CN107630097A - 一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒 - Google Patents
一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒，发明人设计了针对生殖支原体、解脲脲原体、微小脲原体、人型支原体、沙眼衣原体、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV Ⅰ)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV Ⅱ)和淋病奈瑟菌等8种常见的性病病原体的引物组及试剂盒，通过提取的泌尿生殖道标本DNA作为模板，通过将反应体系混合物加入到检测芯片中进行等温扩增，最后采用肉眼观察芯片反应室的颜色改变(或实时监测反应室内荧光变化)的方式来判定待检标本中存在何种性病病原体，可一次检出8种常见的性病病原体，具备简便、快速、准确、灵敏和廉价等优点，适用于各级医院，特别是基层医院、疾控机构和科研院校等单位下设的临床或科研实验室。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及泌尿生殖道感染常见病原体的快速检测，具体是一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒。
背景技术
性传播疾病(Sexually transmitted diseases，STD)仍然是全球公共卫生安全的重要威胁之一，该类疾病可导致不孕不育、胎儿早产、肿瘤发生和各种严重并发症。STD的病原体有很多种，包括细菌、病毒、衣原体、支原体和螺旋体等类型，常见的种类有淋病奈瑟菌、白色念珠菌、HIV、HSV、沙眼衣原体、生殖支原体、人型支原体、解脲脲原体、微小脲原体和梅毒螺旋体等。
当前STD病原体的实验室诊断方法主要有三大类，第一类是传统的涂片培养方法，如淋病奈瑟菌、白色念珠菌的涂片培养；第二类是免疫学方法，如HIV、梅毒螺旋体抗体检测；第三类是分子生物学方法，如生殖支原体核酸检测等。虽然分子生物学方法起步较晚，但是此类方法的发展和应用却非常迅速，目前已逐步赶上甚至超越前两类方法。STD的分子诊断方法种类繁多，主要包括核酸扩增(如PCR、LAMP等)、探针杂交、芯片检测和基因测序等方法，这些方法也都存在不足之处，如需要特殊设备和成本较为昂贵。
LAMP是一种等温核酸扩增技术，其最大优点是无需PCR仪等特殊设备，而且具有很好的特异性和敏感性，操作也非常简便和快速。但是其主要的不足是单管条件下较难实现多重检测，而通过结合简易微流控芯片可以弥补此缺陷。如果将上述结合应用于泌尿生殖道标本，则可实现STD常见病原体的简便、快速、廉价、准确和灵敏检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒。
本发明所采取的技术方案是：
一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组，包括如下引物：
5’-ACAAGCAACCTGATATTCAATT-3’
5’-GCTGTAAGCTTTGGTTCAAC-3’
5’-GCATCAACACGTAATGACTTCTGTCGGTATGCAAGCACGCG-3’
5’-AGCATTCTTTAGTGCCGGACTAGTTCTTTGGAAATAGTGTTTAA-3’
5’-AGAATCTTTGGCATATATTGCG-3’
5’-TTATTGAATTGTTGGAGCAT-3’
5’-TCTCTAACTTCTGGTAATCAGA-3’
5’-TTGTTAGATATCGTCAAGGTGT-3’
5’-CCTGATTTACCACCTCCCACAGTTCGCTGGCTCATTATCTT-3’
5’-TCCAACATTATTAGTGTTCGCTTCCAACACAAGAACACGAG-3’
5’-CTTCATTTGGAAATCAGCATGA-3’
5’-AATAGCTGAACCACCGTTAT-3’
5’-GCTGGTCCTTTATTCACCTTA-3’
5’-GGCAATGTGATAATATGGCCCC-3’
5’-GGTGCCATCATCAGTGTTATCATTAACGACGAATTAGGAAGGAA-3’
5’-TGGCTGAAATGGGTTATTTTGTAAACTTCATTGCGGTGTT-3’
5’-AATTGCGATATCAGTTTGATC-3’
5’-AATACTGATTGAAGAGTTCACA-3’
5’-GCCGTTGTTCCCATTATCCC-3’
5’-TACTTGGCATGGGGGGTG-3’
5’-GTTGGGTGGTGGAGGAGACGTCCTTTTGGTTCTTGTCGGT-3’
5’-GGTCGTCCCTCGCATGAAGCGGCGTGGTAAGGCTGATG-3’
5’-TTGGTGGGAACCCCCGATAC-3’
