CN107629117B

CN107629117B - 用于结合TAFIa/ai的蛋白质及其应用和用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒

Info

Publication number: CN107629117B
Application number: CN201710879910.5A
Authority: CN
Inventors: 李文欣; 苏春阳; 刘峰
Original assignee: Liaoning Medi Biological Technology Co ltd
Current assignee: Liaoning Medi Biological Technology Co ltd
Priority date: 2017-09-26
Filing date: 2017-09-26
Publication date: 2020-10-30
Anticipated expiration: 2037-09-26
Also published as: CN107629117A

Abstract

本发明提供了一种用于结合TAFIa/ai的蛋白质及其应用和用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，涉及生物技术领域，本发明提供的用于结合TAFIa/ai的蛋白质，具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。该蛋白质能够与TAFIa/ai特异性结合，其特点是每个蛋白分子能够同时结合两个TAFIa/ai，提高了检测灵敏度。本发明提供的用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，包括上述蛋白质或TAFIa/ai抗体。该试剂盒具有操作简便、快捷，成本低廉，诊断敏感，检出限低等优点，作为新的TAFIa/ai检测手段，可以对临床血栓类疾病研究和TAFIa/ai的检测给予更进一步的帮助。

Description

用于结合TAFIa/ai的蛋白质及其应用和用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于结合TAFIa/ai的蛋白质及其应用和用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒。

背景技术

众所周知，血栓性疾病是一类严重影响健康的疾病，尤其是心脑血管栓塞性疾病已成为我国人口死亡的首位原因。由于血栓性疾病的临床表现多种多样，其临床诊断和治疗往往非常复杂。目前，临床上血栓性疾病的检查方法主要有心电图、超声心动图、胸部X射线、血压监测、头颅X射线、脑CT扫描、脑MRI检查、DSA、MRA、经颅多普勒超声检查等。射线类检查会对人体产生一定程度的电离辐射，组织血流灌注的功能性成像检查方法较多，这些检查设备通常比较昂贵，增加了成本，有的还需特殊装备，成像时间较长，无法短期获得结果。在医学检验中，尚缺乏一种简单、快捷、准确的用于针对心脑血管疾病等发生可能性的检测方法，不利于对疾病的早期发现，早期治疗。

据相关文献报导，TAFI具有被凝血酶激活后下调纤溶活性的功能，是一种存在于血浆中的含金属Zn的羧肽酶前体，又被称为血浆羧肽酶原B、血浆羧肽酶原U、血浆羧肽酶原R。TAFI前体由肝脏合成，是一条包含423个氨基酸的单链糖蛋白，在循环至血液中的过程中，切掉N端22个氨基酸的信号肽，形成401个氨基酸的56kDa的TAFI；TAFI也存在于血小板内，血小板激活时释放至血液。凝血酶、胰蛋白酶、纤溶酶等蛋白水解酶可以作用于TAFI的Arg92，将其切割成20kDa的激活肽和具有羧肽酶活性的36kDa的TAFIa。TAFIa具有切除部分降解的纤维蛋白C端Arg或Lys的能力，使纤溶蛋白酶原不能被激活，因而具有下调纤溶系统的功能，但其构象具有高度不稳定性。因此，针对TAFI或TAFIa的检测，也存在一定难度。

因此，开发一种简单、快捷、准确，成本低的用于针对心脑血管疾病等发生可能性的检测方法尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种用于结合TAFIa/ai的蛋白质，本发明的第二个目的在于提供上述蛋白质在结合TAFIa/ai中的应用，本发明的第三个目的在于提供一种用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，以缓解现有技术中存在的针对心脑血管疾病等发生可能性的检测方法操作复杂，设备昂贵，检测灵敏度低，检测结果不稳定，检测时间较长的技术问题。

本发明提供了一种用于结合TAFIa/ai的蛋白质，所述蛋白质具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

本发明还提供了上述的蛋白质在结合TAFIa/ai中的应用。

另外，本发明还提供了一种用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，所述试剂盒包括如下(a)或(b)：

