CN107787326A

CN107787326A - 特异性结合淀粉样蛋白‑β的肽及其用于治疗和诊断阿尔茨海默氏痴呆症的用途

Info

Publication number: CN107787326A
Application number: CN201680017223.6A
Authority: CN
Inventors: D.维尔博尔德; S.鲁道夫; J.库切; S.A.芬克
Original assignee: Forschungszentrum Juelich GmbH
Current assignee: Forschungszentrum Juelich GmbH
Priority date: 2015-03-20
Filing date: 2016-03-01
Publication date: 2018-03-09
Also published as: JP2018512410A; WO2016150416A1; US10239923B2; EP3271378A1; DE102015003503A1; US20180072786A1

Abstract

本发明涉及特异性结合淀粉样蛋白‑β的肽及其用于治疗和诊断阿尔茨海默氏痴呆症的用途。

Description

特异性结合淀粉样蛋白-β的肽及其用于治疗和诊断阿尔茨海默氏痴呆症的用途

本发明涉及特异性结合淀粉样蛋白-β的肽及其用于治疗和诊断阿尔茨海默氏痴呆症的用途。

现有技术

由WO 02/081505 A2已知名为“D3”的D-对映体肽。其通过对主要是单体的Aβ(1-42)的镜像噬菌体展示选择来识别，计划是，使其通过结合而稳定化并防止其转化为有毒的Aβ-聚集体。根据目前的认识水平，D3优选将特别有毒的Aβ-寡聚体转化成无毒的非淀粉样蛋白型（nicht-amyloidogen）且ThT阴性的非晶聚集体。在动物模型中，甚至通过用饮用水口服给药D3实现了经治疗的转基因AD小鼠含有明显更少的斑块，并且具有显著改善的认知能力。

但是，尚不存在得到批准的用于阿尔茨海默氏痴呆症（AD）的病因治疗的药物。通常，在AD患者的脑中在死后发现呈斑块状的所谓的β-淀粉样蛋白-肽（Aβ）的沉积物。因此，长期以来认为各种形式的Aβ，例如原纤维，对AD的发生和发展负有责任。

最近几年来，尤其认为小的可自由扩散的Aβ-寡聚体作为主要成因对阿尔茨海默氏痴呆症的发生和发展负有责任。

在我们的整个生命期间，由于前体蛋白APP（淀粉样蛋白前体蛋白）被β-和γ-分泌酶相继地蛋白水解，在我们的身体中不断生成单体Aβ（Haass和Selkoe，1993），并且其本身是无毒的。甚至存在越来越多的证据表明，单体Aβ在大脑中具有生理性的，可能甚至神经保护性的功能（Puzzo和Arancio 2013）。

推测Aβ-单体是否取决于它们的浓度（其最终由于在体内的形成速率和降解速率而产生）而随机地并因此随着年龄的增长越来越可能自发地积聚在一起形成Aβ-寡聚体。一旦产生的Aβ-寡聚体然后可以通过类似朊病毒的机制增殖并最终导致疾病。

基于这些考虑，病因治疗的目的应是，防止形成有毒的Aβ-寡聚体，或者完全消除已经存在的寡聚体和/或防止其类似朊病毒的增殖，而并不降低Aβ-单体浓度。

因此，没有对成因起作用的用于治疗阿尔茨海默氏痴呆症的药物。所使用的药物最多能够缓解一些症状，但不能减缓，更谈不上阻止疾病的发展。

尽管存在一些以各种方式降低Aβ-单体浓度的物质，例如通过 γ分泌酶调节剂、Aβ-结合配体等。但是，由于认定了单体Aβ在脑中的生理性、可能甚至神经保护性的功能，因此由于对阿尔茨海默氏痴呆症的作用机制的最新认识，估计更有效的不是减少单体的Aβ浓度，而是Aβ-寡聚体的浓度。

这一假设也通过迄今的在人体中以降低单体浓度的活性物质进行的临床试验（II期和III期）的负面结果得以证实。

发明目的

因此，本发明的目的是

A)通过防止形成有毒的淀粉样蛋白-β (Aβ)-寡聚体或聚集体或使其去毒来提供用于阿尔茨海默病的病因治疗的肽。此外应

B)为此改进由现有技术已知的镜像噬菌体展示方法，并应

C)揭示根据本发明的肽的用途可能性。

所述目的的解决方案

所述目的通过根据主要权利要求的肽、试剂盒和组合物以及根据次要权利要求的方法和用途得以实现。对此的有利实施方案分别由引用它们的专利权利要求获悉。

发明内容

本发明的目的通过与特定A-β-物类特异性结合的配体或肽来实现。尤其提供了相较于寡聚体和/或原纤维Aβ_1-42更特异性结合Aβ_1-42-单体的肽。

此外，术语靶分子和诱饵同义使用。

特异性，通常也称为选择性，在此含义如下。如果要研究的根据本发明的配体或根据本发明的肽结合两种不同的分子（它们例如称作“诱饵”和“竞争剂”），则在假设1：1结合模型的情况下可给每个结合对，即配体-诱饵和配体-竞争剂各自分配解离常数(K_D)或缔合常数(K_A= 1/K_D)。K_A值越高，各自的结合就越有亲和力。相对于竞争剂，配体对诱饵的特异性通过对诱饵的亲和力与对竞争剂的亲和力的尽可能大的商来显示。根据本发明的配体具有的配体对诱饵的K_A值与对竞争剂的K_A值的商越大，特异性越大。

在这个意义上，当配体或肽对物类A（诱饵）的K_A值与配体对物类B（竞争剂）的K_A值的商至少大于1时，优选大于1.2，或1.5，优选大于2、3、4、5、6、7、8、9，特别是10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，特别是100时，存在相对的特异性，其中作为物类A和物类B，可以接受各种A-β-物类，例如单体、寡聚体和原纤维。

在此，可以接受每个中间值。将数值四舍五入（Rundung）产生上述数值。

该模型原则上可以扩展至多种竞争剂，所述竞争剂可以分别单独地或以混合物的形式来考虑，即使后者不是特别好。

所述目的尤其通过用于治疗阿尔茨海默氏痴呆症的特异性结合淀粉样蛋白-β-物类的肽得以实现。特异性，通常也称为选择性，在此表示，根据本发明的配体或根据本发明的肽原则上可以结合各种A-β-物类，例如，A-β-单体或A-β-寡聚体或A-β原纤维。在1：1结合模型的假设下，给每个结合对（例如，配体与A-β-单体和配体与A-β-寡聚体和配体与A-β-原纤维）各自分配解离常数(K_D)或缔合常数(K_A= 1/K_D)。K_A值越高，各自的结合就越有亲和力。

通过对A-β-单体的亲和力与对A-β-寡聚体或A-β-原纤维的亲和力的尽可能大的商，显示相对于竞争剂而言配体对诱饵的特异性。

因此，根据本发明，通过配体对A-β-单体的K_A值与对A-β-寡聚体（或A-β原纤维）的K_A值的商来确定特异性。该商越大，特异性就越大。

在此，不应将特异性或选择性与亲和力相混淆，亲和力由配体与物类之一的结合强度得出。如果不同的配体竞争相同的靶分子，则较少特异性或选择性的那些可具有更大的结合亲和力。根据本发明，应该确定尤其特异性结合一种物类如单体或寡聚体或原纤维的那些配体。该生物分子应适合作为治疗剂和药剂。以这种方式获得的配体或肽具有所希望的性能并实现本发明的目的。

借助于优化的镜像噬菌体展示选择来选择肽，其例如相较于结合寡聚体或原纤维Aβ(1-42)更特异性地结合单体Aβ(1-42)。

为了识别尽可能特异性结合单体Aβ、但同时对于Aβ-寡聚体和/或原纤维而言是尽可能较不特异性的作为配体的肽，开发并应用了镜像噬菌体展示，其中对单体结合存在正选择压力，对结合寡聚体和原纤维存在负选择压力。

此外，通过交替使用不同的表面材料和/或通过交替使用和不使用封闭试剂（Blocking-Reagenz），确保没有表面组合使用两次，以避免对该表面材料表现出高亲和力的配体的富集。

在本发明的范围内已经认识到，根据现有技术的镜像噬菌体展示还不利地导致结合表面试剂或封闭试剂的配体或至少产生既与表面结合也与诱饵结合的配体。

应当注意，除了这里给出的特异性单体结合剂的选择之外，用于镜像噬菌体展示的方法当然也可以用于找出特异性寡聚体结合剂，或者甚至用于找出针对在蛋白质错误折叠病的情况下出现的其它物类的配体。

通过根据本发明的选择方法，尤其识别具有这些所需性能中一种或多种的D-肽。

所述性能尤其是对Aβ单体的结合特异性、Aβ-原纤维形成的抑制、Aβ-细胞毒性的抑制、Aβ-寡聚体的消除、Aβ-寡聚体生成无毒的非淀粉样蛋白物类的转化。

通过优化具有与聚集的Aβ1-42-物类（Aβ1-42寡聚体、原纤维和高分子量聚集体）竞争的镜像噬菌体展示，确定例如特异性结合A-β-单体的配体或肽。如果使用A-β-寡聚体作为诱饵，则可以用与A-β单体的竞争来确定用于A-β-寡聚体的特异性配体。

在镜像噬菌体展示中，相对于天然存在的L-对映体靶分子（例如Aβ1-42）的精确镜像（D-对映体），例如选择呈现在M13噬菌体的gp3蛋白上并在其基因组中编码的随机化肽序列的重组库。

该肽序列有利地呈现在M13噬菌体的gp3蛋白的N端，并以在其基因组中编码的形式存在。

也称为基因产物3的gp3分子是一种位于噬菌体外壳中并且对于与宿主细胞接触而言必需的蛋白。

所选噬菌体的p3基因的DNA序列包含关于gp3分子上相应的肽序列的遗传信息，并且可以测序。测序后，可以将该基因组序列转录成氨基酸序列，并合成为D-对映体肽，其与靶分子(例如Aβ1-42)的生理性L-对映体形式结合。

可以进行所谓的淘选轮（panning-Runden），例如六轮。在此，使噬菌体库与经固定的靶分子（也称为诱饵）接触，并从其它不结合的噬菌体的十亿倍的背景中分离出结合的噬菌体。