5’-AACATGACCCAGACCGGCAC-3’
5’-GGCCTTGACCGAGGACAC-3’
5’-CGACTCCACGGATGCAGT-3’
5’-TCGACTGAGGGTGCCATGGCGTCCTCCGATTCGCCTACG-3’
5’-GCAACCACTACTCCCCCCGACCGTTTCCTCCGGCGTAA-3’
5’-GCCGACACAGGGAGGGGCGT-3’
5’-GATGGCCACACAAGCCGCAA-3’
5’-TGGTCGGTGCTTCAAAGTG-3’
5’-GCACGTCCACCAATCCATT-3’
5’-CAAACACGCCAAAGCCCTGAACGCACGAGGCGTTTGTAGG-3’
5’-TGTAGTAGAGCGCGGTATCGGACGGTCAAAACCTGTTCGCA-3’
5’-AATATCATCTTTGCGGTTGC-3’
5’-TCTACAAGAGTACATCGGTCA-3’
5’-TCGAGCAACCGCTGTGACGACCTTCATTATGTCGGAGTC-3’
5’-GCAGCTTGTAGTCCTGCTTGAGTCTTCGTAACTCGCTCC-3’
5’-TACAAACGCCTAGGGTGC-3’
5’-CGGGCGATTTGCCTTAAC-3’
5’-ACAACACAACTTACACCACTA-3’
5’-TGGTCACTTCACTCCCTAA-3’
5’-GTGCTTTTTCAAACCCTGGTAAAGTACAACATTATTGTTGCAACCG-3’
5’-CATTGACTCAACCCAAGCTTTGGACTCAACCCCAATCACAC-3’。
作为上述引物组的进一步改进，每4～6条引物置于同一反应体系中。
作为上述引物组的进一步改进，各反应体系包括的引物分别为：
反应体系1：
5’-ACAAGCAACCTGATATTCAATT-3’
5’-GCTGTAAGCTTTGGTTCAAC-3’
5’-GCATCAACACGTAATGACTTCTGTCGGTATGCAAGCACGCG-3’
5’-AGCATTCTTTAGTGCCGGACTAGTTCTTTGGAAATAGTGTTTAA-3’
反应体系2：
5’-AGAATCTTTGGCATATATTGCG-3’
5’-TTATTGAATTGTTGGAGCAT-3’
5’-TCTCTAACTTCTGGTAATCAGA-3’
5’-TTGTTAGATATCGTCAAGGTGT-3’
5’-CCTGATTTACCACCTCCCACAGTTCGCTGGCTCATTATCTT-3’
5’-TCCAACATTATTAGTGTTCGCTTCCAACACAAGAACACGAG-3’
反应体系3：
5’-CTTCATTTGGAAATCAGCATGA-3’
5’-AATAGCTGAACCACCGTTAT-3’
5’-GCTGGTCCTTTATTCACCTTA-3’
5’-GGCAATGTGATAATATGGCCCC-3’
5’-GGTGCCATCATCAGTGTTATCATTAACGACGAATTAGGAAGGAA-3’
5’-TGGCTGAAATGGGTTATTTTGTAAACTTCATTGCGGTGTT-3’
反应体系4：
5’-AATTGCGATATCAGTTTGATC-3’
5’-AATACTGATTGAAGAGTTCACA-3’
5’-GCCGTTGTTCCCATTATCCC-3’
5’-TACTTGGCATGGGGGGTG-3’
5’-GTTGGGTGGTGGAGGAGACGTCCTTTTGGTTCTTGTCGGT-3’
5’-GGTCGTCCCTCGCATGAAGCGGCGTGGTAAGGCTGATG-3’
反应体系5：
5’-TTGGTGGGAACCCCCGATAC-3’
5’-AACATGACCCAGACCGGCAC-3’
5’-GGCCTTGACCGAGGACAC-3’
5’-CGACTCCACGGATGCAGT-3’
5’-TCGACTGAGGGTGCCATGGCGTCCTCCGATTCGCCTACG-3’
5’-GCAACCACTACTCCCCCCGACCGTTTCCTCCGGCGTAA-3’
反应体系6：
5’-GCCGACACAGGGAGGGGCGT-3’
5’-GATGGCCACACAAGCCGCAA-3’
5’-TGGTCGGTGCTTCAAAGTG-3’
5’-GCACGTCCACCAATCCATT-3’
5’-CAAACACGCCAAAGCCCTGAACGCACGAGGCGTTTGTAGG-3’
5’-TGTAGTAGAGCGCGGTATCGGACGGTCAAAACCTGTTCGCA-3’
反应体系7：
5’-AATATCATCTTTGCGGTTGC-3’
5’-TCTACAAGAGTACATCGGTCA-3’
5’-TCGAGCAACCGCTGTGACGACCTTCATTATGTCGGAGTC-3’
5’-GCAGCTTGTAGTCCTGCTTGAGTCTTCGTAACTCGCTCC-3’
