CN107602437A - 活化酯的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种活化酯的制备方法。本发明所述活化酯的制备方法，包括以下步骤：将脂肪酸、具有羟基胺基结构的有机物和催化剂在有机溶剂中进行反应，将反应产物分离、纯化，即得。其中，所述的脂肪酸为肉豆蔻酸，所述具有羟基胺基结构的有机物为N‑羟基琥珀酰亚胺时，二者在催化剂作用下反应得到的活化酯为N‑琥珀酰亚胺基豆蔻酸。本发明所述活化酯的制备方法，操作简单，活化酯的纯度和收率高，成本低且工艺稳定可靠，适于工业化的放大性生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种活化酯的制备方法，属于有机化合物的制备领域。
背景技术
随着中国社会和经济的持续发展，以城市化和体力活动减少为特征的生活方式逐渐被越来越多的人们所接受，加上高能量快餐食品的大量摄入导致糖尿病人群规模迅速扩大。胰岛素及其类似物是治疗糖尿病最直接和最有效的药物，占糖尿病药物40％以上的市场份额。地特胰岛素(Insulin detemir)是一种中性、可溶的长效胰岛素类似物，在制备地特胰岛素的过程中desB 30(原型胰岛素去除了B链第30位苏基酸)不能和肉豆蔻酸直接反应，需要将肉豆蔻酸活化，常见的肉豆蔻酸活化物为N-琥珀酰亚胺基豆蔻酸(简称活化酯)。
若肉豆蔻酸(十四烷酸)直接与desB30进行酰化反应，因其不溶于水和较低的活化能，酰化反应的收率很低，因而必须采用其活化酯的方式做为十四碳酰基的供体，用活化酯来酰化desB30可以显著提高酰化反应的效率。N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)是最常用的活化有机酸羧基的试剂，与肉豆蔻酸在常温常压下通过脱水剂或交联剂反应生成的N-羟基琥珀酰亚胺肉豆蔻酸(活化酯)。
N-羟基琥珀酰亚胺肉豆蔻酸活化酯化学结构虽然不复杂，但由于其不是工业常用的化工原料，且用于地特胰岛素的酰化反应用量也比较小，因此没有专门厂家提供满足制药需求的产品。国外Fluka公司提供该产品每克近2000元，价格十分昂贵，性价比非常低。鉴于该活化酯结构并不复杂，如果可自主合成能大幅度的降低地特胰岛素的生产成本，因此开发一种制备活化酯的方法，十分有意义和必要。
现有的部分化学合成实验需经过缩合、环化、重排、还原等一系列反应，反应路线较长，副产物较多；还有部分化学合成实验需要加入盐酸、搅拌、抽滤及重结晶等工艺，反应操作复杂，污染大，不易于工业化生产。在纯化方法上，部分工艺采用乙醇重结晶的方法进行纯化，工艺复杂，且纯度较低。因此，亟待开发一种工艺简单、合成路线短、成本低、污染小的活化酯制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种活化酯的制备方法，尤其是N-琥珀酰亚胺基豆蔻酸的制备方法，该方法所制备活化酯的纯度和收率高，操作简单，成本低且工艺稳定可靠。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
本发明首先公开了一种活化酯的制备方法，包括以下步骤：(1)将脂肪酸、具有羟基胺基结构的有机物溶解在有机溶剂中，得到反应液A；(2)将催化剂溶解在有机溶剂中，得到反应液B；(3)将反应液B加入到反应液A中进行反应，将反应产物分离、纯化，即得。
其中，按照摩尔比计，脂肪酸：具有羟基胺基结构的有机物：催化剂＝1-2：1-2：1-2，优选为1：1：1。
步骤(1)所述脂肪酸为12-18C脂肪酸中的任意一种，优选为肉豆蔻酸(即14C脂肪酸)。
步骤(1)所述的具有羟基胺基结构的有机物为N-羟基硫代琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三氮唑或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(别名N-羟基丁二酰亚胺)中的任意一种，优选为N-羟基琥珀酰亚胺。
本发明所述脂肪酸为肉豆蔻酸，所述具有羟基胺基结构的有机物为N-羟基琥珀酰亚胺时，二者在催化剂作用下反应得到的活化酯为N-琥珀酰亚胺基豆蔻酸。
步骤(2)所述的催化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)或二环己基碳二亚胺(DCC)中的任意一种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐。
步骤(1)所述有机溶剂为四氢呋喃(THF)、无水二甲基甲酰胺(DMF)、无水丙酮或二氯甲烷中的任意一种，优选为四氢呋喃。
步骤(2)所述的有机溶剂为四氢呋喃(THF)、无水二甲基甲酰胺(DMF)、无水丙酮或二氯甲烷中的任意一种，优选为二氯甲烷。