例如，减少优选结合Aβ1-42的寡聚体或原纤维物类的噬菌体的量，这通过例如自第二轮淘选轮起添加恰恰这些物类作为反选择剂（Gegenselektant）或竞争剂。可以以这种方式从噬菌体池中除去对Aβ1-42-寡聚体和-原纤维表现出增加的亲和力的噬菌体，由此使例如Aβ1-42单体特异性噬菌体富集。当然，可以以类似的方式调整该方法，以确定特异性结合A-β-寡聚体的配体和肽。

为了减少与塑料、BSA或链霉亲和素亲和的噬菌体的富集，根据本发明，此外在优选所有淘选轮中使用经不同处理的表面，并使用进一步的具有例如生物素、高亲和力的链霉亲和素结合剂的竞争步骤。在相继的选择轮中逐渐增加选择压力。为此，在生物素化的靶分子（例如单体D-对映体Aβ1-42）的浓度保持稳定期间，自第二轮选择轮起连续给予较高浓度的充当反选择剂且非生物素化的竞争剂，例如D-对映体Aβ1-42-寡聚体和Aβ1-42-原纤维）。

此外，在镜像噬菌体展示的每一轮中提供不同的基质表面。这可例如通过不同的塑料种类，例如聚苯乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯来实现。

示例性地，可在第1轮中的BSA封闭的聚苯乙烯表面、第2轮中的聚丙烯表面、第3轮中的BSA封闭的聚碳酸酯表面、第轮中的聚苯乙烯表面、在第5轮中的BSA封闭的聚丙烯表面以及第6轮中的聚碳酸酯表面之间更替。

封闭步骤可在靶肽固定之前并且例如仅在第1、3和5轮中，任选在其它轮中用例如在TBST中的1％BSA在室温下进行1小时。

不同基质之间的更替和表面的交替的封闭和不封闭相对于表面而言提高了对靶分子或诱饵的特异性。此外，除了与密切相关的竞争剂竞争以外，非特异性结合塑料表面或BSA（封闭步骤）的配体也减少。

使竞争剂和靶分子或诱饵同时与库接触。因此，所述方法的特征在于以下步骤：

a)提供固定在基质上的诱饵；

b)使充当诱饵的固定的分子与含有分子库的溶液接触；

c)使被所述分子占据的固定的诱饵与至少一种竞争剂接触作为特异性洗涤步骤；

d)将在被所述分子占据的固定的诱饵与竞争剂接触之后继续结合在诱饵上的分子分离并增殖；

e)重复所述步骤，其中在每次重复时使用不同的基质，

f)识别在重复后保留在诱饵上的分子的结构。

例如通过更替基质类型和/或借助于试剂使其封闭或不封闭来利用不同的基质。

使用选自蛋白质、肽、RNA、DNA、m-RNA和化学化合物的分子作为诱饵。尤其使用不同的A-β-物类作为诱饵。

作为在其上固定诱饵的表面，使用例如选自微量滴定板、磁颗粒、琼脂糖(Agarose)微球或琼脂糖(凝胶)(Sepharose)微球的组件。

作为竞争剂，优选使用具有至少一种选自肽、蛋白质、RNA、DNA和m-RNA的组分的混合物。在此，竞争剂是与诱饵类似的分子，其结合位点显示出与固定的诱饵的结合位点的相似性。作为竞争剂，尤其使用不用作诱饵的A-Beta-物类。

库和竞争剂优选同时与固定的诱饵接触。

该方法的特征可在于，在特异性洗涤步骤时，用含有竞争剂的溶液冲洗固定相。

该方法的特征可在于，在特异性洗涤步骤时，具有分子库的溶液被含有竞争剂的溶液替换。

该方法的特征可在于，在特异性洗涤步骤时，将具有竞争剂的溶液添加到固定相。

特异性洗涤步骤和分子库的添加几乎同时进行。如果噬菌体原则上具有对作为诱饵和竞争剂的A-β-单体和-寡聚体的亲和力，则存在同时地而非先后相继地结合在两个靶上的可能性。由此有利地造成仅使甚至在诱饵和竞争剂同时暴露的情况下优先与诱饵结合的配体富集。

每个选择轮优选提高竞争剂的浓度。

因此，根据a）项的诱饵是待选择的生物分子应结合的化合物。根据现有技术已知的方法，将其固定在第一表面上。示例性地而非限制性地可提及蛋白质、肽、RNA或DNA分子，特别是A-β-单体作为诱饵。微量滴定板、磁颗粒、琼脂糖微球或琼脂糖(凝胶)微球可用作可能的表面。

在第二步骤b）中，使固定的诱饵与分子——特别是生物分子——的随机化库接触。这些生物分子竞争以与诱饵结合。随机化库是非常多的，例如10¹²，但也是10⁴或仅100种不同分子以混合形式的混合物。这样的库可以例如在每种情况中由肽、蛋白质、DNA、RNA或m-RNA组成，其以结合在某些载体上的形式存在，并且其可以结合在诱饵上。作为载体，考虑例如噬菌体、多核糖体或细菌表面。所述库可以由人工或由天然分离的成分或由两者的混合物组成。本发明意义上的人工被理解为是指例如由寡核苷酸合成所制成的化合物。

根据本发明，在步骤c）中，使被生物分子占据的固定的诱饵与竞争剂接触。为此，在步骤c）中进行特异性洗涤步骤，其中将竞争剂加入到溶液中，或者用含有竞争剂的溶液冲洗固定相，或者使具有生物分子库的溶液优选反复地被含有竞争剂的溶液替换。竞争剂是与诱饵类似的分子，其结合位点显示出与固定的诱饵的结合位点的相似性。存在于溶液中的竞争剂在洗涤步骤中竞争已结合在固定的诱饵上的库分子。因此，将与对于固定的诱饵而言真正“最佳的”的库成员相似但与游离竞争剂之一更好结合的那些库分子再次从固定的诱饵中取走。在此，待结合的库分子的脱离反应（Ablösungsreaktion）的速度主要由各分子不同的解离常数（k_off-值）决定。具有小的k_off-值的那些以统计学来看保持结合在固定的诱饵上最久，并因此具有较低的能与所提供的竞争剂分子结合的统计学概率。这种库分子最终显示出与诱饵的特异性或选择性结合。示例性地而非限制性地可提及蛋白质、肽、DNA或RNA作为竞争剂。含有竞争剂的液体优选是水性的并且可以含有pH缓冲液。用于特异性洗涤步骤的溶液的其它任选组分是盐、洗涤剂或还原剂。

步骤d）中的分离例如通过从诱饵中洗脱噬菌体来进行，以便能够使它们增殖。该噬菌体含有所述肽。

在特异性洗涤步骤之后根据步骤d）使仍然保留在诱饵上的库分子随后增殖的过程中，将结合的生物分子与诱饵分离，并根据已知方法增殖。为此，例如，可以将根据步骤a）至c）获得的噬菌体颗粒引入到细胞中并增殖。所述分离可以例如通过改变pH值、加热或改变，特别是增加盐浓度来实现。

在步骤e）中提高在步骤a）之后被供给给诱饵的溶液中的所选生物分子的浓度。优选地，进行3至6个包含步骤a）至e）的选择轮。然而，也可以进行1-> 10或1-> 20次重复。随着增加的循环数在步骤c）中在此优选提高的竞争剂浓度也导致改进的选择。竞争剂的浓度起初可以为例如1 nmol/l。竞争剂的浓度变化可以逐步地翻倍至变成十倍或更多。典型的最终浓度为1μmol/l。

在本发明的意义中，与诱饵特异性结合的配体是对特定诱饵具有增加的选择性的分子，也就是说，相较于与诱饵类似的诱饵分子而言与特定诱饵更特异性结合但并非一定更强结合。优选地，所述配体仅与特定诱饵结合。在竞赛性（konkurrierender）或竞争性分子的存在下，通过所述方法选择的配体或肽应优选与靶分子结合。

除了A-β_1-42-单体作为诱饵以外，一个特别相关的镜像噬菌体展示设定了在步骤a）中的N-端生物素化的D-对映体A-β_1-42-单体、在步骤b）中的重组噬菌体库以及在步骤c）中的D-对映体A-β_1-42-寡聚体和/或D-对映体A-β_1-42-原纤维作为竞争剂。作为分离步骤的洗脱例如经由作为分离步骤的pH值降低和作为增殖的噬菌体扩增来实现。

以此方式，开发了针对A-β单体特异性结合的21种肽（Mosd 1-21）。

a) "Mosd1 "(游离N-端, 酰胺化的C-端): YSYLTSYHMVWR

b) "Mosd2" (游离N-端, 酰胺化的C-端): HTWTTYDYVWRL

c) "Mosd3" (游离N-端, 酰胺化的C-端): GTMLKFSGMNLT

d) "Mosd4" (游离N-端, 酰胺化的C-端): HNWFYWTTEPYD

e) "Mosd5" (游离N-端, 酰胺化的C-端): HNWSWEWWYNPN

f) "Mosd6" (游离N-端, 酰胺化的C-端): STLHFYTAFLNK

g) "Mosd7" (游离N-端, 酰胺化的C-端): FSHSHHTWFTWN

h) "Mosd8" (游离N-端, 酰胺化的C-端): HFWSWTSLSMTR

i) "Mosd9" (游离N-端, 酰胺化的C-端): HLSWYWEKYLTS

j) "Mosd10" (游离N-端, 酰胺化的C-端): HTWTHWFSWNVP

k) "Mosd11" (游离N-端, 酰胺化的C-端): LSMNITTVHRWH

l) "Mosd12" (游离N-端, 酰胺化的C-端): VHWDFRQWWQQS

m) "Mosd13" (游离N-端, 酰胺化的C-端): YSFHFEMNMGNY

n) "Mosd14" (游离N-端, 酰胺化的C-端): EHWDFGQWWQQS

o) "Mosd15" (游离N-端, 酰胺化的C-端): GQWDFRQWWQPC

p) "Mosd16" (游离N-端, 酰胺化的C-端): DWSSRVYRDPQT

q) "Mosd17" (游离N-端, 酰胺化的C-端): ERSQWGHRDPQS

r) "Mosd18" (游离N-端, 酰胺化的C-端): DRSKGDHRITQM

s) "Mosd19" (游离N-端, 酰胺化的C-端): DLRFSSLWKLSH

t) "Mosd20" (游离N-端, 酰胺化的C-端): VHWDFRQWWQPS

u) "Mosd21" (游离N-端, 酰胺化的C-端): FSWSMVMPWPTA

根据本发明的这些肽作为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：21来要求保护，并且也可以作为双肽和/或以环化形式来使用。