(a)权利要求1所述的蛋白质；

(b)TAFIa/ai抗体。

进一步地，所述试剂盒包括利用磁微粒复合物链接的如下(a)或(b)：

(a)权利要求1所述的蛋白质；

(b)TAFIa/ai抗体。

进一步地，所述试剂盒还包括标记物试剂、底物试剂和TAFIa/ai标准品。

进一步地，所述磁微粒复合物为磁微粒-链霉亲和素复合物或磁微粒-抗体复合物。

进一步地，所述标记物试剂中的标记物为吖啶酯。

进一步地，所述底物试剂包括：H₂O₂和NaOH；

所述H₂O₂的使用浓度为0.05-0.12mol/L，所述NaOH的使用浓度为0.15-0.30mol/L，溶剂为水。

进一步地，所述标记物为碱性磷酸酶。

进一步地，所述底物试剂包括：AMPPD、Tris、NaCl和CTAC；

所述AMPPD的使用浓度为0.1-0.6g/L，所述Tris的使用浓度为10-18g/L，所述NaCl的使用浓度为50-100g/L，所述CTAC的使用浓度为0.005-0.02g/L，溶剂为水。

本发明提供的用于结合TAFIa/ai的蛋白质，具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。该蛋白质能够与TAFIa/ai特异性结合，其特点是每个蛋白分子能够同时结合两个TAFIa/ai，提高了检测灵敏度。本发明提供的用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，包括上述蛋白质或TAFIa/ai抗体。该试剂盒具有操作简便、快捷，成本低廉，诊断敏感，检出限低等优点，作为新的TAFIa/ai检测手段，可以对临床血栓类疾病研究和TAFIa/ai的检测给予更进一步的帮助。

附图说明

图1为本发明实施例1提供的表达PGT1蛋白的质粒的物理图谱；

图2为本发明实施例1提供的PGT1蛋白的电泳结果图；

图3为本发明实施例2提供的TAFIa/ai化学发光定量检测方法Ⅰ中不同浓度的TAFIa/ai标准品建立标准曲线的结果图；

图4为本发明实施例3提供的TAFIa/ai化学发光定量检测方法Ⅱ中不同浓度的TAFIa/ai标准品建立标准曲线的结果图；

图5为本发明实施例3提供的TAFIa/ai化学发光定量检测方法III中不同浓度的TAFIa/ai标准品建立标准曲线的结果图。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种用于结合TAFIa/ai的蛋白质，蛋白质为PCT1蛋白，具有如下所示的氨基酸序列(SEQ ID NO.1)：

EQHADPICNKPCKTHDDCSGAWFCQACWNSARTCGPYVGMKLYFSRNPNPRLAVAIARYLETKLDFEFASPFAAGQMEKFRRLNPNLSLPILVDDEGKSLWEADAIACRLSRHAHSDFWRTGDDEPEMIRWLSWGKEHFALACDTVHFERGTKQRYGIGPIDQKRVEEGLNQFHTAAAMLDAVLAERQWLVGNSVSYADFRMATFLPFNDAARLPLDDYPSVSRWYRRLEDIDAWRDPFKGMDAPELPPVPQMAVADQREQYDPVCHKPCSTQDDCSGGTFCQACWRFAGTCGPYVHHHHHH。

本发明还提供了上述的蛋白质在结合TAFIa/ai中的应用。

本发明提供的用于结合TAFIa/ai的蛋白质，能够与TAFIa/ai特异性结合，其特点是每个蛋白分子能够同时结合两个TAFIa/ai，提高了检测灵敏度。

另外，本发明还提供了一种用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，包括如下(a)或(b)：

(a)具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的蛋白质；

(b)TAFIa/ai抗体。

根据本申请研究发现，TAFIa短时间失活后，会转变为TAFIai，TAFIai在样本的存留时间要长于TAFIa。因此，TAFIa/ai其浓度在临床检验和研究中的意义远高于TAFI含量的检测，对TAFIa/ai在临床应用做出深入研究，发现在实际应用过程中的样本中TAFIa/ai含量为ng/mL级别，其相对波动明显程度很高，而且TAFIa/ai的含量可以更直接的显示出参与纤溶过程的TAFI用量，有突出的血栓性疾病检测的临床应用和研究优势。

