CN107655958B - 基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法 - Google Patents

基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，解决现有的啶虫脒检测方法成本高、选择性差以及以往的啶虫脒电化学适配体传感器的构建中需对适配体进行电活性基团标记或向测试体系加入电活性物质所造成的操作繁琐、价格昂贵、耗时等的技术问题，本发明通过将镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针原位沉积在电极表面，将高灵敏的电化学分析方法与具有高亲和力的核适配体有效结合，构筑啶虫脒的电化学适配体传感器；该分析方法既能对啶虫脒高灵敏分析，又能在复杂的环境介质中获得高的选择性，同时，该方法具有仪器设备简单、分析成本低、响应迅速快等优点，可为食物和环境中农药啶虫脒残留成分评估提供一种新的检测方法。

Description

基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法
技术领域
本发明涉及一种基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法。
背景技术
啶虫脒是一种高效、安全、持久的内吸性氯代烟碱类农药，它对果树、蔬菜上的半翅目、鳞翅目、鞘翅目等害虫均有毒杀作用，特别是对能抗有机磷、氨基甲酸酯类以及拟除虫菊酯类杀虫剂的害虫有效。由于其大量的使用，可通过食物链进入人体，若长期被误食会对人类健康有潜在的危险。因此，寻求一种快速、可靠、高灵敏以及高选择性的分析方法对食物和环境中啶虫脒残留的检测具有非常重要的意义。
目前，检测啶虫脒残留的方法主要有仪器分析法如高效液相色谱法、气相色谱法以及酶联免疫法等。传统的仪器分析方法所用的设备昂贵、操作复杂、实验耗时且需要专业技术人员。虽然，酶联免疫法简单且快速，然而它的缺点也是不能被忽视的，比如在有机溶剂或者复杂的基体溶液其极易被污染，从而影响实验的测试结果。与以上方法相比，电化学方法由于其具有响应快速、成本低、可实行在线检测且对环境友好等众多优点被认为是最有潜力的分析方法之一。然而，啶虫脒是一种电化学惰性分子，无法利用直接电化学方法对其测定。
适配体是由SELEX技术在自由核苷酸库中筛选出并通过人工合成的单链寡核苷酸片段DNA或RNA，它可与传统的抗体相媲美，对靶物具有强的亲和性和特异性。由于适配体合成简易、稳定性好且易于保存，这些优点使得适配体比抗体更有优势，成为一种理想的生物传感识别元件。据已有文献报道，可特异性结合啶虫脒的适配体已被成功筛选出来，将其引入至电极表面构建选择性识别啶虫脒的电化学适配体传感器是可行的。然而，在以往的电化学适配体传感器构建过程中，为了使适配体与其靶物分子之间的生物识别作用能够有效地转化为可测定的电化学信号，在待测物测定时，需要采用额外的电活性物质，如二茂铁衍生物，钌配合物，甲基蓝等作为指示探针对适配体进行标记。或者，在测试体系中加入这些电化学活性物质来获取电化学信号。但是，适配体的标记通常步骤复杂、价格昂贵、操作耗时，甚至可能影响到适配体和靶物之间的生物亲和性和特异性；在测试体系加入电活性物质，在长时间使用过程中，修饰电极表面易被污染，发生钝化，分析性能下降。为了克服这些局限性，开发一系列无标记的电化学适配体传感器已经成为了一种明显的发展趋势。
发明内容
本发明的目的是解决现有的啶虫脒检测方法成本高、选择性差以及以往的啶虫脒电化学适配体传感器的构建中需对适配体进行电活性基团标记或向测试体系加入电活性物质所造成的操作繁琐、价格昂贵、耗时等的技术问题，提供一种基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，包括以下步骤：
一、制备以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器：
(1)将裸玻碳电极用Al2O3粉末抛光后，用高纯水超声清洗，然后在N2气氛下吹干；
(2)将吹干后的裸玻碳电极置于0.5M的H2SO4溶液中进行循环伏安扫描，扫描电压为-0.2～1.2V，扫描速率为50～100mV/s，直至循环伏安曲线达到稳定；
(3)将步骤(2)处理后的裸玻碳电极置于含有30～50mM NiCl2·6H2O和5～10mMNH4Cl的水溶液中，在恒电位-0.8V下进行Ni富集，使Ni膜沉积于裸玻碳电极表面，然后分别用浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液和高纯水冲洗数次，并干燥；然后将沉积Ni膜的裸玻碳电极转移至含有3mM K3[Fe(CN)6]以及0.1M NaNO3的水溶液中，在恒电位0.7～1.0V下进行恒电位扫描，直至电流趋近于零，即制得镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针；
(4)将步骤(3)制得的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针置于2.5～5.0mM的HAuCl4溶液中，在N2气氛下，扫描电压为0～0.6V，扫描速率为50mV/s，循环伏安扫描5～10圈后，使金纳米粒子沉积在镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的表面；
