CN107613967A - 用于预防和/或治疗胃肠道的炎症疾病的宿主防御蛋白（hdp）模拟物 - Google Patents

用于预防和/或治疗胃肠道的炎症疾病的宿主防御蛋白（hdp）模拟物 Download PDF

Info

Publication number
CN107613967A
CN107613967A CN201680024015.9A CN201680024015A CN107613967A CN 107613967 A CN107613967 A CN 107613967A CN 201680024015 A CN201680024015 A CN 201680024015A CN 107613967 A CN107613967 A CN 107613967A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pmx
disease
compound
inflammation
stomach
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201680024015.9A
Other languages
English (en)
Inventor
克里希纳·梅农
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Innovation Pharmaceutical Co
Cellceutix Corp
Original Assignee
Innovation Pharmaceutical Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Innovation Pharmaceutical Co filed Critical Innovation Pharmaceutical Co
Publication of CN107613967A publication Critical patent/CN107613967A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明提供了通过本文公开的一种或多种化合物、或它们的药学上可接受的盐治疗和/或预防胃肠道的炎症疾病的方法，以及包含其的组合物的用途。

Description

用于预防和/或治疗胃肠道的炎症疾病的宿主防御蛋白(HDP) 模拟物
相关申请的交叉引证
本申请要求于2015年2月20日提交的美国临时专利申请序列号62/118,950的权益。通过引用将其全部内容结合于本文中。
技术领域
本发明涉及宿主防御蛋白(host defense protein)(HDP)模拟物在胃肠道的炎症疾病的预防和治疗中的用途，宿主防御蛋白模拟物包括brilacidin(PMX-30063)和delparantag(PMX-60056)和它们的药学上可接受的盐，及它们的药物组合物。
背景技术
胃肠道的炎症疾病涉及全部或部分消化道的慢性炎症。胃肠道的炎症疾病不是简单的异常。其是引起消化道的长期炎症的一组异常的术语。这种病症可以是慢性的、亚慢性的或急性的，且根据病症可以是轻度的、中等的或严重的。许多疾病包括在该涵盖性术语中。这种治疗中包括在消化道所有部分中的消化道炎症，而不管解剖学区域。活跃疾病的主要症状常见地是逐渐发作的混有血液的持续腹泻。
消化道由嘴巴、食道、胃、小肠、大肠、结肠、直肠和肛门组成。其负责分解食物、提取营养物和除去任何不可用的材料和废产物。沿着消化道的任何地方的炎症包括在这种治疗过程中。治疗包括所有这些病症：
溃疡性结肠炎(UC)是引起大肠(结肠)和直肠的最内部内衬的长期炎症和疼痛(溃疡)的炎症性肠病(IBD)。主要症状是腹泻、大便带血，偶见发烧和腹痛。发作可以是潜伏的或急性的(轻度-60％，中等至严重的-25％，爆发性的-15％)。严重的发作可能伴有结肠扩张，称为毒性巨结肠，其关系到大量的发病率和死亡率。溃疡性结肠炎的并发症是大出血、狭窄形成、爆发性结肠炎(毒性巨结肠)和结肠癌。溃疡性结肠炎开始于直肠并可以向近处发展到涉及结肠的任一段或整个结肠；60％至75％的溃疡性结肠炎患者没有患有靠近乙状结肠的疾病。全结肠炎发生在20％的患者中。溃疡性结肠炎的发病率为每年每100,000个体1至20例，以及流行率为每100,000个体8至246例。根据炎症的位置和症状的严重程度分类溃疡性结肠炎：
·溃疡性直肠炎-炎症限于最接近肛门的区域(直肠)，且直肠出血可以是疾病的唯一迹象。这种形式的溃疡性结肠炎倾向于是最轻度的。
·溃疡性直肠乙状结肠炎-炎症涉及直肠和乙状结肠(结肠的下端)。迹象和症状包括血样腹泻、腹部痉挛和疼痛以及即使努力也不能通大便(里急后重(tenesmus))。
·左侧结肠炎-炎症从直肠向上延伸到乙状结肠和降结肠。迹象和症状包括血样腹泻、左侧腹痉挛和疼痛以及无意的体重下降。
·全结肠炎-全结肠炎往往影响整个结肠并引起可能严重的血样腹泻、腹部痉挛和疼痛、疲劳和明显的体重下降发作。
·急性严重的溃疡性结肠炎-之前称为爆发性结肠炎，结肠炎的这种罕见形式影响整个结肠并引起严重的疼痛、剧烈腹泻、出血、发烧和不能进食。
胶原性结肠炎和淋巴细胞性结肠炎(lymphocytic colitis)也被视为炎症性肠病，但是通常将其与典型的炎症性肠病区别看待。
克罗恩氏病也是引起消化道的内衬的炎症的炎症性肠病。在克罗恩氏病中，炎症往往深入扩散到受影响的组织中。炎症可以涉及消化道的不同区域-大肠、小肠或两者。疾病分布的三种主要模式是回盲肠(40％)，小肠(30％)和结肠(25％)。涉及食道、胃和十二指肠不太常见。最常见的症状是腹泻、腹痛和体重下降。在诊断之前，疾病往往存在数月或数年。在儿童中，生长迟缓可能是指示疾病的一个主要迹象。常见地称为肛周疾病的瘘、脓肿和裂伤的存在是与溃疡性结肠炎的区分因素。克罗恩氏病与溃疡性结肠炎一样也是缓解(remitting)和复发疾病：大于60％的患者在10年内将要求手术，70％的患者在手术一年内将内窥镜检查复发，以及50％的患者在4年内将有复发症状。在克罗恩氏病中，炎症更常见地是病灶性的，其导致肠壁增厚、变得浮肿和纤维化，且肠系膜可能渗透脂肪。主要并发症是狭窄症、弥漫性回肠疾病、弥漫性粘膜损害、瘘、泌尿草酸钙结石和恶性肿瘤，而大出血不太常见。克罗恩氏病可以涉及不同人中的消化道的不同部分的炎症。受影响的最常见区域是小肠的最后部分(回肠)和结肠。炎症可能限于肠壁，其可能导致由于炎症的变窄或瘢痕形成或两者(纤维狭窄)，或可以使肠壁穿孔(瘘)。变窄可能导致阻断(阻塞)。阻塞、狭窄症和瘘与溃疡性结肠炎无关。
过敏性肠综合征(irritable bowel syndrome)(IBS)是影响消化道的另一种疾病，其特征在于慢性腹痛、气胀和腹泻或便秘。IBS没有已知的特殊原因，但是可以在感染或压力之后出现。不存在治愈，但是治疗包括饮食改变、药物、针灸、心理疗法和草药治疗如薄荷油。药物包括抗抑郁剂如氯氮平或奥氮平、轻泻药、止泻药、血清素拮抗剂(5HT3)如昂丹司琼(ondansetron)、氯氮平(clozapine)或昂丹司琼、或血清素再吸收抑制剂(SSRI)、抗痉挛药如莨菪碱或双环胺、质子泵抑制剂(PPI)、硅酸镁铝、阿尔维林柠檬酸盐药物和利福昔明。IBS影响约15％的美国人口。
炎症性肠病
还不能完全地了解IBD的准确原因。积累的证据提出在IBD的发病机理中一直涉及免疫应答。
肠微生物组(mircrobiome)由存在于肠子(gut)的微生物组成。宿主-微生物组相互相用可以交互受益或可以是有毒的，诱发肠炎。在肠微生物组和与胃肠系统有关的淋巴组织之间的界面处的肠上皮在形成粘膜免疫应答上起到关键作用。肠上皮细胞是抵抗过多进入的细菌和其他抗原从肠腔进入到循环的物理障碍。针对细菌入侵的另外的防卫物由专门的上皮细胞组成，包括杯状细胞(goblet cell)和潘纳斯细胞(Paneth cell)。杯状细胞调节粘液和有助于上皮修复和炎症的调节的因子的产生。潘纳斯细胞分泌抗微生物肽如α-防卫素。肠粘液覆盖上皮，从而限制细菌和上皮细胞之间的接触。然而，在炎症性肠病中，炎症反应往往导致持续的上皮伤害，其导致糜烂、溃疡以及防卫素的产量减少。结果是暴露于肠微生物区增多且炎症响应加强。
肠固有层(intestinal lamina propria)包含复杂的免疫细胞群，其平衡内腔微生物区的免疫耐受性的需求与防御病原体、过多进入的内腔微生物区的需要或两者。活跃的炎症性肠病的特点是明显渗透进入先天免疫细胞(嗜中性白细胞、巨噬细胞、树突状细胞和天然杀伤T细胞)和适应性免疫细胞(T细胞和B细胞)的固有层。肠粘膜中这些细胞的数量增加和激活升高TNF-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-23-Th17通路的细胞因子的局部水平。
如在IBD中观察到的，已经将促炎细胞因子TNF-α鉴定为在引起慢性炎症的炎症性级联反应中起到关键作用。在包括克罗恩氏病的多种炎症疾病中循环IL-6的水平升高。IL-6是炎症响应的关键调节剂。影响这种细胞因子的产生可以改变效应物CD4+T细胞亚群的平衡并诱导B细胞抗体产生。此外，考虑到IL-6大部分由先天细胞如巨噬细胞、嗜中性白细胞和肥大细胞产生，其是先天和适应性系统之间的战略桥梁。
对于IBD没有治愈性治疗法。对于UC的唯一治愈法是手术去除大肠，这降低生活质量。为了缓和症状，改变饮食和生活方式是重要的。通常使用消炎类固醇，但是它们也可以诱发严重的副作用。用于IBD的一种消炎药是美沙拉嗪(mesalazine，也称为mesalamine或5-氨基水杨酸)，但是其在UC中比在克罗恩氏病中更有效。免疫调节剂如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、英夫利昔、阿达木单抗、赛妥珠单抗和那他珠单抗也用于克罗恩氏病。长期使用抗生素对于克罗恩氏病稍微有效，但是在UC中无效。长期使用抗生素带来发展耐药微生物的风险。一些个体依赖益生菌、鱼油、针灸或顺势疗法治疗来尝试减轻症状。除了对消化系统的影响，IBD还可以引起营养不足、虹膜炎、眼色素层炎、皮疹、关节炎、原发性硬化性胆管炎、强直性脊柱炎、坏疽性脓皮病和结节性红斑。炎症性肠病影响约1.4百万的美国人，且其发作峰是在15至30岁的人中。
用于炎症疾病的宿主防御蛋白模拟物的发展
最初针对它们直接的抗微生物活性研究了宿主防御肽并发现其表现出多方面的免疫调节活性。尽管在HDP中观察到大的差异，但是它们通常采用高度保守的两亲拓扑结构，其中亲水和疏水侧链分离到分子的明显相对的区域或面。具有两亲结构的分子的实例是爪蟾素(magainin)2。爪蛙素首次发现于非洲爪蛙[Zasloff M.Magainins,a class ofantimicrobial peptides from Xenopus skin:isolation,characterization of twoactive forms,and partial cDNA sequence of a precursor.PNAS 84:5449-5453(1987)]。
生物高分子，包括蛋白质和RNA，通常采用独特的折叠构象，这是它们显著性质的原因。直到最近仍认为折叠过程是一件神秘的事情，但是随着蛋白质折叠、RNA结构和分子组织领域的发展，设计折叠为独特的结构的非生物分子的可能性越来越大。为了模拟天然蛋白质，研究人员通过连续连接独立的单体单元合成了低聚物，以提供具有完全一致的序列和链长度的均相(homogeneous)线性分子。折叠为良好限定的二级结构的低聚物已经变成折叠体(foldamer)(Hill DJ,et al.,Chem.Rev.2001,101,3893-4012；Horne WS,etal.,Acc.Chem.Res.2008,41,1399-1408；Patch JA,Barron AE,J.Am.Chem.Soc.2003,125,12092-12093)。许多折叠体的简单结构和相对容易的合成允许将它们用作分子识别的三维支架。
在Tew等人(Tew et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2002,99,5110-5114)中提供了芳基酰胺聚合物和低聚物的设计、合成和抗微生物活性的实例，通过引用将其全部结合于本文中。合成这些化合物(包括brilacidin(PMX-30063)和delparantag(PMX-60056))，来模拟天然存在的抗微生物肽。PMX-30063和PMX-60056两者具有类似的空间拓扑结构，其在空间上模拟HDP结构。
通过线性和环状肽的大量研究强有力地支持它们的物理化学性质而不是任何精确顺序是它们选择性破坏膜的能力的原因的假设。因此，已经发展了HDP的一系列非肽类似物(HDP模拟物)并评估了它们的潜在抗菌活性。证明优化总电荷和疏水含量两者对于设计在动物中高效和无毒的化合物是特别重要的。宿主防御蛋白(HDP)是先天免疫系统的关键组分并起到双重作用：迅速的微生物杀伤和随后的免疫调节。PMX-30063[N4,N6-双(2-((R)-吡咯烷-3-基氧基)-3-((4-氨基甲酰基丁基)胍)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-4,6-二甲酰胺四氢氯化合物盐，分子式：C40H50F6N14O6·4HCl，USAN名称：brilacidin]和PMX-60056[四-[(L)-赖氨酰基5-氨基-邻-甲基水杨酰胺，分子式：C56H84Cl5N13O12.·5HCl]对于药物用途是具有优于蛋白质的明显优势的HDP的非肽模拟物。这些HDP模拟物表现出迅速的杀菌活性以及消炎和免疫调节效果(Som A,Navasa N,Percher A,Scott RW,Tew GN,Anguita.Identification of Synthetic Host Defense Peptide Mimics That ExertDual Antimicrobial and Anti-Inflammatory Activities.Clin and VaccineImmunol.2012,19:1784-1791；Scorciapino MA,Rinaldi AC.Antimicrobialpeptidomimetics:reinterpreting nature to deliver innovativetherapeutics.Patricia Méndez-Samperio.Front.Immunol 2012,Vol 3,Article 171；Peptidomimetics as a new generation of antimicrobial agents:currentprogress.Infection and Drug Resistance 2014；7:229–237)。针对HDP已经定义了各种各样的免疫调节功能，其产生对潜在的有害促炎症响应的净抑制(Hilchie AL,et al.,Nat.Chem.Biol.2013,9,761-768)。它们多样的免疫调节能力包括调节促炎症和消炎响应(Mansour SC,et al.,Trends in Immunology 2014,35,443-450)以及充当先天和适应性免疫应答两者的免疫调节剂(Wong JH,et al Curr Protein Pept Sci.2013,14,504-514)。尽管HDP的消炎功能是已知的，但是缺乏对HDP的作用的分子机制的了解。本发明人假设在促炎症响应的抑制中HDP可以通过环AMP/环GMP路径起作用。如本文详细说明的，本发明人测试了该假设并发现宿主防御蛋白(HDP)模拟物PMX-30063和PMX-60056抑制体外磷酸二脂酶(PDE)。磷酸二脂酶是催化信号分子环AMP/或环GMP的分解的酶的家族。cAMP和cGMP是由参与许多信号过程的环化酶的大家族产生的普遍存在的第二信使信号分子。
PDE抑制剂在各种临床前模型中示出消炎活性(Martinea A,Gil C.Expertopinion on therapeutic patents 2014,24,1311-1321)。由于所有炎症和免疫调节细胞不仅表达PDE4，而且这些细胞的特定功能普遍受到选择性PDE4抑制剂的抑制的事实，PDE4受到特殊关注。PDE4是在嗜中性白细胞、T细胞和巨噬细胞中表达的主要磷酸二脂酶。PDE4抑制剂降低嗜中性白细胞趋化性、招募和激活；抑制CD4+和CD8+T细胞的激活；及抑制单核细胞趋化性(Tamimi A,et al.Resp.Med 2012,106,319-328)。本发明人的PMX-30063和PMX-60056是PDE抑制剂的发现(在以下讨论)指出预期本文所描述的这些化合物在胃肠道的炎症疾病的治疗中是有用的且如在实施例19中讨论的应在临床研究中进一步探究。