在一个优选的实施方式中，该试剂盒包括利用磁微粒复合物链接的如下(a)或(b)：

(a)具有如SEQ ID NO.1所示的蛋白质；

(b)TAFIa/ai抗体。

在一个优选的实施方式中，该试剂盒还包括标记物试剂、底物试剂和TAFIa/ai标准品。

其中，标记物试剂中的标记物与TAFIa/ai抗体形成标记物复合物。

在一个优选的实施方式中，磁微粒复合物为磁微粒-链霉亲和素复合物或磁微粒-抗体复合物。

其中，磁微粒-抗体复合物中的抗体为具有如SEQ ID NO.1所示的蛋白质的抗体，或TAFIa/ai抗体的抗体。

在一个更优选的实施方式中，上述抗体为抗GST单克隆抗体。

在一个优选的实施方式中，使用化学偶联方式在标记物与TAFIa/ai抗体之间增加一段多聚赖氨酸，提升标记物信号强度，增强标记物和抗体的独立性。

在一个优选的实施方式中，标记物试剂中的标记物为吖啶酯。

当标记物为吖啶酯时，底物试剂包括：H₂O₂和NaOH，H₂O₂的使用浓度为0.05-0.12mol/L，NaOH的使用浓度为0.15-0.30mol/L，溶剂为水。

其中，H₂O₂的使用浓度例如可以为，但不限于0.05mol/L、0.06mol/L、0.07mol/L、0.08mol/L、0.09mol/L、0.10mol/L、0.11mol/L或0.12mol/L；NaOH的使用浓度例如可以为，但不限于0.15mol/L、0.18mol/L、0.20mol/L、0.22mol/L、0.25mol/L、0.27mol/L或0.30mol/L。

在一个更优选的实施方式中，H₂O₂的使用浓度为0.1mol/L，NaOH的使用浓度为0.25mol/L。

在另一个优选的实施方式中，标记物为碱性磷酸酶。

当标记物为碱性磷酸酶时，底物试剂包括：AMPPD、Tris、NaCl和CTAC，AMPPD(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐)的使用浓度为0.1-0.6g/L，Tris(三羟甲基氨基甲烷)的使用浓度为10-18g/L，NaCl(氯化钠)的使用浓度为50-100g/L，CTAC(十六烷基三甲基氯化铵)的使用浓度为0.005-0.02g/L，溶剂为水。在使用时，用酸调节pH至8-10。

其中，AMPPD的使用浓度例如可以为，但不限于0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L或0.6g/L；Tris的使用浓度例如可以为，但不限于10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L或18g/L；NaCl的使用浓度例如可以为，但不限于50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/L或100g/L；CTAC的使用浓度例如可以为，但不限于0.005g/L、0.007g/L、0.01g/L、0.012g/L、0.015g/L、0.018g/L或0.02g/L；pH例如可以为，但不限于8、9、9.4或10。

在一个更优选的实施方式中，AMPPD的使用浓度为0.5g/L，Tris的使用浓度为18g/L，NaCl的使用浓度为100g/L，CTAC的使用浓度为0.02g/L，使用盐酸将pH调整为9.4。

在一个优选的实施方式中，TAFIa/ai标准品为TAFI经重组蛋白经凝血酶、血栓调节蛋白和Ca²⁺活化后的不同浓度的TAFIa/ai。

本发明提供的用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，具有操作简便、快捷，成本低廉，诊断敏感，检出限低等优点，作为新的TAFIa/ai检测手段，可以对临床血栓类疾病研究和TAFIa/ai的检测给予更进一步的帮助。

为了有助于更清楚的理解本发明，下面将结合实施例和对比例对本发明的技术方案进行进一步地说明。

实施例1TAFIa/ai化学发光定量检测试剂的制备

(1)PGT1蛋白的构建

委托技术服务公司，将本发明设计PGT1蛋白序列根据大肠杆菌BL21密码子偏好性进行合成，蛋白序列如下(SEQ ID NO.1)：

得到的载体的物理图谱如图1所示。

将制备得到的蛋白质进行电泳操作，结果如图2所示：各泳道依次为①纯化的PGT1蛋白；②纯化的PGT1蛋白；③纯化的PGT1蛋白；④未纯化的PGT1蛋白；M蛋白marker。从结果图中可以看出，制备得到的蛋白质为PGT1蛋白。

