CN107760732A

CN107760732A - 一种农业级γ‑聚谷氨酸的生产方法

Info

Publication number: CN107760732A
Application number: CN201711135486.XA
Authority: CN
Inventors: 乔长晟; 张卫; 汪建英; 李雪; 李振海
Original assignee: Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co Ltd
Current assignee: Tianjin Peiyang Biotrans Biotech Co Ltd
Priority date: 2017-11-16
Filing date: 2017-11-16
Publication date: 2018-03-06

Abstract

本发明涉及一种农业级γ‑聚谷氨酸的生产方法，包括以下步骤：菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上培养活化；种子液的制备；将活化后的斜面种子接种于种子培养基中，得产γ‑聚谷氨酸的种子液；将种子液接种于发酵培养基中发酵；发酵结束后离心去菌体，醇沉析出聚谷氨酸，干燥，制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸。本发明通过实验室对农业级聚谷氨酸的发酵研究中发现钾盐类对农业级聚谷氨酸合成具有较大促进作用，通过添加氯化钾，提高农业级产量的方法提高底物转化率，不仅操作方便，而且在提高产量的同时相比化妆品级别的聚谷氨酸，其降低了后期聚谷氨酸提取的成本。

Description

一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法

技术领域

本发明属于农业微生物技术领域，涉及一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法。

背景技术

γ-聚谷氨酸是由D-谷氨酸和L-谷氨酸通过α-氨基和γ-羧基间的酰胺键结合而成的一种多功能生物可降解高分子材料。分子量分布在100kDa到 10000kDa之间。γ-聚谷氨酸具有优良的水溶性、超强的吸附性和生物可降解性，降解产物为无公害的谷氨酸，是一种优良的环保型高分子材料，可作为保水剂、重金属离子吸附剂、絮凝剂、缓释剂以及药物载体等，在化妆品、环境保护、食品、医药、农业、沙漠治理等产业均具有很高的商业价值和社会价值。

从聚谷氨酸的发现至今仅有几十年的历史，聚谷氨酸的研究主要还是处于实验室阶段，仅少数企业进行了工业化生产。实验室阶段主要包括对其性质的研究，产生菌的改良和基因研究，发酵过程研究和提取纯化过程研究，以及衍生物的生产和性质的研究。近几年来，由于人们环境意识的增强和国家可持续发展战略的要求，发展对环境友好的材料和开发改善环境问题的产品成为一种产业上的趋势，它也推动了聚谷氨酸产业化研究和探索的进程。进入本世纪，个别国际知名公司开始进行聚谷氨酸的生产和应用的研究，国内部分大学和研究所也积极开展了相关的研究，国内更有数家企业开始计划聚谷氨酸的大规模生产。由于这些产业化研究的跟进，使得聚谷氨酸成为现阶段最受人关注的生物制品之一。

目前文献当中关于聚谷氨酸产量提高主要是通过菌种诱变、培养基成分优化，往往效果不太明显，发酵周期长，且底物的转化率不高，导致聚谷氨酸成本居高不下。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法。本发明提供了一种分别添加氯化钾、硫酸钾等钾盐来提高农业级产量的方法提高底物转化率，不仅操作方便，而且在提高产量的同时相比化妆品级别的聚谷氨酸，其降低了后期聚谷氨酸提取的成本。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于 30℃-37℃培养16-18小时，如此活化2-3次，制备成熟的活化后的斜面种子；

本发明所用菌种来源:天津北洋百川生物技术有限公司申请专利名称为一种高效生产γ-聚谷氨酸的方法，申请号CN201310749908.8。所述地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis)TKPG091，该菌株已于2009年10月14日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.3336；

(2)种子液的制备；将步骤(1)中活化后的斜面种子接种于种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，得到产γ-聚谷氨酸的种子液；