本发明实验发现，将脂肪酸、具有羟基胺基结构的有机物和催化剂三者溶解在同一种有机溶剂中进行反应，难以制备得到活化酯；而将脂肪酸和具有羟基胺基结构的有机物溶解在四氢呋喃中，将催化剂溶解在二氯甲烷中，然后再进行反应，能够合成活化酯。
在其他参数相同的条件下，采用催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)的活化酯合成率明显提高，活化酯合成率比采用催化剂二环己基碳二亚胺(DCC)提高了约10个百分点。
本发明对脂肪酸、具有羟基胺基结构的有机物和催化剂三者比例的优化结果表明，脂肪酸、具有羟基胺基结构的有机物和催化剂的摩尔比为1：1：1，活化酯的合成率达到92.75％，明显高于其他比例。
本发明活化酯的制备方法，步骤(1)所述反应液A的浓度为0.1-0.5mol/L，步骤(2)所述反应液B的浓度为0.1-0.5mol/L；优选的，步骤(1)所述反应液A的浓度为0.25mol/L，步骤(2)所述反应液B的浓度为0.25mol/L。
步骤(3)所述反应的时间为10-30h，优选为24-30h，最优选为24h；所述反应的温度为常温。本发明所述的常温为25℃。
本发明对反应时间的优化结果表明，在10-30h范围内，反应24h的活化酯合成率达到92.75％，反应30h的活化酯合成率达到93.5％。反应24-30h的活化酯合成率明显高于其他反应时间，但从节约时间成本看，反应24h较佳。
步骤(3)所述的分离包括：将反应结束后的反应液进行旋转蒸发，将有机溶剂旋干，得到粗品活化酯。所述旋转蒸发具体为：将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃，转速100rpm/min下冷凝，将有机溶剂旋干。
步骤(3)所述的纯化包括：(a)用少量有机溶剂将粗品活化酯溶解，加入到硅胶中进行挥发吸附；(b)取硅胶装填色谱柱，将步骤(a)吸附活化酯的硅胶加入到色谱柱，上层再加入硅胶，然后用洗脱液进行洗脱，当柱子下端有白色晶体析出时，进行收集，即得到纯化的活化酯。
其中，步骤(a)所述硅胶的用量为：按照质量比计，理论生成活化酯：硅胶＝1-2：1，优选为1.5：1。步骤(a)所述有机溶剂为二氯甲烷、石油醚、乙腈或乙醇中的任意一种，优选为二氯甲烷。
本发明对挥发吸附所用硅胶量的优化结果表明，按照m(理论生成活化酯)：m(硅胶)为2：1，硅胶挥发时间很久，且后期不易挥发；采取1：1的比例，硅胶量较大，在硅胶柱中填充很多；而采取1.5：1的比例较适合。
步骤(b)所述硅胶的目数为200-300目，优选为300目；步骤(b)所述色谱柱的柱高为16-24cm，优选为20-24cm，最优选为20cm；所述上层再加入硅胶的高度为2-5cm，优选为3cm。步骤(b)优选为，先将硅胶加入石油醚超声30min后，再填装到色谱柱中使柱高为20cm。
步骤(b)所述的洗脱液为石油醚与乙酸乙酯按照任意配比组成的混合溶液，或石油醚与乙醇按照任意配比组成的混合溶液；优选的，按体积比计，所述洗脱液依次为石油醚、石油醚：乙酸乙酯＝5：1的混合溶液、石油醚：乙酸乙酯＝3：1的混合溶液、石油醚：乙酸乙酯＝2：1的混合溶液、乙酸乙酯；或者，按体积比计，所述洗脱液依次为石油醚、石油醚：乙醇＝5：1的混合溶液、石油醚：乙醇＝3：1的混合溶液、石油醚：乙醇＝2：1的混合溶液、乙醇。
步骤(b)进一步可以包括：将收集液进行旋转蒸发，将有机溶剂旋干；具体的，将收集液在水浴温度40℃，冷却温度4℃下，旋蒸至样品呈膏状，并将样品置于通风厨中挥干剩余溶剂，然后真空干燥器中抽真空将残留溶剂充分挥发，得到纯化的活化酯。
本发明采用硅胶柱进行活化酯的纯化，不仅工艺简单，而且能够获得纯度较高的活化酯，纯度达99％以上。
本发明采用HPLC方法检测所制备活化酯的纯度，灵敏度高，重现性好，方法简单。具体的，包括：取活化酯适量，照高效液相色谱法测定(中国药典2010版二部附录V D)，以十八烷基硅烷键合硅胶(C18)为介质(kromasil 250*4.6mm，5μm)；流动相A：超纯水，流动相B：100％乙腈；流速：0.7ml/min；92％B等度洗脱，22min；柱温：30℃；检测波长210nm。进样20μl。其中，优选为用少量有机溶剂完全溶解活化酯，再采用HPLC方法进行纯度检测；所述有机溶剂为二氯甲烷、石油醚、乙腈或乙醇中的任意一种，优选为乙腈。本发明采用HPLC方法检测所制备活化酯的纯度为95-99.38％，能够用于地特胰岛素生产的酰化反应中。
本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