(2)TAFIa/ai标准品的制备

将TAFI重组蛋白(50μg)和凝血酶(50U/mL)、凝血调节蛋白(3U/mL)、Ca²⁺(5mM)在500μL的100mM Tris-HCl(pH 7.4)体系中室温孵育20min，将TAFI全部激活为TAFIa/ai。反应结束后加入1μg的D-苯丙氨酰-L-脯氨酰-精氨酰氯甲基酮(PPACK)终止反应。用标准品缓冲液(含0.5％BSA的100mM Tris-HCl(pH 7.4))将TAFIa/ai稀释成0、50、100、200、400ng/mL。

(3)磁微粒-链霉亲和素复合物的制备

将粒径为0.5-5μm的10mg磁微粒进行磁分离，用50mmol/L pH 6.0的MES缓冲液重悬，加入10mg/mL的EDC和NHS溶液各10μL，室温反应30min。磁分离后去除上清，加入50mmol/L的PBS重悬，加入3mg的链霉亲和素，混匀后室温反应2h。加入终浓度为0.5％的BSA室温封闭30min。磁分离后去除上清，加入50mmol/L的PBS至磁微粒终浓度1mg/mL。

(4)磁微粒-抗GST单克隆抗体复合物的制备

将粒径为0.5-5μm的10mg磁微粒进行磁分离，用50mmol/L pH 6.0的MES缓冲液重悬，加入10mg/mL的EDC和NHS溶液各10μL，室温反应30min。磁分离后去除上清，加入50mmol/L的PBS重悬，加入1mg的抗GST单克隆抗体，混匀后室温反应2h。加入终浓度为0.5％的BSA室温封闭30min。磁分离后去除上清，加入50mmol/L的PBS至磁微粒终浓度1mg/mL。

(5)生物素化PGT1的制备

将PGT1在0.02mol/L PBS 2-8℃透析过夜，调整浓度为2mg/mL，将预活化生物素使用纯水溶解，以20：1的比例向PGT1溶液中加入生物素溶液，室温反应30分钟，之后转入透析袋内，用0.02mol/L PBS，2-8℃透析过夜。

(6)TAFIa/ai化学发光定量检测试剂(Ⅰ-a)的制备

将步骤(3)制备的磁微粒-链霉亲和素复合物(10mL)和步骤(5)制备的生物素化PGT1(10mL)混合，室温孵育10min后进行磁分离，去除上清，用10mL 50mmol/L PBS洗涤2次。

(7)TAFIa/ai化学发光定量检测试剂(Ⅱ-a)的制备

将步骤(4)制备的磁性颗粒-抗GST单克隆抗体复合物(10mL)和步骤(1)制备的PGT1(10mL)混合，室温孵育10min后进行磁分离，去除上清，用10mL 50mmol/L PBS洗涤2次。

(8)TAFIa/ai化学发光定量检测试剂(III-a)的制备

将粒径为0.5-5μm的10mg磁微粒进行磁分离，用50mmol/L pH 6.0的MES缓冲液重悬，加入10mg/mL的EDC和NHS溶液各10μL，室温反应30min。磁分离后去除上清，加入50mmol/L的PBS重悬，加入1mg的抗TAFIa/ai单克隆抗体A，混匀后室温反应2h。加入终浓度为0.5％的BSA室温封闭30min。磁分离后去除上清，加入50mmol/L的PBS至磁微粒终浓度1mg/mL。

(9)TAFIa/ai单克隆抗体B-吖啶酯复合物(Ⅰ-b)的制备

将多聚赖氨酸(分子量1000-5000)用50mmol/L pH 6.0的MES缓冲液配制成1mg/mL。取100μL，加入10mg/mL的EDC和NHS溶液各10μL，室温反应30min。加入25mg/mL TAFIa/ai单克隆抗体B 100μL，室温反应2h。然后用0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.5)在2-8℃透析过夜。得到多聚赖氨酸-TAFIa/ai单克隆抗体B。

向多聚赖氨酸-TAFIa/ai单克隆抗体B中加入8.0μL浓度为6.0mmol/L的吖啶酯溶液混匀，室温反应2h，之后转入透析袋内用pH 6.3，0.1mol/L的PBS透析过夜，加入等体积甘油，分装后置于-20℃备用。

