CN107721825B - 一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：（1）预处理：将大麦芽粉碎后，加入水中，搅拌，然后，加入虎杖，搅拌，加热1.5h，然后超声处理；取出虎杖后用水清洗，沥干水分；然后烘干，自然冷却后，用香菇熏蒸2‑3h；然后烘干，得到预处理过的虎杖；（2）酶处理：将预处理过的虎杖，粉碎，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α‑淀粉酶、氯化钙，加入pH调节剂调节体系的pH为5.0，进行酶解；（3）醇提：用乙醇提取；（4）水沉除杂；（5）结晶分离。本发明通过采用食材对虎杖进行预处理，然后采用酶处理，制备方法绿色环保，可以同时提取白藜芦醇及虎杖甙，产品得率高，纯度好。

Description

一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法。
背景技术
虎杖( polygonum cusp idtum sieb)为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖的干燥根茎,主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份，其中二苯乙烯类是虎杖的主要功效成分,主要为白藜芦醇(3, 4′,5-三羟基-二苯乙烯)和虎杖甙(白藜芦醇苷) ，具有保护心脏、抗血栓、降血脂等药理作用。白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近,但其极性却相差较大。白藜芦醇是非黄酮类的多酚化合物，白色针状晶体，难溶于水，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸、乙酯等有机溶剂，在波长365nm的紫外光照射下能产生荧光，并能和三氯化铁-铁氰化钾起显色反应。虎杖甙，别名白藜芦醇甙、白藜芦醇苷、云杉新甙，白色针状结晶粉末，易溶于甲醇、乙醇、丙酮，微溶于水、乙酸乙酯、醋酸丁酯等，不溶于乙醚、石油醚等。
虎杖是一种常见的传统中药,资源丰富、价格低廉,利用简单的工艺提取出有效成分,将大大增加其经济价值；目前，提取虎杖中有效成分的方法主要为醇提，有些还经过有机溶剂萃取，但是存在工艺流程时间长、产品得率和纯度较低等问题，使得虎杖资源为得到充分利用。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明旨在提供一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，该方法的产品得率高，而且纯度高。
一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：将大麦芽粉碎后，按照料液比1g：100mL加入水中，搅拌，然后按照大麦芽和虎杖的质量比为1:10加入虎杖，搅拌，在50-65℃下搅拌加热1.5h，然后在功率200-300W下超声处理10-20min；取出虎杖后用水清洗，沥干水分；然后在70-80℃下烘干2h，再在95-105℃下烘干2h；取出自然冷却后，用香菇熏蒸2-3h；然后在90-100℃下烘干4-5h，得到预处理过的虎杖；
（2）酶处理：取预处理过的虎杖，粉碎，过30-40目，按照料液比1g：4 mL加入水，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙，加入pH调节剂调节体系的pH为5.0，搅拌，在45-50℃下酶解10h，得到虎杖的酶处理液；
（3）醇提：用乙醇提取，过滤，滤液经过减压浓缩得到浸膏；
（4）水沉除杂，得到虎杖提取物粗品；
（5）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离。
步骤（1）中香菇熏蒸的具体步骤为：按照香菇和虎杖的质量比为1:10称取香菇，切块后加入蒸锅内，加入水，水保持沸腾状态，将虎杖置于蒸笼上。
步骤（2）酶处理中，所述酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙的加入量分别为25-30 U/mL、25-30 U/mL、15 -25 U/mL、0.05- 0.15g/100mL。
步骤（2）中，所述pH调节剂为盐酸、硫酸、乳酸或者乙酸中的至少一种。
步骤（3）醇提中，用乙醇提取的具体操作为：在虎杖的酶处理液中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩20-25min，得到浸膏。
步骤（4）水沉除杂的具体操作为：将步骤（3）得到的浸膏加入3-5倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，去除脂溶性色素、脂类以及水溶性杂质，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥6-8h，得到粉末状的虎杖提取物粗品。
步骤（5）中硅胶柱分离的具体操作为：按照质量比为1：（2-3），将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液。
步骤（5）中加入乙醚进行结晶分离的具体操作为：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:（3-5），向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在80-85℃下干燥3-4h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在80-85℃下干燥3-4h，得到白藜芦醇纯品。
本发明的优点：
本发明通过采用食材对虎杖进行预处理，然后采用酶处理，制备方法绿色环保，可以同时提取白藜芦醇及虎杖甙，产品得率高，纯度好。
具体实施方式