根据SEQ ID NO：1-21的肽可以通过与A-β-单体的特异性结合用作抗阿尔茨海默氏痴呆症的可能的药物。

A-β-单体被根据本发明的肽，特别是SEQ ID NO：1的肽高度特异性结合，由此使寡聚体分解。

在本发明范围内已经认识到，现有的结合Aβ-单体的物质不利地旨在减少Aβ-单体。已经认识到，目的必须是开发淀粉样蛋白-β-单体的特异性结合剂，其不降低单体的浓度，而是使单体稳定，以保留其保护性能。

根据本发明的肽通过降低淀粉样蛋白-β-寡聚体浓度并同时使淀粉样蛋白-β-单体稳定化实现了所述目的。对于A-β-单体的特异性可以在ELISA中证实。

一方面，所提及的特异性结合A-β-单体的根据本发明的配体（或肽）阻止了A-β-寡聚体的形成，而不同时导致单体浓度的降低。另一方面，通过用根据本发明的使单体稳定化的活性物质或肽处理而将已经形成的A-β-寡聚体从不同聚集体物类的动态平衡中除去。由此有利地导致寡聚体降解成单体。

尤其是防止重新形成寡聚体和除去已经形成的寡聚体，而且主要生成单体以及生成大的、非原纤维且无毒的聚集体。

所述目的还通过包含根据SEQ ID NO：1-21和/或其同源体、片段和部分的氨基酸序列的肽来实现。该肽同样有利地结合淀粉样蛋白-β-单体。

在本发明的一个方案中，使用这样的肽，其结合最多500μM，优选250、100、50μM，特别优选25、10、6μM，特别是4、2、1μM或亚μM的A-β-单体。

该目的还特别地通过由上述的根据本发明的肽的两种或更多种组成的多聚体和/或其同源物或片段和部分来实现。二聚体由根据本发明的肽的两个构成，这两个肽各自与淀粉样蛋白-β-物类结合。在此可以使用相同的（例如，SEQ ID NO：1的两个肽）或两个不同的根据本发明的肽（例如来自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的肽的二聚体）。多聚体还具有更多的根据本发明的肽。

由本身结合A-β-单体的根据本发明的肽根据本发明构成的多聚体在其对A-β-单体的特异性方面有利地表现出协同效果。换句话说：根据本发明的多聚体优于构成它们的单肽。本发明意义上的协同效果是对于A-β-单体显示出更高特异性的效果。

在本发明的另一个特别有利的实施方案中，多聚体，特别是二聚体在动物模型实验（体外或体内）中有利地比单个肽单元更有效。

在本发明的一个方案中使用这样的肽或多聚体，它们以最高500 µM，优选250、100、50 µM，特别优选25、10、1 µM的解离常数（K_D-值），特别优选以最高500 nM、250、100、50，特别优选25、10、1 nM、500pM、100、50、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1 pM至亚pM的解离常数（K_D-值）与A-β-单体结合，其中可采用每个中间值。

在本发明的一个实施方案中，肽的结合亲和力由解离常数（K_D-值）来定义。

在本发明的一个有利的实施方案中，根据本发明的肽的解离常数（K_D-值）有利地降低。与此相关联的是根据本发明的肽的改善的性能，如更高的结合亲和力和降解和/或阻止形成有毒的淀粉样蛋白-β-寡聚体的更高效率。这尤其不仅涉及在A-β-单体的高亲和力位点处的较低的K_D-值。

片段和部分有利地表现出与根据本发明的肽类似或相同的效果。

在本发明的一个方案中，根据本发明的SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO:3、SEQ ID 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO: 14、SEQ IDNO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和/或SEQ ID NO: 21及其同源体、片段和部分的肽基本上，优选至少50%、60%、75%、80%，特别优选85%、90%、95%，特别是96%、97%、98%、99%、100%由D-对映体氨基酸构成。

本发明的意义上的多聚体由本身与淀粉样蛋白-β-单体结合的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个肽形成。

在本发明的一个实施方案中，根据SEQ ID NO: 1-21的肽在游离的C端处具有酸酰胺基。此时，根据本发明的肽，例如根据SEQ ID NO：1-21的肽在位置12处在游离的C端处酰胺化。由其构成的二聚体在位置24处在游离的C端处酰胺化等等。

在本发明的另一个实施方案中，根据SEQ ID NO: 1-21的肽在游离的C端处与游离的N端彼此共价结合，并因此相应地环化存在。通过环闭合也有利地导致在游离的C端处不再有羧基。

根据本发明的肽有利地具有这样的氨基酸序列，在该序列中，线性分子的环化例如通过第一个氨基酸与最后一个氨基酸的共价结合，例如通过缩合反应进行。当然，存在着另外的环化可能性，例如通过将其它氨基酸彼此连接。仅示例性地可提及第二个氨基酸与最后一个氨基酸的连接。同样可以想到的是每种可能的其它连接。

在将肽的第一个和最后一个氨基酸彼此连接的情况中，有利地造成在肽链（氨基酸序列）中没有开放末端。

该措施还造成，在环化后产生相同的不再可区分的氨基酸顺序的具有线性氨基酸序列的所有肽在这个意义上是相同的。

实例：已知的肽D3的线性氨基酸序列为rprtrlhthrnr。通过N端的氨基和C-端的羧基之间的酰胺结合而连接的相应的环化肽“cD3”不再能与下述环化肽区分开：prtrlhthrnrr、rtrlhthrnrrp、trlhthrnrrpr、rlhthrnrrprt、lhthrnrrprtr、hthrnrrprtrl、thrnrrprtrlh、hrnrrprtrlht、rnrrprtrlhth、nrrprtrlhthr或rrprtrlhthrn。此外，由这些序列中的每一个也可衍生出cD3。

此外，相对于一种，优选甚至每一种起结合作用的线性肽（其可衍生出环化的或另外修饰的根据本发明的肽），产生根据本发明要求保护的更高特异性、任选亲和力和效率的效果。

此外，环化肽的制备是现有技术，并且可以例如根据DE 102005049537 A1中所述的方法进行。

有利地，经由肽的第一个和最后一个氨基酸的环化导致不再存在肽链的“开放”端，所述“开放”端通常是细胞、动物或人体中例如通过氨肽酶和羧肽酶用于肽的降解活动（Aktivitäten）的进攻位点。

借助根据本发明的环化肽，例如根据SEQ ID NO：1的Mosd1，另外有利地作为次要效果造成根据本发明的环化肽或多聚体在一些情况下不易降解，尽管该效果不是决定性的。此外，如已经显示的，也仅适用于头尾-或尾头-环化的情况，其中将线性肽的两端相应地彼此连接。

在本发明的另一个实施方案中，所述多聚体由相同的肽例如Mosd1构成，或由2、3、4、5、6、7、8、9、10个各种不同的上述根据SEQ ID NO：1-21的肽的组合构成，作为所谓的组合多聚体。所述肽也可以是部分相同的。组合多聚体中相同肽的数目是可自由选择的。

例如可以通过化学合成或肽合成来制备多聚体。

在本发明的一个实施方案中，根据本发明的肽彼此共价连接。在另一个实施方案中，所述单体彼此非共价结合。

在本发明的意义上存在肽单元的共价结合或连接，如果该肽是头头、尾尾或头尾彼此线性连接的，在其间具有或不具有嵌入的连接体（Linker）或连接基团。

如果所述肽例如经由生物素和链霉亲和素，特别是链霉亲和素四聚体彼此连接，则存在本发明意义上的非共价连接。

在本发明的一个方案中，所述肽可以是彼此线性连接的，特别是如上所述。在另一个方案中，所述肽彼此支化连接成根据本发明的多聚体。

根据本发明，支化多聚体可以是树状物，在该树状物中单体彼此共价或非共价连接。

或者，所述肽还可以与平台分子（Plattform-Molekül）（例如PEG或糖）连接，从而形成支化多聚体。

或者，这些选项的组合也是可行的。

根据本发明的肽和由其构成的多聚体在下文中被称作根据本发明的肽。

在本发明的一个方案中，涉及具有下述氨基酸序列的肽：SEQ ID NO: 1、SEQ IDNO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 13、SEQ IDNO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和/或SEQ ID NO: 21及其具有至少50％的同一性的同源体、片段和部分。

在本发明的意义上，“同源序列”或“同源体”表示一个氨基酸序列具有与所述单体的上述氨基酸序列之一的至少50、55、60、65、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100 %的同一性。替代术语“同一性”，在本说明书中，同义使用术语“同源的”或“同源性”。两个核酸序列或多肽序列之间的同一性借助基于Smith, T.F.和Waterman, M.S (Adv. Appl. Math. 2：482-489(1981))的算法的BESTFIT程序通过对比进行计算，其中设定如下的氨基酸参数：空位产生罚分（Gap creation penalty）：8和空位扩展罚分（Gap extension penalty）：2；并设定如下的核酸参数：空位产生罚分：50和空位扩展罚分：3。在两个核酸序列或多肽序列之间的同一性优选通过核酸序列/多肽序列在各自整个序列长度上的同一性来定义，如它们借助基于Needleman, S.B.和Wunsch, C.D. (J. Mol. Biol. 48：443-453)的算法的GAP程序通过对比进行计算，其中设定如下的氨基酸参数：空位产生罚分：8和空位扩展罚分：2；并设定如下的核酸参数：空位产生罚分：50和空位扩展罚分：3。

如果两个氨基酸序列具有同样的氨基酸序列，则在本发明的意义中，它们是同一的。

在一个方案中，可将同源体理解为是指上述单体的相应的逆反(retro-invers)序列。根据本发明，术语“逆反序列”是指由以对映体形式的氨基酸组成(反：α-C原子的手性相反) 并且此外序列顺序相对于原本的氨基酸序列颠倒 (逆＝逆向)的氨基酸序列。