(3)发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，8％～10％接种量，将步骤 (2)中的种子液接种于发酵培养基中，控制初始发酵温度37-38℃，罐压 0.01-0.05MPa；通风量0.5-1.5vvm，发酵罐搅拌转速400rpm；初始发酵液pH值调至7.0-7.7；在发酵前20h控制pH值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束；发酵时间为72h，发酵过程中pH会降低，我们会使用氢氧化钠溶液调控pH，初始发酵液PH值以及发酵前28小时PH值调节是方便菌体在最适PH范围内，使菌体能够在进入延滞期后快速进入对数期，在发酵后期菌体进入稳定期期间，菌体主要产γ-聚谷氨酸的目的产物，故不再需要调节PH值。通风量过大会使菌体的溶养的到充足，从而使菌体过快的进入对数期，消耗了葡萄糖等培养基底物，使得在稳定期菌体没有充足的底物维持，进而影响聚谷氨酸目的产物的量，所以通风量及罐压必须在合适的范围内进行调节。

所述发酵培养基组分为：葡萄糖78-85g/L，NH₄Cl 5.32-6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.45-0.6g/L，无水氯化钙0.45-0.55g/L，FeSO₄·7H₂O 0.08-0.12g/L，酵母膏 18-25g/L；味精75-85g/L，钾盐10-18g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌 30-40min，得到所述的发酵培养基；其中味精单独灭菌，单独添加；味精和培养基一起灭菌会降低菌体对味精的转化和利用率，故单独添加，使得味精的转化率提高。所述钾盐为KCl或K₂SO₄；

(4)提取：发酵结束后离心去菌体，然后用4-5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，干燥；制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸。

作为优选的技术方案：

优选的，所述发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，NH₄Cl 5.52g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，无水氯化钙0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1g/L，酵母膏20g/L；味精80g/L，钾盐15g/L。

优选的，通过高效液相检测样品中农业级聚谷氨酸的产量。

优选的，所述种子培养基组成为：酵母膏7g/L，胰蛋白胨10/L，K₂HPO₄ 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，pH值7.2，葡萄糖30g/L，余量为水；在温度125℃ 下灭菌30-40min，得到所述的种子培养基；其中葡萄糖单独灭菌，单独添加。葡萄糖和培养基一起灭菌会降低菌体对葡萄糖的转化和利用率，故单独添加，使得味精的转化率提高。优选的，所述发酵培养基的pH是使用1～4mol/L硫酸、盐酸、氢氧化钠或氢氧化钾水溶液调节的。

优选的，所述干燥指的是利用喷雾干燥方法，制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸。

优选的，所述农业级聚谷氨酸的分子量为20万-100万道尔顿，无机盐等盐类是微生物生长过程中必须的，必须由外界直接提供的营养成分，钾盐等无机盐可以提供微生物重要化学物质、辅助因子(辅酶和辅基)的组分和参与代谢。本专利发现通过在培养基中添加不同钾盐成分考察其农业级γ-聚谷氨酸的产量，从而确定添加的最佳钾盐成份。γ-聚谷氨酸属于次级代谢产物，在菌体处于对数期后期，稳定期前期大部分开始产生，有少部分在稳定期后期产生。

所述添加钾盐的优化过程：采用的农业级γ-聚谷氨酸的生产过程为：

(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336原始菌株接种在斜面培养基上，于37℃培养18小时，制备成熟的斜面种子；斜面培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂粉20g/L，余量为水。

(2)种子液的制备：将活化后的斜面种子接种于装有50mL液体培养基的 500mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，参考以 OD₆₆₀值长在0.3则可

所述种子培养基组成为：酵母膏7g/L，胰蛋白胨10/L，K₂HPO₄ 0.5g/L， MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；葡萄糖30g/L单灭单独添加。

(3)发酵罐发酵：将步骤(2)中的种子液1.5L接种于发酵罐，以10％的接种量，30L发酵罐发酵培养基装量为15L，初始发酵温度38℃，罐压0.03MPa，通风量，1vvm，转速400rpm；初始发酵液pH值调至7.0，在发酵前20h控制 pH值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束。

所述发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，NH₄Cl 5.52g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，无水氯化钙0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1g/L，酵母膏20g/L；味精80g/L单灭单独添加。采取发酵培养基其余成分不变，分别添加KCl 10g/L，15g/L；K₂SO₄ 10g/L，K₂HPO₄15g/L，KH₂PO₄ 15g/L以NaCl 10g/L做参照对比，从而选择出添加最佳钾盐类及其浓度。实验室对此进行了大量研究，对钾盐类进行了筛选，对用量进行了优化，结果如下表：