(5)将步骤(4)处理后的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针用高纯水冲洗并用N2吹干，培育在2.0～4.0μM的啶虫脒适配体溶液中，并在4℃下自组装12h以上，然后将组装后的指示探针置于巯基正己醇溶液中进行培养，即制得以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器；
二、啶虫脒的检测：
(1)配制若干个浓度的啶虫脒标准溶液；
(2)以步骤一制得的以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器作为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极、铂片电极为对电极、浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液为电解质溶液构成三电极体系；向三电极体系中加入配制的第一个浓度的啶虫脒标准溶液，并培育30～40min，采用差分脉冲伏安法记录该浓度啶虫脒对应的峰电流，采用上述方法依次记录其余浓度啶虫脒对应的峰电流，通过峰电流的变化与啶虫脒的标准溶液浓度的线性关系绘制标准曲线；
(3)将啶虫脒浓度未知的待测样品加入到三电极体系中，采用差分脉冲伏安法记录待测样品对应的峰电流，带入步骤(2)制得的标准曲线中，即可得到待测样品中啶虫咪的浓度；
(4)将使用过的电化学适配体传感器电极置于浓度0.5％、pH 1.9的SDS溶液中浸泡3～5min，去除键合在电极表面的啶虫脒，使电极再生，以便后续重复使用。
进一步地，所述步骤一中Ni的富集时间为30s。
进一步地，所述步骤一中的啶虫脒适配体先经0.2mM三(2-羧乙基)膦处理，将其中的二硫键还原，然后再用于培育镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针。
进一步地，所述步骤一中组装后的指示探针在巯基正己醇溶液中培养时间为30～50min。
进一步地，所述步骤一中巯基正己醇溶液的浓度为1mM。
本发明通过将镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针原位沉积在电极表面，将高灵敏的电化学分析方法与具有高亲和力的核适配体有效结合，构筑啶虫脒的电化学适配体传感器，建立了一种检测啶虫脒的新型电化学分析方法。该分析方法既能对啶虫脒高灵敏分析，又能在复杂的环境介质中获得高的选择性，同时，该方法具有仪器设备简单、分析成本低、响应迅速快等优点，可为食物和环境中农药啶虫脒残留成分评估提供一种新的检测方法。本发明的有益效果是：
(1)本发明将镍铁氰配合物纳米颗粒原位沉积于电极表面作为传感器的信号指示探针，构筑的电化学适配体传感器，克服了以往适配体传感器需对适配体进行电化学活性基团标记或向测试体系加入电化学活性物质所造成的操作繁琐、价格昂贵、耗时等缺点，构建了一种简单、无标记的电化学适配体传感器，为啶虫脒的检测提供了一种新型的电化学分析方法；
(2)本发明将高灵敏的电化学方法和专一性识别啶虫脒的适配体结合起来，构建了基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器，该方法不仅具有高的灵敏度，对啶虫脒测定的检测限可达0.5nM，而且由于传感器表面适配体的修饰，大大提高该电化学分析方法的抗干扰能力，在100倍于待测物质浓度的共存干扰物和结构相似干扰物质中，能选择性的识别出待测物质啶虫脒；
(3)本发明制备电化学分析方法在啶虫脒的检测中，信号变化灵敏，分析时间短，操作方便，仪器简单，尤其是该方法具有灵敏度高和抗干扰能力强的优势，适用于食品和环境复杂基质中啶虫脒残留量的检测。
附图说明
图1为本发明制备的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的扫描电镜图；
图2为本发明制备的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针在PBS溶液中的多次扫描循环伏安图；
图3为本发明检测方法对啶虫脒选择性测试图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
本实施例中的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，包括以下步骤：
一、制备以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器：
(1)将裸玻碳电极用Al2O3粉末抛光后，用高纯水超声清洗，然后在N2气氛下吹干；
(2)将吹干后的裸玻碳电极电极置于0.5M的H2SO4溶液中进行循环伏安扫描，扫描电压为-0.2V，扫描速率为50mV/s，直至循环伏安曲线达到稳定；
(3)将步骤(2)处理后的裸玻碳电极置于含有30mM NiCl2·6H2O和5mM NH4Cl的水溶液中，在恒电位-0.8V下进行Ni富集，使Ni膜沉积于裸玻碳电极表面，然后分别用浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液和高纯水冲洗数次，并干燥；然后将沉积Ni膜的裸玻碳电极转移至含有3mM K3[Fe(CN)6]以及0.1M NaNO3的水溶液中，在恒电位0.7～1.0V下进行恒电位扫描，直至电流趋近于零，即制得镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针，如图1所示，为镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的扫描电镜图，从图中可以看到，一层致密的镍铁氰配合物纳米颗粒均匀地覆盖在玻碳电极表面，颗粒大小约为10～20nm；