在另一个方案中，根据本发明的肽与淀粉样蛋白-β-肽的部分结合。

在另一个方案中，根据本发明的肽具有与所示序列最多三个氨基酸不同的序列。

此外，还使用包含上述序列的序列作为肽。

在另一个方案中，所述肽具有上述序列的片段或具有上述序列的同源序列。

根据本发明，其涉及用于医药中，优选用于治疗阿尔茨海默氏痴呆症的肽。

在本发明的一个实施方式中，所述肽基本上由D-氨基酸组成。

在本发明的意义中，术语“基本上由D-对映体氨基酸组成”表示，根据本发明使用的单体至少50%、55%、60%、65%、70%，优选75％、80％，特别优选85％、90％、95％，特别是96％、97％、98％、99％、100％由D-对映体氨基酸构成。

在另一个方案中涉及用于抑制淀粉样蛋白-β-寡聚体的原纤维形成的根据本发明的肽。根据本发明的肽使A-β-寡聚体或由其形成的多聚体以及原纤维去毒，其中其不与它们结合，而是与A-β-单体结合，并通过平衡导致A-β-寡聚体减少并因此将其转变为无毒的化合物。因此，本发明的主题也是用于使A-β-寡聚体、由其形成的聚集体或原纤维去毒的方法。

在一个实施方式中，本发明的主题也是与其它物质连接的根据本发明的肽。

在本发明的意义中，所述连接是化学结合，如Römpp Chemie Lexikon，第9版，第1卷，第650页及其以后几页，Georg Thieme Verlag Stuttgart中定义的，优选是主价键（Hauptvalenz）结合，特别是共价结合。

在一个方案中，所述物质是根据2012年9月实施的药物法§2或§4(19)定义的药物或活性物质。在一个替代方案中，活性物质是治疗活性物质，其用作医药有效物质。优选使用消炎剂。

在另一个方案中，所述物质是增强所述肽的效果的化合物。

在一个替代方案中，这种化合物是氨基吡唑和/或氨基吡唑衍生物。在本发明意义中的氨基吡唑衍生物是3-氨基吡唑-5-羧酸或3-硝基吡唑-5-羧酸以及杂环的CH-基团被-CR-或-N-或-O-或-S-替换的所有衍生物，以及所有由其衍生的肽二聚体、三聚体或四聚体，优选氨基吡唑三聚体。

在另一个替代方案中涉及改善所述肽的溶解性和/或通过血脑屏障的化合物。

在一个替代方案中，根据本发明，所述肽具有上述方案、实施方式和/或替代方案的至少两个或更多个特征的每种任意组合。

在本发明的范围内，还已经认识到，相较于游离C端（即C端的羧基）未经修饰并且相应地携带负电荷的起结合作用的线性肽，经酰胺化和/或环化的肽以更高的亲和力与Aβ-单体结合。这意味着，在经修饰的肽的情况中，K_D-值低于其中游离C端（即C端的羧基）未经修饰且相应地携带负电荷的线性肽的情况。

因此，在本发明的另一个优选的实施方案中，与在C端具有负电荷但其余相同的氨基酸序列的线性肽相比，根据本发明修饰的在C端没有负电荷的肽的结合亲和力提高了1%、2、3、4、5、6、7、8、9，特别是10%、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，特别是100%、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199，特别是200 %、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299，特别是300%、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399，特别是400%、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499，有利地甚至500%、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599，特别有利地600%、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699，特别有利地700%、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799，同样特别有利地800%、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899，同样特别有利地900%、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、976、977、978、979、980、981、982、983、984、985、986、987、988、989、990、991、992、993、994、995、996、997、998、999，或者甚至1000 %，或者甚至10000%，或者甚至最高100000%或1000000%，其中可以采用每个中间值。这尤其涉及对A-β-单体的高亲和力位点的提高的亲和力。

这通过相应降低的K_D-值来表明。与在游离C端具有负电荷的起结合作用的线性肽相比，作为经修饰的，特别是环化的肽对淀粉样蛋白-β-单体的结合亲和力的量度的K_D-值降低了1%、2、3、4、5、6、7、8、9，特别是10%、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99，特别是99.1、99.2、99.3、99.4、99.5%、99.6、99.7、99.8、99.9直至99.99或甚至99.999%，其中可以采用每个中间值。

这些较低的K_D-值特别有利地但不仅涉及对A-β-物类-单体的高亲和力位点。

因此，经修饰的肽可以比在游离C端具有负电荷的起结合作用的线性肽还更有效地用作用于诊断目的的探针，特别是比其具有相同氨基酸序列的线性肽对应物（Pendant）更有效。

然而，它们尤其也可以比在游离C端具有负电荷的线性结合肽更有效地用作治疗剂，特别是比其具有相同氨基酸序列的线性肽对应物更有效。

直接比较经修饰的肽与在C端带有负电荷的肽，根据本发明的肽在亲和力和效率方面获得更好的结果。

在本发明的范围内，此外已经认识到，与在游离C端具有负电荷的肽相比，但特别是与其具有相同氨基酸序列的肽对应物相比，该经修饰的肽另外还以更高的有效性或功效阻止形成特别有毒的淀粉样-β-寡聚体或导致其破坏和/或去毒化（Endtoxifizierung）。这种效率尤其提高了1%、2、3、4、5、6、7、8、9，特别是10%、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.9，特别有利地甚至提高了100%。

在最简单的情况中，将具有不同A-β-构象异构体的样品以实验方式（testweise）例如分级。在每个级分中，相应于分级步骤富集不同的构象异构体，如单体、寡聚体、原纤维或更高级的聚集体，然后可以精确确定。

术语“精确确定”包括在分级时通过已知类型和行为的分子进行的校准步骤。分级后，在每个级分中仅存在一种特定类型的A-β构象异构体，例如单体、寡聚体或原纤维等。

例如，在密度梯度离心作为分级步骤时，根据其s值或沉降系数分离构象异构体。不同大小的分子可以具有相同的流体动力学半径，但尽管如此具有不同的s值，并因此也被分离。通过用已知s值的分子校准，根据其s值精确确定借助密度梯度离心获得的A-β-构象异构体。

此外，所获得的级分用和不用活性物质处理，并例如通过RP-HPLC来测定。以这种方式，可以确定活性物质的效率。

下面介绍另一种方法。可使用所谓的QIAD（quantitative determination ofinterference with Aβ aggregate size distribution（定量测定Aβ聚集体尺寸分布的干扰））测试用于活性物质的定量分析。该用于定量分析活性物质对样品中淀粉样肽和/或蛋白质的粒度分布的影响的方法包括以下步骤。首先，在受控条件下使A-β聚集，从而各形成不同的A-β-聚集体。如此选择条件，以至于形成特别多的、小的、特别是细胞毒性的A-β-寡聚体。接下来，将待分析的物质，例如根据本发明的经修饰的肽之一加入到样品中。活性物质改变了样品中的粒度分布。定量确定该变化。该变化是对于特定粒度的特定的有毒物类的减少或者甚至完全消除的量度。通过QIAD方法测量特定粒度的A-β-聚集体的增加或减少。一些具有特定大小的A-β-聚集体最初存在于样品中，但它们在活性物质的影响下减少或者甚至被完全消除。其它粒度在该活性物质的影响下增加或保持恒定。将由A-β形成的颗粒优选根据其颗粒的流体动力学半径彼此分离。以此方式有利地造成，从样品中获得多个级分。在这些级分中，这些颗粒富集在具有特定聚集体大小的淀粉样肽和/或蛋白质上。所述颗粒的这种分离可以借助密度梯度离心进行。将级分在空间上彼此分离，例如通过移液。最后，在分级后进行的反相（RP）-HPLC期间通过A-β-物类的完全变性来确定各级分中的A-β浓度。聚集体的变性可以例如用30％乙腈和0.1％三氟乙酸在80℃的柱温下完全进行，并根据疏水性在C8柱上分离。借助在215nm下的UV吸收检测洗脱的A-β。峰面积积分可借助Agilent Chemstation软件进行。用先前进行的校准对所产生的值的结算（Verrechnung）可以计算各级分中存在的A-β的浓度。对每个级分可以计算多个，例如六个彼此独立进行的实验的平均值以及标准偏差。HPLC分析的优点在于，可以独立于聚集态和溶剂而非常敏感地检测（例如约20nM或1.8 ng Aβ1-42），并可靠地定量。该方法的决定性优点在于密度梯度离心和反相HPLC的偶联，这使得A-β-寡聚体的可靠定量也成为可能。

淀粉样蛋白-β-物类和特别是淀粉样蛋白-β-寡聚体的消除（或形成）的提高的效率的根据本发明的效果可以用这些方法之一进行，但并非仅仅限于这些方法。

在本发明的一个特别优选的实施方案中，也在体外和/或体内产生对A-β-单体增加的特异性的效果和同时与此相关联的A-β-寡聚体（或形成）的消除、去毒的效率。

本发明此外还涉及包含根据本发明的肽的组合物，其尤其用于治疗阿尔茨海默病。

本发明的主题还是包含根据本发明的肽的组合物，其特别是用于减少存在的有毒A-β-寡聚体和防止形成有毒A-β-寡聚体。

根据本发明的“组合物”可以例如是疫苗、药物（例如，以片剂形式）、注射液、食品、食品补充剂，其在根据专业知识制备的制剂中含有根据本发明的肽。

本发明此外还涉及含有根据本发明的配体或肽的试剂盒。

在这种试剂盒中，根据本发明的肽可被包装在容器中，任选地与缓冲液或溶液一起或在缓冲液或溶液中。试剂盒的所有组分可以包装在同一个容器中或彼此分开地包装。此外，该试剂盒可包含其使用说明书。这种试剂盒可包含例如在具有瓶塞和/或隔膜的注射瓶中的根据本发明的肽。此外，其中还可包含例如一次性注射器。

根据本发明的肽可充当用于结合A-β-单体的探针。这种分子探针包含根据本发明的肽或多聚体和任选的染料、荧光染料、放射性同位素、(PET等)、钆(MRI)，以及适用于探针的成像并可例如静脉内注射给患者的替代性物质。在通过血脑屏障后，所述探针可与A-β-单体和/或斑块结合。这样标记的A-β-单体和/或斑块可借助成像方法例如SPECT、PET、CT、MRT、质子-MR-波谱法等可见。