(10)TAFIa/ai单克隆抗体B-碱性磷酸酶复合物(Ⅱ-b)的制备

将碱性磷酸酶、EDC和NHS溶解于100μL 30mmol/L MES缓冲液(pH4.0)中，使碱性磷酸酶、EDC、NHS终浓度分别为0.01mmol/L、10mmol/L、50mmol/L。室温反应2h，加入100μg多聚赖氨酸-TAFIa/ai单克隆抗体B，加入100μL pH 8.0的PBS缓冲液。37℃反应2h后，用ProteinG亲和柱(GE公司)纯化酶标抗体，得到TAFIa/ai单克隆抗体B-碱性磷酸酶复合物。

(11)化学发光底物液Ⅰ的制备

发光底物A液为0.1mol/L H₂O₂、B液为0.25mol/L NaOH。

(12)化学发光底物液Ⅱ的制备

称取3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐(AMPPD)0.5g、三羟甲基氨基甲烷(Tris)18g、氯化钠(NaCl)100g、十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)0.02g，纯化水定容至1000mL，调整其pH值为9.4±0.05。在2～8℃条件下避光保存，用时缓慢混匀。

(13)化学发光清洗液的制备

称取1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)、8.5g氯化钠(NaCl)、1g吐温-20，加入纯化水约900mL，混匀至各试剂溶解，用2mol/L柠檬酸钠溶液调整溶液pH到7.8±0.1，补加纯化水定容至1000mL，过滤后混匀待用。

实施例2TAFIa/ai化学发光定量检测方法Ⅰ

(1)化学发光仪型号为BPCL微弱发光测量仪。检测池温度设为37℃。

(2)在检测管中加入150μL的本发明实施例1步骤(6)提供的试剂Ⅰ-a、150μL的本发明实施例1步骤(9)提供的试剂Ⅰ-b和5μL的标准品，混匀后放在检测池中孵育10min。

(3)磁分离，去除上清。将本发明实施例1步骤(11)提供的化学发光底物Ⅰ中的A液和B液各50μL依次注入检测管中，开始记录发光强度，测量时间300s。本实验采集的是化学发光动力学曲线的峰面积所对应的光子计数。

(4)用几个不同浓度的标准品建立标准曲线。用相同的方法检测样本，通过标准曲线得到所测的TAFIa/ai浓度。

不同浓度或活化时间对检测得到的TAFIa/ai的发光强度的影响结果如表1所示：

标准物浓度(ng/mL)	发光强度(ΔI<sub>CL</sub>×10<sup>-8</sup>)
		0	0.0084
50	0.3102
		100	0.5463
200	1.0993
		400	2.1846
活化3min标准品	0.1013
		活化20min标准品	1.5823

制得的标准曲线如图3所示。

实施例3TAFIa/ai化学发光定量检测方法Ⅱ

(2)在检测管中加入150μL的本发明实施例1步骤(7)提供的试剂Ⅱ-a、150μL的本发明实施例1步骤(10)提供的试剂Ⅱ-b和5μL的标准品，混匀后放在检测池中孵育10min。

(3)磁分离，去除上清，加入300μL的本发明实施例1步骤(13)提供的化学发光清洗液。去除磁场，混匀后在检测池中孵育5min。

(4)将本发明实施例1步骤(12)提供的化学发光底物Ⅱ注入检测管中，开始记录发光强度，测量时间300s。本实验采集的是化学发光动力学曲线的峰面积所对应的光子计数。

(5)用几个不同浓度的标准品建立标准曲线。用相同的方法检测样本，通过标准曲线得到所测的TAFIa/ai浓度。

不同浓度或活化时间对检测得到的TAFIa/ai的发光强度的影响结果如表2所示：

标准物浓度(ng/mL)	发光强度(ΔI<sub>CL</sub>×10<sup>-8</sup>)
		0	0.0105
50	0.3847
		100	0.8035
200	1.5763
		400	3.1498
活化3min标准品	0.1203
		活化20min标准品	1.9346

制得的标准曲线如图4所示。

实施例4TAFIa/ai化学发光定量检测方法III

(2)在检测管中加入150μL的本发明实施例1步骤(8)提供的试剂III-a、150μL的本发明实施例1步骤(9)提供的试剂Ⅰ-b和5μL的标准品，混匀后放在检测池中孵育10min。

