CN107727868A - 一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒,包括试剂R1:硼酸缓冲液、PEG‑6000、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白、HY‑500防腐剂,溶剂为纯化水;试剂R2:硼酸缓冲液、牛血清白蛋白、S9、胶乳微球、HY‑500防腐剂、S100β蛋白抗体、PVP,溶剂为纯化水。本发明还公开了一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法。本发明是优点在于:(1)具有较高的检测灵敏度和准确性,操作简单、快速;(2)稳定性好,在2‑8℃至少可以保存12个月;(3)是采用胶乳增强免疫透射比浊法的S100β蛋白试剂盒,操作成本低、特异性强;(4)适合全自动测试,可大规模的开展和推广。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域,尤其涉及一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
s100β蛋白又叫中枢神经特异蛋白,也有学者将s100β蛋白描述为脑的“C反应蛋白”。一定生理浓度的s100β蛋白具有神经营养作用,高浓度的s100β蛋白具有神经毒性,S100β蛋白的过表达将增加大脑对缺血缺氧的易感性,导致神经元的凋亡。
目前市面上用于S100β蛋白检测的产品主要是以荧光免疫分析法、酶联免疫分析法的方式进行检测,这些方法成本高、准确度低,还需要配备特定的仪器进行配合检测,操作比较繁琐。
因此,目前急需一种采用其他检测方法,且能获得成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好的新的S100β蛋白检测产品,以定量检测血清中S100β蛋白的含量。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供了一种成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高的稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法。
本发明是通过以下技术方案实现的:一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒,包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分,包括的成分及相应含量为:
试剂R1:
试剂R2:
一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法,包括如下步骤:
(1)将待测样品与试剂R1混合,37℃孵育1min;
(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1;
(3)再与试剂R2混合,37℃孵育5min;
(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2;
(5)根据吸光度变化值计算出样本中的s100β蛋白的含量。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为2:1。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(2)和步骤(4)中,在主波长380nm、副波长405nm处测定吸光度A1和A2。
作为本发明的优选方式之一,所述步骤(5)中,吸光度变化值为ΔA,即A1减去A2后的值。
本发明的检测原理:在胶乳颗粒上包被S100β蛋白多克隆抗体,S100β蛋白多克隆抗体和样本中的S100β蛋白抗原发生凝集反应,形成了抗原抗体复合物并产生浊度,该浊度的高低与样本中的S100β蛋白抗原浓度成正相关,测定其吸光度值并根据校准曲线计算出S100β蛋白抗原的含量。
本发明相比现有技术的优点在于:
(1)本发明试剂盒具有较高的检测灵敏度和准确性,操作简单、快速,从检测到出结果最多只需要6分钟;
(2)本发明试剂盒试剂R2中的S100β蛋白抗体结合胶乳微球得到的S100β蛋白抗体胶乳颗粒的制备由于采用的化学偶联法,稳定性好,在2-8℃至少可以保存12个月;
(3)本发明为采用胶乳增强免疫透射比浊法的S100β蛋白试剂盒,操作成本低、特异性强;
(4)本发明可用于全自动生化分析仪上,适合全自动测试,可大规模的开展和推广。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明,本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒,包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分,包括的成分及相应含量为:
试剂R1:
试剂R2:
实施例2
本实施例的一种上述实施例中稳定的s100β蛋白检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
(1)配制试剂R1:
①按照上述实施例中试剂R1的组分含量,将牛血清白蛋白溶于硼酸缓冲液中,搅拌均匀,待充分溶解,配制成R1分散液;
②按照上述实施例中试剂R1的组分含量,将PEG-6000、蔗糖、海藻糖、HY-500防腐剂溶于R1分散液中,搅拌均匀,待所有原料充分溶解,即制得试剂R1;
(2)配制试剂R2:
①按照上述实施例中试剂R2的组分含量,将牛血清白蛋白溶于硼酸缓冲液中,搅拌均匀,待充分溶解,配制成R2一次分散液;
②按照上述实施例中试剂R2的组分含量,将S9、HY-500防腐剂、胶乳微球、PVP于R2分散液中,搅拌均匀,即得R2分散液;
③S100β蛋白抗体的标记工艺:
a.将粒径为150nm的胶乳颗粒用0.5mmol/L的PBS缓冲液清洗2遍,每次15000rpm转速下离心15min,吸去上清液;然后用0.5mmol/L的PBS缓冲液稀释胶乳颗粒到浓度为3%,每毫升体积溶液中加入S9 0.5mg,混匀,室温摇晃反应0.5小时,15000rpm转速下离心10min,去上清,将沉淀悬浮于50mmol/L的硼酸缓冲液中,超声分散;
b.再于15000rpm转速下离心1.5min,弃上清,将沉淀悬浮于100mmol/L的硼酸缓冲液中,使得胶乳颗粒最终浓度为5.0%,超声分散,边搅拌边加入三分之一体积的S100β抗体,混合搅拌,室温反应2h;
c.15000rpm转速下离心35min,弃上清,将包被好的抗体加入一倍的100mmol/L的硼酸缓冲液中,超声分散,加入BSA,4℃封闭30min,离心去上清,加入一倍的100mmol/L的硼酸缓冲液稀释,超声分散,4℃过夜保存,得最终所需的S100β蛋白抗体胶乳颗粒;
④用R2分散液来溶解得到的S100β蛋白抗体胶乳颗粒,使其中的胶乳颗粒终浓度为1.0%,超声分散,最终制得试剂R2。
实施例3
本实施例的一种上述实施例中稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法,包括如下步骤:
(1)将12μL待测样品与400μL试剂R1混合,37℃孵育1min;
(2)用全自动生化分析仪在主波长380nm、副波长405nm处测定反应后的吸光度A1;
(3)再与200μL试剂R2混合,37℃孵育5min;
(4)用全自动生化分析仪在主波长380nm、副波长405nm处测定反应后的吸光度A2;
(5)根据吸光度变化值“ΔA=A1-A2”计算出样本中的s100β蛋白的含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒,其特征在于,包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分,包括的成分及相应含量为:
试剂R1:
其溶剂为纯化水;
试剂R2:
其溶剂为纯化水。
2.一种使用如权利要求1所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将待测样品与试剂R1混合,37℃孵育1min;
(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1;
(3)再与试剂R2混合,37℃孵育5min;
(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2;
(5)根据吸光度变化值计算出样本中的s100β蛋白的含量。
3.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法,其特征在于,所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为2:1。
4.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法,其特征在于,所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。
5.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法,其特征在于,所述步骤(2)和步骤(4)中,在主波长380nm、副波长405nm处测定吸光度A1和A2。
6.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法,其特征在于,所述步骤(5)中,吸光度变化值为ΔA,即A1减去A2后的值。
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