CN107624792A - 一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法 - Google Patents

一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法 Download PDF

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葛亚明
刘俊稚
夏松养
孙静亚
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Abstract

一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，所述的方法包括如下步骤：a）将蟹壳烘干获得干燥蟹壳；b）使用超微粉碎机粉碎并过筛；c）将过筛后的蟹壳粉按照蟹壳粉：有机酸=1：10‑100的比例加入有机酸；d）将超声波对有机酸连续超声20‑200分钟；e）将玻璃容器中的混合溶液过滤，将滤液蒸干，获得有机酸钙；f）将滤渣转移至微生物发酵罐，向发酵罐中补充适量FeSO4.7H2O、鸟氨酸、KH2PO4和MgSO4.7H2O，获得蟹壳粉发酵准备液；g）使用培养基活化自行分离的内生链霉菌属菌株；h）将活化后的菌株培养液按照活化菌株培养液；i）将蟹壳粉发酵液与腐殖酸溶液或螯合钙或氨基酸按照比例混合，获得蟹壳基植物免疫诱抗剂。

Description

一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法
技术领域
本发明涉及的是一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，属于植物免疫诱抗剂的制备技术领域。
背景技术
蟹壳是蟹类加工企业的主要下脚料之一。研究表明甲壳素、壳聚糖和壳寡糖等蟹壳降解产物能够显著提高植物的抗病增产能力，因此可作为关键原料制备植物免疫诱抗剂。以蟹类加工品的下脚料蟹壳为原料，开发微生物法降解蟹壳的清洁生产工艺，将降解产物与生物碱等生物制剂复配，开发专用型植物免疫诱抗剂产品，可拓展蟹类加工产业链，增加企业效益。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的存在的不足，而提供一种有机酸原料丰富，制取方便，价格低廉，对植物的生长发育也十分有利，可以广泛应用于绿色和有机农产品生产的利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，所述的方法包括如下步骤：
a）将蟹壳在40-120℃下烘干至重量不再变化，获得干燥蟹壳；
b）秤取一定量的干燥蟹壳，使用超微粉碎机粉碎，将粉碎后的蟹壳粉过50-500目筛；
c）将过筛后的蟹壳粉转移至玻璃容器，按照蟹壳粉：有机酸=1：10-100（重量/体积）的比例加入有机酸；
d）将超声波细胞破碎仪的探头插入玻璃容器中的有机酸内，调节超声波细胞破碎仪的功率至150-1800W，连续超声20-200分钟；
e）当玻璃容器内不再有气泡产生时，将玻璃容器中的混合溶液过滤，滤渣用自来水洗至pH值等于6-7；将滤液蒸干，获得有机酸钙；
f）将滤渣转移至微生物发酵罐，向发酵罐中补充适量FeSO4.7H2O、鸟氨酸、KH2PO4和MgSO4.7H2O，获得蟹壳粉发酵准备液；
g）使用ISPI培养基活化自行分离的内生链霉菌属（Streptomyces sp.）菌株，于恒温摇床上连续培养30-50小时；
h）将活化后的菌株培养液按照活化菌株培养液：蟹壳粉发酵准备液的体积比为1:5-50接种于发酵罐中，调节发酵罐内溶液的pH值为6-7，控制发酵罐温度为28℃，连续培养2-10天，获得蟹壳粉发酵液；
i）将蟹壳粉发酵液与腐殖酸溶液按照体积比:10-100：1的比例混合，或者将蟹壳粉发酵液与螯合钙按照体积（ml）/质量（g）比:100-1000：1的比例混合，再或者将蟹壳粉发酵液与氨基酸按照体积（ml）/质量（g）比:10-50：1的比例混合，分别获得果树专用型、蔬菜专用型和花卉专用型蟹壳基植物免疫诱抗剂。
作为优选：所述的步骤b）中，秤取10-100g干燥蟹壳；
所述的步骤c）中，加入有机酸是竹酸，草酸、苯甲酸中的一种或几种）；
所述的步骤g）中，恒温摇床的温度为25-30℃，转速为100-200 转/分钟；
所述的步骤i）中，腐殖酸溶液的TOC浓度为500 mg/L）。
本发明使用有机酸、超声波、湿法粉碎等不需外排废水的环境友好型技术方法对蟹壳进行预处理，破坏蟹壳内生物钙质的稳定结构，改善微生物对蟹壳内蛋白质等有机成分的接触效果，再使用微生物对预处理蟹壳降解，制取甲壳素、壳聚糖和壳寡糖等蟹壳降解产物；将降解产物与甜菜碱、腐殖酸等生物制剂复配，制备高活性植物免疫诱抗剂。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明作详细的介绍：本发明所述的一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，所述的方法包括如下步骤：
a）将蟹壳在40-120℃下烘干至重量不再变化，获得干燥蟹壳；
b）秤取一定量的干燥蟹壳，使用超微粉碎机粉碎，将粉碎后的蟹壳粉过50-500目筛；
c）将过筛后的蟹壳粉转移至玻璃容器，按照蟹壳粉：有机酸=1：10-100（重量/体积）的比例加入有机酸；
d）将超声波细胞破碎仪的探头插入玻璃容器中的有机酸内，调节超声波细胞破碎仪的功率至150-1800W，连续超声20-200分钟；
e）当玻璃容器内不再有气泡产生时，将玻璃容器中的混合溶液过滤，滤渣用自来水洗至pH值等于6-7；将滤液蒸干，获得有机酸钙；
f）将滤渣转移至微生物发酵罐，向发酵罐中补充适量FeSO4.7H2O、鸟氨酸、KH2PO4和MgSO4.7H2O，获得蟹壳粉发酵准备液；
g）使用ISPI培养基活化自行分离的内生链霉菌属（Streptomyces sp.）菌株，于恒温摇床上连续培养30-50小时；
h）将活化后的菌株培养液按照活化菌株培养液：蟹壳粉发酵准备液的体积比为1:5-50接种于发酵罐中，调节发酵罐内溶液的pH值为6-7，控制发酵罐温度为28℃，连续培养2-10天，获得蟹壳粉发酵液；
i）将蟹壳粉发酵液与腐殖酸溶液按照体积比:10-100：1的比例混合，或者将蟹壳粉发酵液与螯合钙按照体积（ml）/质量（g）比:100-1000：1的比例混合，再或者将蟹壳粉发酵液与氨基酸按照体积（ml）/质量（g）比:10-50：1的比例混合，分别获得果树专用型、蔬菜专用型和花卉专用型蟹壳基植物免疫诱抗剂。
所述的步骤b）中，秤取10-100g干燥蟹壳；
所述的步骤c）中，加入有机酸是竹酸，草酸、苯甲酸中的一种或几种）；
所述的步骤g）中，恒温摇床的温度为25-30℃，转速为100-200 转/分钟；
所述的步骤i）中，腐殖酸溶液的TOC浓度为500 mg/L）。
实施例：
本发明所述的利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，所述的方法包括如下步骤：
1）将蟹壳在40-120℃下烘干至重量不再变化，获得干燥蟹壳；
2）秤取10-100g干燥蟹壳，使用超微粉碎机粉碎，将粉碎后的蟹壳粉过50-500目筛；
3）将过筛后的蟹壳粉转移至玻璃容器，按照蟹壳粉：有机酸=1：10-100（重量/体积）的比例加入有机酸（竹酸，草酸、苯甲酸等中的一种或几种）；
4）将超声波细胞破碎仪的探头插入玻璃容器中的有机酸内，调节超声波细胞破碎仪的功率至150-1800W，连续超声20-200分钟；
5）当玻璃容器内不再有气泡产生时，将玻璃容器中的混合溶液过滤，滤渣用自来水洗至pH值等于6-7；
6）将滤液蒸干，获得有机酸钙；
7）将滤渣转移至微生物发酵罐，向发酵罐中补充适量FeSO4.7H2O、鸟氨酸、KH2PO4和MgSO4.7H2O，获得蟹壳粉发酵准备液；
8）使用ISPI培养基活化自行分离的内生链霉菌属（Streptomyces sp.）菌株，于恒温摇床（温度为25-30℃，转速为100-200 转/分钟）上连续培养30-50小时；
9）将活化后的菌株培养液按照活化菌株培养液：蟹壳粉发酵准备液的体积比为1:5-50接种于发酵罐中，调节发酵罐内溶液的pH值为6-7，控制发酵罐温度为28℃，连续培养2-10天，获得蟹壳粉发酵液；
10）将蟹壳粉发酵液与腐殖酸溶液（TOC浓度500 mg/L）按照体积比:10-100：1的比例混合，或者将蟹壳粉发酵液与螯合钙按照体积（ml）/质量（g）比:100-1000：1的比例混合，再或者将蟹壳粉发酵液与氨基酸按照体积（ml）/质量（g）比:10-50：1的比例混合，分别获得果树专用型、蔬菜专用型和花卉专用型蟹壳基植物免疫诱抗剂。