(4)将步骤(3)制得的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针置于2.5mM的HAuCl4溶液中，在N2气氛下，扫描电压为0～0.6V，扫描速率为50mV/s，循环伏安扫描5圈后，使金纳米粒子沉积在镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的表面；
(5)将啶虫脒适配体(上海生工生产)经0.2mM三(2-羧乙基)膦处理，使其中的二硫键还原，并制成2.0μM的啶虫脒适配体溶液；将步骤(4)处理后的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针用高纯水冲洗并用N2吹干，培育在配制的2.0μM的啶虫脒适配体溶液中，并在4℃下自组装12h以上，然后将组装后的指示探针置于巯基正己醇溶液中进行培养，所述培养时间为30min，即制得以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器；
二、啶虫脒的检测：
(1)配制若干个浓度的啶虫脒标准溶液；
(2)以步骤一制得的以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器作为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极、铂片电极为对电极、浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液为电解质溶液构成三电极体系；向三电极体系中加入配制的第一个浓度的啶虫脒标准溶液，并培育30～40min，采用差分脉冲伏安法记录该浓度啶虫脒对应的峰电流，采用上述方法依次记录其余浓度啶虫脒对应的峰电流，通过峰电流的变化与啶虫脒的标准溶液浓度的线性关系绘制标准曲线；
(3)将啶虫脒浓度未知的待测样品加入到三电极体系中，采用差分脉冲伏安法记录待测样品对应的峰电流，带入步骤(2)制得的标准曲线中，即可得到待测样品中啶虫咪的浓度；
(4)将使用过的电化学适配体传感器电极置于浓度0.5％、pH 1.9的SDS溶液中浸泡3～5min，去除键合在电极表面的啶虫脒，使电极再生，以便后续重复使用。
实施例2
本实施例中的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，包括以下步骤：
一、制备以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器：
(1)将裸玻碳电极用Al2O3粉末抛光后，用高纯水超声清洗，然后在N2气氛下吹干；
(2)将吹干后的裸玻碳电极电极置于0.5M的H2SO4溶液中进行循环伏安扫描，扫描电压为0.5V，扫描速率为70mV/s，直至循环伏安曲线达到稳定；
(3)将步骤(2)处理后的裸玻碳电极置于含有40mM NiCl2·6H2O和8mM NH4Cl的水溶液中，在恒电位-0.8V下进行Ni富集，富集30s后，使Ni膜沉积于裸玻碳电极表面，然后分别用浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液和高纯水冲洗数次，并干燥；然后将沉积Ni膜的裸玻碳电极转移至含有3mM K3[Fe(CN)6]以及0.1M NaNO3的水溶液中，在恒电位0.7～1.0V下进行恒电位扫描，直至电流趋近于零，即制得镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针；
(4)将步骤(3)制得的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针置于4.0mM的HAuCl4溶液中，在N2气氛下，扫描电压为0～0.6V，扫描速率为50mV/s，循环伏安扫描8圈后，使金纳米粒子沉积在镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的表面；
(5)将啶虫脒适配体(上海生工生产)经0.2mM三(2-羧乙基)膦处理，使其中的二硫键还原，并制成3.0μM的啶虫脒适配体溶液；将步骤(4)处理后的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针用高纯水冲洗并用N2吹干，培育在配制的3.0μM的啶虫脒适配体溶液中，并在4℃下自组装12h以上，然后将组装后的指示探针置于1mM的巯基正己醇溶液中进行培养，所述培养时间为40min，即制得以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器；
二、啶虫脒的检测：
(1)配制若干个浓度的啶虫脒标准溶液；
(2)以步骤一制得的以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器作为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极、铂片电极为对电极、浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液为电解质溶液构成三电极体系；向三电极体系中加入配制的第一个浓度的啶虫脒标准溶液，并培育30～40min，采用差分脉冲伏安法记录该浓度啶虫脒对应的峰电流，采用上述方法依次记录其余浓度啶虫脒对应的峰电流，通过峰电流的变化与啶虫脒的标准溶液浓度的线性关系绘制标准曲线；
(3)将啶虫脒浓度未知的待测样品加入到三电极体系中，采用差分脉冲伏安法记录待测样品对应的峰电流，带入步骤(2)制得的标准曲线中，即可得到待测样品中啶虫咪的浓度；