附图说明
图1示出PMX-30063抑制PDE4，IC50在3μM范围(n＝5)内。
图2示出PMX-60056抑制PDE4，IC50在3μM范围(n＝5)内。
图3示出PMX-30063抑制PDE3，IC50为1.5±0.2μM(n＝4)。
图4示出了PMX-60056抑制PDE3，IC50为3μM。
图5示出PMX-30063抑制大鼠巨噬细胞中LPS诱导的TNF-α生产。
图6示出PMX-60056抑制大鼠巨噬细胞中LPS诱导的TNF-α生产。
图7示出在LPS刺激大鼠巨噬细胞之后PMX-30063抑制MCP-1诱导，在0.5μM下MCP-1水平下降最少25％。
图8示出在LPS刺激大鼠巨噬细胞之后PMX-60056抑制MCP-1诱导，在0.5μM下MCP-1水平下降最少25％。
图9示出了在LPS刺激大鼠巨噬细胞之后，观察到在12.5μM的PMX-30063浓度下，MMP-9水平下降50％。
图10示出在LPS刺激大鼠巨噬细胞之后，PMX-30063抑制IL-6诱导，观察到在0.5μM的PMX-30063下IL-6水平下降约50％。
图11示出当在雄性Balb/c小鼠中口腔给予10mg/kg或IV给予5mg/kg之后评估PMX-30063的血浆和小肠浓度时，IV给予的PMX60073的峰值浓度是48,415ng/mL，而当PO给予时血浆中的峰值浓度是33.7ng/mL。
图12示出当在雄性Balb/c小鼠(Study 16009-12001)中口腔给予10mg/kg或IV给予5mg/kg之后评估PMX-30063的血浆和小肠浓度时，在PO给予之后，小肠组织中的峰值浓度是38,941ng/克组织。
图13示出了基于源自图12和13的数据计算的在口腔给予PMX-30063之后的肠/血浆浓度比值。
图14示出在体内溃疡性结肠炎模型中，在直肠给予PMX-30063之后与未处理的对照相比，肠重量下降，但是不明显。
图15示出观察到在直肠给予PMX-30063之后溃疡性结肠炎得分的剂量依赖性下降；然而，仅在用400mg/kg处理的动物中，与未处理的对照相比得分显著下降；以及用5-ASA处理的动物没有示出显著疗效。
发明内容
本发明涉及预防和/或治疗哺乳动物的胃肠道的炎症疾病的方法，包括给予需要这种预防和/或治疗的哺乳动物治疗有效量的选自brilacidin(PMX-30063)和delparantag(PMX-60056)和它们的药学上可接受的盐的化合物。在一个实施方式中，同时给予brilacidin和delparantag。在另一个实施方式中，炎症疾病是炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病或过敏性肠综合征。在另一个实施方式中，连同除brilacidin或delparantag之外的抗生素给予所述化合物。
本发明还涉及药物组合物用于治疗胃肠道的炎症疾病的用途，药物组合物包含治疗有效量的选自brilacidin和delparantag及它们的药学上可接受的盐的化合物，和药学上可接受的载体。疾病包括但不限于炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病和过敏性肠综合征。在一个实施方式中，药物组合物包含brilacidin和delparantag两者。在另一个实施方式中，组合物包含brilacidin或delparantag和除brilacidin之外的抗生素。在另一个实施方式中，组合物包含brilacidin或delparantag并与除brilacidin之外的抗生素一起给予。
本发明还提供了活性化合物或包含其的药物组合物，用于在制备预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的药剂中应用。在一个实施方式中，药物组合物包含brilacidin和delparantag两者。在另一个实施方式中，组合物包含除brilacidin之外的抗生素。
以下示出了brilacidin和delparantag的结构式。
PMX-30063(brilacidin)
PMX-60056(delparantag)
本发明还提供了用于预防和治疗哺乳动物的胃肠道的炎症疾病的药物组合物，其包含有效量的上述化合物中的一种或多种或它们的一种或多种盐及药学上可接受的载体。合适的组合物包含但不限于口服非吸收组合物。合适的组合物还包含但不限于盐水、水、环糊精溶液和pH 3-9的缓冲溶液。
具体实施方式
制备化合物brilacidin及其药学上可接受的盐所需的起始材料是可批量地商业获得的。通过以下各项制备化合物brilacidin和盐：
a)在叔丁醇钾存在的情况下使(R)-(-)-N-Boc-3-吡咯烷醇与2-氯-5-(三氟甲基)-1,3-二硝基苯反应以形成具有式I的化合物
b)在氢存在的情况下使式I的化合物与醇和过渡金属催化剂反应以形成式II的化合物
c)在N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐存在的情况下将式II的化合物和嘧啶-4,6-二羧酸添加到吡啶中以形成式III的化合物
d)使式III的化合物与5-(苄氧羰基氨基)戊酸反应以形成式IV的化合物
e)在醇、过渡金属催化剂和氢存在的情况下还原生成的式IV的化合物以提供式V
f)在碱存在的情况下使生成的式V的化合物与二-N-Boc吡唑反应以提供式VI的化合物：
使用酸脱保护式VI的化合物以产生PMX-30063(brilacidin)；以及如果期望，制备药学上可接受的盐。
通过以下各项制备化合物delparantag及其药学上可接受的盐：(a)使用氢气和过渡金属催化剂从式VII的化合物或它们的药学上可接受的盐中除去Cbz基团
，以形成delparantag或其药学上可接受的盐，以及(b)可选地分离delparantag或其药学上可接受的盐，且如果期望，由化合物delparantag制备药学上可接受的盐。
可用于步骤a)的合适的氢化/氢解条件的实例包括在合成有机化学领域已知的那些条件。例如，可以使用H2气体和过渡金属催化剂如Pd-C(5-10％)、Pd(OH)2、铂金属和雷尼镍。可以在合适的温度例如周围温度(约20-25℃)或最高达反应混合物中的溶剂回流的温度下进行反应。
通过本领域已知的各种技术可以分离(包括纯化)PMX-60056或其药学上可接受的盐。例如，在某些情况下，可能期望通过过滤和随后从滤液中沉淀产物或结晶分离反应产物。另外举例，在某些情况下，可能期望通过用适当的溶剂或溶剂的混合物例如二乙醚或乙酸乙酯萃取以及随后在硅胶如3-巯基丙基乙基硫化硅胶上的色谱法或通过用适当的溶剂如二氯甲烷、甲醇或溶剂的混合物研磨分离反应产物。可以用溶剂或溶剂的混合物进行再结晶。在一些实施方式中，分离产物包括从反应产物中除去过渡金属催化剂，和通过合适的方法如感应耦合等离子体(ICP)确定金属催化剂的水平。可以通过合适的方法如使用HPLC确定分离的(或纯化的)产物的纯度。
起始材料，5-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲基酯和Boc-Lys(Cbz)-OH是商业可获得的，并可以容易地由商业供应商得到用于制备式VII的化合物。
在一些实施方式中，通过以下各项可以制备用于步骤a)的式VII的化合物或其药学上可接受的盐：
c)从式VIII的化合物或其药学上可接受的盐中除去Boc基团：
以形成式VII的化合物或其药学上可接受的盐。
可以在合适的温度例如周围温度(约20-25℃)下使用合适的试剂如酸(例如H3PO4、TFA、HCl、TsOH或H2SO4)或TMSOTf/2,6-二甲基吡啶或试剂在合适的极性或卤化溶剂如THF、EtOAc、二氧六环、二氧六环、水或CH2Cl2或这些溶剂中的任意两种或更多种的混合物中的溶液进行Boc基团的去除。用NaOH作为碱中和来中和酸盐，可以作为式VII的化合物的盐或游离碱分离步骤c)的反应产物。
在一些实施方式中，通过以下各项可以制备用于步骤c)的式VIII的化合物或其药学上可接受的盐：
d)使式IX的化合物或其药学上可接受的盐与式X的化合物或其药学上可接受的盐反应：
可以在偶联试剂存在的情况下进行步骤d)的反应，偶联试剂如二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)、O-(7-偶氮苯并三唑1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺、二环己基碳化二亚胺(DCC)、N,N'-二异丙基碳化二亚胺(DIC)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(Py-BOP)、N,N'-羰基二咪唑(CDI)、N-羟基苯并三唑(HOBt)、1H-苯并三唑鎓1-[双(二甲基-氨基)亚甲基]-5-氯-六氟磷酸盐(1-),3-氧化物(HCTU)、合适的1,3,5-三嗪衍生物(参见例如Kaminski,Tetrahedron Letters,1985,26,2901-2904；合适的1,3,5-三嗪衍生物的实例包括但不限于2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪、2-氯-4,6-二苯氧基-1,3,5-三嗪；2-氯-4,6-二苄氧基-1,3,5-三嗪；2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪；2,4-二氯-6-苯氧基-1,3,5-三嗪；2,4-二氯-6-苄氧基-1,3,5-三嗪；或2,4-二氯-6-甲氧基-1,3,5-三嗪)和它们的两种或更多种的混合物。如果期望，步骤d)中的偶联试剂包含EDAC和HOBt及有机碱的混合物以形成式VIII的化合物或其药学上可接受的盐。
步骤d)中的偶联试剂选自防止存在于反应物(和/或反应产物)中的任何手性中心的消旋作用的那些(参见Konig et al.,Chem.Ber.,1970,103,788；列出HOBt作为这种偶联试剂)。在合适的碱存在的情况下可以进行偶联反应。合适的碱的实例包括但不限于三乙胺(TEA)、二异丙基乙胺(DIEA)、N-甲基吗啉(NMM)、N-N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、吡啶和咪唑。
可以在合适的溶剂如极性溶剂例如醚(例如四氢呋喃(THF)、卤化溶剂(如二氯甲烷(DCM)或氯仿)或合适的溶剂的混合物中，在合适的温度例如周围温度(20-25℃)或最高达反应混合物中的溶剂回流的温度下进行步骤d)的反应。可以通过本领域已知的任何合适的技术分离(包括纯化)步骤d)的反应产物。
可以通过以下各项制备用于步骤d)的式X的化合物或其药学上可接受的盐：
e)使式IX的化合物或其药学上可接受的盐与氨或产氨试剂反应：
以形成式XI的化合物或其药学上可接受的盐：
；以及
f)从式XI的化合物或其药学上可接受的盐中除去Boc基团以形成式X的化合物或其药学上可接受的盐。
在偶联试剂和有机碱存在的情况下进行步骤e)的偶联反应。本领域已知合适的偶联试剂和有机碱。
在步骤e)中可以使用氨(纯的或在溶剂如水或二氧六环中)。可以使用产氨试剂(如NH4Cl)。
通过使用合适的酸试剂(例如H3PO4、TFA、HCl、TsOH或H2SO4)或试剂在溶剂中的溶液(HCl-二氧六环、HCl-乙酸乙酯)进行步骤f)中的Boc基团的去除。
可以通过以下各项制备用于本发明的式VIII的化合物或其药学上可接受的盐：
g)在合适的碱如(例如LiOH、NaOH、KOH、Ba(OH)2)和金属碳酸盐(例如Na2CO3、K2CO3和Cs2CO3)存在的情况下水解式XII的化合物：
或其药学上可接受的盐以形成式IX的化合物。
可以通过以下各项制备用于本发明的式XII的化合物或其药学上可接受的盐：
h)使式XIII的化合物：
或其药学上可接受的盐与式XIV的化合物或其药学上可接受的盐反应：
以形成式XII的化合物或其药学上可接受的盐。
在偶联试剂和有机碱存在的情况下可以进行步骤h)的偶联反应，其中合适的偶联试剂和有机碱是本领域已知的。在一些实施方式中，在偶联试剂存在的情况下进行步骤h)的偶联反应。在一些实施方式中，步骤h)中的偶联试剂包括EDAC和HOBt的混合物。
在一些实施方式中，步骤h)中的有机碱是NMM。
可以通过以下各项制备用于本发明的式XIII的化合物或其药学上可接受的盐：
i)在碱存在的情况下水解式XV的化合物：
或其药学上可接受的盐以形成式XIV的化合物：
j)从式XIV的化合物或其药学上可接受的盐中除去Boc基团以形成式XV的化合物或其药学上可接受的盐。通过使用合适的试剂或合适的多种试剂如酸(例如H3PO4、TFA、HCl、TsOH或H2SO4)或TMSOTf/2,6-二甲基吡啶进行Boc基团的去除。酸(例如TsOH)用于除去Boc基团。
步骤i)中的合适的水解碱的实例包括但不限于金属氢氧化物(例如LiOH、NaOH、KOH、Ba(OH)2)和金属碳酸盐(例如Na2CO3、K2CO3和Cs2CO3)。在一些实施方式中，步骤i)中的碱是LiOH。
在一些实施方式中，通过以下各项可以制备用于本发明的式XV的化合物或其药学上可接受的盐：
k)使式XVI的化合物或其药学上可接受的盐：
与式XVII的化合物或其药学上可接受的盐反应：
以形成式XV的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，在偶联试剂和有机碱存在的情况下进行步骤k)的偶联反应。本领域已知合适的偶联试剂和有机碱。在一些实施方式中，在偶联试剂存在的情况下进行步骤k)的偶联反应。在一些实施方式中，步骤k)中的偶联试剂是EDAC和HOBt的混合物。在一些实施方式中，步骤k)中的有机碱是NMM。
通过本领域技术人员熟知的固相合成流程可以合成本发明的化合物(参见Tew etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2002,99,5110-5114；Barany et al.,Int.J.Pept.Prot.Res.,1987,30,705-739；Solid-phase Synthesis:A Practical Guide,Kates,S.A.,and Albericio,F.,eds.,Marcel Dekker,New York(2000)；和F.Z.,Organic Synthesis on Solid Phase:Supports,Linkers,Reactions,2nd Ed.,Wiley-VCH,Weinheim(2002))。
如在本文中使用的，术语“约”是指描述值的±5％。例如，约100是指95至105。
如在本文中使用的，“分离的(isolated)”是指如通过常规技术从合成有机化学反应混合物的其他组分分离化合物并纯化。
如在本文中使用的，术语“哺乳动物”是指啮齿类动物(即小鼠、大鼠或豚鼠)、猴、猫、狗、牛、马、猪或人。在一些实施方式中，哺乳动物是人。
如在本文中使用的，术语“纯化的”是指当被分离时，按分离物的重量计，分离物包含至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的期望的化合物I。
如在本文中使用的，短语“药学上可接受的盐”包括但不限于酸性基团或碱性基团的盐。盐的合适的实例包括例如氢氯酸盐和三氟乙酸盐。
