，得到上清液；最后用微孔滤膜过滤所述上清液，得到样品的乙醇提取物；
②制备所述人参皂苷样品溶液：精密称取所述样品的乙醇提取物质量mx’，溶于体积Vx’色谱甲醇中，用微孔滤膜过滤，得到所述人参皂苷样品溶液。
8.根据权利要求7所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述人参皂苷样品粉末mx为0.1～3g；
所述乙醇溶液Vx为1～30ml；
所述乙醇的体积浓度Wx为70％～90％；
所述超声处理时间Tx为20min～90min。
9.根据权利要求7所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述微孔膜的孔隙直径为0.1～0.22μm。
10.根据权利要求7所述的一种同时定性定量测定多种人参皂苷单体的方法，其特征在于，所述乙醇提取物质量mx’为2～4mg；
所述体积Vx’为1～2ml。
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