表1：不同钾盐类对比NaCl的培养基渗透压比较

实验组条件	渗透压(osmol/kg)
		对照组NaCl 10g/L	1.619
KCl 15g/L	1.692
		K₂HPO₄ 15g/L	1.289
KH₂PO₄ 15g/L	1.368
		K₂SO₄ 15g/L	1.407

由表1可以得出：kCl15g/L，K₂SO₄ 15g/L其培养基渗透压与对照组接近，以此进行下一步浓度优化，具体如表2；且K₂HPO₄以及KH₂PO₄由于和钙离子还会产生沉淀，故不考虑作为农业级聚谷氨酸发酵培养基成分添加。

表2：K₂SO₄不同浓度与对照组的γ型-谷氨酸产量比较

由表2可以得出：K₂SO₄替换得到的γ-聚谷氨酸产量效果很低且不明显。

表3：KCl不同浓度与对照组的γ-聚谷氨酸产量比较

	γ-聚谷氨酸产量g/L
		对照组NaCl 10g/L	18
kCl 10g/L	20.6
		kCl15g/L	22.8

由表3可以得出：KCl替换是有促进作用的而且得到的γ-聚谷氨酸产量效果明显增加，且kCl15g/L得到的聚谷氨酸的产量是最高的。农业级γ-聚谷氨酸属于次级代谢产物，已证实在微生物对数期后期、稳定期前期开始产生；为了缩短发酵周期，提高底物转化率，本发明通过实验室对农业级聚谷氨酸的发酵研究中发现钾盐类对农业级聚谷氨酸合成具有较大促进作用，且成本较低。

本发明针对地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336发酵生产农业级γ-聚谷氨酸过程中存在产量低、底物转化率低的缺陷。经过培养基成分的研究，确定了原因在于培养基的优化，但没有找出合适的替代物。经过培养基优化的大量研究，有针对性的替换培养基中单一成分即对照组，发现在培养基中加入kCl促进了终产物γ-聚谷氨酸生成。本发明有针对性的根据不同钾盐类和发酵过程中添加不同的量特点来比较其农业级γ-聚谷氨酸的产量，通过准对性的添加钾盐，极大地缩短了培养基优化的长周期，提高了底物的转化率，同样也提高了农业级γ- 聚谷氨酸的产量；作为工业化生产农业级γ-聚谷氨酸其转化率适合工业化生产，提高了底物的利用效率，且发酵周期较短，大大降低了设备的损耗，以及设备利用率等成本。

有益效果

本发明提供了一种分别添加氯化钾、硫酸钾等钾盐来提高农业级产量的方法提高底物转化率，不仅操作方便，而且在提高产量的同时相比化妆品级别的聚谷氨酸，其降低了后期聚谷氨酸提取的成本。

农业级γ-聚谷氨酸属于次级代谢产物，已证实在微生物对数期后期、稳定期前期开始产生；为了缩短发酵周期，提高底物转化率，本发明通过实验室对农业级聚谷氨酸的发酵研究中发现钾盐类对农业级聚谷氨酸合成具有较大促进作用，且成本较低。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，包括以下步骤：

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)TKPG091，该菌株已于2009年10 月14日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.3336；

(2)种子液的制备：将活化后的斜面种子接种于装有50mL液体培养基的 500mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，参考以OD₆₆₀值长在0.3则可

种子培养基组成为：酵母膏7g/L，胰蛋白胨10/L，K₂HPO₄ 0.5g/L， MgSO₄·7H₂O0.5g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；葡萄糖30g/L单灭单独添加。

(3)发酵罐发酵：将步骤(2)中的种子液1.5L接种于发酵罐，以10％的接种量，30L发酵罐发酵培养基装量为15L，初始发酵温度38℃，罐压0.03MPa，通风量1vvm，转速400rpm；初始发酵液pH值调至7.0，在发酵前20h控制pH 值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束。发酵培养基的pH是使用1mol/L硫酸、氢氧化钠水溶液调节的。当发酵进行72h 后即菌体生长处于稳定期前期时产物开始大量积累。