不同浓度或活化时间对检测得到的TAFIa/ai的发光强度的影响结果如表3所示：

标准物浓度(ng/mL)	发光强度(ΔI<sub>CL</sub>×10<sup>-8</sup>)
		0	0.0163
50	0.1781
		100	0.2968
200	0.5923
		400	1.1332
活化3min标准品	0.0744
		活化20min标准品	0.8134

制得的标准曲线如图5所示。

实施例5化学发光定量检测方法检测样本中的TAFIa/ai

新采集10例血浆样本，分别按照本发明实施例2、实施例3和实施例4提供的方法检测其中的TAFIa/ai浓度。分别通过已建立的标准曲线得到浓度值如下表所示：

通过上述实验结果可以看出，本发明提供的用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，操作简便、快捷，诊断敏感，检出限低，作为新的TAFIa/ai检测手段，可以对临床血栓类疾病研究和TAFIa/ai的检测给予更进一步的帮助。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 辽宁迈迪生物科技股份有限公司

<120> 用于结合TAFIaai的蛋白质及其应用和用于检测TAFIaai含量的试剂盒

<130> 2017

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 302

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Glu Gln His Ala Asp Pro Ile Cys Asn Lys Pro Cys Lys Thr His Asp

1 5 10 15

Asp Cys Ser Gly Ala Trp Phe Cys Gln Ala Cys Trp Asn Ser Ala Arg

20 25 30

Thr Cys Gly Pro Tyr Val Gly Met Lys Leu Tyr Phe Ser Arg Asn Pro

35 40 45

Asn Pro Arg Leu Ala Val Ala Ile Ala Arg Tyr Leu Glu Thr Lys Leu

50 55 60

Asp Phe Glu Phe Ala Ser Pro Phe Ala Ala Gly Gln Met Glu Lys Phe

65 70 75 80

Arg Arg Leu Asn Pro Asn Leu Ser Leu Pro Ile Leu Val Asp Asp Glu

85 90 95

Gly Lys Ser Leu Trp Glu Ala Asp Ala Ile Ala Cys Arg Leu Ser Arg

100 105 110

His Ala His Ser Asp Phe Trp Arg Thr Gly Asp Asp Glu Pro Glu Met

115 120 125

Ile Arg Trp Leu Ser Trp Gly Lys Glu His Phe Ala Leu Ala Cys Asp

130 135 140

Thr Val His Phe Glu Arg Gly Thr Lys Gln Arg Tyr Gly Ile Gly Pro

145 150 155 160

Ile Asp Gln Lys Arg Val Glu Glu Gly Leu Asn Gln Phe His Thr Ala

165 170 175

Ala Ala Met Leu Asp Ala Val Leu Ala Glu Arg Gln Trp Leu Val Gly

180 185 190

Asn Ser Val Ser Tyr Ala Asp Phe Arg Met Ala Thr Phe Leu Pro Phe

195 200 205

Asn Asp Ala Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asp Tyr Pro Ser Val Ser Arg

210 215 220

Trp Tyr Arg Arg Leu Glu Asp Ile Asp Ala Trp Arg Asp Pro Phe Lys

225 230 235 240

Gly Met Asp Ala Pro Glu Leu Pro Pro Val Pro Gln Met Ala Val Ala

245 250 255

Asp Gln Arg Glu Gln Tyr Asp Pro Val Cys His Lys Pro Cys Ser Thr

260 265 270

Gln Asp Asp Cys Ser Gly Gly Thr Phe Cys Gln Ala Cys Trp Arg Phe

275 280 285

Ala Gly Thr Cys Gly Pro Tyr Val His His His His His His

290 295 300

Claims

1.一种用于结合TAFIa/ai的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.如权利要求1所述的蛋白质在结合TAFIa/ai中的应用。

3.一种用于检测TAFIa/ai含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的蛋白质。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括利用磁微粒复合物链接的权利要求1所述的蛋白质。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标记物试剂、底物试剂和TAFIa/ai标准品。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒复合物为磁微粒-链霉亲和素复合物或磁微粒-抗体复合物。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述标记物试剂中的标记物为吖啶酯。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述底物试剂包括：H₂O₂和NaOH；

9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述标记物为碱性磷酸酶。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述底物试剂包括：AMPPD、Tris、NaCl和CTAC；