反应体系8：
5’-TACAAACGCCTAGGGTGC-3’
5’-CGGGCGATTTGCCTTAAC-3’
5’-ACAACACAACTTACACCACTA-3’
5’-TGGTCACTTCACTCCCTAA-3’
5’-GTGCTTTTTCAAACCCTGGTAAAGTACAACATTATTGTTGCAACCG-3’
5’-CATTGACTCAACCCAAGCTTTGGACTCAACCCCAATCACAC-3’。
一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的试剂盒，包括DNA聚合酶、反应液、指示剂、检测芯片，其所使用的引物组如上所述。
作为上述试剂盒的进一步改进，反应液包括dNTP、反应缓冲液、MgSO4和甜菜碱。
作为上述试剂盒的进一步改进，检测芯片包括独立的反应室、加样孔和排气孔。
作为上述试剂盒的进一步改进，指示剂为荧光染料或显色剂。
作为上述试剂盒的进一步改进，荧光染料为SYBR green，显色剂为羟基萘酚蓝。
作为上述试剂盒的进一步改进，不同的反应室中使用不同的引物组合。
本发明的有益效果是：
(1)操作简便：DNA提取步骤简单有效，模板可直接用于后续扩增反应，等温扩增无需PCR仪等特殊设备；
(2)检测快速：DNA提取只需30min，等温扩增只需60min，扩增完成后结果可直接判读，整个检测过程所需时间在2h以内。
(3)高特异性：采用4～6种引物对靶基因进行特异扩增，很少产生非特异性产物，故具备高特异性。
(4)高灵敏性：能检测出的最低值为100个拷贝。
(5)避免污染：荧光染料或显色剂在反应前加入，无需反应后开盖加入，能有效防止扩增产物的扩散和污染。
(6)宽检测谱：能同时检测8种常见的性病病原体，已基本涵盖常见的细菌、支原体和病毒等病原体类型。
附图说明
图1是检测芯片上反应室、加样孔和排气孔的布局图。1～10为反应室，11为加样孔，12、13为排气孔；反应室从左至右分别代表：1、阴性质控；2、人型支原体；3、解脲脲原体；4、生殖支原体；5、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)；6、微小脲原体；7、淋病奈瑟菌；8、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)；9、沙眼衣原体；10、阳性质控。
图2是临床泌尿生殖道标本检测结果图。从左至右观察芯片反应室，反应室2、10为阳性，其它反应室为阴性。阴阳性质控结果正常，故可判读为人型支原体检测阳性。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明的内容，但所描述的实例只是本发明的部分实施例，而不是全部实施例，故不应该理解为对本发明的限制。基于本发明中的实施例，在未付出创造性劳动前提下对本发明方法、步骤或条件的修改或替换，都属于本发明保护的范围。
引物设计
发明人通过查询并使用独有方法优化，得到设计好的引物，具体如下：
5’-ACAAGCAACCTGATATTCAATT-3’(SEQ ID NO：1)
5’-GCTGTAAGCTTTGGTTCAAC-3’(SEQ ID NO：2)
5’-GCATCAACACGTAATGACTTCTGTCGGTATGCAAGCACGCG-3’(SEQ ID NO：3)
5’-AGCATTCTTTAGTGCCGGACTAGTTCTTTGGAAATAGTGTTTAA-3’(SEQ ID NO：4)
5’-AGAATCTTTGGCATATATTGCG-3’(SEQ ID NO：5)
5’-TTATTGAATTGTTGGAGCAT-3’(SEQ ID NO：6)
5’-TCTCTAACTTCTGGTAATCAGA-3’(SEQ ID NO：7)
5’-TTGTTAGATATCGTCAAGGTGT-3’(SEQ ID NO：8)
5’-CCTGATTTACCACCTCCCACAGTTCGCTGGCTCATTATCTT-3’(SEQ ID NO：9)
5’-TCCAACATTATTAGTGTTCGCTTCCAACACAAGAACACGAG-3’(SEQ ID NO：10)
5’-CTTCATTTGGAAATCAGCATGA-3’(SEQ ID NO：11)
5’-AATAGCTGAACCACCGTTAT-3’(SEQ ID NO：12)
5’-GCTGGTCCTTTATTCACCTTA-3’(SEQ ID NO：13)
5’-GGCAATGTGATAATATGGCCCC-3’(SEQ ID NO：14)
5’-GGTGCCATCATCAGTGTTATCATTAACGACGAATTAGGAAGGAA-3’(SEQ ID NO：)15
5’-TGGCTGAAATGGGTTATTTTGTAAACTTCATTGCGGTGTT-3’(SEQ ID NO：16)
5’-AATTGCGATATCAGTTTGATC-3’(SEQ ID NO：17)
5’-AATACTGATTGAAGAGTTCACA-3’(SEQ ID NO：18)