虎杖原料：白藜芦醇含量为0.23%，虎杖甙含量为2.0%，本发明的每次实施例中，称取0.5kg的虎杖。
实施例1
一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：将大麦芽粉碎后，按照料液比1g：100mL加入水中，搅拌，然后按照大麦芽和虎杖的质量比为1:10加入虎杖，搅拌，在50℃下搅拌加热1.5h，然后在功率200W下超声处理20min；取出虎杖后用水清洗，沥干水分；然后在70℃下烘干2h，再在105℃下烘干2h；取出自然冷却后，按照香菇和虎杖的质量比为1:10称取香菇，切块后加入蒸锅内，加入水，水保持沸腾状态，将虎杖置于蒸笼上，用香菇熏蒸2h；然后，将虎杖在90℃下烘干5h，得到预处理过的虎杖；
（2）酶处理：取预处理过的虎杖，粉碎，过30目，按照料液比1g：4 mL加入水，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙，其中，酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙的加入量分别为30 U/mL、30 U/mL、15 U/mL、0.05g/100mL，加盐酸作为pH调节剂,调节体系的pH为5.0，搅拌，在45℃下酶解10h，得到虎杖的酶处理液；
（3）醇提：用乙醇提取，在虎杖的酶处理液中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩25min，得到浸膏；
（4）水沉除杂，将步骤（3）得到的浸膏加入3倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，去除脂溶性色素、脂类以及水溶性杂质，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥6h，得到粉末状的虎杖提取物粗品；
（5）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离，具体操作为：按照质量比为1：2，将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液；然后加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:3，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在80℃下干燥4h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在80℃下干燥4h，得到白藜芦醇纯品。
实施例2
一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：将大麦芽粉碎后，按照料液比1g：100mL加入水中，搅拌，然后按照大麦芽和虎杖的质量比为1:10加入虎杖，搅拌，在65℃下搅拌加热1.5h，然后在功率300W下超声处理10min；取出虎杖后用水清洗，沥干水分；然后在80℃下烘干2h，再在95℃下烘干2h；取出自然冷却后，按照香菇和虎杖的质量比为1:10称取香菇，切块后加入蒸锅内，加入水，水保持沸腾状态，将虎杖置于蒸笼上，用香菇熏蒸3h；然后，将虎杖在100℃下烘干4h，得到预处理过的虎杖；
（2）酶处理：取预处理过的虎杖，粉碎，过40目，按照料液比1g：4 mL加入水，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙，其中，酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙的加入量分别为25 U/mL、25U/mL、25U/mL、0.15g/100mL，加硫酸作为pH调节剂,调节体系的pH为5.0，搅拌，在50℃下酶解10h，得到虎杖的酶处理液；
（3）醇提：用乙醇提取，在虎杖的酶处理液中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩20min，得到浸膏；
（4）水沉除杂，将步骤（3）得到的浸膏加入5倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，去除脂溶性色素、脂类以及水溶性杂质，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥8h，得到粉末状的虎杖提取物粗品；
（5）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离，具体操作为：按照质量比为1：3，将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液；然后加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:5，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在85℃下干燥3h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在85℃下干燥3h，得到白藜芦醇纯品。
实施例3
一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：将大麦芽粉碎后，按照料液比1g：100mL加入水中，搅拌，然后按照大麦芽和虎杖的质量比为1:10加入虎杖，搅拌，在58℃下搅拌加热1.5h，然后在功率260W下超声处理15min；取出虎杖后用水清洗，沥干水分；然后在75℃下烘干2h，再在100℃下烘干2h；取出自然冷却后，按照香菇和虎杖的质量比为1:10称取香菇，切块后加入蒸锅内，加入水，水保持沸腾状态，将虎杖置于蒸笼上，用香菇熏蒸2.5h；然后，将虎杖在95℃下烘干4.5h，得到预处理过的虎杖；