(4)将使用过的电化学适配体传感器电极置于浓度0.5％、pH 1.9的SDS溶液中浸泡3～5min，去除键合在电极表面的啶虫脒，使电极再生，以便后续重复使用。
实施例3
本实施例中的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，包括以下步骤：
一、制备以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器，包括如下步骤：
(1)将裸玻碳电极用Al2O3粉末抛光后，用高纯水超声清洗，然后在N2气氛下吹干；
(2)将吹干后的裸玻碳电极电极置于0.5M的H2SO4溶液中进行循环伏安扫描，扫描电压为1.2V，扫描速率为100mV/s，直至循环伏安曲线达到稳定；
(3)将步骤(2)处理后的裸玻碳电极置于含有50mM NiCl2·6H2O和10mM NH4Cl的水溶液中，在恒电位-0.8V下进行Ni富集，富集30s后，使Ni膜沉积于裸玻碳电极表面，然后分别用浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液和高纯水冲洗数次，并干燥；然后将沉积Ni膜的裸玻碳电极转移至含有3mM K3[Fe(CN)6]以及0.1M NaNO3的水溶液中，在恒电位0.7～1.0V下进行恒电位扫描，直至电流趋近于零，即制得镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针；
(4)将步骤(3)制得的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针置于5.0mM的HAuCl4溶液中，在N2气氛下，扫描电压为0～0.6V，扫描速率为50mV/s，循环伏安扫描10圈后，使金纳米粒子沉积在镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的表面；
(5)将啶虫脒适配体(上海生工生产)经0.2mM三(2-羧乙基)膦处理，使其中的二硫键还原，并制成4.0μM的啶虫脒适配体溶液；将步骤(4)处理后的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针用高纯水冲洗并用N2吹干，培育在配制的4.0μM的啶虫脒适配体溶液中，并在4℃下自组装12h以上，然后将组装后的指示探针置于1mM的巯基正己醇溶液中进行培养，所述培养时间为50min，即制得以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器；
二、啶虫脒的检测：
(1)配制若干个浓度的啶虫脒标准溶液；
(2)以步骤一制得的以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器作为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极、铂片电极为对电极、浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液为电解质溶液构成三电极体系；向三电极体系中加入配制的第一个浓度的啶虫脒标准溶液，并培育30～40min，采用差分脉冲伏安法记录该浓度啶虫脒对应的峰电流，采用上述方法依次记录其余浓度啶虫脒对应的峰电流，通过峰电流的变化与啶虫脒的标准溶液浓度的线性关系绘制标准曲线；
(3)将啶虫脒浓度未知的待测样品加入到三电极体系中，采用差分脉冲伏安法记录待测样品对应的峰电流，带入步骤(2)制得的标准曲线中，即可得到待测样品中啶虫咪的浓度；
(4)将使用过的电化学适配体传感器电极置于浓度0.5％、pH 1.9的SDS溶液中浸泡3～5min，去除键合在电极表面的啶虫脒，使电极再生，以便后续重复使用。
本发明制得的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的稳定性及重现性研究：
将本发明制得镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针电极置于pH 7.41、浓度0.1M的PBS溶液中或直接暴漏在空气中一段时间后，在0.1M PBS(pH 7.41)溶液中进行循环伏安扫描，扫描电位范围为0～0.7V，扫速为100mV/s。实验结果发现该指示探针电极在空气中放置2天后和在PBS溶液中放置一周后，对镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的电化学活性没有任何影响，氧化还原峰电流保持不变，表明该指示探针具有长期存储的稳定性。同时，对该电极的重现性进行了研究，在0.1M PBS(pH 7.41)溶液中，连续循环伏安扫描30圈后，如图2所示，可以看到氧化还原峰的峰电流高度及其峰间距大小几乎没有发生任何变化，表明镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针具有极好的重现性。本发明制备的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针其好的稳定性和重现性为传感器在实际样品中啶虫脒残留的准确分析提供了重要的保障。
本发明检测方法对啶虫脒的选择性测试试验：
