CN107759687A - 一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺 - Google Patents

一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺 Download PDF

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CN107759687A CN201710943189.1A CN201710943189A CN107759687A CN 107759687 A CN107759687 A CN 107759687A CN 201710943189 A CN201710943189 A CN 201710943189A CN 107759687 A CN107759687 A CN 107759687A
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李洪桥
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Abstract

本发明公开了一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其包括以下步骤：组分II+III制备；组分III分离：取高效价原料血浆制备的组分II+III，低温注射用水溶，调pH、乙醇浓度和温度至5.00~5.30、16~20%和‑5.8~‑4.0℃，过滤；组分II分离：取滤液，调pH、离子强度、乙醇浓度和温度至7.20~7.55、0.03~0.06、24~27%和‑12.0~‑8.0℃，过滤；组分II纯化：低温注射用水溶，调pH和电导率至6.45~7.10和1.2~1.5ms/cm，层析纯化；调pH至4.30~4.80，等倍透析，蛋白液浓缩至≥60g/L；中间品制备；原液制备；具有提高纯度的效果。

Description

一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺
技术领域
本发明涉及一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺。
背景技术
乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)是由乙型肝炎疫苗免疫健康献浆员后采集的乙型肝炎表面抗体效价较高的血浆，经分离、提纯、病毒灭活而制备的特异性免疫球蛋白，具有特异性被动免疫作用，能够中和体内表面抗原，并将病毒清除。乙型肝炎人免疫球蛋白是一种针对乙型肝炎的抗体药物，对于阻止乙肝母婴垂直传播和防止乙肝的意外感染等方面都有重要的临床应用价值。
申请公布号为CN101161232A、申请公布日为2008年4月16日的中国专利公开了一种静脉注射人乙型肝炎免疫球蛋白制备方法，在研究过程中发现该制备方法分离得到的乙型肝炎免疫球蛋白纯度不高(93％左右)，具有一定的安全隐患。
发明内容
本发明的目的是提供一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，具有提高纯度的效果。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，包括组分II+III的制备、组分III的分离、组分II的分离、组分II的纯化、中间品的制备和原液的制备，
组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8～14倍注射用水，在2～8℃下溶解；②调节pH至5.00～5.30；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至16～20％；④调节温度至-5.8～-4.0℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，调节pH至7.20～7.55；②调节离子强度至0.03～0.06；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24～27％；④调节温度至-12.0～-8.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加注射用水，在2～8℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②调节pH至6.45～7.10，调节电导率至1.2～1.5ms/cm，层析纯化；③调节pH至4.30～4.80，用1～6℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
在乙肝人免疫球蛋白的制备过程中，温度影响了各种蛋白的溶解度，温度过低还影响了分离效果；乙醇低温分离组分时，除了能影响分离效果时，还由于其加入体系中为放热反应而与温度影响发生关联性；离子强度过低则由于乳化现象明显分离导致困难，离子强度过高则由于其引入的离子而影响蛋白质量；蛋白浓度过高则由于其共沉淀现象导致分离困难，过低则沉淀聚集时间过长；采用上述技术方案，可得到乙肝人免疫球蛋白的含量、纯度和抗-HBs效价均优于现有技术乙肝人免疫球蛋白。
进一步优选为：组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8～14倍注射用水，在2～8℃下溶解；②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.00～5.30；③加入≤-15℃且体积浓度为90～99％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至16～20％；④调节温度至-5.8～-4.0℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.20～7.55；②加入NaCl调节离子强度至0.03～0.06；③加入≤-15℃且体积浓度为90～99％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24～27％；④调节温度至-12.0～-8.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；
组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加5～10倍体积的注射用水，在2～8℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②用0.5～2M的盐酸溶液调节pH至6.45～7.10，用0.5～2M的NaCl溶液调节电导率至1.2～1.5ms/cm，层析纯化；③用0.5～2M的盐酸溶液调节pH至4.30～4.80，用1～6℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
进一步优选为：组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8～14倍注射用水，在3～7℃下溶解；②调节pH至5.10～5.20；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至17～19％；④调节温度至-5.5～-4.5℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，调节pH至7.30～7.50；②调节离子强度至0.04～0.06；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24～26％；④调节温度至-10.0～-9.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加5～10倍体积的注射用水，在3～7℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②用0.5～2M的盐酸溶液调节pH至6.50～7.00，用0.5～2M的NaCl溶液调节电导率至1.3～1.4ms/cm，层析纯化；③用0.5～2M的盐酸溶液调节pH至4.30～4.60，用2～5℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