（2）酶处理：取预处理过的虎杖，粉碎，过40目，按照料液比1g：4 mL加入水，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙，其中，酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙的加入量分别为27.5U/mL、27.5U/mL、20U/mL、0.10g/100mL，加入乳酸和乙酸作为pH调节剂,调节体系的pH为5.0，搅拌，在48℃下酶解10h，得到虎杖的酶处理液；
（3）醇提：用乙醇提取，在虎杖的酶处理液中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩23min，得到浸膏；
（4）水沉除杂，将步骤（3）得到的浸膏加入4倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，去除脂溶性色素、脂类以及水溶性杂质，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥7h，得到粉末状的虎杖提取物粗品；
（5）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离，具体操作为：按照质量比为1：3，将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液；然后加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:5，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在83℃下干燥3.5h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在83℃下干燥3.5h，得到白藜芦醇纯品。
对比例1（不进行步骤（1）的预处理，步骤（2）中只按照料液比1g：4 mL加入水，然后继续实施例3中的步骤（3）、（4）、（5），其他同实施例3）
一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）取虎杖，粉碎，过40目，按照料液比1g：4 mL加入水；
（2）醇提：用乙醇提取，向步骤（1）得到的混合液体中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩23min，得到浸膏；
（3）水沉除杂，将步骤（2）得到的浸膏加入4倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，去除脂溶性色素、脂类以及水溶性杂质，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥7h，得到粉末状的虎杖提取物粗品；
（4）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离，具体操作为：按照质量比为1：3，将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液；然后加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:5，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在83℃下干燥3.5h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在83℃下干燥3.5h，得到白藜芦醇纯品。
对比例2（不进行步骤（1）的预处理，直接进行酶处理，其他同实施例3）
一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）酶处理：取虎杖，粉碎，过40目，按照料液比1g：4 mL加入水，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙，其中，酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙的加入量分别为27.5U/mL、27.5U/mL、20U/mL、0.10g/100mL，加入乳酸和乙酸作为pH调节剂,调节体系的pH为5.0，搅拌，在48℃下酶解10h，得到虎杖的酶处理液；
（2）醇提：用乙醇提取，向步骤（1）得到的混合液体中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩23min，得到浸膏；
（3）水沉除杂，将步骤（2）得到的浸膏加入4倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，去除脂溶性色素、脂类以及水溶性杂质，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥7h，得到粉末状的虎杖提取物粗品；
（4）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离，具体操作为：按照质量比为1：3，将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，去除脂溶性色素、脂类等杂质，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液；然后加入乙醚进行结晶分离：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:5，向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在83℃下干燥3.5h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在83℃下干燥3.5h，得到白藜芦醇纯品。
对得到的白藜芦醇纯品和虎杖甙纯品，采用高效液相色谱检测其纯度，结果如表1所示。