此外，本发明也涉及根据本发明的肽用于防止淀粉样蛋白-β-寡聚体和/或淀粉样蛋白-β-肽-聚集体和/或淀粉样蛋白-β-原纤维的用途。

根据本发明的肽还用于使有毒的淀粉样蛋白-β-寡聚体和/或聚集体去毒。特别用于结合淀粉样蛋白-β-单体并通过移动平衡而形成非晶的无毒聚集体。

这些聚集体可以由结合的单体构成，并且使平衡移动，更确切地说主要远离寡聚体。可以形成非晶的无毒聚集体，从而实现有毒物类的减少。其它肽在ELISA实验中通过单体特异性使A-β单体稳定，如图2中所示。

已经认识到，如果A-β-寡聚体已经存在，则治疗的目的必须是通过对A-β-单体具有尽可能高的特异性的物质来处理它们。事实上，相较于A-β-寡聚体，对A-β-单体的特异性可能根本不足够大，并且相应的比例在每种情况下均大于1。

在本发明的范围内已经认识到，作为A-β-寡聚体的基础单元的A-β-单体在人体内不断形成，并且估计其本身是无毒的。甚至存在这样的可能性，单体具有有益的功能。取决于它们的浓度，A-β-单体可偶然地簇集到一起。该浓度取决于它们在体内的形成速率和降解速率。如果A-β-单体的浓度随着年龄的增长在体内增加，那么单体自发簇集成A-β-寡聚体的可能性就越来越大。如此产生的A-β-寡聚体可类似于朊病毒那样地增殖并最终导致阿尔茨海默病。

此外已经认识到，事实上，在预防和治疗或甚至治愈阿尔茨海默氏痴呆症之间的一个重要区别在于，通过阻止第一个A-β-寡聚体的形成可能已经可以实现预防。为此，一些少量的高特异性的A-β-单体配体是足够的，所述配体对A-β-寡聚体是同时很少亲和力和选择性的。

由许多单体形成A-β-寡聚体是一个高阶反应，因此以高乘方的方式依赖于A-β-单体浓度。因此，活性A-β-单体浓度的少量的降低就导致防止形成第一个A-β-寡聚体。迄今处于开发的更确切来说预防性的治疗构思和物质可能基于这种机理。

然而，在阿尔茨海默氏痴呆症的治疗中，应从一个完全改变的情况出发。在这里，存在A-β-寡聚体或可能甚至已经较大的多聚体或原纤维，其通过类似朊病毒的机制增殖。然而，该增殖是低阶反应，并且几乎不依赖于A-β单体浓度。

因此，如果已经产生了A-β-寡聚体，则治疗的目标必须是，通过特别有效地消除它们和/或特别有效地防止形成或使它们去毒的物质来处理它们。

通过提供根据本发明的肽满足了在治疗阿尔茨海默氏痴呆症方面的要求。根据本发明的肽在治疗的意义上以相应低的解离常数特异性结合淀粉样蛋白-β-单体。因此，另一主题是根据本发明的肽作为阿尔茨海默氏痴呆症的治疗剂的用途。

根据本发明的肽特别好地结合可溶性A-β-单体的A-β。

借助硫黄素T实验可以表明，根据本发明的肽，特别是具有SEQ ID NO: 1-21的肽，特别是根据SEQ ID NO: 1的肽非常有效地抑制了A-β-肽的原纤维形成。

另一主题是根据本发明的肽在处理（体外，离体）血液、血液制品和/或器官的方法中的用途，其特征在于，将所述血液、血液制品和/或器官从人体或动物体中取出，并除去A-(淀粉样蛋白)-β-寡聚体和/或使其去毒。

肽的特异性由单噬菌体-ELISA中对靶分子或诱饵（例如A-β-单体）的吸收值与对竞争剂（例如A-β-寡聚体和-原纤维）的标准化（normiert）的吸收值的百分比差异产生。

该吸收值表示噬菌体单克隆对各自的固定的A-β-物类的亲和力。该特异性不取决于亲和力的强度，而仅取决于物类之间亲和力的差异。对靶分子（例如Aβ_1-42-单体）的信号强度与对所谓的竞争剂（Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维）的信号强度的百分比差异越大，各自的噬菌体结合靶分子的特异性越高。术语“竞争剂”和“靶分子”或“诱饵”定义为如下所示。

如果标准化的吸收值（对于靶分子，例如单体Aβ_1-42 = 100%）的百分比差异为至少40％、45％，更好50％，优选好于70％，特别是好于80％或90％，特别优选100％，其中可采用所有中间值，则将肽视为在上述特异性概念意义上的特异性。

交替的基质首先提高对靶分子以及“同族物（Verwandte）”的一般特异性。借助交替的基质及其交替的封闭和不封闭，相对于起非特异性结合作用的噬菌体（与基质(塑料表面)、链霉亲和素或BSA(封闭试剂)结合），提高对靶分子的特异性。

通过交替使用不同的基质，例如在第X轮中结合了基质A的噬菌体在下一轮X + 1中不再能够结合其优选的结合配偶体基质A，因为其已经被基质B取代，由此失去了结合基质A的噬菌体。

除了这种第一粗略特异性而外，借助使用竞争剂（其例如可以是靶分子的多聚体）提高对靶分子的明确定义的形式（例如单体）的特异性。

以此方式，不仅可以明显降低先前经常发生的与靶分子和基质的非特异性结合或者与基质的优选结合，而且可以提高对靶分子的明确定义结构的单体变体的特异性。

因此，根据本发明的方法有利地特别适用于识别相对于作为诱饵的A-β-单体或A-β-寡聚体的配体，在每种情况下其它物类作为竞争者。

实例：对于用于ELISA实验的例如不同的Aβ_1-42-物类，几乎不可能确保相同的固定效力，因此应在每个96孔微量滴定板上使用固定对照。这可以是：代替扩增的单噬菌体克隆，可以将(Aβ_1-42-)特异性抗体（例如6E10）加入到各自的对照反应槽（孔）中。测量的吸收信号——其强度取决于抗体与所提供的具有或不具有固定的Aβ_1-42-物类的表面的结合——可以在实验之后用作固定效力的量度。作为进一步的对照，可以检验噬菌体特异性抗体与固定的分子或反应槽表面的可能的交叉反应。通常将噬菌体特异性抗体加入到测定单噬菌体以定量其与各自加入的靶结构（例如表面、Aβ_1-42-单体、Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维）的结合的批料（Ansatz）中。然而，为此必须知道噬菌体特异性抗体与其它可能的靶，例如与噬菌体本身的上述潜在靶结构的非特异性结合有多强，以将这些所谓的交叉反应任选包括在所获得的数据的解读中。

因此，应采用用于将所获得的值标准化的方法。可以从单噬菌体ELISA中的单噬菌体克隆的所有吸收值中减去作为背景的在交叉反应中测试的噬菌体抗体的值。这对应于先前固定的物类进行。为此，可以从来自具有固定的Aβ_1-42-寡聚体的反应槽的单噬菌体克隆的信号值中减去噬菌体抗体的信号值（来自具有固定的Aβ_1-42-寡聚体的反应槽）。然后对Aβ_1-42-单体进行类似操作。以此方式，可以首先从单噬菌体克隆的信号中计算出噬菌体抗体的可能的背景信号。随后，借助用Aβ_1-42-特异性6E10抗体进行的对照测量所使用的不同Aβ_1-42-物类的固定效力并进行比较。由此，相对于Aβ_1-42-单体，有利地造成Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的混合物的更有效的固定（也参见图1）。因此，在固定Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的反应槽中提供了更多的用于单噬菌体克隆的潜在结合配偶体，并且结果失真。因此，将得自固定Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的反应槽的6E10对照值基于在固定Aβ_1-42-单体的反应槽中的Aβ_1-42-的含量标准化。由此，对于每个使用的微量滴定板产生一个特定因子，用其乘以每个单噬菌体克隆与Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维结合的值。只有这样才能等效解读结果，特别是在单噬菌体克隆的特异性的评价方面（见图2）。

实施例

在下文中，借助实施例和附图更详细地解释本发明，而并非意在由此限制本发明。

其中示出：

图1:不同Aβ_1-42-物类的固定对照。

图2:单噬菌体-ELISA。

图3:通过Mosd-肽调节Aβ_1-42-聚集体-ThT实验。

图4:通过Mosd-肽调节不同的Aβ_1-42-物类。

图5:通过Mosd1调节不同的Aβ_1-42-物类。

图6:借助RP- HPLC将通过Mosd1的不同Aβ_1-42-物类的调节定量。

图7:用和未用10 µM Mosd1温育的10 µM Aβ_1-42的TEM-照片。

图8:MTT减少实验：Mosd1对Aβ_1-42-诱导的细胞毒性的影响。

图9:Mosd1对表达APP的细胞的影响。

以A-β-单体作为诱饵为例的竞争性镜像噬菌体展示：

竞争性镜像噬菌体展示的目的是选择特异性结合Aβ_1-42-单体的肽。进行6轮所谓的淘选轮，其中淘选轮对应于噬菌体库与固定的靶分子/诱饵即Aβ_1-42-单体接触的过程。

为了减少对其它Aβ_1-42-物类（即寡聚体和原纤维）具有提高的特异性的噬菌体的数量，正是将这些物类自第二轮淘选轮起用作竞争剂。

以这种方式，可以减少对Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维具有提高的亲和力的噬菌体的数量，同时增加对单体Aβ_1-42具有提高的特异性的噬菌体的数量。

怀着进一步的目的，即减少结合塑料的噬菌体以及对封闭试剂BSA（牛血清白蛋白）具有特异性的噬菌体的富集，将靶分子固定在不同的逐轮交替的涂覆有链霉亲和素的塑料/表面上（聚苯乙烯/聚丙烯/聚碳酸酯）。

在固定靶分子之前，根据制造商说明书洗涤聚苯乙烯表面。此外，在固定靶分子之前，在室温下用150 µl 1x TBS/0.1% (v/v) 吐温-20/1% (w/v) BSA交替地逐轮进行表面的封闭和不封闭1小时。以这种方式，在6轮淘选轮期间没有来自塑料表面和封闭的组合使用多于一次（参见表X）。