在一些实施方式中，术语“药学上可接受的”是指由联邦监管机构(regulatoryagency of the Federal)或州政府批准或列入美国药典(U.S.Pharmacopeia)或其他普遍公认的用于动物、且更特别是人的药典。术语“载体(carrier)”是指稀释剂、辅剂或赋形剂，连同其一起给予选自PMX-30063和PMX-60056和它们的药学上可接受的盐的化合物(在下文中还称为活性化合物)。这种药物载体可是液体如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。药物载体还可以为盐水、阿拉伯树胶、凝胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶体硅、尿素等。此外，可使用辅剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。当给予至人时，活性化合物和药学上可接受的载体可以是无菌的。当静脉内给予化合物时，水是合适的载体。还可以使用盐水溶液或葡萄糖和甘油水溶液作为液体载体，尤其是用于可注射溶液。合适的药物载体还包含赋形剂如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、干燥脱脂牛奶、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。如果期望，本组合物还可以含有少量的湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。
在本文中所描述的组合物可以采取以下形式：溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、粒剂、胶囊、包含液体的胶囊、粉末、缓释配制品、栓剂、气雾剂、喷雾或任何其它适合使用的形式。合适的药物载体的实例描述在Remington’s Pharmaceutical Sciences,A.R.Gennaro(Editor)Mack Publishing Co.中。
根据常规流程配制活性化合物作为适于给予至人的药物组合物。典型地，作为在无菌等渗含水缓冲液中的溶液给予活性化合物。必要时，组合物还可以包含增溶剂。用于静脉内给予的组合物可以可选地包含局部麻醉剂如利多卡因以减轻在注射位置的疼痛。通常，可以分别或以单位剂型混合在一起，例如作为干燥冻干粉末或无水浓缩物(气密密封容器中，如在指示活性试剂的量的安瓿瓶或小袋(sachette)中)供应成分。在通过输注给予本发明的化合物的情况下，可以利用包含无菌药物等级水或盐水的输注瓶来对其进行分配。在通过注射给予活性化合物的情况下，可以提供一安瓿瓶的注射用无菌水或盐水，以便在给予前可以将成分混合。
可以口腔给予活性化合物和包含其的组合物。用于口腔递送的化合物和组合物可以是例如片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、细粒、粉末、乳液、胶囊、糖浆或酏剂的形式。口腔给予的组合物可以包含一种或多种可选的试剂，例如增甜剂如果糖、阿斯巴甜或糖精；调味剂如薄荷、冬青油、或樱桃；着色剂；和防腐剂以提供药学上可口的制剂。此外，在片剂或丸剂形式的情况下，可以将组合物包覆以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在长时间周期内提供持续的作用。包围渗透活性驱动化合物的选择透过膜也适用于口腔给予的活性化合物。口服组合物可以包含标准载体如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。此类载体(vehicle)具有合适的药物等级。
药物组合物可以是单位剂型。以这种形式，组合物可以被分成包含适的量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装包含离散量的制剂，例如包装的片剂、胶囊和在小瓶或安瓿瓶中的粉末。单位剂型还可以是胶囊、扁囊剂或片剂本身，或它可以是适当数量的任何这些包装形式。
以下非限制性实例示出了本文公开的组合物和方法以及本文公开的化合物的制备。
治疗胃肠道的炎症疾病的brilacidin和delparantag
可以通过其中它们具有活性的任何途径以任何常规的方式给予化合物brilacidin(PMX-30063)和delparantag(PMX-60056)和它们的药学上可接受的盐(在下文中还称为活性化合物)用于治疗胃肠道的炎症疾病。给予可以是全身的、直肠的或口服的。例如，给予可以是但不限于非肠道的、皮下的、静脉内的、肌内、腹膜内的、经皮的、口服的或面颊途径，或通过储库型注射(depot injection)或植入。因此，这些化合物的给予模式(单独的或与其他药物组合)可以是但不限于舌下的、可注射的(包括皮下或肌肉内注射的短效、储库、植入和药丸形式)，或利用直肠栓剂、子宫内装置和经皮形式如贴片和乳膏。根据临床医师已知的得到期望的临床响应的方法由临床医师调节或滴定(titrate)进行给予的具体途径和剂量方案的选择。待给予的本发明的化合物的量是治疗有效的量。待给予的剂量将取决于被治疗的受试者的特征，例如具体的被治疗的动物、年龄、体重、健康、同时治疗的类型(如果有的话)以及治疗频率，并且可以容易地由本领域技术人员(例如由临床医师)确定。本文所描述的在治疗和/或预防胃肠道的炎症疾病中将有效的化合物的量将取决于炎症疾病的性质和严重程度，且可以由标准的临床技术确定。此外，可以可选地采用体外或体内测定以帮助确定最优剂量范围。在组合物中采用的精确剂量还将取决于给予途径和异常的严重性，并且应该根据医生的判断和每位患者的情况来确定。然而，用于口腔给予的合适的剂量范围通常是从约0.001毫克至约1000毫克/千克体重。在一些实施方式中，口服剂量是约0.01毫克至100毫克/千克体重、约0.01毫克至约70毫克/千克体重、约0.1毫克至约50毫克/千克体重、0.5毫克至约20毫克/千克体重或约1毫克至约10毫克/千克体重。在一些实施方式中，口服剂量是约5毫克/千克体重。对于口腔给予，可以以包含100mg/片剂的片剂形式或以溶解在水中至1至10mg/mL的浓度的液体形式给予活性化合物。产生的配制品在pH7下是澄清的无色溶液。可以通过每天的剂量给予活性化合物直到病症解决。对于直肠给予，作为60mL无菌溶液中的保留灌肠剂(retention enema)给予25mg或50mg。在就寝时间每天一次给予或在早晨和就寝时间每天两次给予灌肠剂，持续6周。如果以单一药物组合物或并行地给予brilacidin(PMX-30063)和delparantag(PMX-60056)，两种化合物的总的日剂量通常将是与以上对于单一化合物的日剂量阐述的量可比较的。
可以以单次或分次剂量给予总的日剂量。本发明还包含缓释组合物。这些剂量是基于体重为约65kg至70kg的平均人类受试者。医师将能够容易地确定体重落在该范围外的受试者如婴儿和老年人的剂量。
包含活性化合物和合适的载体中的一种或两者的药物组合物和/或配制品可以是固体剂型，其包括但不限于片剂、胶囊、扁囊剂、颗粒、丸剂、粉末和细粒；局部的剂型，其包括但不限于溶液、粉末、流体乳液、流体悬浮液、半固体、膏剂、糊剂、乳膏、凝胶和果冻和泡沫；和肠胃外剂型，其包括但不限于溶液、悬浮液、乳液和干粉；包含有效量的本发明的化合物。在本领域内还已知活性成分可以与药学上可接受的稀释剂、填料、崩解剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、疏水载体、水溶性载体、乳化剂、缓冲液、保湿剂(humectant)、增湿剂(moisturizer)、增溶剂、防腐剂等一同包含在这种配制品中。给予的手段和方法是本领域已知的且技术人员可以查阅各种用于指导的药理学参考(参见例如ModernPharmaceutics,Banker&Rhodes,Marcel Dekker,Inc.(1979)；和Goodman&Gilman’s ThePharmaceutical Basis of Therapeutics,6th Edition,MacMillan Publishing Co.,NewYork(1996))。例如在第19版的‘Remington’s Pharmaceutical Sciences’(MackPublishing Company，1995)中可以找到药物组合物及其制备方法的描述。
在一些实施方式中，可以与包括但不限于局部镇痛剂(例如利多卡因)的试剂一起使用活性化合物。也可以与抗生素一起给予活性化合物。这些抗生素的实例是阿莫西林、氨苄西林、阿洛西林、杆菌肽、羧苄青霉素、氯氨苄青霉素、头孢羟唑、头孢唑啉、头孢美唑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢磺啶、头孢曲松、头孢氨苄、头孢菌素C、头孢菌素、头孢拉定、氯唑西林、D-环丝氨酸、双氯西林、D-青霉胺、氯苯甲氯咪唑、乙胺丁醇、溶葡球菌酶、头孢羟羧氧(moxalactam)、萘夫西林、尼克霉素Z(nikkomycin Z)、硝基呋喃妥英、苯唑青西林、青霉酸、盘尼西林G、苯氧乙基青霉素、苯氧甲基青霉酸、磷霉素、吡哌酸、哌拉西林、瑞斯托霉素(ristomycin)和万古霉素；阿米卡星、茴香霉素、阿普拉霉素、阿奇霉素、杀稻瘟菌素S、布雷菲德菌素A、丁苷菌素、氯霉素、氯四环素、克林达霉素(clindamycin)、克霉唑、放线菌酮、地美环素、地贝卡星、二双氢链霉素、盐酸多西环素(doxycycline)、耐久霉素、土根碱、红霉素、褐霉酸、G 418、正大霉素、烟曲霉酸、潮霉素B、交沙霉素、卡那徽素、黄色霉素、林可霉素(lincomycin)、甲氯环素(meclocycline)、美帕曲星、美迪加霉素、米诺环素、新霉素、奈替米星、硝基呋喃妥英、诺尔丝菌素(nourseothricin)、竹桃霉素、土霉素、巴龙霉素、嘌呤霉素、纳巴霉素、核糖霉素、利福平、利福霉素、蔷薇霉素、西苏霉素、放线壮观素、螺旋霉素、链霉素、四环素、甲砜氯霉素、硫链丝菌肽、托普霉素、衣霉素、泰乐菌素、紫霉素和维吉尼霉素(virginiamycin)；喜树碱、10-去乙酰基巴卡亭III、氮胞苷、7-氨基放线菌素D、8-喹啉醇、9-二氢-13-乙酰基巴卡亭III、阿柔比星(aclarubicin)、放线菌素D、放线菌素I、放线菌素V、巴伐洛霉素A1(bafilomycin A1)、博莱霉素(bleomycin)、卷曲霉素(capreomycin)、色霉素、西诺沙星(cinoxacin)、环丙沙星、顺式-二氨铂(II)二氯化物、香豆霉素A1、L(+)-乳酸、细胞松弛素B、细胞分裂抑素D、达卡巴嗪(dacarbazine)、正定霉素(daunorubicin)、远霉素A、多柔比星(doxorubicin)、棘霉素(echinomycin)、恩氟沙星(enrofloxacin)、依托泊甙(etoposide)、氟甲喹(flumequine)、间型霉素(formycin)、烟曲霉素(fumagillin)、更昔洛韦(ganciclovir)、胶霉毒素(gliotoxin)、洛美沙星(lomefloxacin)、甲硝唑(metronidazole)、光辉霉素A、丝裂霉素C(mitomycin C)、萘啶酮酸、纺锤菌素(netropsin)、硝基呋喃妥英、诺加霉素(nogalamycin)、无活菌素(nonactin)、新生霉素、氧氟沙星、噁喹酸、紫杉醇、吩唪、腐草霉素、吡哌酸、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、灭真菌素(sinefungin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素、琥珀酰磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺咪结核菌素(sulfaguanidine purum)、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine)、对氨基苯磺酰胺、磺胺喹噁啉、柳氮磺胺吡啶、磺胺噻唑、甲氧苄啶、杀结核菌素(tubercidin)、5-氮胞苷、虫草素(cordycepin)和间型霉素A；2-巯基吡啶、4-溴卡西霉素A23187、丙甲甘肽、两性霉素B、卡西霉素A23187、氯己啶(chlorhexidine)、克霉唑(clotrimazol)、粘菌素(colistin)、益康唑(econazole)、氢化可的松(hydrocortisone)、伏里平、胶霉毒素、短杆菌肽A、短杆菌肽C、离子霉素、拉沙里菌素A(lasalocid A)、卢奴霉素A(lonomycin A)、莫能星(monensin)、N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺、甲基盐霉素(narasin)、尼日利亚菌素(nigericin)、尼生素(nisin)、无活菌素(nonactin)、制霉菌素(nystatin)、吩嗪、匹马菌素(pimaricin)、多粘菌素B、DL-青霉胺、多粘菌素B、吡喹酮、盐霉素、表面活性素(surfactin)和缬氨霉素(valinomycin)；(+)-地衣酸、(±)-咪康唑、(S)-(+)-喜树碱、1-脱氧甘露糖野尻霉素(1-deoxymannojirimycin)、2-庚基-4-羟基喹啉N-氧化物、虫草素、1,10-邻二氮杂菲、6-重氮-5-氧基-L-正亮氨酸、8-喹啉醇、抗霉素、抗蛋白酶、子囊霉素(ascomycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、巴弗洛霉素(bafilomycin)、浅蓝菌素(cerulenin)、氯喹(chloroquine)、西诺沙星、(cinoxacin)、环丙沙星、美伐他汀、刀豆素A(concanamycin A)、刀豆素C(concanamycin C)、香豆霉素A1、L(+)-乳酸、环孢菌素A、益康唑、恩氟沙星(enrofloxacin)、依托泊苷(etoposide)、氟甲喹(flumequine)、间型霉素A、呋喃唑酮(furazolidone)、萎蔫酸、格尔德霉素(geldanamycin)、胶霉毒素、短杆菌肽A、短杆菌肽C、除莠霉素A(herbimycin A)、茚甲新、氯苯酚(irgasan)、罗氟哌酸、霉酚酸(mycophenolic acid)、粘噻唑(myxothiazol)、N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺、萘啶酮酸、纺锤菌素、氯硝柳胺(niclosamide)、日光霉素(nikkomycin)、N-甲基-1-脱氧野尻霉素、诺加霉素、无活菌素、新生霉素、氧氟沙星、竹桃霉素、寡霉素、噁喹酸、杀蝶素A(piericidin A)、吡哌酸、根赤壳菌素(radicicol)、纳巴霉素(rapamycin)、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、西尼霉素(sinefungin)、星形孢菌素(staurosporine)、stigmatellin、琥珀酰磺胺噻唑、琥珀酰磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧、磺胺咪、磺胺甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、对氨基苯磺酰胺、磺胺喹噁啉、柳氮磺胺吡啶、磺胺噻唑、triacsin C、甲氧苄啶和vineomycin A1。
也可以连同以下各项一起给予活性化合物：抗抑郁剂如氯氮平或奥氮平；轻泻剂；止泻试剂；血清素拮抗剂(5-HT3)如昂司丹琼、氯氮平或昂司丹琼；血清素再吸收抑制剂(SSRI)；抗痉挛剂如莨菪碱或二环胺；质子泵抑制剂(PPI)；硅酸镁铝；阿尔维林柠檬酸盐药物；利福昔明；消炎试剂如类固醇、美沙拉嗪(mesalazine，mesalamine或5-氨基水杨酸)；免疫调节剂如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、利福昔明、阿达木单抗、赛妥珠单抗或那他珠单抗。
可以将活性化合物配制为用于通过注射(如通过推注或连续输注)的肠胃外给予。可以通过在约15分钟至约24小时的时间段内皮下连续输注给予化合物。可以以单位剂型(如在安瓿瓶(ampoule)或多剂量容器中)连同添加的防腐剂来提供用于注射的配制品。组合物可以采取这些形式，如在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并可以包含配制剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。