5’-GCCGTTGTTCCCATTATCCC-3’(SEQ ID NO：19)
5’-TACTTGGCATGGGGGGTG-3’(SEQ ID NO：20)
5’-GTTGGGTGGTGGAGGAGACGTCCTTTTGGTTCTTGTCGGT-3’(SEQ ID NO：21)
5’-GGTCGTCCCTCGCATGAAGCGGCGTGGTAAGGCTGATG-3’(SEQ ID NO：22)
5’-TTGGTGGGAACCCCCGATAC-3’(SEQ ID NO：23)
5’-AACATGACCCAGACCGGCAC-3’(SEQ ID NO：24)
5’-GGCCTTGACCGAGGACAC-3’(SEQ ID NO：25)
5’-CGACTCCACGGATGCAGT-3’(SEQ ID NO：26)
5’-TCGACTGAGGGTGCCATGGCGTCCTCCGATTCGCCTACG-3’(SEQ ID NO：27)
5’-GCAACCACTACTCCCCCCGACCGTTTCCTCCGGCGTAA-3’(SEQ ID NO：28)
5’-GCCGACACAGGGAGGGGCGT-3’(SEQ ID NO：29)
5’-GATGGCCACACAAGCCGCAA-3’(SEQ ID NO：30)
5’-TGGTCGGTGCTTCAAAGTG-3’(SEQ ID NO：31)
5’-GCACGTCCACCAATCCATT-3’(SEQ ID NO：32)
5’-CAAACACGCCAAAGCCCTGAACGCACGAGGCGTTTGTAGG-3’(SEQ ID NO：33)
5’-TGTAGTAGAGCGCGGTATCGGACGGTCAAAACCTGTTCGCA-3’(SEQ ID NO：34)
5’-AATATCATCTTTGCGGTTGC-3’(SEQ ID NO：35)
5’-TCTACAAGAGTACATCGGTCA-3’(SEQ ID NO：36)
5’-TCGAGCAACCGCTGTGACGACCTTCATTATGTCGGAGTC-3’(SEQ ID NO：37)
5’-GCAGCTTGTAGTCCTGCTTGAGTCTTCGTAACTCGCTCC-3’(SEQ ID NO：38)
5’-TACAAACGCCTAGGGTGC-3’(SEQ ID NO：39)
5’-CGGGCGATTTGCCTTAAC-3’(SEQ ID NO：40)
5’-ACAACACAACTTACACCACTA-3’(SEQ ID NO：41)
5’-TGGTCACTTCACTCCCTAA-3’(SEQ ID NO：42)
5’-GTGCTTTTTCAAACCCTGGTAAAGTACAACATTATTGTTGCAACCG-3’(SEQ ID NO：43)
5’-CATTGACTCAACCCAAGCTTTGGACTCAACCCCAATCACAC-3’(SEQ ID NO：44)。
体系建立：
1、单个目的病原体LAMP检测体系的建立
设置不同浓度的引物终浓度(反应体系中各引物的摩尔比始终保持不变)分别在不同温度条件下(63℃、65℃、67℃)对同一份模板进行等温扩增，应用荧光分析仪监测荧光变化和分析扩增曲线，以能够获得最小Ct值的引物终浓度和反应温度作为本发明的最终反应条件。
2、芯片检测体系的建立
对不同目的病原体的同一项反应条件(如扩增温度)进行中位数分析，取中位数作为整个芯片检测体系的反应条件。最终确定的扩增温度为65℃、引物浓度为10μM。
3、芯片检测体系的特异性和灵敏性
用芯片分别检测生殖支原体、解脲脲原体、微小脲原体、人型支原体、沙眼衣原体、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)和淋病奈瑟菌等8种常见的性病病原体，发现每张芯片只有被检测病原体对应的反应室和阳性质控室为阳性，其它反应室均为阴性，因此芯片检测体系的分析特异性为100％。
用芯片分别检测上述8种常见性病病原体的103copies/μL、102copies/μL、10copies/μL浓度模板，发现沙眼衣原体和解脲脲原体的最低检测浓度为102copies/μL，其它病原体的最低检测浓度均为103copies/μL，因此芯片检测体系的分析灵敏性为100个拷贝。
样本检测
1、样本收集
共收集50份泌尿生殖道标本，其中女性拭子标本33份，男性拭子标本17份。
2、样本处理和扩增
(1)待检样品DNA的提取：采用煮沸裂解法提取样品DNA。(a)取拭子标本在1mL生理盐水中进行洗脱，或取培养细胞标本1mL；(b)13000rpm离心5min，然后去掉上清，加入1mL生理盐水并震荡混匀；(c)13000rpm离心5min，然后去掉上清，加入50μL生理盐水并震荡混匀；(d)100℃煮沸裂解10min后，13000rpm离心5min备用。