进行该步骤，以减少对塑料和BSA的非特异性结合，因为例如结合了BSA的噬菌体在根据上述说明在没有BSA的情况下进行的随后淘选中没有碰到结合配偶体，因此在洗涤步骤中被除去。

在表面预处理后，将D-对映体、N-端生物素化的Aβ_1-42-单体在1×TBS中稀释至63nM的浓度，并作为靶分子固定在各自的表面上。Aβ_1-42-分子的单体状态通过尺寸排阻色谱来确保。63nM的使用浓度对应于占据每个使用表面的所有链霉亲和素结合位点的1/3，从具有最少数量的游离链霉亲和素结合位点的表面出发。将单体Aβ_1-42在1×TBS中的100μl调节至63nM的溶液施加到涂覆有链霉亲和素的表面，并在室温下温育5分钟。然后将该表面用150 µl 1x TBS洗涤三次。

接着，在第一轮淘选轮中，将90 µl 1x TBS与10μl商购可得的重组噬菌体库施加到表面上，并在室温下温育5分钟。除去上清液，并用100μl 在1x TBS/0.1% (v/v)吐温-20中的10 µM生物素替换。该步骤用于通过高亲和力的链霉亲和素-结合配偶体生物素来竞争性排挤与仍然游离的链霉亲和素结合位点结合的噬菌体，并在室温下进行5分钟。然后，用TBS/0.1% (v/v)吐温-20洗涤该表面四次。

通过pH步骤分离出一如既往结合的噬菌体。为此，将100μl pH值为2.2的0.2 M甘氨酸/ HCl溶液施加到该表面上，并在室温下温育10分钟。移除包括洗脱的噬菌体的溶液，并加入到25μl pH值为9.1的1M Tris / HCl中以进行中和，并混合。

将20μl该批料转移到新的反应容器中，并继续用于测定洗脱后的噬菌体滴度（所谓的输出滴度）。剩余的105μl用于扩增洗脱的噬菌体。根据噬菌体库的制造商说明(现有技术)进行滴定和扩增。

类似于洗脱的未扩增的噬菌体，滴定扩增的噬菌体（输入滴定）。考虑稀释因子的情况下，确定每毫升的噬斑形成单位(= pfu)数目。对于每一轮，借助该数目将噬菌体数调节为100μl1x TBS中1x 10¹¹个噬菌体。对于每个后续轮，使用前一轮的扩增的噬菌体并相应稀释。

靶分子或诱饵（单体Aβ_1-42）的浓度在所有轮中均稳定在63nM，而竞争剂以在逐个淘选轮中增加的浓度加入。D-对映体Aβ_1-42-寡聚体（经提纯的，即通过尺寸排阻色谱与其它Aβ_1-42-物类分离）和Aβ_1-42-原纤维（借助密度梯度离心提纯的）充当竞争剂。所述竞争剂不是生物素化的，因为否则可能与表面结合。然而目的是，通过在洗涤步骤中洗涤，将结合竞争剂的噬菌体与结合在固定的靶分子上的噬菌体分离。对于两种竞争剂-物类，浓度的增加是相同的且如下所示：第1轮= 0nM - 第2轮= 1nM - 第3轮= 5nM - 第4轮= 10nM - 第5轮=50nM - 第6轮= 500nM。

通过引入竞争步骤，自第2轮起调整上述淘选轮的过程：来自前一轮的1x 10¹¹个噬菌体从此以后不是稀释在100 µl 1x TBS中，而是在60 µl中。剩余的40μl然后直接用包含上面对于每轮给出的浓度的5倍的Aβ_1-42-寡聚体的20 µl 1x TBS以及包含上面给出的浓度的5倍的Aβ_1-42-原纤维的20 µl 1x TBS补足。上面给出的浓度的五倍是由这样的事实得出，即计算总体积100μl的浓度，因为在每种情况中总体积的仅五分之一(20 µl)由竞争剂溶液构成，在总批料中的竞争剂浓度相当于所提及的值。

5分钟后，除去噬菌体和竞争剂的溶液。随后进行已经描述的用10μM生物素的竞争步骤，以及洗涤步骤，其数量同样逐个淘选轮地增加（第1轮= 4个洗涤步骤 - 第2轮= 6 -第3轮= 8 - 第4轮= 10 - 第5轮= 12 - 第6轮= 15）。

表 1: 所进行的所有6个淘选轮的参数。

轮

塑料

预洗涤

用BSA封闭

靶分子浓度

竞争剂浓度

洗涤步骤数量

1

PS

是

63 nM

0

4

2

PP

否

63 nM

1 nM

6

3

PC

否

是

63 nM

5 nM

8

4

PS

是

否

63 nM

10 nM

10

5

PP

否

是

63 nM

50 nM

12

6

PC

否

63 nM

500 nM

15

对于表1：对于镜像噬菌体展示定义了以下参数。在6个淘选轮中，交替使用3种不同的塑料作为表面（PS =聚苯乙烯，PP =聚丙烯，PC =聚碳酸酯）。此外，在每两轮中，在开始第一轮时，在固定靶分子之前用BSA封闭表面。以此方式，应减少对塑料或BSA之一具有特异性的噬菌体的富集。在单纯（naive）的噬菌体库（在这里“单纯”表示其迄今尚未与靶分子接触）具有在第一淘选轮中与固定的靶分子（Aβ_1-42-单体）结合的可能性之后，自第二淘选轮起引入竞争步骤。该步骤由添加增加浓度的竞争剂构成，所述竞争剂即Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维。以此方式，应除去非特异性结合不同Aβ_1-42-物类的噬菌体，以便最终只保留以下这样的噬菌体，其a）特异性结合D-对映体Aβ_1-42而不与塑料表面、BSA或生物素结合，和与此同时b）对于单体、D-对映体Aβ_1-42是特异性的。通过增加每轮的洗涤步骤的数量来增加洗涤时的严苛程度（Rigorosität），由此应除去与靶分子非常弱地结合的噬菌体。

单噬菌体扩增:由这些淘选轮产生与靶分子结合特异性越来越高的不同噬菌体的集合。由这些集合使单噬菌体克隆进行增殖，以将它们随后相互比较（DNA的测序和单噬菌体-ELISA）。为此，从镜像噬菌体展示的优选轮（淘选轮3-6）的输出滴定板中取出各个存在的噬斑形成单元并增殖。根据重组噬菌体库的制造商的方案进行增殖。

单噬菌体-ELISA: 借助ELISA检测各个噬菌体克隆对靶分子和竞争剂的亲和力。为此，将所有三种物类以生物素化的形式固定在聚苯乙烯表面上在其上结合的链霉亲和素上。由于在淘选轮期间将寡聚体和原纤维同时加入作为竞争剂，因此将这两个物类在单噬菌体-ELISA中同样混合着固定。根据与镜像噬菌体展示中相同的原理，将Aβ_1-42-物类提纯并以320nM固定（在Aβ_1-42-寡聚体和Aβ_1-42-原纤维的情况中，制备总浓度为320nM的两种物类的1：1混合物并固定）。对于每个克隆和在该方案的后续过程中提及的每个对照，在每种情况中在2个反应槽（专业术语，原则上也表述为德语：“孔”：在聚苯乙烯（或其它塑料）板上的96孔）中固定Aβ_1-42-单体、Aβ_1-42-寡聚体/原纤维或不固定这两种批料的任一种。没有固定的Aβ_1-42的反应槽用于随后证明，该噬菌体或用于检测噬菌体或Aβ_1-42的抗体是否与塑料表面非特异性结合。涂覆有链霉亲和素的微滴定板按照制造商说明进行预洗涤。将Aβ_1-42-单体或Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维在1x TBS中稀释至在每种情况中浓度为320nM。为了固定，每个反应槽使用100μl，并在室温下温育15分钟。在（一个或多个）整个板用每个反应槽150 µl1x TBS洗涤2次之后，用150 µl 1x TBS/0.1% (v/v) 吐温-20/1% (w/v) BSA在室温下进行封闭步骤1小时。随后，用每个反应槽150 µl 1x TBS/0.1% (v/v) 吐温-20进行三次洗涤步骤。将扩增的单噬菌体克隆与1x TBS/1% (w/v) BSA进行1:1混合。抗体6E10在1x TBS/0.1%(v/v)吐温-20中以1:10000稀释。将100μl每种单噬菌体克隆稀释液、不含噬菌体的样品（LB培养基1：1与1x TBS/1% (w/v) BSA）和抗体稀释液加入到各2个没有固定的Aβ_1-42的反应槽、2个具有固定的单体Aβ_1-42的反应槽和2个具有固定的寡聚体/原纤维Aβ_1-42的反应槽中，并在室温下温育1小时。在用每个反应槽150 µl 1x TBS/0.1% (v/v) 吐温-20洗涤5次后，向每个反应槽中加入200 µl 1x TBS/0.1% (v/v)吐温-20，并将所述（一个或多个）板在室温下温育1小时。取出溶液并如下替换。在先前已用单噬菌体克隆稀释液或没有噬菌体的批料温育的所有反应槽中，现加入100μl的在1x TBS/0.1% (v/v)吐温-20中以1:5000稀释的噬菌体抗体。将稍后用于底物（TMB）转化的酶：辣根过氧化物酶（= HRP）与该抗体偶联。该转化引起显色反应，其强度与抗体与其靶（噬菌体）的结合成比例并因此又与噬菌体与固定的物类或表面的结合成比例。同时，在先前用6E10抗体稀释液温育过的所有反应槽中，现加入100μl的在1x TBS/0.1% (v/v)吐温-20中以1:1000稀释过的第二抗体，其能够识别并结合源自小鼠的6E10抗体。该抗体也是HRP偶联的，并因此允许定量第一抗体与反应槽的固定的靶分子或塑料表面的结合。在室温下温育1小时后，将所述（一个或多个）板用每个反应槽150 µl 1x TBS/0.1% (v/v) 吐温-20洗涤10次。通过加入底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来检测信号。TMB被HRP转化，由此在溶液中发生变色。显色反应的强度是噬菌体或抗体的结合强度的量度。为此，在洗涤后，每个反应槽施加50μl的TMB溶液。一旦反应槽中的溶液变成青绿色，就通过加入50 µl 2 M H₂SO₄来停止显色。随后，自动读取450nm下的吸收。

