CN107748254A - 一种n‑端脑利钠肽前体检测试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种N‑端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和R2；试剂R1包含：缓冲液15‑40mmol/L、PEG‑6000 0.5‑2.5％、蔗糖0.1‑0.5g/L、海藻糖0.1‑0.5g/L、牛血清白蛋白5‑15g/L、防腐剂0.2‑0.8g/L；试剂R2包含：缓冲液15‑40mmol/L、牛血清白蛋白10‑30g/L、表面活性剂1.5‑5.5g/L、胶乳微球0.2‑1.2％、防腐剂0.2‑1.2g/L、N‑端脑利钠肽前体抗体0.1‑2.0％、聚乙烯吡咯烷酮3‑5g/L。本发明的优点在于：试剂盒成本低、特异性强、灵敏度高、稳定性好，可定量检测N‑端脑利钠肽前体的含量。

Description

一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，更具体涉及一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒及其应用。
背景技术
心血管疾病是目前危害人类健康的重要疾病之一，中国每年因该疾病入院病人在三千多万，死于该疾病的有三百多万人，而且每年呈上升趋势。所以，利用合适的医疗设备对心血管疾病的诊断、治疗和康复已成为一个引起全球性重视的话题。N-端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)是B型利钠肽激素原分裂后无活性的N端碎片，是典型的心脏标志物，主要在心肌细胞所受容量负荷增高时由左心室分泌。N-端脑利钠肽前体的应用在于协助诊断充血性心力衰竭，判断病情的严重程度和预后，以及指导治疗已经取得了医学界的广泛关注。
迄今，已有多篇相关的研究论文发表于新英格兰医学杂志、循环医学、美国心脏病学院杂志等权威杂志上。这些论文探讨了诸如NT-ProBNP在心衰急诊诊断中的作用、快速NT-ProBNP检测用于区别充血性心衰或肺部疾患导致的呼吸困难的病人等问题，为心衰的诊断和评估开辟了一个崭新的领域。
目前市面上检测NT-ProBNP的试剂盒主要是以荧光免疫分析法、酶联免疫分析法的方式进行检测，这些方法成本高、准确度低。还需要配备特定的仪器进行配合检测，操作比较繁琐。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供了一种成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好、可定量检测血清中N-端脑利钠肽前体的含量的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒及其应用。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：
一方面提供一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
优选地，所述缓冲液选自HEPES缓冲液或硼酸缓冲液。
优选地，所述防腐剂选自HY-500防腐剂或叠氮钠。
优选地，所述表面活性剂选自S9或曲拉通-100。
优选地，所述胶乳微球的粒径为80nm。
另一方面，提供上述N-端脑利钠肽前体检测试剂盒在检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量中的应用。
优选地，所述应用通过以下步骤实现：
1)向比色杯中加入样本和试剂R1，混匀，37℃孵育1分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A1；
2)再向比色杯中添加试剂R2，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A2；
3)根据校准曲线计算出样本中N-端脑利钠肽前体抗原的含量。
优选地，按体积比计，样本：试剂R1：试剂R2＝1:80:40，且样本、试剂R1和试剂R2的总体积至少为比色杯总体积的2/3。
检测原理是在胶乳微球上包被N-端脑利钠肽前体多克隆抗体，N-端脑利钠肽前体多克隆抗体和样本中的N-端脑利钠肽前体抗原发生凝集反应，形成了抗原抗体复合物并产生浊度，该浊度的高低与样本中的N-端脑利钠肽前体抗原浓度成正相关，测定其吸光度值并根据校准曲线计算出N-端脑利钠肽前体抗原的含量。
应用本发明试剂盒，可以在日立系列、贝克曼系列、奥林巴斯系列、东芝系列、西门子系列、雅培系列、罗氏系列、希森美康系列、迈瑞系列、迪瑞系列全自动生化分析仪上进行使用。
本发明相比现有技术具有以下优点：
该试剂盒成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好，可定量检测血清中N-端脑利钠肽前体的含量；以一株高特异性，高敏感性NT-proBNP单克隆抗体为标记抗体，另一株单克隆抗体为捕获抗体，结合链亲和素-生物素放大系统，应用免疫金标层析技术，检测人血中NT-proBNP的含量。并且具有较高的检测灵敏度，操作简单、快速，从检测到出结果最多只需要5分钟，甚至更短。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
所有原料均为市购原料；所有配比中，对于固体，％表示g/100mL，对于液体，％表示mL/100mL。
实施例1
一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2。
其中，试剂R1的组分及含量为：
试剂R2的组分及含量为：
试剂R1的配制如下：
(1)按照上述试剂R1的组分含量，将牛血清白蛋白溶于HEPES缓冲液中，搅拌均匀，待充分溶解，即得分散液；
(2)按照试剂R1的组分含量，将PEG-6000、蔗糖、海藻糖、HY-500防腐剂溶于步骤(1)所制得的分散液中，搅拌均匀待所有原料充分溶解，即制得试剂R1。
试剂R2液的配制如下：