发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，NH₄Cl 5.52g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，无水氯化钙0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1g/L，酵母膏20g/L；味精80g/L，钾盐10g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌35min，得到的发酵培养基；其中味精单独灭菌，单独添加；钾盐为KCl；

(4)提取：发酵结束后离心去菌体，然后用5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，且定容于25mL后经过水解处理得样品，通过高效液相检测得其γ-聚谷氨酸产量为20.6g/L，利用喷雾干燥方法制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸，农业级聚谷氨酸的分子量为20万 -100万道尔顿

实施例2

一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于30℃ 培养16小时，制备活化后的斜面种子；斜面培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl10g/L，琼脂粉20g/L，余量为水。

(2)种子液的制备；将活化后的斜面种子接种于装有50mL液体培养基的 500mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，参考以 OD660值长在0.3则可；得到产γ-聚谷氨酸的种子液；

种子培养基组成为：酵母膏7g/L，胰蛋白胨10/L，K₂HPO₄ 0.5g/L， MgSO₄·7H₂O0.5g/L，pH值7.2，葡萄糖30g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌40min，得到的种子培养基；其中葡萄糖单独灭菌，单独添加。

(3)发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，8％接种量，将步骤(2)中的种子液接种于发酵培养基中，30L发酵罐发酵培养基装量为15L，控制初始发酵温度37℃，罐压0.01MPa；通风量0.5vvm，转速400rpm；初始发酵液pH值调至7；在发酵前20h控制pH值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束；发酵培养基的pH是使用4mol/L盐酸或氢氧化钾水溶液调节的。当发酵进行72h后即菌体生长处于稳定期前期时产物开始大量积累。

发酵培养基组分为：葡萄糖78g/L，NH₄Cl6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.6g/L，无水氯化钙0.55g/L，FeSO₄·7H₂O 0.08g/L，酵母膏25g/L；味精85g/L，钾盐15g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌35min，得到的发酵培养基；其中味精单独灭菌，单独添加；钾盐为KCl；

(4)提取：发酵结束后离心去菌体，然后用4倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，再纯净水复溶且定容于25mL后经过水解处理得样品，通过高效液相检测得其γ-聚谷氨酸产量为22g/L；利用喷雾干燥方法制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸，农业级聚谷氨酸的分子量为20万-100万道尔顿

实施例3

一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于35℃ 培养17小时，制备活化后的斜面种子；斜面培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl10g/L，琼脂粉20g/L，余量为水。

(2)种子液的制备；将步骤(1)中活化后的斜面种子接种于装有50mL液体培养基的500mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，参考以OD660值长在0.3则可，得到产γ-聚谷氨酸的种子液；

种子培养基组成为：酵母膏7g/L，胰蛋白胨10/L，K₂HPO₄ 0.5g/L， MgSO₄·7H₂O0.5g/L，pH值7.2，葡萄糖30g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌35min，得到的种子培养基；其中葡萄糖单独灭菌，单独添加。

(3)发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，10％接种量，将步骤(2) 中的种子液接种于发酵培养基中，30L发酵罐发酵培养基装量为15L，控制初始发酵温度38℃，罐压0.05MPa；通风量1vvm，转速400rpm；初始发酵液pH值调至7.7；在发酵前20h控制pH值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束；发酵培养基的pH是使用2mol/L盐酸或氢氧化钠水溶液调节的。当发酵进行72h后即菌体生长处于稳定期前期时产物开始大量积累。

发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，NH₄Cl 5.52g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，无水氯化钙0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1g/L，酵母膏20g/L；味精80g/L；钾盐15g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌40min，得到发酵培养基；其中味精单独灭菌，单独添加；钾盐为KCl；

(4)提取：发酵结束后离心去菌体，然后用5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，再纯净水复溶且定容于 25mL后经过水解处理得样品，通过高效液相检测得其γ-聚谷氨酸产量为 25.3g/L。利用喷雾干燥方法制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸，农业级聚谷氨酸的分子量为20万-100万道尔顿。