首先借助用Aβ_1-42-特异性抗体6E10的固定对照的结果（参见图1，固定对照）基于涂覆有Aβ_1-42-单体的反应槽的Aβ_1-42-含量的结果将单噬菌体-ELISA中得到的对Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的亲和性力的值标准化。随后，对于每个克隆，将涂覆有Aβ_1-42-单体的反应槽的信号强度的值设为100％。涂覆有Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的反应槽的信号强度与涂覆有Aβ_1-42-单体的反应槽的值的差异在下表2中以百分比给出。该值越高，差异越大，与Aβ_1-42-单体的结合特异性越大。按照根据本发明的方法识别不同的克隆（克隆5.60 – 6.135），随后是另外的经测试、但未选择的克隆(6.262 – 6.85)。例如，克隆6.84未被选择用于进一步的实验，因为尽管对Aβ_1-42-单体存在特异性，但信号强度极低。

表 2: 按照单噬菌体-ELISA的单噬菌体克隆的Aβ_1-42-单体-特异性。

克隆号	名称	Aβ_1-42-单体(100%) 和Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维之间的信号强度的差异
			>5.60	Mosd1	71.989
>5.80	Mosd2	67.145
			>5.57	Mosd3	59.955
>5.81	Mosd4	69.154
			>6.216	Mosd5	62.729
>6.249	Mosd6	67.981
			>6.247	Mosd7	57.960
>6.227	Mosd8	68.616
			>6.239	Mosd9	68.016
>6.242	Mosd10	71.902
			>6.245	Mosd11	57.671
>6.141	Mosd12	59.012
			>6.113	Mosd13	57.246
>6.197	Mosd14	56.526
			>6.255	Mosd15	59.985
>6.139	Mosd16	52.387
			>6.240	Mosd17	54.492
>6.257	Mosd18	49.181
			>6.190	Mosd19	50.299
>6.167	Mosd20	45.718
			>6.135	Mosd21	46.030
>6.262		23.317
			>6.246		14.335
>6.159		31.283
			>6.217		40.973
>6.84		55.362
			>6.31		33.755
>6.29		42.783
			>6.121		36.403
>6.142		43.606
			>6.74		33.181
>6.85		46.352

用根据本发明的镜像噬菌体展示，已经确定了用Mosd1至Mosd21特异性结合A-β-单体的肽。

表 1: 所选择的特异性结合Aβ_1-42-单体的肽序列，其借助根据本发明的竞争性镜像-噬菌体-展示来选择。

克隆号	名称	SEQ ID NO:	氨基酸序列
				>5.60	Mosd1	1	YSYLTSYHMVWR
>5.80	Mosd2	2	HTWTTYDYVWRL
				>5.57	Mosd3	3	GTMLKFSGMNLT
>5.81	Mosd4	4	HNWFYWTTEPYD
				>6.216	Mosd5	5	HNWSWEWWYNPN
>6.249	Mosd6	6	STLHFYTAFLNK
				>6.247	Mosd7	7	FSHSHHTWFTWN
>6.227	Mosd8	8	HFWSWTSLSMTR
				>6.239	Mosd9	9	HLSWYWEKYLTS
>6.242	Mosd10	10	HTWTHWFSWNVP
				>6.245	Mosd11	11	LSMNITTVHRWH
>6.141	Mosd12	12	VHWDFRQWWQQS
				>6.113	Mosd13	13	YSFHFEMNMGNY
>6.197	Mosd14	14	EHWDFGQWWQQS
				>6.255	Mosd15	15	GQWDFRQWWQPC
>6.139	Mosd16	16	DWSSRVYRDPQT
				>6.240	Mosd17	17	ERSQWGHRDPQS
>6.257	Mosd18	18	DRSKGDHRITQM
				>6.190	Mosd19	19	DLRFSSLWKLSH
>6.167	Mosd20	20	VHWDFRQWWQPS
				>6.135	Mosd21	21	FSWSMVMPWPTA

给出分离出序列的各噬菌体克隆的编号与肽的相应氨基酸序列的名称（其同样以单字母代码示出）以及相应的SEQ ID NO：。

对于图1：对于ELISA实验，将生物素化的D-对映体Aβ_1-42-单体以及生物素化的D-对映体Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的混合物以各自320 nM的浓度固定在涂覆有链霉亲和素的96孔微滴定板上。为了能够确保正确评价以下的单噬菌体-ELISA实验，借助Aβ_1-42-特异性抗体（6E10）测试固定的效力。测量在450nm下的吸收并绘制在Y轴上。Aβ_1-42 -单体以及Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的混合物均固定在所用的所有板（A、B、C）上，这从相比于没有固定Aβ_1-42的孔的值而言升高的吸收值得知。Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维具有比Aβ_1-42-单体更高的固定效力。

这表示，一方面，不同的Aβ_1-42-物类的固定是成功的。但是在物类之间，固定的Aβ_1-42的量不同，因此为了进一步评价该实验（图2），需要将Aβ_1-42-单体和Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的值标准化。

对于图2：检测扩增的单噬菌体克隆的对于固定的Aβ_1-42-单体、Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维以及涂覆有链霉亲和素的塑料表面的结合亲和力。测量在450nm下的吸收。从左至右，示出按照表1所示顺序的克隆(5.60 – 6.135)，然后是测试的其它的但没有选择的克隆(6.262 – 6.85)。Y轴的值给出单噬菌体克隆对单体Aβ_1-42（黑色）、寡聚体和原纤维Aβ_1-42（深灰色）和涂覆有链霉亲和素的塑料表面（浅灰色条纹）的标准化的吸收值。在减去缓冲液对照值后，由于图1中示出的不同Aβ_1-42-物类的固定效力的差异，将固定有Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维的孔的吸收基于涂覆有Aβ_1-42-单体的孔的Aβ_1-42-含量标准化。

从吸收值看出，测试的所有噬菌体优选结合单体Aβ_1-42。所有噬菌体对单体Aβ_1-42具有比对Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维以及比对不含Aβ_1-42 的塑料表面更高的值。由此可以得出结论，用这里使用的方法中的竞争步骤实现了比对Aβ_1-42-寡聚体和-原纤维更高的对Aβ_1-42-单体的特异性，并且借助交替的基质表面可减少结合塑料、BSA或链霉亲和素的噬菌体的富集。含有Mosd1的肽序列的克隆5.60尤其突出。该克隆不仅具有所有测试的克隆中对单体Aβ_1-42的最高吸收值。此外，其特征在于，对单体Aβ_1-42的吸收值与对寡聚体和原纤维Aβ_1-42的吸收值的最大差异。这意味着对单体Aβ_1-42的非常高的特异性。

对于图3：给出了得自七次独立进行的ThT实验的平均相对荧光与标准偏差。染料硫黄素T（ThT）在批料中与β-折叠结构结合，并因此改变其荧光光谱。在Aβ_1-42聚集的过程中，β-折叠结构形成增多，其因此可以通过ThT荧光的增加来直接测量。10 µM Aβ_1-42-样品（黑色）的相对荧光用作参照。将荧光信号对数增加转变为稳定期的时间点设为100％。等摩尔浓度的不同肽的使用影响了恰好这一时间点的同样含于批料中的Aβ_1-42的ThT荧光并因而影响了聚集和原纤维形成。示出的是Aβ_1-42与Mosd1（浅灰色）、Mosd2（深灰色）、Mosd3（灰色，斜条纹）和Mosd4（灰色，点花纹）以等摩尔含量的共温育相较于仅含Aβ_1-42的批料（黑色）的相对荧光单位。

在Mosd2和3在提及的时间点提高了ThT荧光的情况下，由此可认为，这些肽促进了β-折叠结构的形成。相反，Mosd4对β-折叠结构的形成具有仅很小的影响。Mosd1能够降低相对荧光，该荧光是对样品中的β-折叠结构含量的量度。由于在该实验中所测试的肽没有一种具有固有荧光，因此可以认为，所增加的荧光值仅归因于原纤维的、并因此含有β-折叠结构的Aβ的形成。由此可以得出结论，Mosd1降低原纤维Aβ的含量，可能是通过使Aβ-单体稳定化或形成大的ThT-阴性聚集体。相反，肽Mosd2和Mosd3似乎加速了Aβ的原纤维化。然而，这并非必然是评价为负面的结果，因为原纤维Aβ的形成也意味着将作为必需的前体的寡聚体从平衡中取走。

对于图4: 不同Mosd-肽对不同大小的Aβ_1-42-物类的多样化（breit gefächert）混合物的影响借助密度梯度离心、离心后的梯度的分级和借助Tris-Tricin-SDS-PAGE的级分分析和银染来分析。

将80 µM Aβ_1-42在不添加肽的情况下在600rpm和25℃下温育4.5小时，以获得不同Aβ_1-42-物类的广谱。随后，将该批料在加入或不加入肽的情况下温育另外40分钟，紧接着施加到碘克沙醇密度梯度上。然后，将该梯度离心，由此使样品的内容物（不同大小的Aβ_1-42-物类）根据其大小和形状扩散到梯度中。离心后将该梯度分级成15个级分（1-15），并将前14个单独的级分施加到Tris-Tricin-SDS凝胶上。每个级分的内容物的分离通过电泳进行。变性蛋白质的条带（Aβ_1-42 在4.5 kDa处，见标记（M））借助银染可见。该方法不能定量分析，但是信号强度与蛋白质的浓度相关，因此较强的信号通常意味着较高的蛋白质浓度。

研究了40 µM浓度的肽Mosd1-4的影响。该图像在最上部中示出了没有与肽共温育的Aβ_1-42-物类的分布。在样品中存在不同大小的Aβ_1-42-物类的广谱。肽Mosd1、2和3提高了高分子量Aβ_1-42-物类（级分10-14）的含量，并主要减少了被认为有毒的寡聚体Aβ_1-42-物类（级分4-7）。

对于图5: Mosd1的不同浓度对不同大小的Aβ_1-42-物类的多样化混合物的影响借助密度梯度离心、离心后的梯度的分级和借助Tris-Tricin-SDS-PAGE的级分分析和银染来分析。