进一步优选为：组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8～14倍注射用水，在3～7℃下溶解；②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.10～5.20；③加入≤-15℃且体积浓度为92～98％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至17～19％；④调节温度至-5.5～-4.5℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.30～7.50；②加入NaCl调节离子强度至0.04～0.06；③加入≤-15℃且体积浓度为92～98％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24～26％；④调节温度至-10.0～-9.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；
组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加5～10倍体积的注射用水，在3～7℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②用0.8～1.5M的盐酸溶液调节pH至6.50～7.00，用0.8～1.5M的NaCl溶液调节电导率至1.3～1.4ms/cm，层析纯化；③用0.8～1.5M的盐酸溶液调节pH至4.30～4.60，用2～5℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
进一步优选为：所述高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml。
进一步优选为：组分II的纯化步中，层析纯化的条件为：采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化。
进一步优选为：高效价原料血浆制备组分II+III的步骤为：按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III。
进一步优选为：中间品的制备包括如下步骤：①取蛋白浓缩液，用0.5～2M的盐酸溶液调节pH至3.7～4.5；②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至85～120g/l，蛋白含量至45～70g/l；③过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；④纳米膜过滤，取滤液进入下一步；⑤滤液用1～6℃注射用水等倍透析多次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，调节pH至6.5～7.4；
原液的制备包括如下步骤：①加入NaCl和注射用水，调节Na+至125～160mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
进一步优选为：中间品的制备包括如下步骤：①取蛋白浓缩液，用0.8～1.5M的盐酸溶液调节pH至3.8～4.4；②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至90～110g/l，蛋白含量至50～65g/l；③过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；④纳米膜过滤，取滤液进入下一步；⑤滤液用2～5℃注射用水等倍透析多次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用0.8～1.5M的NaOH调节pH至6.6～7.2；原液的制备包括如下步骤：①加入NaCl和注射用水，调节Na+至130～150mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
综上所述，本发明具有以下有益效果：本申请的制备方法制备得到的乙肝人免疫球蛋白的含量、纯度和抗-HBs效价均明显优于现有技术；本申请的制备方法制备得到的乙肝人免疫球蛋白的不同生产批次中各组分的纯度都比较接近而且都在预期的标准范围内，制备过程可以稳定控制工艺环节的蛋白分离纯化效果。
具体实施方式
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的保护范围内都受到专利法的保护。
实施例1：一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，包括如下步骤：
(1)组分II+III的制备
按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III，高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml；
(2)组分II的制备
i、组分III的分离
①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入12倍体积的注射用水，在5℃下溶解；
②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.15；
③加入≤-15℃且体积浓度为95％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至18％；
④调节温度至-5.0℃，分离组分III；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤液进入下一步；
ii、组分II的分离
①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.40；
②加入NaCl调节离子强度至0.05；
③加入≤-15℃且体积浓度为95％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至25％；
④调节温度至-9.5℃，分离组分II；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤饼进入下一步；
iii、组分II的纯化
①取滤饼，加7倍体积的注射用水，在5℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；
②用1.0M的盐酸溶液调节pH至6.70，用1.0M的NaCl溶液调节电导率至1.3ms/cm，采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化；
③用1.0M的盐酸溶液调节pH至4.45，用3℃注射用水等倍透析6次，将蛋白液浓缩至≥60g/L；
(3)中间品的制备
①取步骤(2)蛋白浓缩液，用1.0M的盐酸溶液调节pH至4.0；
②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至100g/l，蛋白含量至60g/l；
③通过0.2μm除菌滤器过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；
④DV-50纳米膜过滤，取滤液进入下一步；