实施例4

一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于 30℃-37℃培养16-18小时，制备活化后的斜面种子；斜面培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂粉20g/L，余量为水。

(2)种子液的制备；将步骤(1)中将活化后的斜面种子接种于装有50mL液体培养基的500mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，参考以OD660值长在0.3则可，得到产γ-聚谷氨酸的种子液；

种子培养基组成为：酵母膏7g/L，胰蛋白胨10/L，K₂HPO₄ 0.5g/L， MgSO₄·7H₂O0.5g/L，pH值7.2，葡萄糖30g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌38min，得到的种子培养基；其中葡萄糖单独灭菌，单独添加。

(3)发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，9％接种量，将步骤(2)中的种子液接种于发酵培养基中，30L发酵罐发酵培养基装量为15L，控制初始发酵温度37℃，罐压0.03MPa；通风量1.5vvm，转速400rpm；初始发酵液pH值调至7.2；在发酵前20h控制pH值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束；发酵培养基的pH是使用3mol/L盐酸或氢氧化钾水溶液调节的。当发酵进行72h后即菌体生长处于稳定期前期时产物开始大量积累。

发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，NH₄Cl 5.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，无水氯化钙0.55g/L，FeSO₄·7H₂O 0.11g/L，酵母膏22g/L；味精78g/L，钾盐18g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌35min，得到的发酵培养基；其中味精单独灭菌，单独添加；钾盐为KCl；

(4)提取：发酵结束后离心去菌体，然后用5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，再纯净水复溶且定容于 25mL后经过水解处理得样品，通过高效液相检测得其γ-聚谷氨酸产量为 21.6g/L；利用喷雾干燥方法制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸，农业级聚谷氨酸的分子量为20万-100万道尔顿。

Claims

1.一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于30℃-37℃培养16-18小时，制备活化后的斜面种子；

（2）种子液的制备；将步骤（1）中活化后的斜面种子接种于种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养18小时至对数生长期，得到产γ-聚谷氨酸的种子液；

（3）发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，8％～10％接种量，将步骤（2）中的种子液接种于发酵培养基中，控制初始发酵温度37-38℃，罐压0.01-0.05MPa；通风量0.5-1.5vvm，转速400rpm；初始发酵液pH值调至7.0-7.7；在发酵前20h控制pH值不低于6.0，20-28h控pH值不低于6.5，后期不用再调节pH值直到发酵结束；

所述发酵培养基组分为：葡萄糖78-85g/L，NH₄Cl 5.32-6g/L， MgSO₄·7H₂O 0.45-0.6g/L，无水氯化钙0.45-0.55g/L，FeSO₄·7H₂O 0.08-0.12g/L，酵母膏18-25g/L；味精75-85g/L，钾盐10-18g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌30-40min，得到所述的发酵培养基；其中味精单独灭菌，单独添加；

所述钾盐为KCl；

（4）提取：发酵结束后离心去菌体，然后用4-5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，干燥；制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸。

2.根据权利要求1所述的一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于，所述发酵培养基组分为：葡萄糖80g/L，NH₄Cl 5.52g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，无水氯化钙0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1g/L，酵母膏20g/L，味精80g/L，钾盐15g/L。

3.根据权利要求1所述的一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于，通过高效液相检测样品中农业级聚谷氨酸的产量。

4.根据权利要求1所述的一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于，所述斜面培养基组成为：胰蛋白胨10 g/L，酵母浸粉5g/L， NaCl 10g/L，琼脂粉20g/L，余量为水。

5.根据权利要求1所述的一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于，所述种子培养基组成为：酵母膏7 g/L，胰蛋白胨10 g/L，K₂HPO₄ 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，pH值7.2，葡萄糖30g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌30-40min，得到所述的种子培养基；其中葡萄糖单独灭菌，单独添加。

6.根据权利要求1所述的一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于，所述干燥指的是利用喷雾干燥方法，制备出黄色干粉状农业级聚谷氨酸。

7.根据权利要求1所述的一种农业级γ-聚谷氨酸的生产方法，其特征在于，所述农业级聚谷氨酸的分子量为20万道尔顿-100万道尔顿。