表1 白藜芦醇纯品和虎杖甙纯品的检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE002
由表1可知，不采用预处理和酶处理时，虎杖甙和白藜芦醇的得率明显降低，纯度也降低；当采用酶处理时，虎杖甙和白藜芦醇的得率虽然提高，但是纯度却基本没有提高；而采用本发明提供的方法提取虎杖时，虎杖甙和白藜芦醇的得率和纯度都较高。

Claims (6)

1.一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，包括以下步骤：
（1）预处理：将大麦芽粉碎后，按照料液比1g：100mL加入水中，搅拌，然后按照大麦芽和虎杖的质量比为1:10加入虎杖，搅拌，在50-65℃下搅拌加热1.5h，然后在功率200-300W下超声处理10-20min；取出虎杖后用水清洗，沥干水分；然后在70-80℃下烘干2h，再在95-105℃下烘干2h；取出自然冷却后，用香菇熏蒸2-3h；然后在90-100℃下烘干4-5h，得到预处理过的虎杖；
（2）酶处理：取预处理过的虎杖，粉碎，过30-40目，按照料液比1g：4 mL加入水，然后加入酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙，加入pH调节剂调节体系的pH为5.0，搅拌，在45-50℃下酶解10h，得到虎杖的酶处理液；
（3）醇提：用乙醇提取，过滤，滤液经过减压浓缩得到浸膏；
（4）水沉除杂，得到虎杖提取物粗品；
（5）结晶分离：采用质量浓度为95%的乙醇为洗脱液进行硅胶柱分离，然后加入乙醚进行结晶分离；
其中，步骤（1）中香菇熏蒸的具体步骤为：按照香菇和虎杖的质量比为1:10称取香菇，切块后加入蒸锅内，加入水，水保持沸腾状态，将虎杖置于蒸笼上；
其中，步骤（5）中加入乙醚进行结晶分离的具体操作为：按照体积比1:1，向二氯甲烷-虎杖提取物溶液中加入乙醚，过滤，按照滤液与乙醚的体积比为1:（3-5），向滤液中加入乙醚，静置结晶12h，过滤，得到滤渣和乙醚母液，滤渣在80-85℃下干燥3-4h，即得到虎杖甙纯品；乙醚母液经减压分段蒸馏回收二氯甲烷和乙醚，然后按照虎杖提取物粗品与水的料液比1g:4mL加入水，静置12h，将沉淀过滤，在80-85℃下干燥3-4h，得到白藜芦醇纯品。
2.根据权利要求1所述一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，其特征在于：步骤（2）酶处理中，所述酸性蛋白酶、纤维素酶、α-淀粉酶、氯化钙的加入量分别为25-30 U/mL、25-30 U/mL、15 -25 U/mL、0.05- 0.15g/100mL。
3.根据权利要求1所述一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述pH调节剂为盐酸、硫酸、乳酸或者乙酸中的至少一种。
4.根据权利要求1所述一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，其特征在于：步骤（3）醇提中，用乙醇提取的具体操作为：在虎杖的酶处理液中加入乙醇，调整乙醇的质量浓度为70%，60℃加热回流1h，过滤，收集滤液，滤渣按照料液比1g：3 mL，用质量浓度为70%的乙醇提取2次，每次提取都是在60℃加热回流1h，合并3次滤液，将滤液在温度60-65℃、真空度-0.075至-0.081MPa下减压浓缩20-25min，得到浸膏。
5.根据权利要求1所述一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，其特征在于：步骤（4）水沉除杂的具体操作为：将步骤（3）得到的浸膏加入3-5倍质量的水中，搅拌均匀，静置12h，经抽滤，将得到的沉淀物在55℃-60℃、压力-0.081至-0.085MPa的条件下真空干燥6-8h，得到粉末状的虎杖提取物粗品。
6.根据权利要求1所述一种从虎杖中提取白藜芦醇及虎杖甙的方法，其特征在于：步骤（5）中硅胶柱分离的具体操作为：按照质量比为1：（2-3），将虎杖提取物粗品与200目的硅胶拌样上柱，采用95%的乙醇为洗脱液进行洗脱，同时用三氯化铁-铁氰化钾检识洗脱液中的白藜芦醇，当检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阳性时，开始收集洗脱液，直至检测到洗脱液中的白藜芦醇呈阴性时，停止收集洗脱液；将收集的洗脱液真空蒸馏，回收乙醇，然后按照虎杖提取物粗品与二氯甲烷的料液比为1g:1mL加入二氯甲烷，溶解得到二氯甲烷-虎杖提取物溶液。
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CN101698634B (zh) * 2009-06-30 2013-03-27 三原润禾植化有限公司 从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法
CN101628859A (zh) * 2009-08-11 2010-01-20 张守力 一种白藜芦醇的提取方法
CN102531851A (zh) * 2011-12-29 2012-07-04 广西壮族自治区药用植物园 虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法
CN102627677A (zh) * 2012-03-22 2012-08-08 聊城大学 从虎杖中分离纯化单体化合物的方法
CN104130298A (zh) * 2014-08-20 2014-11-05 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 一种从虎杖中提取虎杖苷及白藜芦醇的方法
CN105669385A (zh) * 2016-03-15 2016-06-15 常州市阿曼特化工有限公司 一种白藜芦醇的制备方法
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