(2)等温扩增反应：80μL反应扩增体系中需加入10μLDNA模板，其它成分还包括40μL反应液、3μL DNA聚合酶、2μL显色剂(或荧光染料)和25μL去核酸水。将反应混合液加入检测芯片中，于65℃等温反应60min进行扩增，然后90℃等温反应2min终止反应。
(3)结果判断：通过观察芯片反应室内液体颜色的变化来判断结果，或通过荧光分析仪的实时荧光检测数据来进行判断。
图1是检测芯片上反应室、加样孔和排气孔的布局图。1～10为反应室，11为加样孔，12、13为排气孔；反应室从左至右分别代表：1、阴性质控；2、人型支原体；3、解脲脲原体；4、生殖支原体；5、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)；6、微小脲原体；7、淋病奈瑟菌；8、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)；9、沙眼衣原体；10、阳性质控。
图2是临床泌尿生殖道标本检测结果图。肉眼观察结果，深蓝色为扩增阴性，浅蓝色为扩增阳性；采用荧光分析方法时，样本扩增曲线呈S型，且信号值高于阈值才判定为阳性，无扩增曲线或扩增曲线平直均判定为阴性。两种方法都只能在阴阳性对照结果符合的情况下才能判读样本扩增结果。从左至右观察芯片反应室，反应室2、10为阳性，其它反应室为阴性。阴阳性质控结果正常，故可判读为人型支原体检测阳性。
序列表
<110> 蔡慧娜
<120> 一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒
<160> 44
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tggtcggtgc ttcaaagtg 19
<210> 32
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
gcacgtccac caatccatt 19
<210> 33
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
caaacacgcc aaagccctga acgcacgagg cgtttgtagg 40
<210> 34
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
tgtagtagag cgcggtatcg gacggtcaaa acctgttcgc a 41
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
aatatcatct ttgcggttgc 20
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
tctacaagag tacatcggtc a 21
<210> 37
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
tcgagcaacc gctgtgacga ccttcattat gtcggagtc 39
<210> 38
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
gcagcttgta gtcctgcttg agtcttcgta actcgctcc 39
<210> 39
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
tacaaacgcc tagggtgc 18
<210> 40
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
cgggcgattt gccttaac 18
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
acaacacaac ttacaccact a 21
<210> 42
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
tggtcacttc actccctaa 19
<210> 43
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
gtgctttttc aaaccctggt aaagtacaac attattgttg caaccg 46
<210> 44
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
cattgactca acccaagctt tggactcaac cccaatcaca c 41
Claims (9)
1.一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组，包括如下引物：
5’-ACAAGCAACCTGATATTCAATT-3’
5’-GCTGTAAGCTTTGGTTCAAC-3’
5’-GCATCAACACGTAATGACTTCTGTCGGTATGCAAGCACGCG-3’