⑤滤液用3℃注射用水等倍透析三次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用1.0M的NaOH调节pH至7.0；
(4)原液的制备
①加入NaCl和注射用水，调节Na+至140mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过0.2μm除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
实施例2：一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，包括如下步骤：
(1)组分II+III的制备
按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III，高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml；
(2)组分II的制备
i、组分III的分离
①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8倍体积的注射用水，在3℃下溶解；
②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.10；
③加入≤-15℃且体积浓度为92％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至19％；
④调节温度至-5.5℃，分离组分III；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤液进入下一步；
ii、组分II的分离
①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.30；
②加入NaCl调节离子强度至0.04；
③加入≤-15℃且体积浓度为92％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24％；
④调节温度至-10.0℃，分离组分II；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤饼进入下一步；
iii、组分II的纯化
①取滤饼，加5倍体积的注射用水，在3℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；
②用0.8M的盐酸溶液调节pH至7.00，用0.8M的NaCl溶液调节电导率至1.3ms/cm，采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化；
③用0.8M的盐酸溶液调节pH至4.30，用2℃注射用水等倍透析6次，将蛋白液浓缩至≥60g/L；
(3)中间品的制备
①取步骤(2)蛋白浓缩液，用0.8M的盐酸溶液调节3.8；
②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至90g/l，蛋白含量至50g/l；
③通过0.2μm除菌滤器过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；
④DV-50纳米膜过滤，取滤液进入下一步；
⑤滤液用2℃注射用水等倍透析三次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用0.8M的NaOH调节pH至6.6；
(4)原液的制备
①加入NaCl和注射用水，调节Na+至130mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过0.2μm除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
实施例3：一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，包括如下步骤：
(1)组分II+III的制备
按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III，高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml；
(2)组分II的制备
i、组分III的分离
①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入14倍体积的注射用水，在7℃下溶解；
②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.20；
③加入≤-15℃且体积浓度为98％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至17％；
④调节温度至-4.5℃，分离组分III；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤液进入下一步；
ii、组分II的分离
①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.50；
②加入NaCl调节离子强度至0.06；
③加入≤-15℃且体积浓度为98％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至26％；
④调节温度至-9.0℃，分离组分II；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤饼进入下一步；
iii、组分II的纯化
①取滤饼，加10倍体积的注射用水，在7℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；
②用1.5M的盐酸溶液调节pH至6.50，用1.5M的NaCl溶液调节电导率至1.4ms/cm，采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化；
③用1.5M的盐酸溶液调节pH至4.60，用5℃注射用水等倍透析6次，将蛋白液浓缩至≥60g/L；
(3)中间品的制备
①取步骤(2)蛋白浓缩液，用1.5M的盐酸溶液调节pH至4.4；
②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至110g/l，蛋白含量至65g/l；
③通过0.2μm除菌滤器过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；
④DV-50纳米膜过滤，取滤液进入下一步；
⑤滤液用5℃注射用水等倍透析三次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用1.5M的NaOH调节pH至7.2；
(4)原液的制备
①加入NaCl和注射用水，调节Na+至150mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过0.2μm除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
实施例4：一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，包括如下步骤：
(1)组分II+III的制备
按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III，高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml；
(2)组分II的制备
i、组分III的分离
①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入13倍体积的注射用水，在2℃下溶解；
②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.00；