对于口腔给予，可以通过将这些化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体组合容易地配制活性化合物。这样的载体能够将本发明的化合物配制为片剂、丸剂、糖衣丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、淤浆、悬浮液等以供待治疗患者口腔摄入。在添加合适的辅剂(如果需要的话)得到片剂或糖衣丸核心之后，可以通过例如添加固体赋形剂，可选地研磨得到的混合物，并且处理细粒的混合物得到用于口服的药物制剂。合适的赋形剂包括但不限于填料如糖，包括但不限于乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；纤维素制剂如但不限于玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果期望，可以添加崩解剂，如但不限于交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。可以为糖衣丸核心提供合适的包衣。为此目的，可以使用浓糖溶液，其可以可选地包含阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝胶(carbopolgel)、聚乙二醇、和/或二氧化钛、清漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料加入至片剂或糖衣丸包衣中，用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。
口服使用的药物制剂包括但不限于由明胶制备的推入配合胶囊(push-fitcapsule)以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制备的软密封胶囊。推入配合胶囊可以包含与填料如乳糖、粘合剂如淀粉、和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁以及可选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮于合适的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。另外，可以添加稳定剂。口腔给予的所有配制品应该是适用于这种给予的剂量。对于含服给予(buccal administration)，组合物可以采取如以常规方式配制的片剂或锭剂形式。
活性化合物还可以被配制在直肠组合物如栓剂或保留灌肠剂中，如包含常规栓剂基底如可可脂或其它甘油脂。
活性化合物还可以被配制为长效制剂(depot preparation)。可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射来给予此类长效配制品。可以以约1个月至约6个月或更长的间隔来给予长效注射。因此，例如，可以用合适的聚合物或疏水材料(例如作为可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一同配制化合物、或作为微溶性衍生物(例如作为微溶性盐)配制化合物。
在透皮给药中，可以将活性化合物例如应用于膏药，或可以通过因此被提供给有机体的透皮治疗系统应用。
活性化合物的药物组合物还可以包含合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。此类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。
本发明还提供了用于预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的本发明的化合物或包含其的组合物。本发明还提供了用于预防和/或治疗胃肠道的炎症疾病的本发明的化合物或包含其的组合物。本发明还提供了用于制备预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的药剂的本发明的化合物或包含其的组合物。
本发明还提供了用于预防和/或治疗动物的胃肠道的炎症疾病的方法，包括将有效量的本发明的化合物给于至需要其的动物。本发明还提供了用于预防和/或治疗动物的胃肠道的炎症疾病的方法，包括将本发明的组合物给于至需要其的动物。本发明还提供了用于预防和治疗胃肠道的炎症疾病的方法，包括将有效量的本发明的化合物或盐给于至动物。
本发明还提供了用于预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的活性化合物或包含其的组合物。本发明还提供了用于制备预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的药剂的活性化合物或包含其的组合物。
本文中描述的结构可以省去必需的氢原子以实现适当的化合价。因此，在一些情况下，碳原子或氮原子可以看起来具有开放的化合价(即仅具有两个键的碳原子将可能还键连至两个氢原子；另外，描述的具有单键的氮原子将可能还键连至两个氢原子)。例如，本领域技术人员将把“-N”认为是“-NH2”。因此，在本文所描述的其中化合价开放的任何结构中，视情况一个或多个氢原子是潜在的，且只为了简便起见将其省略。
PMX-30063(brilacidin)和PMX-60056(delparantag)的消炎活性
实施例中讨论的研究表明了PMX-30063和PMX-60056的消炎活性：在PDE-Glo磷酸二脂酶测定中抑制磷酸二脂酶PDE4；在PDE-Glo磷酸二脂酶测定中抑制PDE3；抑制NR8383大鼠巨噬细胞中的脂多糖(LPS)诱导的TNF-α产生的TNF-α；抑制NR8383大鼠巨噬细胞中LPS诱导的单核细胞化学吸引蛋白-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1)(MCP-1)的释放；抑制NR8383大鼠巨噬细胞中LPS诱导的基质-金属蛋白酶-9(MMP-9)的释放(仅PMX-30063)；抑制NR8383大鼠巨噬细胞中LPS诱导的IL-6的释放(仅PMX-30063)。在口腔给予之后，PMX-30063由小肠吸收，但是<0.5％进入循环；治疗肠上皮的巨大的优点是全身中毒的风险低。在体内溃疡性结肠炎模型中，在直肠给予PMX-30063之后与未治疗的对照相比，肠重量下降，但不显著。在溃疡性结肠炎得分中观察到剂量依赖性下降。
本发明人假设PMX-30063和PMX60056作为HDP模拟物可以通过环AMP/环GMP通路在促炎症响应的抑制中起作用。PDE4是在嗜中性白细胞、T细胞和巨噬细胞中表达的主要的磷酸二脂酶，以及PDE4抑制剂降低嗜中性白细胞趋化性、招募和激活，抑制CD4+和CD8+T细胞的激活以及抑制单核细胞趋化性。因此，PDE4对于可能涉及在溃疡性结肠炎和克罗恩氏病中的多种关键效应细胞具有广泛的消炎效果。还公认使用PDE3抑制剂可以向患者的炎症疾病提供临床益处。示出组合PDE3和PDE4的抑制剂与单独抑制的任一种PDE相比提供更大的益处(Rieder et al.PLoS One 2013 2013；8(2):e56867.doi:10.1371/journal.pone.0056867.Epub 2013Feb 28)。
方法
以下参考作为本申请的一部分的附图阐述了实施例中提及的研究方法的讨论。
图1的方法.使用PMX-30063进行PDE4的磷酸二脂酶抑制测定。使用8ng的PDE4B、1μM cAMP的底物和PMX-30063进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定(Promega，Madison，WI，美国，目录号V1361)。混合化合物和PDE4B(BPS Biosciences，San Diego，CA)并在室温下预温育15分钟。添加底物并在室温下温育反应7分钟。作为发光单位(RLU)提供数据。
图2的方法.使用PMX-60056进行PDE4的磷酸二脂酶抑制测定。使用8ng的PDE4B(BPS Biosciences，San Diego，CA)、1μM cAMP的底物和PMX-30063进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定(Promega，Madison，WI，美国，目录号V1361)。混合化合物和PDE4B并在室温下预温育15分钟。添加底物并在室温下温育反应7分钟。作为发光单位(RLU)提供数据。
图3的方法.使用PMX-30063进行PDE3的磷酸二脂酶抑制测定。根据制造商说明书使用2.75ng的PDE3A、1μM cAMP底物和PMX-30063进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定(Promega，Madison，WI，美国，目录号V1361)。混合化合物和PDE3A并在室温下预温育15分钟。添加底物并在室温下温育反应7分钟。作为发光单位(RLU)提供数据。
图4的方法.使用PMX-60056进行PDE3的磷酸二脂酶抑制测定。根据制造商说明书使用2.75ng的PDE3A、1μM cAMP底物和PMX-60056进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定(Promega，Madison，WI，美国，目录号V1361)。混合化合物和PDE3A并在室温下预温育15分钟。添加底物并在室温下温育反应7分钟。作为发光单位(RLU)提供数据。
图5的方法.使用PMX-30063进行TNF-α测定。用PMX-30063预处理NR8383(CRL-2192，ATCC，Manassas，VA)大鼠巨噬细胞45分钟，随后用来自大肠杆菌(Sigma，St.Louis，MO)的1μg/ml脂多糖(LPS)处理8小时。通过ELISA使用对大鼠TNF-α(R&D Systems，Minneapolis，MN)特异性的免疫测定试剂盒根据制造商说明书确定上清液中的TNF-α浓度。
图6的方法.使用PMX-60056进行TNF-α测定。用PMX-60056预处理NR8383大鼠巨噬细胞细胞45分钟，随后用来自大肠杆菌(Sigma，St.Louis，MO)的1μg/ml LPS处理8小时。通过ELISA使用对大鼠TNF-α(R&D Systems，Minneapolis，MN)特异性的免疫测定试剂盒根据制造商说明书确定上清液中的TNF-α浓度。
图7的方法.使用PMX-30063进行MCP-1测定。用所示浓度的PMX-30063预处理大鼠巨噬细胞(NR8383)45分钟，随后用来自大肠杆菌(Sigma，St.Louis，MO)的1μg/ml LPS处理8小时。8小时之后，收集上清液用于通过ELISA的MCP-1测量。根据制造商说明书使用免疫测定试剂盒(Thermo Scientific，Rockford，IL)测量MCP-1。
图8的方法.使用PMX-60056进行MCP-1测定。用所示浓度的PMX-30063预处理大鼠巨噬细胞(NR8383)45分钟，随后用来自大肠杆菌(Sigma，St.Louis，MO)的1μg/ml LPS处理8小时。8小时之后，收集上清液用于通过ELISA的MCP-1测量。根据制造商说明书使用免疫测定试剂盒(Thermo Scientific，Rockford，IL)测量MCP-1。
图9的方法.使用PMX-30063进行MMP-9测定。用所示浓度的PMX-30063预处理大鼠巨噬细胞(NR8383)45分钟，随后用来自大肠杆菌(Sigma，St.Louis，MO)的1μg/ml LPS处理8小时。8小时之后，收集上清液，用于通过ELISA使用免疫测定试剂盒(R&D Systems，Minneapolis，MN)根据制造商说明书测量MMP9。
图10的方法。使用PMX-30063进行IL-6释放测定。用所示浓度的PMX-30063预处理大鼠巨噬细胞(NR8383)45分钟，随后用来自大肠杆菌(Sigma，St.Louis，MO)的1μg/ml LPS处理8小时。8小时之后，收集上清液，用于通过ELISA使用免疫测定试剂盒(R&D Systems，Minneapolis，MN)根据制造商说明书测量IL-6。
图11的方法.评估PMX-30063的血浆浓度，随后口腔(PO)或静脉内(IV)给予雄性Balb/c小鼠(研究16009-12001)。校正测试制品PMX-30063的盐形式，但是没有进行纯度调节。将PMX-30063溶解在一半体积的水中，然后添加另一半体积的2X盐水以产生用于口腔给予的1mg/mL的标准浓度。得到的配制品是澄清的无色溶液(pH 7)并将其存储在室温下直至给予。配制的溶液是澄清的和无色的，直到完成给药。通过HPLC-UV以95.5％的精确度确认给药溶液中的PMX-30063的浓度。
将总共60只雄性Balb/c小鼠用于该研究，在接收时约4-7周龄，体重18.0g至21.9g。以10mg/kg在10mL/kg下口腔或5mg/kg在5mL/kg体积下静脉内经由单次推注给予来给予测试制品PMX-30063。
对于1-2组，使用在给药后5分钟、15分钟、30分钟、1、2、4、8和24小时的每个时间点的每个组中的三只小鼠的血液。在适当的时间点通过吸入二氧化碳安乐死之后，经由心脏穿刺收集血液样品(至少300μL/样品)。将样品放置在包含K2-EDTA的管中，然后在4℃下以约8,000rpm离心6分钟，并分离产生的血浆并将其冷冻存储在约-80℃下。
通过Medicilon Preclinical Research(上海)LLC进行药物动力学(PK)分析。由测试物质中的平均浓度-时间数据通过研究指导者(Study Director)确定测试制品的PK参数。将WinNonlinTMProfessional 5.2的非间隔模块用于计算参数。用“0”值替换任何BLQ(对于血浆LLOQ＝2.5ng/mL，以及对于小肠LLOQ＝500ng/g)，并用这些替换值计算平均值及其标准偏差(SD)。
将血浆样品(50μL)转移到离心管中，然后向其中添加250μL的IS溶液(50ng/mL卡维地洛)。在涡旋1分钟和在15,000rpm下离心5分钟之后，将上清液的100μL等分试样转移到玻璃自动取样小管中。
图12的方法.在口腔(PO)或静脉内(IV)给予(PO)雄性Balb/c小鼠(研究16009-12001)之后，也评估PMX-30063的组织分布的程度。制备PMX-30063并如图11所描述的给予。获取每个动物的含内容物的小肠并将其每动物每组织放置到管中。将含内容物的小肠样品紧压冷冻在干冰中，然后存储在-80℃直到生物分析。所有样品标记有详细的信息如研究数、动物数、基质及收集的时间点和收集日期。另外，将针对研究得到的而不是放置用于研究的额外的动物用于收集含内容物的小肠。然后将产生的含内容物的小肠样品应用于该研究中的生物分析方法和样品生物分析的发展。通过LC-MS/MS在样品上进行生物分析。
为了分析小肠的内容物，通过添加盐水(1g小肠：5mL盐水)均匀化小肠样品。将小肠匀化液(50μL)转移到管中并将250μL的内标(IS)工作液(50ng/mL卡维地洛)添加到各个样品中。在涡旋1分钟和在15,000rpm下离心5分钟之后，将上清液的100μL等分试样转移到玻璃自动取样小管中。
图13的方法.基于源自图11和12的数据计算口腔给予PMX-30063之后的肠管/血浆浓度比值。示出了对时间的比值。
图14的方法.在溃疡性结肠炎(UC)模型中评估PMX-30063的疗效。使Balb/c小鼠空腹24小时。通过将200μL的4％乙酸注射到直肠中诱导溃疡性结肠炎。四天之后，以100mg/kg、200mg/kg或400mg/kg直肠内PMX-30063每天一次治疗动物，持续四天。用5-ASA(5-氨基水杨酸或esalamine)治疗另一组动物，以及另一组不接受治疗。第一次给药之后七天，在冷盐水中清洁5cm的肠，然后称重。
图15的方法.在溃疡性结肠炎(UC)模型中评估PMX-30063的疗效。使Balb/c小鼠空腹24小时。通过将200μL的4％乙酸注射到直肠中诱导溃疡性结肠炎。四天之后，以100mg/kg、200mg/kg或400mg/kg直肠内PMX-30063每天一次治疗动物，持续四天。用5-ASA(5-氨基水杨酸或esalamine)治疗另一组动物，以及另一组不接受治疗。在第一次给药七天之后，视觉检查结肠的溃疡性结肠炎并根据下表评分。
溃疡性结肠炎得分 观察
0 没有损坏
1 局部溃疡损坏
2 没有严重炎症的线形溃疡
3 在一个点处具有炎症的线形溃疡
4 在两个或更多个点处疼痛或炎症
5 大于1厘米的大规模的溃疡或炎症