5’-AGCATTCTTTAGTGCCGGACTAGTTCTTTGGAAATAGTGTTTAA-3’
5’-AGAATCTTTGGCATATATTGCG-3’
5’-TTATTGAATTGTTGGAGCAT-3’
5’-TCTCTAACTTCTGGTAATCAGA-3’
5’-TTGTTAGATATCGTCAAGGTGT-3’
5’-CCTGATTTACCACCTCCCACAGTTCGCTGGCTCATTATCTT-3’
5’-TCCAACATTATTAGTGTTCGCTTCCAACACAAGAACACGAG-3’
5’-CTTCATTTGGAAATCAGCATGA-3’
5’-AATAGCTGAACCACCGTTAT-3’
5’-GCTGGTCCTTTATTCACCTTA-3’
5’-GGCAATGTGATAATATGGCCCC-3’
5’-GGTGCCATCATCAGTGTTATCATTAACGACGAATTAGGAAGGAA-3’
5’-TGGCTGAAATGGGTTATTTTGTAAACTTCATTGCGGTGTT-3’
5’-AATTGCGATATCAGTTTGATC-3’
5’-AATACTGATTGAAGAGTTCACA-3’
5’-GCCGTTGTTCCCATTATCCC-3’
5’-TACTTGGCATGGGGGGTG-3’
5’-GTTGGGTGGTGGAGGAGACGTCCTTTTGGTTCTTGTCGGT-3’
5’-GGTCGTCCCTCGCATGAAGCGGCGTGGTAAGGCTGATG-3’
5’-TTGGTGGGAACCCCCGATAC-3’
5’-AACATGACCCAGACCGGCAC-3’
5’-GGCCTTGACCGAGGACAC-3’
5’-CGACTCCACGGATGCAGT-3’
5’-TCGACTGAGGGTGCCATGGCGTCCTCCGATTCGCCTACG-3’
5’-GCAACCACTACTCCCCCCGACCGTTTCCTCCGGCGTAA-3’
5’-GCCGACACAGGGAGGGGCGT-3’
5’-GATGGCCACACAAGCCGCAA-3’
5’-TGGTCGGTGCTTCAAAGTG-3’
5’-GCACGTCCACCAATCCATT-3’
5’-CAAACACGCCAAAGCCCTGAACGCACGAGGCGTTTGTAGG-3’
5’-TGTAGTAGAGCGCGGTATCGGACGGTCAAAACCTGTTCGCA-3’
5’-AATATCATCTTTGCGGTTGC-3’
5’-TCTACAAGAGTACATCGGTCA-3’
5’-TCGAGCAACCGCTGTGACGACCTTCATTATGTCGGAGTC-3’
5’-GCAGCTTGTAGTCCTGCTTGAGTCTTCGTAACTCGCTCC-3’
5’-TACAAACGCCTAGGGTGC-3’
5’-CGGGCGATTTGCCTTAAC-3’
5’-ACAACACAACTTACACCACTA-3’
5’-TGGTCACTTCACTCCCTAA-3’
5’-GTGCTTTTTCAAACCCTGGTAAAGTACAACATTATTGTTGCAACCG-3’
5’-CATTGACTCAACCCAAGCTTTGGACTCAACCCCAATCACAC-3’。
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：每4～6条引物置于同一反应体系中。
3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：各反应体系包括的引物分别为：
反应体系1：
5’-ACAAGCAACCTGATATTCAATT-3’
5’-GCTGTAAGCTTTGGTTCAAC-3’
5’-GCATCAACACGTAATGACTTCTGTCGGTATGCAAGCACGCG-3’
5’-AGCATTCTTTAGTGCCGGACTAGTTCTTTGGAAATAGTGTTTAA-3’
反应体系2：
5’-AGAATCTTTGGCATATATTGCG-3’
5’-TTATTGAATTGTTGGAGCAT-3’
5’-TCTCTAACTTCTGGTAATCAGA-3’
5’-TTGTTAGATATCGTCAAGGTGT-3’
5’-CCTGATTTACCACCTCCCACAGTTCGCTGGCTCATTATCTT-3’
5’-TCCAACATTATTAGTGTTCGCTTCCAACACAAGAACACGAG-3’
反应体系3：
5’-CTTCATTTGGAAATCAGCATGA-3’
5’-AATAGCTGAACCACCGTTAT-3’
5’-GCTGGTCCTTTATTCACCTTA-3’
5’-GGCAATGTGATAATATGGCCCC-3’
5’-GGTGCCATCATCAGTGTTATCATTAACGACGAATTAGGAAGGAA-3’
5’-TGGCTGAAATGGGTTATTTTGTAAACTTCATTGCGGTGTT-3’