将80 µM Aβ_1-42在不添加肽的情况下在600rpm和25℃下温育4.5小时，以获得不同的Aβ_1-42-物类的广谱。随后，将该批料在不加入(A)或加入不同浓度的Mosd1 (B = 10 µMMossd1; C = 20 µM Mosd1; D = 40 µM Mosd1; E = 80 µM Mosd1)的情况下温育另外40分钟，紧接着施加到碘克沙醇密度梯度上。然后，将该梯度离心，由此使样品的内容物（不同大小的Aβ_1-42-物类）根据其大小和形状扩散到梯度中。离心后将该梯度分级（1-15份），并将各个级分施加到Tris-Tricin-SDS凝胶上。每个级分的内容物的分离通过电泳进行。变性蛋白质的条带（Aβ_1-42 在4.5kDa处，见标记（M））借助银染可见。该方法不能定量分析，但是信号强度与蛋白质的浓度相关，因此较强的信号通常意味着较高的蛋白质浓度。

研究了肽 Mosd1的不同浓度的影响。该图像在最上部(A)示出了没有与肽共温育的Aβ_1-42-物类的分布。在样品中存在不同大小的Aβ_1-42-物类的广谱。通过Mosd1调节Aβ_1-42-物类是浓度依赖性的（B-E）。低浓度的Mosd1（B＆C）仅略微改变Aβ_1-42-物类的组成，但与未处理的Aβ_1-42-样品相比，它们降低了有毒寡聚体（级分4-7）的含量，并提高了高分子量聚集体的含量。较高浓度的Mosd1（D＆E）明显降低了小的Aβ_1-42-物类和有毒寡聚体的含量，并导致Aβ_1-42-物类向高分子量聚集体的调节。

Mosd1能够从不同的Aβ-物类的池中除去存在的有毒Aβ-寡聚体，并促进无毒的高分子量聚集体的形成。这个过程是浓度依赖性的。使用20 µM Mosd1就已降低寡聚体条带的信号强度，并且与未处理的Aβ相比，增强了级分11-14中的Aβ条带的信号。更高的浓度增强了这种效果，但是也导致了对应于单体Aβ的级分1-2中的信号强度的下降。

对于图6: Mosd1的不同浓度对不同大小的Aβ_1-42-物类的多样化混合物的影响借助密度梯度离心、离心后的梯度的分级和借助Tris-Tricin-SDS-PAGE的级分分析和银染来分析(图 5)。借助反相HPLC分离并定量得自图5中所示实验的每个级分的样品。为此，在升高的柱温（80℃）下，使样品在流动相(30% (v/v)乙腈、0.1% (v/v) TFA在ddH₂O中)中通过Zorbax 300SB-C8柱变性并分离。对于每个级分，将来自3个彼此独立进行的实验的样品取平均值，并计算标准偏差。该结果与图5的凝胶图像的结果一致，并能够定量分析该数据。级分15对应于密度梯度离心后的丸粒（Pellet），并且同样含有少量的Aβ_1-42。

借助RP-HPLC定量分析样品的数据证实了图5的定性结论。在含有有毒寡聚体的级分中的Aβ浓度在Mosd1浓度增加的情况下降低。高分子量Aβ-物类（级分11-14）的浓度也同时增加。

对于图7: 前面的实验表明，Aβ_1-42与Mosd-肽（在具体情况中为Mosd1）的共温育导致Aβ_1-42-聚集体向高分子量聚集体的调节。因此，为进一步分析，将10 µM Aβ_1-42在具有和没有10 µM Mosd1的情况下在室温下温育24小时，然后固定在Formvar /碳-铜网上，并用乙酸双氧铀染色。在没有Mosd1的情况下温育Aβ_1-42时，随后通过TEM（120kV）的的分析显示出原纤维结构（左图）。与Mosd1的共温育导致形成大的高分子量聚集体，其与原纤维结构明显不同（右图）。比例尺相当于0.25μm。

对于图8: 测试了Aβ_1-42对PC-12-细胞的活力的影响。将不同Aβ_1-42-物类的混合物（制备参见图4）加入到PC-12-细胞中。此外，如图4中所述，Aβ_1-42的批料与不同浓度的Mosd1共温育，并测试仅含有Mosd1的批料。每孔的最终浓度为1 µM Aβ_1-42 和1或0.5µM Mosd1。将样品加入到细胞的培养基中并与细胞在37℃下温育24小时。随后，通过MTT实验测定细胞的活力。在这种情况下，向细胞中加入可由代谢活性细胞（活细胞）转化的代谢反应物。该转化的产物是可溶解的有色甲臜晶体。溶解后培养基的着色对应于反应物的转化率，并因此对应于细胞的活力。未处理的细胞（介质，白色菱形的）充当活体对照，并且将活细胞含量定义为100％。其它批料的值基于该值标准化。用0.1％ TritonX-100的处理充当细胞毒性的阳性对照（浅灰色），在该批料中活细胞的量仅为1.5％。如猜想的那样，不同Aβ_1-42-物类的混合物也含有有毒物类，以至于通过将所述细胞与Aβ_1-42-混合物温育而使活细胞数减少到45％（黑色）。Mosd1不影响PC-12-细胞的活力。然而，Aβ_1-42和Mosd1的共温育以浓度依赖性方式降低了Aβ_1-42的毒性（灰色（1µM Mosd1）和深灰色（0.5 µM Mosd1））。如果将Aβ_1-42-混合物在加入细胞之前与Mosd1共温育，则86％和66％的细胞存活。

这表明，Mosd1能够将有毒的聚集体转化为高分子量、无毒的Aβ_1-42-物类或使有毒的Aβ_1-42-物类分解。

对于图9: 小鼠神经母细胞瘤细胞系Neuro-2a充当神经元细胞的模型，因此适用于分析AD的症状。用人APP695稳定转染Neuro-2a细胞此外允许一种模型，其在细胞本身中产生人APP（淀粉样前体蛋白）及其所有加工产物，尤其是有毒的Aβ_1-42。以此方式可以直接在神经元细胞中研究天然存在的Aβ_1-42-物类的影响。在实验中，将没有APP的Neuro-2a细胞与具有APP转染的那些平行培养。APP及其加工产物的生产显示出圆形且分隔的细胞，它们彼此几乎没有接触（左图）。然而，通过用10 µM或100 µM Mosd1温育，可以逆转这种病理表现型，并且这些细胞按照对应于野生型Neuro-2a-细胞的生理表现型发展。这意味着，细胞数量增加且细胞积累（akkumulieren），具有多边形形状并形成大量细胞接触和末梢（Ausläufer）（中间和右侧图像）。

这证明了，Mosd1不仅能够分解或转化有毒Aβ_1-42-物类，而且还可以防止有毒物类的形成。

对于SEQ ID NO：2-21的肽和多聚体，也可以预期对于Mosd1所显示的结果。因此，在实施例中显示的结果对于根据所有SEQ ID NO：1-21的肽以及通常对于用根据本发明的方法，即改良的镜像噬菌体展示获得的肽也是类似的。

对此应指出的是，所用的镜像噬菌体展示可以完全一样地以另一个方向进行，也就是说用于识别A-β-寡聚体上的配体，这通过使用A-β-寡聚体作为诱饵和使用A-β-单体和/或A-β-原纤维作为竞争剂。此外，根据本发明的镜像噬菌体展示当然也可用于其它的诱饵-竞争剂-对。

Claims

1.特异性结合淀粉样蛋白-β-物类的肽，其包含选自下述的至少一个氨基酸序列：SEQID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ IDNO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 12、SEQID NO. 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和/或SEQ ID NO: 21及其同源体、片段和部分，以及SEQID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ IDNO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 12、SEQID NO. 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和/或SEQ ID NO: 21的多聚体及其同源体、片段和部分。

2.根据权利要求1的肽，其特征在于，其基本上由D-氨基酸构成。

3.根据权利要求1或2的肽，其特征在于，其以环化形式存在。

4.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其用于医药中。

5.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其用于治疗或预防阿尔茨海默病。

6.试剂盒，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的肽。

7.包含根据权利要求1至5中任一项所述的肽的组合物。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的肽作为用于特异性识别、定量和/或定性测定淀粉样蛋白-β-单体、淀粉样蛋白-β-原纤维和/或淀粉样蛋白-β-寡聚体的探针的用途。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的肽用于防止淀粉样蛋白-β-寡聚体和/或淀粉样蛋白-β-肽聚集体的用途。

10.根据权利要求1至5中任一项所述的肽用于使有毒的淀粉样蛋白-β-寡聚体和/或聚集体去毒的用途。

11.根据权利要求10的用途，其特征在于，淀粉样蛋白-β-寡聚体和/或聚集体通过根据权利要求1至5中任一项所述的肽转化成单体和/或无毒的聚集体。

12.肽SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID 4、SEQ ID NO: 5、SEQ IDNO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQID NO. 12、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和/或SEQ ID NO: 21 及其同源体、片段和部分以及SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID 4、SEQ ID NO: 5、SEQID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ IDNO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20和/或SEQ ID NO: 21多聚体及其同源体、片段和部分的用于特异性结合 A-β-单体的用途。

13.根据权利要求1至5中任一项所述的肽作为治疗剂和用于预防阿尔茨海默病的用途。

14.用于识别特异性结合诱饵的配体的方法，其包括以下步骤：

a)提供固定在基质上的诱饵；

b)使充当诱饵的固定的分子与含有分子库的溶液接触；

e)重复所述步骤，其中在每次重复时使用不同的基质，

f)识别在重复后保留在诱饵上的分子的结构。

15.根据前述权利要求14的方法，其特征在于，在每次重复时使用不同的基质类型和/或使用封闭或非封闭试剂。

16.根据前述权利要求14或15中任一项所述的方法，其特征在于聚苯乙烯、聚丙烯和/或聚碳酸酯作为基质。

17.根据前述权利要求14至16中任一项所述的方法，其特征在于，使用A-β-单体作为诱饵和使用A-β-寡聚体和/或A-β-原纤维作为竞争剂，或者反之亦然。

18.用根据前述权利要求14至17中任一项所述的方法识别的特异性结合诱饵，例如特异性结合A-β-物类的配体，特别是肽。