为了可以更有效地理解本文公开的发明，以下提供了实施例。应当理解这些实施例只作解释说明的目的且不应以任何方式被解释为限制本发明。贯穿这些实施例，除非另有说明，否则使用商业可获得的试剂进行标准技术。由它们各自的供应商分别通过实施例1和2中所描述的方法，基于在2012年10月26日提交的美国专利申请序列号13/661,466和在2013年1月15日公布的美国专利号8,354,556中的各自公开内容制备如实施例所描述的测试的Brilacidin和delparantag。由马萨诸塞州德文斯的Johnson Matthey PharmaServices得到Brilacidin，以及由俄亥俄州康科德的Ricerca Biosciences得到delparantag。
将以下缩写词用于常用溶剂：THF，四氢呋喃；DMA，二甲基乙酰胺；DMSO，二甲亚砜；DMF，二甲基甲酰胺；EtOAc，乙酸乙酯；TFA，三氟乙酸；DCM，二氯甲烷；MTBE，叔丁基甲基醚。
实施例
实施例1：制备brilacidin(PMX-30063)
方案-1：制备PMX-30063的合成方法
步骤1：将N-Boc-3-吡咯烷醇(2.2kg)溶解在四氢呋喃(11.2kg)中并冷却到10℃。然后添加叔丁醇钾(1.5kg)，随后添加在叔丁基甲基醚(5.1kg)中的2-氯-5-(三氟甲基)-1,3-二硝基苯(3.0kg)的溶液。在10-17℃下搅拌产生的混合物16小时，然后添加叔丁基甲基醚(10.7kg)和水(15.6kg)。分离有机层，并通过盐水洗涤，以及蒸发至干燥。用乙醇/水结晶两次的粗产物给出预期HPLC纯度为约96.4％的2.17kg(46.3％)的(R)-3-(2,6-二硝基-4-三氟甲基苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔-丁基酯(3)。
步骤2：将2.2kg的化合物3溶解在甲醇(6.1kg)中，然后在氮气下添加5％Pd-C(294g)。在10-15psi的氢气下搅拌产生的反应混合物98小时。通过HPLC监测反应进程。通过C盐衬垫(Celite pad)过滤反应混合物，以及浓缩滤液以提供1.715kg(89.5％)的(R)-3-(2,6-二氨基-4-三氟甲基苯氧基)-吡咯烷-1-羧酸叔-丁基酯(4)，具有预期HPLC纯度为约96.2％。
步骤3：在1-[(3-(二甲基氨基)-丙基)]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.29kg)存在的情况下、在吡啶中、在惰性气氛下、在周围温度下使化合物4(1.6kg)与嘧啶-4,6-二羧酸(383g)连接。25小时之后，将反应混合物稀释在水中(92kg)，分离出固体，通过过滤收集和在37-40℃下干燥，以及通过乙酸乙酯/庚烷研磨三次来纯化粗化合物。产率：1.34kg(70％)，预期纯度约：87.5％。
步骤4：用冰浴将在16.9kg的无水吡啶中的1.07kg的DMAP的溶液冷却至0℃。缓慢添加1050g的亚硫酰氯并将温度保持低于15℃。一旦溶液达到5℃，添加5-N-(苄氧羰基氨基)戊酸(2.2kg)并将温度保持低于15℃。将溶液冷却至5℃，以及随后添加化合物5(2.5kg)并在将温度升高至室温之前继续搅拌22分钟。将产生的反应混合物搅拌21小时，然后添加乙酸乙酯(17.3kg)。用1，2N氢氧化钠洗涤有机层，然后用氯化钠洗涤，并在硫酸钠上干燥。分离有机层并蒸发至干燥，以及用甲苯研磨产生的残留物给出粗化合物6，通过硅胶色谱法使用甲醇/乙酸乙酯作为洗脱液纯化。通过从二氯甲烷/甲苯混合物再结晶进一步纯化化合物6。产率：1.47kg(30％)，预期的HPLC纯度：约97.6％。
步骤5和6：将化合物6(1.47kg)溶解在甲醇(11.6kg)中，然后在氮气气氛下添加10％Pd-C(143g)。在环境压力下在氢气下搅拌产生的反应混合物2.5小时，然后通过过滤除去催化剂。向滤液中按顺序添加1N HCl(2L)、三乙胺(420g)和二-boc-脒基(guanyl)吡唑(0.70g)。在室温下搅拌产生的反应混合物102分钟。然后蒸发，随后用乙酸乙酯稀释(10.7kg)。用氯化钠溶液洗涤有机层，在硫酸钠上干燥并蒸发至干燥。通过柱色谱用1.9kg硅胶和乙酸乙酯/二氯甲烷至甲醇/二氯甲烷纯化粗化合物8。产率：1.19kg(62.3％)，预期的HPLC纯度：约96.4％。
步骤7：将化合物8(1.17kg)溶解在乙酸乙酯(21.5kg)中并添加281g的水。将HCl气体添加到溶液中，同时将温度保持低于45℃。5小时之后，发现反应完成。通过过滤收集固体(PMX-30063，brilacidin)。通过用甲醇/THF研磨以上固体完成PMX-30063的进一步纯化。产率：696g(84.1％)，预期的HPLC纯度：约98.6％。
实施例2：制备delparantag：
方案2-制备PMX-60056的合成策略
步骤1：制备化合物11
用NMM(N-甲基吗啉)(885g，8.76mol，2.0eq))处理在14.0L(二氯甲烷)中的化合物9(1665g，4.379mol，1.0eq)、化合物10(817g，4.51mol，1.03eq)和N-羟基苯并三唑(651g，4.82mol，1.1eq)的混合物，随后逐部分地添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(923g，4.82mol，1.10eq)。在20℃下运行反应，并通过过程内HPLC(in-processHPLC)监测反应进程。反应完成之后，通过标准萃取流程处理反应混合物以提供化合物11(2192g，92.1％产率)。预期HPLC分析示出化合物11的纯度为约97-98％。预期手性HPLC方法示出在步骤1期间化合物11的对映异构体纯度得到保持(来自化合物9)。预期不会检测到不期望的对映异构体。
步骤2A：制备化合物13
将化合物1-3(1250g，2.30mol)、THF(13.8L)和甲醇(9.4L)的混合物冷却至10℃，并在30分钟内用作为水中的5％溶液递送的4摩尔当量的氢氧化锂逐滴处理。在搅拌下将反应混合物升至室温，并通过过程内HPLC监测进程。反应完成之后，用HCl水溶液中和反应混合物的pH，部分浓缩，用HCl水溶液酸化，并用乙酸乙酯萃取。得到化合物1-4(1175g，96.5％产率)，预期其HPLC分析示出约96％的纯度。预期手性HPLC方法示出在步骤2A期间化合物13的对映异构体纯度得到保持(来自化合物11。预期不会检测到不期望的对映异构体。
步骤2B：制备化合物12
用对甲苯磺酸(1073g，5.6mol，1.2eq)处理在DCM(15.0L)中的化合物1-3(2556g，4.70mol)的溶液；并将混合物加热至40℃。通过过程中HPLC监测反应进程。反应完成之后，将反应混合物冷却至室温，用碳酸氢钠水溶液处理，然后通过标准萃取流程处理以提供化合物12(2065g，99％产率)，通过HPLC分析预期该产物的纯度为约96.4％。
步骤3：制备化合物14
用在氯仿(2.0L)中的EDAC(511g，2.65mol，1.2eq)的溶液处理在氯仿(17.6L)中的化合物12(1030g，2.32mol，1.05eq)、HOBt(601g，4.45mol，2.0eq)和NMM(670g，6.63mol，3.0eq)的混合物。通过逐滴添加在氯仿(4.2L)中的化合物13(1170g，2.21mol，1.0eq)和NMM(337g，3.33mol，1.5eq)的溶液处理该混合物，并在20-25℃下搅拌产生的反应混合物。通过过程中HPLC方法监测反应进程。反应完成之后，通过标准萃取流程处理反应混合物。得到的固体泡沫示出过量的重量和通过HPLC分析的约88％的纯度。使得到的固体泡沫经受从庚烷/EtOAc中结晶。得到化合物14(1287g，61％产率)并预期通过HPLC分析确定的其纯度是约97.2％。
步骤4：制备化合物15
将化合物14(2516g，2.63mol)、THF(16.6L)和甲醇(10.9L)的混合物冷却至10℃，并在45分钟内用作为水中5％溶液递送的4当量LiOH逐滴处理。在搅拌下将反应混合物升至室温，并通过过程中HPLC监测反应进程。反应完成之后，用HCl水溶液中和反应混合物，部分浓缩，用HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取。得到化合物15(定量产率，2813g的粗产物)，并预期通过HPLC分析确定的其纯度为约-94.7％。该粗产物无需进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤5：制备化合物16
将在氯仿(13.0L)中的化合物15[在以上步骤4中制备的1490g的粗产物，假设为1297g(1.38mol)纯化合物15的等价物]的溶液冷却至10℃并用一份中的氯甲酸乙酯(302g，2.78mol，2.0eq)处理，随后逐滴添加DIEA(357g，2.76mol，2.0eq.)，同时监测内部温度。在搅拌下将反应混合物升至周围温度。监测反应进程，通过HPLC分析样品示出完全转化为反应混合的酸酐中间体，通过二氧六环中0.5M氨淬灭样品并评估化合物16的形成和化合物15的消耗。在将酸15完全转化为酸酐中间体之后，将反应混合物冷却至0℃并通过含氨气(151g，8.8mol，6.4eq.)的起泡器处理，同时监测内部温度。通过过程中HPLC监测反应进程。反应完成之后，用水淬灭并通过标准萃取流程处理反应混合物。得到化合物16(定量产率，1322g的粗产物)，并预期通过HPLC分析确定的其纯度为约93.2％。该粗产物无需进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤6：制备化合物17
将在DCM(4.4L)中的化合物16(在以上步骤5中制备的1322g的粗产物，假设为1298g(1.38mol)纯化合物16的等价物)的溶液冷却至0℃，并用三氟乙酸(2.1L，28mol，20eq.)逐滴处理，同时将内部温度保持低于约10℃。在搅拌下将反应混合物升至周围温度。通过过程中HPLC监测反应进程。反应完成之后，将反应混合物快速冷却至-20℃，然后通过在30分钟内添加至在水(9.6L)和DCM(4.5L)中的NaOH(22eq.)的快速搅拌的-5℃混合物淬灭。添加速率使得将混合物的内部温度保持低于约10℃。通过标准萃取流程处理淬灭的反应混合物以提供化合物17(1152g，99％产率)，以及预期通过HPLC分析确定的其纯度为约85.0％。
步骤7：制备化合物18
用在氯仿(2.2L)中的EDAC(240g，1.25mol，1.2eq)的溶液处理在氯仿(17.9L)中的化合物15(981g，1.04mol，1.00eq)、化合物17(894g，1.06mol，1.02eq)和HOBt(288g，2.1mol，2.0eq)的混合物，随后添加NMM(161g，1.6mol，1.5eq.)。在20-25℃下搅拌反应混合物，并通过过程内HPLC监测反应进程。反应完成之后，通过标准萃取流程处理反应混合物以提供化合物18(定量产率，1840g的粗产物)，为固体。预期通过HPLC分析确定的粗产物18的纯度为80.0％。使粗产物经受从2-丙醇/甲醇中第一次再结晶，随后从氯仿/2-丙醇中第二次再结晶以提供纯化的化合物18(1280g，69.8％产率)，以及预期通过HPLC分析确定的其纯度为约95.1％。
步骤8：制备化合物19
制备DCM(3.1L)、THF(3.1L)和磷酸(5323g，85％，46.2mol，65eq.)的混合物，并在30分钟内逐部分地添加在步骤7中制备的纯化的化合物18(1248g，0.707mol)。在20-25℃下搅拌反应混合物，并通过过程内HPLC监测反应进程。反应完成之后，用NaOH水溶液淬灭反应混合物(将反应混合物的pH调节为8-9)并通过标准萃取流程处理以提供化合物19(定量产率，1323g粗产物)。预期通过HPLC分析确定的粗产物的纯度为约90.5％。通过硅胶色谱法纯化粗产物19。纯化过程使用30g硅胶((230-400目))每克粗产物19。将1％甲醇/DCM至10％甲醇/DCM(梯度)用作洗脱溶剂。层析之后，得到460g(39％)的纯化化合物19。预期通过HPLC分析确定的纯化化合物19的纯度为约97.5％。
步骤9：制备delparantag(PMX-60056)
使通过步骤8制备的纯化化合物19(417g，0.251mol)、10wt％的碳上钯(167g)、甲醇(16.7L)和HCl(5.0eq.，在7.2重量％的水溶液中)的混合物经受70psi压力的氢气。在25℃下搅拌反应混合物，并通过过程内HPLC监测反应进程。反应完成之后，过滤反应混合物并通过与乙腈的共蒸馏浓缩以提供固体产物，将其在叔丁基甲基醚(MTBE)中制浆，过滤并干燥以提供delparantag。产率：300g(91％)(作为五HCl)，预期HPLC纯度：约97.9％
纯化delparantag：
将不纯的delparantag(274g，0.209mol)溶解在甲醇(13.9L)中，以及随后用28g的3-巯基丙基乙基硫化硅胶处理并搅拌90分钟。过滤混合物并通过与乙腈共蒸馏浓缩以提供固体产物，将其在MTBE中制浆，过滤和干燥。在之前得到的纯化产物(266g，0.203mol)上再一次重复该纯化过程，以及第二次纯化过程产生219g的delparantag。预期的HPLC纯度：97.9％，Pd含量：2.7ppm。
实施例3：PMX-30063抑制PDE4A
磷酸二脂酶类型4(PDE4)是在嗜中性白细胞、T细胞和巨噬细胞中表达的主要磷酸二脂酶。PDE抑制剂在几乎所有的炎症细胞中示出了广谱的消炎效果。PDE4抑制剂阻止PDE4对cAMP的降解行为，从而增加介导蛋白激酶的磷酯化的cAMP水平的细胞内水平。PDE4抑制剂降低嗜中性白细胞趋化性、招募和激活；抑制CD4+和CD8+T细胞的激活；及抑制单核细胞趋化性。因此，预期PDE的抑制在炎症疾病如胃肠道的炎症疾病中具有治疗效果。为了测试PMX-30063是否可以抑制PDE4磷酸二脂酶，使用PMX-30063进行PDE4的抑制测定。根据针对图1所描述的方法使用8ng的PDE4B、1μM cAMP底物和PMX-30063进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定。作为发光单位(RLU)提供数据。
PMX-30063抑制PDE4，IC50在3μM范围(n＝5)内(图1)。这是HDP模拟物抑制PDE的首次报告。由于在各种动物模型中，PDE4的抑制表明明显的消炎效果，所以通过PMX-30063抑制PDE4对于涉及在胃肠道的炎症疾病的各种关键效应细胞可以具有广泛的消炎效果。
实施例4：PMX-60056抑制PDE4A
由于PMX-30063抑制PDE4，所以决定同样也测量PMX-60056对PDE4活性的抑制。因此，用PMX-60056进行PDE4的磷酸二脂酶抑制测定。
根据针对图2所描述的方法使用8ng的PDE4B、1μM cAMP底物和PMX-60056进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定。作为发光单位(RLU)提供数据。
PMX-60056抑制PDE4，IC50在3μM范围(n＝5)内(图2)。由于在各种动物模型中，PDE4抑制示出了明显的消炎效果，所以通过PMX-60056抑制PDE4对于涉及在胃肠道的炎症疾病的各种关键效应细胞可以具有广泛的消炎效果。
实施例5：PMX-30063抑制PDE3A
磷酸二脂酶是催化信号分子环AMP/或环GMP的分解的酶家族。cAMP和cGMP是由参与许多信号过程的环化酶的大家族产生的普遍存在的第二信使信号分子。本发明人假设HDP可以在促炎症响应的抑制中通过环AMP/环GMP途径起作用。PDE3抑制剂阻碍cAMP和cGMP两者的降解，这导致细胞内的cAMP/cGMP浓度升高。因此，用PMX-30063进行PDE3的磷酸二脂酶抑制测定。
根据针对图3所描述的方法使用2.75ng的PDE3A、1μM cAMP底物和PMX-30063进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定。混合化合物和PDE3A并在室温下预温育15分钟。添加底物并温育反应。
PMX-30063以1.5±0.2μM(n＝4)的IC50抑制PDE3(图3)。因此，PMX-30063作为单个分子充当PDE3和PDE4抑制剂两者。组合PDE4和PDE3抑制的功能，PMX-30063可以作为抗微生物和消炎起作用。当同时抑制多种PDE时，产生加成和/或协同效应(Rieder et al.PLoSOne 20132013；8(2):e56867.doi:10.1371/journal.pone.0056867.Epub 2013Feb 28)。预期其减少发生在胃肠道中的炎症疾病中的炎症。