反应体系4：
5’-AATTGCGATATCAGTTTGATC-3’
5’-AATACTGATTGAAGAGTTCACA-3’
5’-GCCGTTGTTCCCATTATCCC-3’
5’-TACTTGGCATGGGGGGTG-3’
5’-GTTGGGTGGTGGAGGAGACGTCCTTTTGGTTCTTGTCGGT-3’
5’-GGTCGTCCCTCGCATGAAGCGGCGTGGTAAGGCTGATG-3’
反应体系5：
5’-TTGGTGGGAACCCCCGATAC-3’
5’-AACATGACCCAGACCGGCAC-3’
5’-GGCCTTGACCGAGGACAC-3’
5’-CGACTCCACGGATGCAGT-3’
5’-TCGACTGAGGGTGCCATGGCGTCCTCCGATTCGCCTACG-3’
5’-GCAACCACTACTCCCCCCGACCGTTTCCTCCGGCGTAA-3’
反应体系6：
5’-GCCGACACAGGGAGGGGCGT-3’
5’-GATGGCCACACAAGCCGCAA-3’
5’-TGGTCGGTGCTTCAAAGTG-3’
5’-GCACGTCCACCAATCCATT-3’
5’-CAAACACGCCAAAGCCCTGAACGCACGAGGCGTTTGTAGG-3’
5’-TGTAGTAGAGCGCGGTATCGGACGGTCAAAACCTGTTCGCA-3’
反应体系7：
5’-AATATCATCTTTGCGGTTGC-3’
5’-TCTACAAGAGTACATCGGTCA-3’
5’-TCGAGCAACCGCTGTGACGACCTTCATTATGTCGGAGTC-3’
5’-GCAGCTTGTAGTCCTGCTTGAGTCTTCGTAACTCGCTCC-3’
反应体系8：
5’-TACAAACGCCTAGGGTGC-3’
5’-CGGGCGATTTGCCTTAAC-3’
5’-ACAACACAACTTACACCACTA-3’
5’-TGGTCACTTCACTCCCTAA-3’
5’-GTGCTTTTTCAAACCCTGGTAAAGTACAACATTATTGTTGCAACCG-3’
5’-CATTGACTCAACCCAAGCTTTGGACTCAACCCCAATCACAC-3’。
4.一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的试剂盒，包括DNA聚合酶、反应液、指示剂、检测芯片，其特征在于：其所使用的引物组如权利要求1～3任一项所述。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：反应液包括dNTP、反应缓冲液、MgSO4和甜菜碱。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：检测芯片包括独立的反应室、加样孔和排气孔。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：指示剂为荧光染料或显色剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：荧光染料为SYBR green，显色剂为羟基萘酚蓝。
9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：不同的反应室中使用不同的引物组合。
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| CN201711090497.0A CN107630097A (zh) | 2017-11-08 | 2017-11-08 | 一种快速检测泌尿生殖道感染常见病原体的引物组及试剂盒 |
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| CN110093431A (zh) * | 2019-03-22 | 2019-08-06 | 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院） | 解脲脲原体的lamp检测方法及试剂盒 |
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| CN107099618A (zh) * | 2017-05-03 | 2017-08-29 | 上海速创诊断产品有限公司 | 一种用于检测泌尿生殖道致病微生物的lamp引物组合物及其相关应用 |
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2017
- 2017-11-08 CN CN201711090497.0A patent/CN107630097A/zh active Pending
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