现有的活化酯制备工艺均存在路线长，污染大，副产物多等现象，不适用于后期地特胰岛素的酰化工艺。本发明所述活化酯的制备方法，能够快速得到所需活化酯，且活化酯符合制药原药的质量标准，工艺和质量稳定，且对后期胰岛素酰化工艺无任何影响。本发明方法所制备活化酯的纯度和收率高，利用本发明方法大规模制备的活化酯纯度超过98％，副产物低于2％。本发明所述活化酯的制备方法，操作简单，反应时间较短，整体收率增加，副产物少，成本明显降低且污染小，对于规模化、工业化制备活化酯，提供了一种简捷高效的方法。本发明采用HPLC方法检测活化酯的纯度，重现性好、灵敏度高，方法简单。
附图说明
图1为利用肉豆蔻酸、N-羟基琥珀酰亚胺和催化剂EDC·HCl制备活化酯的反应式；其中，P1中的R为脂肪酸碳链，P2为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；
图2为实施例7的成分检测图；从左至右依次为标、EDC反应液、EDC·HCl、NHS、肉豆蔻酸；其中，标为活化酯标品；EDC反应液为活化酯合成反应液；EDC·HCl为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐；NHS为N-羟基琥珀酰亚胺；
图3为实施例14中反应液HPLC检测图谱；
图4为实施例14中活化酯终样品HPLC检测图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1
按摩尔比1:1:1称取棕榈酸、1-羟基苯并三氮唑和DCC(二环己基碳二亚胺)，三者溶解在四氢呋喃中配制成0.25mol/L的溶液，常温下(25℃，下同)反应24h。溶液成浑浊现象，将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量四氢呋喃将样品完全溶解，发现有大量油状物体出现，无法溶解。
实施例2
按摩尔比1:1:1称取棕榈酸、1-羟基苯并三氮唑和DCC，三者溶解在二氯甲烷中配制成0.25mol/L的溶液，常温下反应24h。溶液成浑浊现象，将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，发现部分样品无法溶解。
实施例3
按摩尔比1:1:1称取棕榈酸、1-羟基苯并三氮唑和DCC，将棕榈酸和1-羟基苯并三氮唑溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将DCC溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现，但大量聚集在原始点，未展开，说明合成率较低，再经过检测，合成率约45.37％。
实施例4
按摩尔比1:1:1称取肉豆蔻酸、NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)和DCC，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将DCC溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现但大量聚集在原始点，未展开，说明合成率较低，再经过检测，合成率约64.13％。
实施例5
按摩尔比1:1:2称取肉豆蔻酸、NHS和DCC，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将DCC溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，但有大量油状物体产生。经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现，但大量聚集在原始点，未展开，说明合成率较低，再经过检测，合成率约70.34％。
实施例6
按摩尔比1:1:2称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐)，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，但有大量油状物体产生。经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现，但有少许聚集在原始点，未展开，说明合成率较低，再经过检测，合成率约81％。
实施例7
按摩尔比1:1:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h(反应式见图1)。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现，说明合成率较高，再经过检测，合成率约92.75％。
实施例8
按摩尔比2:1:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，。经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现，但再经过检测，合成率约79％。