(1)按照试剂R2的组分含量，将牛血清白蛋白溶于HEPES缓冲液中，搅拌均匀，待充分溶解，即得分散液；
(2)按照试剂R2的组分含量，将S9、HY-500防腐剂、胶乳微球、聚乙烯吡咯烷酮溶于步骤(1)所制得的分散液中，搅拌均匀即得乳胶微球溶解试剂；
(3)采用化学偶联法将N-端脑利钠肽前体抗体包被到乳胶微球中，制得抗体胶乳；
(4)将步骤(3)制得的抗体胶乳离心去上清液，然后用步骤(2)制得的乳胶微球溶解试剂溶解沉淀物，使抗体胶乳的终浓度为1.0％，超声分散，制得试剂R2。
上述试剂盒在检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量中的应用通过以下步骤实现：
1)向比色杯中加入样本5.0μL和试剂R1 400μL，混匀，37℃孵育1分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A1；
2)再向比色杯中添加试剂R2 100μL，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A2；
3)根据校准曲线计算出样本中N-端脑利钠肽前体抗原(NT-proBNP)的含量。
在日立7180全自动生化分析仪上分析，具体方法如下：
主波长 340nm 副波长 450nm
测定方法 终点法 校准方法 多点
试剂样品比 100:1 反应方向 正反应
样品孵育时间 1分钟 测定时间 5分钟
样本中NT-proBNP含量(pg/mL)＝CS×ΔAT/ΔAS(pg/mL)
式中：ΔAT 以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS 以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS 校准液中NT-proBNP的浓度。
实施例2
一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2。
其中，试剂R1的组分及含量为：
试剂R2的组分及含量为：
按照实施例1的方法制备上述试剂盒并将上述试剂盒应用于检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量。
实施例3
一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2。
其中，试剂R1的组分及含量为：
试剂R2的组分及含量为：
按照实施例1的方法制备上述试剂盒并将上述试剂盒应用于检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量。
实施例4
一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2。
其中，试剂R1的组分及含量为：
试剂R2的组分及含量为：
按照实施例1的方法制备上述试剂盒并将上述试剂盒应用于检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量。
实施例5
一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2。
其中，试剂R1的组分及含量为：
试剂R2的组成和含量为：
按照实施例1的方法制备上述试剂盒并将上述试剂盒应用于检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量。
该试剂盒成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好，可定量检测血清中N-端脑利钠肽前体的含量；本发明的试剂盒以一株高特异性，高敏感性NT-proBNP单克隆抗体为标记抗体，另一株单克隆抗体为捕获抗体，结合链亲和素-生物素放大系统，应用免疫金标层析技术，检测人血中NT-proBNP的含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，包含体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
其中，所述试剂R1的组分及含量为：
所述试剂R2的组分及含量为：
2.根据权利要求1所述的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液选自HEPES缓冲液或硼酸缓冲液。
3.根据权利要求1所述的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂选自HY-500防腐剂或叠氮钠。
4.根据权利要求1所述的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂选自S9或曲拉通-100。
5.根据权利要求1所述的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球的粒径为80nm。
6.权利要求1至5中任一项所述的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒在检测样本中N-端脑利钠肽前体的含量中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用通过以下步骤实现：
1)向比色杯中加入样本和试剂R1，混匀，37℃孵育1分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A1；
2)再向比色杯中添加试剂R2，混匀，37℃孵育5分钟，置入全自动生化分析仪中，读取吸光度A2；
3)根据校准曲线计算出样本中N-端脑利钠肽前体抗原的含量。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，按体积比计，样本：试剂R1：试剂R2＝1:80:40，且样本、试剂R1和试剂R2的总体积至少为比色杯总体积的2/3。
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