实施例6：PMX-60056抑制PDE3A
由于PMX-30063抑制PDE3，所以决定同样也测量PMX-60056对PDE3活性的抑制。因此，用PMX-60056进行PDE3的磷酸二脂酶抑制测定。根据针对图4所描述的方法使用2.75ng的PDE3A、1μM cAMP底物和PMX-60056进行PDE-Glo磷酸二脂酶测定。混合化合物和PDE3A并在室温下预温育15分钟。添加底物并温育反应。
PMX-60056以3uM的IC50抑制PDE3(图4)。因此，PMX-60056作为单个分子充当PDE3和PDE4抑制剂两者。组合PDE4和PDE3抑制的功能，PMX-60056可以作为抗微生物和消炎起作用。当同时抑制多种PDE时，产生加成和/或协同效应。预期其减少发生在胃肠道中的炎症疾病中的炎症。
实施例7：PMX-30063抑制TNF-α
肠固有层(intestinal lamina propria)包含复杂的免疫细胞群，其平衡内腔微生物区的免疫耐受性的需求与防御病原体、过多进入内腔微生物区的需要，或两者。活跃的炎症性肠病的特点是明显渗透进入先天免疫细胞(嗜中性白细胞、巨噬细胞、树突状细胞和天然杀伤T细胞)和适应性免疫细胞(T细胞和B细胞)的固有层。肠粘膜中这些细胞的数量增加和激活升高TNF-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-23-Th17通路的细胞因子的局部水平。
已经确定促炎症细胞因子TNF-α在引起胃肠道的炎症疾病中的慢性肠炎的炎症级联反应中起到关键作用。TNF-α是胃肠道的炎症疾病中的嗜中性炎症的关键介体(mediator)。已经示出抗-TNF-α缓解这种炎症过程。已经示出TNF-α抑制剂诱导产生TNF-α的免疫细胞的细胞凋亡，降低来自这些和其他细胞的各种下游促炎症细胞因子的产生。因此，其抑制具有靶向胃肠道的炎症疾病的多种组分的潜能。因此，用PMX-30063进行TNF-α抑制测定。
根据针对图5所描述的方法进行TNF-α抑制测定。用PMX-30063预处理NR8383大鼠巨噬细胞45分钟，随后用1μg/ml LPS处理8小时。通过ELISA使用对大鼠TNF-α特异性的免疫测定试剂盒(R&D Systems)确定上清液中的TNF-α浓度。
PMX-30063在0.5μM PMX-30063下抑制NR8383大鼠巨噬细胞(CRL-2192，ATCC)中LPS诱导的TNF-α生产约50％(图5)。作为消炎HDP，PMX-30063降低TNFα的水平，这对于治疗胃肠道的炎症疾病可以是非常有效的。
实施例8：PMX-60056抑制TNF-α
由于PMX-30063抑制TNF-α，所以决定同样也测量PMX-60056对TNF-α活性的抑制。根据针对图6所描述的方法进行TNF-α抑制测定。用PMX-60056预处理NR8383大鼠巨噬细胞(CRL-2192，ATCC)45分钟，随后用1μg/ml LPS处理8小时。通过ELISA使用对大鼠TNF-α特异性的免疫测定试剂盒(R&D Systems)确定上清液中的TNF-α浓度。
PMX-60056在62.5nM PMX-60056下将NR8383大鼠巨噬细胞中LPS诱导的TNF-α生产抑制大于50％(图6)。作为消炎HDP，PMX-60056降低TNFα的水平，对于治疗胃肠道的炎症疾病可以是非常有效的行为。
实施例9：PMX-30063抑制单核细胞化学吸引蛋白-1
MCP-1由各种细胞产生，包括树突状细胞、巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞，且在暴露于炎症刺激如IL-1和TNF-α之后其表达上调。最初将MCP-1视作单核细胞特异性趋化物(chemoattractant)，但是之后示出其作用于T细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和天然杀伤细胞。在患克罗恩氏病和溃疡性结肠炎的患者以及结肠炎的实验模型的粘膜组织中观察到MCP-1上升。由于MCP-1结合至C-C趋化因子受体类型2(CCR2)，以及MCP-1可以诱导T细胞和单核细胞迁移，所以该趋化因子有利于在胃肠道的炎症疾病中招募这些细胞并在炎症反应的诱导中起到重要作用。因此，用PMX-30063进行MCP-1抑制测定。
根据针对图7所描述的方法进行MCP-1抑制测定。当用PMX-30063预处理NR8383大鼠巨噬细胞(CRL-2192，ATCC)45分钟时，在LPS(1μg/ml)刺激8小时之后，我们观察到MCP-1诱导的强烈抑制(图7)。
观察到在0.5μM PMX-30063下MCP-1水平上下降25％的最小值。这些结果进一步表明PMX-30063的有力的消炎效果。
实施例10：PMX-60056抑制单核细胞化学吸引蛋白-1
由于PMX-30063抑制MCP-1，所以决定同样也测量PMX-60056对MCP-1活性的抑制。根据针对图8所描述的方法进行MCP-1抑制测定。当用PMX-60056预处理NR8383大鼠巨噬细胞(CRL-2192，ATCC)45分钟时，在LPS(1μg/ml)刺激8小时之后，我们观察到MCP-1诱导的强烈抑制(图8)。
观察到在0.5μM的PMX-60056下，MCP-1水平下降25％的最小值。这些结果进一步表明PMX-60056的有力的消炎效果。
实施例11：PMX-30063抑制基质-金属蛋白酶-9
已经示出基质金属蛋白酶(MMP-9)涉及在炎症疾病如胃肠道的炎症疾病的发病机理中。MMP的不恰当表达和过度活性与胃肠道的炎症疾病有关的组织破坏过程相关联。慢性炎症由炎症细胞导致，炎症细胞释放吸引更多炎症细胞的促炎症和破坏性介体如弹性酶、蛋白酶、白细胞介素-8(IL-8)、白三烯B-4(LTB4)、TNFα和MMP[Gueders,M.M.,Foidart,J.M.,Noel,A.&Cataldo,D.D.Matrix metalloproteinases(MMPs)and tissue inhibitorsof MMPs in the respiratory tract:potential implications in asthma and otherlung diseases.European Journal of Pharmacology 533,133-144,(2006)；Hurst,J.R.&Wedzicha,J.A.The biology of a chronic obstructive pulmonary diseaseexacerbation.Clinics in chest medicine 28,525-536,(2007)]。这些促炎症细胞因子导致慢性炎症的周期延长。因此，用PMX-30063进行MMP-9抑制测定。
根据针对图9所描述的方法进行MCP-9抑制测定。确定用PMX-30063预处理NR8383大鼠巨噬细胞(CRL-2192，ATCC)45分钟，随后LPS(1μg/ml)诱导8小时的上清液中的MMP-9的活性水平。
观察到在12.5μM的PMX-30063浓度下MMP-9水平下降50％(图9)。这些结果进一步表明PMX-30063的有力的消炎效果。
实施例12：PMX-30063抑制IL-6诱导
肠固有层包含复杂的免疫细胞群，其平衡内腔微生物区的免疫耐受性的需求与防御病原体、过多进入内腔微生物区的需要，或两者。活跃的炎症性肠病的特点是明显渗透进入先天免疫细胞(嗜中性白细胞、巨噬细胞、树突状细胞和天然杀伤T细胞)和适应性免疫细胞(T细胞和B细胞)的固有层。肠粘膜中这些细胞的数量增加和激活升高TNF-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-23-Th17通路的细胞因子的局部水平。
影响IL-6的产生可以改变效应物CD4+T细胞亚群的平衡并诱导B细胞抗体产生。此外，考虑到IL-6大部分由先天细胞如巨噬细胞、嗜中性白细胞和肥大细胞产生，其是先天和适应性系统之间的战略桥。已经示出IL-6是慢性炎症的关键作用者。在包括克罗恩氏病的多种炎症疾病中循环IL-6的水平升高。IL-6表达在炎症部位增加，以及阻断IL-6和IL-6信号对于预防和治疗炎性疾病如胃肠道的炎症疾病的模型是有效的。因此，用PMX-30063进行抑制IL-6诱导测定。
根据针对图10所描述的方法进行抑制IL-6诱导测定。在0.5μM的PMX-30063下用PMX-30063预处理8小时将NR8383大鼠巨噬细胞(CRL-2192，ATCC)中LPS(1μg/ml)诱导的IL-6生产抑制约50％，一种对于治疗胃肠道的炎症疾病可以是非常有效的活性。
PMX-30063和PMX-60056的消炎活性的总结(图1-10)
作为消炎试剂，PMX-30063降低TNF-α、MCP-1、MMP-9和IL-6的水平。PMX-60056也降低TNF-α和MCP-1的水平。PMX-30063和PMX-60056的消炎作用可以由减少多种促炎症通路和调节环核苷酸的细胞内浓度及其信号通路，因此影响慢性炎症疾病如胃肠道的炎症疾病的多种生物响应来介导。
体内分布研究表明口腔给予的PMX-30063主要保持在小肠中
实施例13：静脉内或口腔给予至小鼠之后血浆中的PMX-30063的浓度
为了评估在给予PMX-30063之后血浆中的分布的程度，根据图11所描述的方法进行研究来测量PO给予10mg/kg或IV给予5mg/kg至雄性Balb/c小鼠(研究16009-12001)之后PMX-30063的血浆浓度。
示出了在IV或PO给予之后PMX-30063的血浆浓度对时间的曲线(图11)。IV给予的PMX-30063的峰值浓度是48,415±7803ng/mL，而PO给予时，血浆中的峰值浓度是33.7±8.56ng/mL。这表明口腔给予的PMX-30063的小于0.1％进入循环，这大大降低了全身中毒的风险。
实施例14：口腔给予至小鼠之后小肠中的PMX-30063的浓度
根据针对图12所描述的方法进行PO给予10mg/kg之后小肠中的PMX-30063的浓度。在1小时，小肠中的浓度的峰值在38,941±4703ng/克组织(图12)。这表明当口腔给予时，PMX-30063进入小肠组织，其中其可以在局部层面发挥其消炎作用。
实施例15：在口腔给予PMX-30063之后肠与血浆浓度的比值
基于源自图11和12的数据根据针对图13所描述的方法计算在口腔给予PMX-30063之后肠与血浆浓度的比值。
在第一小时，这些比值在2243至4323的范围，表明在口腔给予之后最初小于0.1％的PMX-30063进入循环。在4小时内，在口腔给予之后，仍小于0.5％进入循环(图13)。
下表示出了在静脉内和口腔给予PMX-30063之后雄性小鼠的血浆和小肠中的PMX-30063的药物动力学参数。这些数据还表明了在口腔给予时血液的总暴露(AUC)小于0.5％。
图11、图12、图13和表格表明通过口腔给予，PMX-30063被小肠中的组织吸收，但是<0.5％进入循环，这提供了在全身中毒的低风险下用于治疗肠上皮的重大优点。
实施例16：在溃疡性结肠炎模型中PMX-30063对体内肠重量的影响
根据针对图14所描述的方法在溃疡性结肠炎(UC)模型中评估PMX-30063的体内疗效。简要地，通过将4％乙酸注射到直肠中诱导UC。四天后，直肠内用每天一次100mg/kg、200mg/kg或400mg/kg的PMX-30063治疗动物，持续5天，或用5-ASA治疗，或不治疗。
与未治疗的对照(p＝0.02)相比，在400mg/kg剂量下肠重量显著下降17％(图14，下表)。由于UC导致组织炎症，所以预期在用PMX-30063治疗时肠重量将下降。
实施例17：PMX-30063表明在溃疡性结肠炎模型中的体内疗效
根据对图15所描述的方法在溃疡性结肠炎(UC)模型中评估PMX-30063的疗效。
观察到动物中溃疡性结肠炎得分的剂量依赖性下降(图15)。用100mg/kg的PMX-30063治疗将中值UC得分下降33％以及在200和400mg/kg下使UC得分进一步下降67％，但是不明显(下表)。在用5-ASA治疗的动物中，UC得分也下降67％，但不明显。在所有组中，最大体重损失是12％。
因此，该初步研究提出直肠内给予PMX-30063在减少溃疡性结肠炎的临床症状上可以是有效的，同时是良好耐受的。我们假设作为HDP模拟物的PMX-30063在促炎症响应的抑制中可以通过环AMP/环GMP路径起作用。PDE4是在嗜中性白细胞、T细胞和巨噬细胞中表达的主要的磷酸二脂酶，以及PDE4抑制剂降低嗜中性白细胞趋化性、招募和激活，抑制CD4+和CD8+T细胞的激活以及抑制单核细胞趋化性。因此，PDE4对于可能涉及在溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和其他炎症性肠病中的多种关键效应细胞具有广泛的消炎效果。
生物数据的总结
总之，表明消炎活性，PMX-30063(brilacidin)降低TNF-α、MCP-1、MMP-9和IL-6的水平。PMX-60056(delparantag)也降低TNF-α和MCP-1的水平。PMX-30063和PMX-60056的消炎作用可以由减少多种促炎症通路和调节环核苷酸的细胞内浓度及其信号通路，因此影响慢性炎症疾病如胃肠道的炎症疾病的多种生物响应来介导。
PMX-30063具有抗微生物和消炎效果两者，所以当存在感染和炎症两者时可以使用它。当不存在感染时，也可以将其用于治疗炎症。当存在感染和炎症两者时，可以将PMX-60056与PMX-30063或与另一种抗生素一起使用。当不存在感染但是存在炎症时，可以使用PMX-30063和/或PMX-60056以提供针对炎症的预防。将PMX-30063和/或PMX-60056用于可能引起炎症的感染将提供可以防止炎症从而打断慢性细菌定植、炎症和上皮损害之间的潜在恶性循环的预防。PMX-30063和PMX-60056具有预防胃肠道的炎症疾病的诱导和发展的潜能，与在抑制慢性炎症中具有有限的疗效、不会使疾病病变逆转、以及不改变引发和驱动疾病的长期发展的因素的当前疗法不同。
实施例18：提出的临床研究
2阶段开放标记的多中心研究来评估直肠给予的brilacidin(PMX-30063)对于诱导活跃的轻度至中度溃疡性直肠炎(UP)或溃疡性直肠乙状结肠炎(UPS)的受试者的缓解的疗效和安全性。
在筛选成员时，满足内窥镜检查参加标准的受试者将接受两次(2)直肠的和两次(2)乙状结肠的活检，用于未来可能在疗效结果的分析中使用(不需要登记活检结果)。所有受试者将接收经由直肠给予的brilacidin。将在每个参与地点顺序分配治疗组。不进行随机化。在任何一个地点，登记的受试者的不超过50％可以患有UPS。
将在A)在就寝时间每天一次在60mL中25mg、B)在就寝时间每天一次在60mL中50mg、C)在早晨和就寝时间每天两次在60mL中25mg或D)在早晨和就寝时间每天两次在60mL中50mg的剂量下，在作为保留灌肠剂的注射用水(WFI)中直肠给予PMX-30063(brilacidin)，持续6周。作为构思研究的证据，对于每个臂将登记约10位受试者到研究中。在研究中，将允许符合条件的受试者维持之前建立的每天至多4.8克剂量的口腔5-ASA治疗。在研究期间进行周期性安全监测，包括身体检查、生命指征、实验室测试以及AE和伴随的药物的记录。
主要目的是基于改进的梅奥疾病活性指数(Modified Mayo Disease ActivityIndex，MMDAI)得分评估用经由直肠给予的PMX-30063治疗活跃的UP或UPS受试者6周之后临床和内窥镜检查缓解的频率。主要的疗效量度是实现缓解的患者的百分比，定义为内窥镜检查得分≤1，直肠出血得分＝0，以及在第6周MMDAI的大便频率子刻度(subscale)的基准线改善或无变化。
次要目的是评估当经由直肠给予时brilacidin的安全性和评估在该指示(indication)中随后的试验的统计学功效(power)。关键的次要结果包括：
●临床响应的受试者的百分比
●实现直肠出血MMDAI子刻度得分0的受试者的百分比
●在第6周内窥镜检查MMDAI子刻度得分<1的受试者的百分比
●排泄物钙防卫蛋白(fecal calprotectin)的变化
●血清C-反应蛋白(CRP)的变化
●血清IL-6的变化
●健康有关的生活质量(QOL)的改善
●药物动力学数据。