实施例9
按摩尔比1:2:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，经薄层检测，与标品一样具有黑色点带出现，但有部分聚集在原始点，未展开，再经过检测，合成率约80％。
实施例10
按摩尔比2:2:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，经薄层检测，与标品一样具有有黑色点带出现，但有少许聚集在原始点，未展开，经过检测，合成率约62.57％。
实施例11
按摩尔比1:1:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应10h、16h、24h、30h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解，经薄层检测，反应24h和30h有明显的黑色条带出现，说明合成率较高；其他部分聚集在原始点，未展开，说明合成率较低。经检测，各时间段的合成率分别为：55.36％、72.83％、92.75％和93.5％。但从节约时间成本看，24h较佳。
实施例12
按摩尔比1:1:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解分成三份，按照m(理论生成活化酯)：m(硅胶)(质量比)为2:1、1.5:1、1:1称取硅胶，将活化酯二氯甲烷分次加入到硅胶中挥发吸附。结果，2:1比例的硅胶发现挥发时间很久，且后期不易挥发；1:1比例的硅胶量较大，在硅胶柱中填充很多；1.5:1较适合。
实施例13
按摩尔比1:1:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解按照m(理论生成活化酯)：m(硅胶)(质量比)为1.5:1称取硅胶，将活化酯二氯甲烷分次加入到硅胶中挥发吸附。称取一定量300目的硅胶，加入石油醚超声30min后，填装到色谱柱中使柱高为24cm，将吸附活化酯的硅胶加入到色谱柱，上层加入3cm的硅胶。分别用石油醚500ml、洗脱液A(石油醚：乙醇体积比5:1)2CV，洗脱液B(石油醚：乙醇体积比3:1)2CV，洗脱液C(石油醚：乙醇体积比2:1)、乙醇1CV洗脱，在加入洗脱液B时开始收集，每份300ml左右。将收集的洗脱液分别取样进行薄层层析，展开剂为石油醚：乙酸乙酯体积比4:1。将层析后的层析板放入紫外分析仪，在254nm紫外波长下检测，与标品一样显示有黑色点带的代表有活化酯样品。将检测含有活化酯的洗脱液，在水浴温度40℃，冷却温度4℃下，旋蒸至样品呈膏状，并将样品置于通风厨中挥干剩余溶剂，然后真空干燥器中抽真空将残留溶剂充分挥发。取本品适量，以十八烷基硅烷键合硅胶(C18)为介质(kromasil 250*4.6mm，5μm)；流动相A：超纯水，流动相B:100％乙腈；流速：0.7ml/min；92％B等度洗脱，22min；柱温：30℃；检测波长210nm。进样20μl。样品溶解采用100％乙腈。精确称取供试品，用乙腈溶解配制成1mg/ml左右的供试品溶液，进行HPLC检测，按照峰面积归一法计算，样品纯度95％。
实施例14
按摩尔比1:1:1称取肉豆蔻酸、NHS和EDC·HCl，将肉豆蔻酸和NHS溶解在四氢呋喃中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液A)，将EDC·HCl溶解在二氯甲烷中，配制成0.25mol/L的溶液(反应液B)，将反应液B缓慢添加到反应液A中，常温下反应24h。将反应液转移到旋蒸瓶中，在旋转蒸发水浴温度40℃，冷凝循环水4℃下冷凝，将有机溶剂旋干。用少量二氯甲烷将样品完全溶解按照m(理论生成活化酯)：m(硅胶)(质量比)为1.5:1称取硅胶，将活化酯二氯甲烷分次加入到硅胶中挥发吸附。称取一定量300目的硅胶，加入石油醚超声30min后，填装到色谱柱中使柱高为20cm，将吸附活化酯的硅胶加入到色谱柱，上层加入3cm的硅胶。分别用石油醚500ml、洗脱液A(石油醚：乙酸乙酯体积比5:1)2CV，洗脱液B(石油醚：乙酸乙酯体积比3:1)2CV，洗脱液C(石油醚：乙酸乙酯体积比2:1)、乙酸乙酯1CV洗脱，在洗脱过程中，柱子底端的液体流出部位会析出白色晶体时收集。收集液在水浴温度40℃，冷却温度4℃下，旋蒸至样品呈膏状，并将样品置于通风厨中挥干剩余溶剂，然后真空干燥器中抽真空将残留溶剂充分挥发。取本品适量，以十八烷基硅烷键合硅胶(C18)为介质(kromasil 250*4.6mm，5μm)；流动相A：超纯水，流动相B:100％乙腈；流速：0.7ml/min；92％B等度洗脱，22min；柱温：30℃；检测波长210nm。进样20μl。样品溶解采用100％乙腈。精确称取供试品，用乙腈溶解配制成1mg/ml左右的供试品溶液，进行HPLC检测，按照峰面积归一法计算，样品纯度99.38％。