③加入≤-15℃且体积浓度为90％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至20％；
④调节温度至-5.8℃，分离组分III；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤液进入下一步；
ii、组分II的分离
①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.20；
②加入NaCl调节离子强度至0.03；
③加入≤-15℃且体积浓度为90％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24％；
④调节温度至-12.0℃，分离组分II；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤饼进入下一步；
iii、组分II的纯化
①取滤饼，加5倍体积的注射用水，在2℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；
②用0.5M的盐酸溶液调节pH至7.00，用0.5M的NaCl溶液调节电导率至1.2ms/cm，采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化；
③用0.5M的盐酸溶液调节pH至4.30，用1℃注射用水等倍透析7次，将蛋白液浓缩至≥60g/L；
(3)中间品的制备
①取步骤(2)蛋白浓缩液，用0.5M的盐酸溶液调节pH至3.7；
②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至85g/l，蛋白含量至45g/l；
③通过0.2μm除菌滤器过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；
④DV-50纳米膜过滤，取滤液进入下一步；
⑤滤液用1℃注射用水等倍透析2次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用0.5M的NaOH调节pH至6.5；
(4)原液的制备
①加入NaCl和注射用水，调节Na+至125mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过0.2μm除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
实施例5：一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，包括如下步骤：
(1)组分II+III的制备
按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III，高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml；
(2)组分II的制备
i、组分III的分离
①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入9倍体积的注射用水，在8℃下溶解；
②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.30；
③加入≤-15℃且体积浓度为99％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至16％；
④调节温度至-4.0℃，分离组分III；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤液进入下一步；
ii、组分II的分离
①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.55；
②加入NaCl调节离子强度至0.06；
③加入≤-15℃且体积浓度为99％的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至27％；
④调节温度至-8.0℃，分离组分II；
⑤依次使用5μm和2μm的滤板过滤反应液，取滤饼进入下一步；
iii、组分II的纯化
①取滤饼，加10倍体积的注射用水，在8℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；
②用2.0M的盐酸溶液调节pH至6.40，用2.0M的NaCl溶液调节电导率至1.5ms/cm，采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化；
③用2.0M的盐酸溶液调节pH至4.80，用6℃注射用水等倍透析8次，将蛋白液浓缩至≥60g/L；
(3)中间品的制备
①取步骤(2)蛋白浓缩液，用2.0M的盐酸溶液调节pH至4.5；
②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至120g/l，蛋白含量至70g/l；
③通过0.2μm除菌滤器过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；
④DV-50纳米膜过滤，取滤液进入下一步；
⑤滤液用6℃注射用水等倍透析四次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用2.0M的NaOH调节pH至7.4；
(4)原液的制备
①加入NaCl和注射用水，调节Na+至160mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过0.2μm除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
性能测试
测试样品：实施例1-5以及参照样。参照样参照CN101161232A的实施例1制备。
1、乙型肝炎人免疫球蛋白的蛋白含量、纯度和抗-HBs效价的测试：每个测试样品平行试验3次，对制备过程中的乙型肝炎人免疫球蛋白的蛋白含量、纯度和抗-HBs效价进行检测。
蛋白质含量：采用双缩脲法测定，《中国药典》2010版三部通则0731。
抗-HBs效价：采用经验证的酶联免疫方法测定。
纯度：采用《中国药典》2010版三部通则0541第二法。
测试结果如表1所示，与对照样相比，实施例1-5的含量、纯度和抗-HBs效价均优于对照样，且实施例1-5的不同生产批次中各组分的纯度都比较接近而且都在预期的标准范围内，表明实施例1-5的工艺可以稳定控制工艺环节的蛋白分离纯化效果。
表1 乙型肝炎人免疫球蛋白各组分蛋白含量、纯度和抗-HBs效价检测表

Claims (9)

1.一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，包括组分II+III的制备、组分III的分离、组分II的分离、组分II的纯化、中间品的制备和原液的制备，
组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8~14倍注射用水，在2~8℃下溶解；②调节pH至5.00~5.30；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至16~20%；④调节温度至-5.8~-4.0℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，调节pH至7.20~7.55；②调节离子强度至0.03~0.06；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24~27%；④调节温度至-12.0~-8.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；