Claims (2)

1.一种利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，其特征在于所述的方法包括如下步骤：
a）将蟹壳在40-120℃下烘干至重量不再变化，获得干燥蟹壳；
b）秤取一定量的干燥蟹壳，使用超微粉碎机粉碎，将粉碎后的蟹壳粉过50-500目筛；
c）将过筛后的蟹壳粉转移至玻璃容器，按照蟹壳粉：有机酸=1：10-100（重量/体积）的比例加入有机酸；
d）将超声波细胞破碎仪的探头插入玻璃容器中的有机酸内，调节超声波细胞破碎仪的功率至150-1800W，连续超声20-200分钟；
e）当玻璃容器内不再有气泡产生时，将玻璃容器中的混合溶液过滤，滤渣用自来水洗至pH值等于6-7；将滤液蒸干，获得有机酸钙；
f）将滤渣转移至微生物发酵罐，向发酵罐中补充适量FeSO4.7H2O、鸟氨酸、KH2PO4和MgSO4.7H2O，获得蟹壳粉发酵准备液；
g）使用ISPI培养基活化自行分离的内生链霉菌属（Streptomyces sp.）菌株，于恒温摇床上连续培养30-50小时；
h）将活化后的菌株培养液按照活化菌株培养液：蟹壳粉发酵准备液的体积比为1:5-50接种于发酵罐中，调节发酵罐内溶液的pH值为6-7，控制发酵罐温度为28℃，连续培养2-10天，获得蟹壳粉发酵液；
i）将蟹壳粉发酵液与腐殖酸溶液按照体积比:10-100：1的比例混合，或者将蟹壳粉发酵液与螯合钙按照体积（ml）/质量（g）比:100-1000：1的比例混合，再或者将蟹壳粉发酵液与氨基酸按照体积（ml）/质量（g）比:10-50：1的比例混合，分别获得果树专用型、蔬菜专用型和花卉专用型蟹壳基植物免疫诱抗剂。
2.根据权利要求1所述的利用蟹壳制备植物免疫诱抗剂的方法，其特征在于：
所述的步骤b）中，秤取10-100g干燥蟹壳；
所述的步骤c）中，加入有机酸是竹酸，草酸、苯甲酸中的一种或几种）；
所述的步骤g）中，恒温摇床的温度为25-30℃，转速为100-200 转/分钟；
所述的步骤i）中，腐殖酸溶液的TOC浓度为500 mg/L）。
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