Claims (13)

1.一种预防和/或治疗哺乳动物的胃肠道的炎症疾病的方法，包括给予需要这种预防和/或治疗的所述哺乳动物治疗有效量的选自PMX-30063(brilacidin)和PMX-60056(delparantag)以及它们的药学上可接受的盐的化合物。
2.药物组合物用于治疗胃肠道的炎症疾病的用途，所述组合物包含治疗有效量的选自PMX-30063(brilacidin)和PMX-60056(delparantag)以及它们的药学上可接受的盐的化合物和药学上可接受的载体。
3.PMX-30063(brilacidin)和PMX-60056(delparantag)以及它们的药学上可接受的盐活性化合物或包含其的药物组合物，用于在制备用于预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的药物中应用。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述疾病是炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病、或过敏性肠综合征。
5.根据权利要求2所述的用途，其中，所述疾病是炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病、或过敏性肠综合征。
6.PMX-30063(brilacidin)和PMX-60056(delparantag)以及它们的药学上可接受的盐或包含其的药物组合物，用于在制备用于预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病的药物中应用。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，连同抗生素一起给予所述化合物。
8.根据权利要求2所述的用途，其中，所述组合物还包含除PMX-30063(brilacidin)之外的抗生素。
9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述疾病是炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病、或过敏性肠综合征。
10.根据权利要求8所述的用途，其中，所述疾病是炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病、或过敏性肠综合征。
11.一种选自PMX-30063(brilacidin)和PMX-60056(delparantag)以及它们的药学上可接受的盐活性化合物的化合物或包含其的药物组合物，用于在预防和/或治疗患者的胃肠道的炎症疾病中应用。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中，所述疾病是炎症性肠病、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、克罗恩氏病、或过敏性肠综合征。
13.根据权利要求11或12所述的化合物，用于与其中所述另一种抗生素联合使用。
CN201680024015.9A 2015-02-20 2016-02-09 用于预防和/或治疗胃肠道的炎症疾病的宿主防御蛋白（hdp）模拟物 Pending CN107613967A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562118950P 2015-02-20 2015-02-20
US62/118,950 2015-02-20
PCT/US2016/017061 WO2016133733A1 (en) 2015-02-20 2016-02-09 Host defense protein (hdp) mimetics for prophylaxis and/or treatment of inflammatory diseases of the gastrointestinal tract