组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加注射用水，在2~8℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②调节pH至6.45~7.10，调节电导率至1.2~1.5ms/cm，层析纯化；③调节pH至4.30~4.80，用1~6℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
2.根据权利要求1所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，
组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8~14倍注射用水，在2~8℃下溶解；②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.00~5.30；③加入≤-15℃且体积浓度为90~99%的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至16~20%；④调节温度至-5.8~-4.0℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.20~7.55；②加入NaCl调节离子强度至0.03~0.06；③加入≤-15℃且体积浓度为90~99%的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24~27%；④调节温度至-12.0~-8.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；
组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加5~10倍体积的注射用水，在2~8℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②用0.5~2M的盐酸溶液调节pH至6.45~7.10，用0.5~2M的NaCl溶液调节电导率至1.2~1.5ms/cm，层析纯化；③用0.5~2M的盐酸溶液调节pH至4.30~4.80，用1~6℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
3.根据权利要求1所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，
组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8~14倍注射用水，在3~7℃下溶解；②调节pH至5.10~5.20；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至17~19%；④调节温度至-5.5~-4.5℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，调节pH至7.30~7.50；②调节离子强度至0.04~0.06；③加入≤-15℃的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24~26%；④调节温度至-10.0~-9.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；
组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加5~10倍体积的注射用水，在3~7℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②用0.5~2M的盐酸溶液调节pH至6.50~7.00，用0.5~2M的NaCl溶液调节电导率至1.3~1.4ms/cm，层析纯化；③用0.5~2M的盐酸溶液调节pH至4.30~4.60，用2~5℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
4.根据权利要求3所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，
组分III的分离包括如下步骤：①取高效价原料血浆制备的组分II+III，加入8~14倍注射用水，在3~7℃下溶解；②用HAc-NaAc缓冲液调节pH至5.10~5.20；③加入≤-15℃且体积浓度为92~98%的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至17~19%；④调节温度至-5.5~-4.5℃，分离组分III；⑤过滤反应液，取滤液进入下一步；
组分II的分离包括如下步骤：①取滤液，用NaHCO3调节pH至7.30~7.50；②加入NaCl调节离子强度至0.04~0.06；③加入≤-15℃且体积浓度为92~98%的乙醇溶液，调节乙醇的体积浓度至24~26%；④调节温度至-10.0~-9.0℃，分离组分II；⑤过滤反应液，取滤饼进入下一步；
组分II的纯化包括如下步骤：①取滤饼，加5~10倍体积的注射用水，在3~7℃下溶解，溶解后过滤除去杂质；②用0.8~1.5M的盐酸溶液调节pH至6.50~7.00，用0.8~1.5M的NaCl溶液调节电导率至1.3~1.4ms/cm，层析纯化；③用0.8~1.5M的盐酸溶液调节pH至4.30~4.60，用2~5℃注射用水等倍透析多次，将蛋白液浓缩至≥60g/L。
5.根据权利要求1所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，所述高效价原料血浆的抗-HBs效价≥8IU/ml。
6.根据权利要求1任一项所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，组分II的纯化步中，层析纯化的条件为：采用与滤液相同条件的磷酸缓冲液进行DEAE-Sepharose FF凝胶的平衡和制品层析纯化。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，高效价原料血浆制备组分II+III的步骤为：按照0，1，2月三针复免免疫程序，采用乙肝疫苗免疫供血浆者，获得抗-HBs效价≥8IU/ml的组分II+III。
8.根据权利要求1-6任一项所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，
中间品的制备包括如下步骤：①取蛋白浓缩液，用0.5~2M的盐酸溶液调节pH至3.7~4.5；②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至85~120g/l，蛋白含量至45~70g/l；③过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；④纳米膜过滤，取滤液进入下一步；⑤滤液用1~6℃注射用水等倍透析多次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，调节pH至6.5~7.4；
原液的制备包括如下步骤：①加入NaCl和注射用水，调节Na+至125~160mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
9.根据权利要求8所述的一种乙肝人免疫球蛋白的制备工艺，其特征在于，
中间品的制备包括如下步骤：①取蛋白浓缩液，用0.8~1.5M的盐酸溶液调节pH至3.8~4.4；②加入麦芽糖和注射用水，调节麦芽糖含量至90~110g/l，蛋白含量至50~65g/l；③过滤，取滤液低pH孵放病毒灭活；④纳米膜过滤，取滤液进入下一步；⑤滤液用2~5℃注射用水等倍透析多次，将抗-HBs效价浓缩至≥120IU/ml，用0.8~1.5M的NaOH调节pH至6.6~7.2；
原液的制备包括如下步骤：①加入NaCl和注射用水，调节Na+至130~150mmol/l，且抗-HBs效价≥120IU/ml；②将制品通过除菌滤器进行过滤，滤液即为产品。
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