Claims (10)
1.一种活化酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将脂肪酸、具有羟基胺基结构的有机物溶解在有机溶剂中，得到反应液A；(2)将催化剂溶解在有机溶剂中，得到反应液B；(3)将反应液B加入到反应液A中进行反应，将反应产物分离、纯化，即得。
2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：按照摩尔比计，脂肪酸：具有羟基胺基结构的有机物：催化剂＝1-2：1-2：1-2，优选为1：1：1。
3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述脂肪酸为12-18C脂肪酸中的任意一种，优选为肉豆蔻酸。
4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述具有羟基胺基结构的有机物为N-羟基硫代琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三氮唑或N-羟基琥珀酰亚胺中的任意一种，优选为N-羟基琥珀酰亚胺。
5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的催化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐或二环己基碳二亚胺中的任意一种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-碳酰二亚胺盐酸盐。
6.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述有机溶剂为四氢呋喃、无水二甲基甲酰胺、无水丙酮或二氯甲烷中的任意一种，优选为四氢呋喃；
步骤(2)所述有机溶剂为四氢呋喃、无水二甲基甲酰胺、无水丙酮或二氯甲烷中的任意一种，优选为二氯甲烷。
7.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述反应液A的浓度为0.1-0.5mol/L，步骤(2)所述反应液B的浓度为0.1-0.5mol/L；优选的，步骤(1)所述反应液A的浓度为0.25mol/L，步骤(2)所述反应液B的浓度为0.25mol/L。
8.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述反应的时间为10-30h，优选为24-30h，最优选为24h；所述反应的温度为常温。
9.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的分离包括：将反应结束后的反应液进行旋转蒸发，将有机溶剂旋干，得到粗品活化酯；
步骤(3)所述的纯化包括：(a)用有机溶剂将粗品活化酯溶解，加入到硅胶中进行挥发吸附；(b)取硅胶装填色谱柱，将步骤(a)吸附活化酯的硅胶加入到色谱柱，上层再加入硅胶，然后用洗脱液进行洗脱，当柱子下端有白色晶体析出时，进行收集，即得到纯化的活化酯。
10.按照权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)所述硅胶的用量为：按照质量比计，理论生成活化酯：硅胶＝1-2：1，优选为1.5：1；
步骤(a)所述有机溶剂为二氯甲烷、石油醚、乙腈或乙醇中的任意一种，优选为二氯甲烷；
步骤(b)所述硅胶的目数为200-300目，优选为300目；
步骤(b)所述色谱柱的柱高为16-24cm，优选为20-24cm，最优选为20cm；所述上层再加入硅胶的高度为2-5cm，优选为3cm；
所述的洗脱液为石油醚与乙酸乙酯按照任意配比组成的混合溶液，或石油醚与乙醇按照任意配比组成的混合溶液；优选的，按体积比计，所述洗脱液依次为石油醚、石油醚：乙酸乙酯＝5：1的混合溶液、石油醚：乙酸乙酯＝3：1的混合溶液、石油醚：乙酸乙酯＝2：1的混合溶液、乙酸乙酯；或者，按体积比计，所述洗脱液依次为石油醚、石油醚：乙醇＝5：1的混合溶液、石油醚：乙醇＝3：1的混合溶液、石油醚：乙醇＝2：1的混合溶液、乙醇。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
2017
- 2017-08-09 CN CN201710676427.7A patent/CN107602437A/zh active Pending
Patent Citations (6)
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