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107613967A true CN107613967A (zh) 2018-01-19

Family

ID=56689106

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680024015.9A Pending CN107613967A (zh) 2015-02-20 2016-02-09 用于预防和/或治疗胃肠道的炎症疾病的宿主防御蛋白（hdp）模拟物

Country Status (15)

Country Link
US (3) US20160243117A1 (zh)
EP (1) EP3258927B8 (zh)
JP (1) JP6047203B2 (zh)
CN (1) CN107613967A (zh)
AU (1) AU2016220373B2 (zh)
DK (1) DK3258927T3 (zh)
ES (1) ES2881429T3 (zh)
HR (1) HRP20211107T1 (zh)
HU (1) HUE055090T2 (zh)
LT (1) LT3258927T (zh)
PL (1) PL3258927T3 (zh)
PT (1) PT3258927T (zh)
RS (1) RS62249B1 (zh)
SI (1) SI3258927T1 (zh)
WO (1) WO2016133733A1 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090092574A1 (en) 2006-12-29 2009-04-09 Scott Richard W Ophthalmic And Otic Compositions Of Facially Amphiphilic Polymers And Oligomers And Uses Thereof
DK2709619T3 (en) 2011-05-16 2018-01-15 Cellceutix Corp RELATIONSHIPS FOR USING THE TREATMENT OF MUCOSITIS
KR20180080189A (ko) 2015-09-01 2018-07-11 퍼스트 웨이브 바이오, 인코포레이티드 이상 염증 반응과 연관된 질환을 치료하기 위한 방법 및 조성물
US10980756B1 (en) 2020-03-16 2021-04-20 First Wave Bio, Inc. Methods of treatment
US11771694B2 (en) 2020-06-05 2023-10-03 Innovation Pharmaceuticals Inc. Arylamide compounds for treatment and prevention of viral infections

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050031582A1 (en) * 2001-03-29 2005-02-10 Toback F. Gary Control of growth and repair of gastro-intestinal tissues by gastrokines and inhibitors
US8017576B2 (en) * 2005-05-10 2011-09-13 The University Of Chicago Methods and compositions to treat mucositis
CN102256614A (zh) * 2008-10-27 2011-11-23 波利梅伊公司 宿主防御的合成模拟物及其用途
US20120295922A1 (en) * 2011-05-16 2012-11-22 Polymedix, Inc. Compounds For Use In Treatment Of Mucositis

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5209302B2 (ja) * 2004-06-15 2013-06-12 ポリメディックス、インク． ポリカチオン化合物とその使用
US20090092574A1 (en) * 2006-12-29 2009-04-09 Scott Richard W Ophthalmic And Otic Compositions Of Facially Amphiphilic Polymers And Oligomers And Uses Thereof

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050031582A1 (en) * 2001-03-29 2005-02-10 Toback F. Gary Control of growth and repair of gastro-intestinal tissues by gastrokines and inhibitors
US8017576B2 (en) * 2005-05-10 2011-09-13 The University Of Chicago Methods and compositions to treat mucositis
CN102256614A (zh) * 2008-10-27 2011-11-23 波利梅伊公司 宿主防御的合成模拟物及其用途
US20120295922A1 (en) * 2011-05-16 2012-11-22 Polymedix, Inc. Compounds For Use In Treatment Of Mucositis
CN103957710A (zh) * 2011-05-16 2014-07-30 塞尔西优蒂克斯公司 用于治疗粘膜炎的化合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RICHARD W. SCOTT: "Chemical Mimetics of Host Defense Proteins", 《WWW.POLYMEDIX.COM》 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20160243117A1 (en) 2016-08-25
DK3258927T3 (da) 2021-07-19
HUE055090T2 (hu) 2021-10-28
SI3258927T1 (sl) 2022-03-31
RS62249B1 (sr) 2021-09-30
EP3258927A1 (en) 2017-12-27
JP6047203B2 (ja) 2016-12-21
EP3258927B1 (en) 2021-06-09
ES2881429T3 (es) 2021-11-29
AU2016220373A1 (en) 2017-10-12
PL3258927T3 (pl) 2021-11-08
US11666571B2 (en) 2023-06-06
AU2016220373B2 (en) 2020-10-22
US20230310435A1 (en) 2023-10-05
EP3258927B8 (en) 2021-09-15
LT3258927T (lt) 2021-09-27
JP2016153386A (ja) 2016-08-25
PT3258927T (pt) 2021-07-22
WO2016133733A1 (en) 2016-08-25
HRP20211107T1 (hr) 2021-10-15
US20200368232A1 (en) 2020-11-26
EP3258927A4 (en) 2018-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230310435A1 (en) Host defense protein (hdp) mimetics for prophylaxis and/or treatment of inflammatory diseases of the gastrointestinal tract
ES2755125T3 (es) Derivados de 2H-1,2,3-triazol como inhibidores de fibrosis
US20200038350A1 (en) Chemical modulators of signaling pathways and therapeutic use
EP3160964A1 (en) Aryl receptor modulators and methods of making and using the same
KR20080027191A (ko) 신규한 벤즈옥사졸 유도체, 이의 제조방법 및 이를포함하는 약학 조성물
JP2011529502A (ja) 抗マラリア化合物
EA037447B1 (ru) Способ лечения эозинофильных заболеваний
US11737993B2 (en) Multiple myeloma treatment
US8822519B2 (en) Compound with agitation effect on peroxisome proliferator-activated receptor process for its preparation and use thereof
CN111886026A (zh) 用于治疗或预防高细胞因子血症和重度流感的方法和化合物
US8614240B2 (en) Benzoxazole derivatives having inhibitory activity against interleukin-6, preparation method thereof, and pharmaceutical composition containing the same
US20120225889A1 (en) Use of macrocyclic lactone derivatives for the treatment of inflammatory disorders
US20070010497A1 (en) Pharmaceutical composition comprising a p2x7 antagonist and sulfasalazine
WO2022194136A1 (zh) 二苯烷类化合物及其制备方法、药物组合物和用途
US20230346816A1 (en) Compounds and methods for treating viral infection
EP4119165A1 (en) Novel 3,5-diaminobenzoic acid compound, and pin1 inhibitor and therapeutic agent for inflammatory diseases using same
CA2772907C (en) Selective antibacterials for clostridium difficile infections
WO2002066046A1 (en) Cancer therapeutic agent comprising thiopeptide with multiple thiazole rings
RU2427373C1 (ru) Средство для индукции эндогенного интерферона
CN105377838A (zh) 新抗疟剂
JP2010520236A (ja) リソフィリンアナログとその使用法
US20160279079A1 (en) Compositions and methods for treating bone diseases
TW383304B (en) 1-(3-aminoindazol-5-yl)-3-butyl-cyclic urea useful as a HIV protease inhibitor, and pharmaceutical compositions and kits thereof
JPH10226652A (ja) アピシジンを用いた疾患予防および治療用医薬
WO2016206097A1 (zh) 新的5型磷酸二酯酶抑制剂及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180119