将本发明制得的以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器作为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极、铂片电极为对电极、采用浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液为电解质溶液构成三电极电解体系；配制含有10nM待测物质啶虫脒和1000nM干扰物质的混合样品，所述干扰物质分别为2,4-D、阿特拉津、双酚A、吡虫啉以及氧乐果，采用本发明的检测方法测定混合样品中两种物质的峰电流。结果显示，干扰物质的相对响应电流均小于6.5％，如图3所示，这表明了所制备的电化学适配体传感器对啶虫脒具有好的专一性识别能力。
本发明检测方法对不同基体溶液中的啶虫脒的检测试验：
采用本发明的检测方法对某地区的生活污水和食物样品西红柿进行分析。污水样品用0.22μm的滤膜进行过滤处理；西红柿样品首先在干净的研钵中将其磨碎，加入甲醇萃取，放入离心机转速为1000rpm离心处理20min后，取上清液，在真空水泵用0.22μm的滤膜进行抽滤并稀释；对两个样品进行加标回收实验，结果发现啶虫脒在两种不同基体溶液的平均回收率为95％到103％，三次重复实验，相对标准偏差小于5.6％。这表明该电化学适配体传感器能抵制复杂基体效应的干扰，可被用于食物和环境中啶虫脒残留的检测，且与传统仪器分析方法相比，本发明所述的电化学分析方法设备简单、操作方便、分析成本低，具有较强的适用性和推广性。

Claims (5)

1.基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
一、制备以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器：
(1)将裸玻碳电极用Al2O3粉末抛光后，用高纯水超声清洗，然后在N2气氛下吹干；
(2)将吹干后的裸玻碳电极置于0.5M的H2SO4溶液中进行循环伏安扫描，扫描电压为-0.2～1.2V，扫描速率为50～100mV/s，直至循环伏安曲线达到稳定；
(3)将步骤(2)处理后的裸玻碳电极置于含有30～50mM NiCl2·6H2O和5～10mM NH4Cl的水溶液中，在恒电位-0.8V下进行Ni富集，使Ni膜沉积于裸玻碳电极表面，然后分别用浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液和高纯水冲洗数次，并干燥；然后将沉积Ni膜的裸玻碳电极转移至含有3mM K3[Fe(CN)6]以及0.1M NaNO3的水溶液中，在恒电位0.7～1.0V下进行恒电位扫描，直至电流趋近于零，即制得镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针；
(4)将步骤(3)制得的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针置于2.5～5.0mM的HAuCl4溶液中，在N2气氛下，扫描电压为0～0.6V，扫描速率为50mV/s，循环伏安扫描5～10圈后，使金纳米粒子沉积在镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针的表面；
(5)将步骤(4)处理后的镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针用高纯水冲洗并用N2吹干，培育在2.0～4.0μM的啶虫脒适配体溶液中，并在4℃下自组装12h以上，然后将组装后的指示探针置于巯基正己醇溶液中进行培养，即制得以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器；
二、啶虫脒的检测：
(1)配制若干个浓度的啶虫脒标准溶液；
(2)以步骤一制得的以镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的电化学适配体传感器作为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极、铂片电极为对电极、浓度0.1M、pH 7.41的PBS溶液为电解质溶液构成三电极体系；向三电极体系中加入配制的第一个浓度的啶虫脒标准溶液，并培育30～40min，采用差分脉冲伏安法记录该浓度啶虫脒对应的峰电流，采用上述方法依次记录其余浓度啶虫脒对应的峰电流，通过峰电流的变化与啶虫脒的标准溶液浓度的线性关系绘制标准曲线；
(3)将啶虫脒浓度未知的待测样品加入到三电极体系中，采用差分脉冲伏安法记录待测样品对应的峰电流，带入步骤(2)制得的标准曲线中，即可得到待测样品中啶虫咪的浓度；
(4)将使用过的电化学适配体传感器电极置于浓度0.5％、pH 1.9的SDS溶液中浸泡3～5min，去除键合在电极表面的啶虫脒，使电极再生，以便后续重复使用。
2.根据权利要求1所述的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，其特征在于，所述步骤一中Ni的富集时间为30s。
3.根据权利要求1所述的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，其特征在于，所述步骤一中的啶虫脒适配体先经0.2mM三(2-羧乙基)膦处理，将其中的二硫键还原，然后再用于培育镍铁氰配合物纳米颗粒指示探针。
4.根据权利要求1所述的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，其特征在于：所述步骤一中组装后的指示探针在巯基正己醇溶液中培养时间为30～50min。
5.根据权利要求1所述的基于镍铁氰配合物纳米颗粒为指示探针的啶虫脒检测方法，其特征在于：所述步骤一中巯基正己醇溶液的浓度为1mM。
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