CN107727868A - 一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒，包括试剂R1：硼酸缓冲液、PEG‑6000、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白、HY‑500防腐剂，溶剂为纯化水；试剂R2：硼酸缓冲液、牛血清白蛋白、S9、胶乳微球、HY‑500防腐剂、S100β蛋白抗体、PVP，溶剂为纯化水。本发明还公开了一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法。本发明是优点在于：(1)具有较高的检测灵敏度和准确性，操作简单、快速；(2)稳定性好，在2‑8℃至少可以保存12个月；(3)是采用胶乳增强免疫透射比浊法的S100β蛋白试剂盒，操作成本低、特异性强；(4)适合全自动测试，可大规模的开展和推广。

Description

一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
s100β蛋白又叫中枢神经特异蛋白，也有学者将s100β蛋白描述为脑的“C反应蛋白”。一定生理浓度的s100β蛋白具有神经营养作用，高浓度的s100β蛋白具有神经毒性，S100β蛋白的过表达将增加大脑对缺血缺氧的易感性，导致神经元的凋亡。
目前市面上用于S100β蛋白检测的产品主要是以荧光免疫分析法、酶联免疫分析法的方式进行检测，这些方法成本高、准确度低，还需要配备特定的仪器进行配合检测，操作比较繁琐。
因此，目前急需一种采用其他检测方法，且能获得成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好的新的S100β蛋白检测产品，以定量检测血清中S100β蛋白的含量。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高的稳定的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育1min；
(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1；
(3)再与试剂R2混合，37℃孵育5min；
(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；
(5)根据吸光度变化值计算出样本中的s100β蛋白的含量。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为2:1。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)和步骤(4)中，在主波长380nm、副波长405nm处测定吸光度A1和A2。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即A1减去A2后的值。
本发明的检测原理：在胶乳颗粒上包被S100β蛋白多克隆抗体，S100β蛋白多克隆抗体和样本中的S100β蛋白抗原发生凝集反应，形成了抗原抗体复合物并产生浊度，该浊度的高低与样本中的S100β蛋白抗原浓度成正相关，测定其吸光度值并根据校准曲线计算出S100β蛋白抗原的含量。
本发明相比现有技术的优点在于：
(1)本发明试剂盒具有较高的检测灵敏度和准确性，操作简单、快速，从检测到出结果最多只需要6分钟；
(2)本发明试剂盒试剂R2中的S100β蛋白抗体结合胶乳微球得到的S100β蛋白抗体胶乳颗粒的制备由于采用的化学偶联法，稳定性好，在2-8℃至少可以保存12个月；
(3)本发明为采用胶乳增强免疫透射比浊法的S100β蛋白试剂盒，操作成本低、特异性强；
(4)本发明可用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
实施例2
本实施例的一种上述实施例中稳定的s100β蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1：
①按照上述实施例中试剂R1的组分含量，将牛血清白蛋白溶于硼酸缓冲液中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1分散液；
②按照上述实施例中试剂R1的组分含量，将PEG-6000、蔗糖、海藻糖、HY-500防腐剂溶于R1分散液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；
(2)配制试剂R2：
①按照上述实施例中试剂R2的组分含量，将牛血清白蛋白溶于硼酸缓冲液中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2一次分散液；
②按照上述实施例中试剂R2的组分含量，将S9、HY-500防腐剂、胶乳微球、PVP于R2分散液中，搅拌均匀，即得R2分散液；
③S100β蛋白抗体的标记工艺：
a.将粒径为150nm的胶乳颗粒用0.5mmol/L的PBS缓冲液清洗2遍，每次15000rpm转速下离心15min，吸去上清液；然后用0.5mmol/L的PBS缓冲液稀释胶乳颗粒到浓度为3％，每毫升体积溶液中加入S9 0.5mg，混匀，室温摇晃反应0.5小时，15000rpm转速下离心10min，去上清，将沉淀悬浮于50mmol/L的硼酸缓冲液中，超声分散；
b.再于15000rpm转速下离心1.5min，弃上清，将沉淀悬浮于100mmol/L的硼酸缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为5.0％，超声分散，边搅拌边加入三分之一体积的S100β抗体，混合搅拌，室温反应2h；
c.15000rpm转速下离心35min，弃上清，将包被好的抗体加入一倍的100mmol/L的硼酸缓冲液中，超声分散，加入BSA，4℃封闭30min，离心去上清，加入一倍的100mmol/L的硼酸缓冲液稀释，超声分散，4℃过夜保存，得最终所需的S100β蛋白抗体胶乳颗粒；
④用R2分散液来溶解得到的S100β蛋白抗体胶乳颗粒，使其中的胶乳颗粒终浓度为1.0％，超声分散，最终制得试剂R2。
实施例3
本实施例的一种上述实施例中稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将12μL待测样品与400μL试剂R1混合，37℃孵育1min；
(2)用全自动生化分析仪在主波长380nm、副波长405nm处测定反应后的吸光度A1；
(3)再与200μL试剂R2混合，37℃孵育5min；
(4)用全自动生化分析仪在主波长380nm、副波长405nm处测定反应后的吸光度A2；
(5)根据吸光度变化值“ΔA＝A1-A2”计算出样本中的s100β蛋白的含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种稳定的s100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
其溶剂为纯化水。
2.一种使用如权利要求1所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育1min；
(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1；
(3)再与试剂R2混合，37℃孵育5min；
(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；
(5)根据吸光度变化值计算出样本中的s100β蛋白的含量。
3.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为2:1。
4.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。
5.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(4)中，在主波长380nm、副波长405nm处测定吸光度A1和A2。
6.根据权利要求2所述的稳定的s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即A1减去A2后的值。
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