CN107573327B - 吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学医药制备领域，具体涉及吲唑‑甲酰胺‑吡啶酮衍生物及其制备方法和用途。本发明提供了一类吲唑‑甲酰胺‑吡啶酮衍生物，结构如式I所示。本发明还提供上述吲唑‑甲酰胺‑吡啶酮衍生物的制备方法和用途。本发明提供的吲唑‑甲酰胺‑吡啶酮衍生物，是在大量筛选的基础上得到的新化合物，具有抑制EZH2活性，为抗肿瘤和自身免疫性疾病的药物开发和应用提供了新的选择。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
现今肿瘤已成为一类严重威胁人类健康和生命的多发病和致死病，其致死率已经超过心脑血管类疾病，成为人类健康的第一大杀手。近年来，全世界恶性肿瘤的发病率呈不断上升的趋势。表观遗传修饰(epigenetic modification)在包括细胞增殖、分化和细胞存活的许多细胞过程的调节中发挥重要作用。包括在DNA或组蛋白甲基化中的整体改变、非编码RNA和核小体重塑失调，其导致肿瘤基因、肿瘤抑制基因和信号通路的异常活化或失活。研究表明，很多疾病如肿瘤、神经发育紊乱、神经变性、神经系统疾和自身免疫性疾病等的发生、发展都与表观遗传学修饰标志类型出错或者修饰的时间或地点出错有关。EZH2是蛋白PRC2的核心组成部分，起组蛋白甲基转移酶的作用，能使H3K27侧链上的ε氨基发生三甲基化。H3K27三甲基化被认为是在PcG沉默机制中起作用的主要存在形式。三甲化后的H3K27后能将PRC1复合物招募到特定基因位点，从而沉默与细胞分化、抑制增殖在内的基因，导致肿瘤的发生。目前，已经发现在弥漫性大B细胞淋巴瘤、乳腺癌，结直肠癌，横纹肌瘤等多种肿瘤中有EZH2的过表达，这使得EZH2成为治愈肿瘤的潜在靶点。
越来越多的证据表明，对于抗癌治疗的长期有效需要两个或更多的癌基因途经的共同抑制，而采用特异性抑制剂来对癌症表观基因组进行调解可能会直接改变获得性转录抗性机制的有效组合疗法。因此开发EZH2选择性抑制剂有望与其他药物联合作用，达到彻底治愈肿瘤的效果。
目前认为肿瘤的发生、治疗抵抗和复发转移皆依赖于肿瘤干细胞的自我更新、多向分化及其高致瘤性。尽管肿瘤干细胞在肿瘤体积中所占的比例还不到5％，其不断的自我更新能力及对放化疗抵抗是肿瘤难以根除的根源所在。目前有文献报道EZH2功能与肿瘤干细胞的自我更新，转移等恶性生物学特性相关，因此开发EZH2选择性抑制剂有望能同时彻底杀死肿瘤干细胞，为彻底治愈肿瘤避免复发带来希望。
因此以EZH2为靶点的靶向小分子抑制剂在多种实体瘤与血液瘤中既能抑制分化细胞的增殖又能彻底杀死肿瘤干细胞，同时有望克服肿瘤获得性耐药，因此开发EZH2抑制剂能避免耐药与复发，从而彻底治愈肿瘤。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一类吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，结构如式I所示：
其中，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；
R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基、-CF3、-NO2、C1～C4烷氧基、卤素；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；
R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基；m＝1～6；
R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基；n＝0～4；
R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
作为本发明优选的方案，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
进一步优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基、C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～4；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
进一步优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基、C1～C4烷基或
m＝1～4；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
更进一步优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、
或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
进一步优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为C1～C4烷基或
n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
更进一步优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0～2；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0～2；R7为-H、C1～C4烷基或苄基。
进一步优选的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0～2；R7为-H或C1～C4烷基。
最优的，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0或1；R7为-H或C1～C4烷基。
上述吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的结构式为：
本发明所要解决的第二个技术问题是提供上述吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的制备方法，制备路线如下：
上述吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的制备方法，包括以下步骤：
1)A和液溴反应进行溴化反应得到B；所述反应的溶剂为氯仿、醋酸中的任意一种；所述反应的温度为0～10℃；所述A与液溴的摩尔比为1:1～3；
2)B在酸性条件下与甲醇进行酯化反应得到C；所述的酸为浓硫酸或浓盐酸；所述反应的温度为15～30℃；所述B、甲醇、酸的摩尔比为1:1～5:1～5；
3)C在碱性条件下进行取代反应得到D；所述的碱为碳酸钾或碳酸钠；所述反应的溶剂为DMF(二甲基甲酰胺)或DMSO(二甲基亚砜)；所述反应的温度为60～100℃；所述C与碱的摩尔比为1:1～3；
4)将D在碱的醇水溶液中水解得到E；所述的碱为碳酸钠、氢氧化钠或氢氧化钾中任意一种；所述反应的温度为15～60℃；所述D与碱的摩尔比为1:1～3；所述醇水溶液中醇与水混合的体积比为3～5:1；所述的醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇；
5)利用缩合剂将胺F与酸E酰胺缩合制备得到G；所述的缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑或1-羟基苯并三唑中任意一种；所述反应的溶剂为二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或二氯甲烷中任意一种；所述反应的温度为15～30℃；所述F、E与缩合剂的摩尔比为1:1～2:1～2；
6)在钯介导的硼酸或硼酸酯H与G偶联得到I；所述的钯为([1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、醋酸钯或四(三苯基磷)钯)中任意一种；所述反应的溶剂为二氧六环和水的混合溶液，比例5:1～1:1；所述反应的温度为90～110℃；所述H、G与钯的摩尔比为1～2:1:0.07；
其中，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基、-CF3、-NO2、C1～C4烷氧基、卤素；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
本发明所还提供上述式I所示的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的盐或水合物。
本发明还提供了上述式I所示的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物及其盐或水合物在制备抗肿瘤药物或自身免疫疾病药物中的用途。
上述用途中，所述的肿瘤为脑癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、肾脏癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤或甲状腺癌。
上述用途中，所述的自身免疫性疾病为银屑病或红斑狼疮。
本发明还提供了一种药物组合物，是由上述式I所示的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。该药物组合物可用于制备抗肿瘤药物或自身免疫疾病药物。
本发明的吡啶酮衍生物是在大量筛选的基础上得到的新化合物，具有抑制EZH2活性，为抗肿瘤和自身免疫性疾病的药物开发和应用提供了新的选择。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的阐述。实施例仅用于说明本发明，而不是以任何方式来限制本发明。
实施例1中间体4,6-二甲基-3-胺甲基吡啶酮及1-甲基-4-胺甲基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮的制备1)4,6-二甲基-3-胺甲基吡啶酮的制备：
步骤1：制备4,6-二甲基-3-氰基吡啶酮
将戊二酮(10g，0.1mol)、氰基乙酰胺(8.4g，0.1mol)和氢氧化钠(4g，0.1mol)加入到无水乙醇中，室温搅拌过夜。TLC监测反应完成，停止反应，将析出固体物质抽滤，并用少许水、乙醇、乙醚洗涤，干燥，得白色固体物4,6-二甲基-3-氰基吡啶酮142g，95.8％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.89(t,J＝5.9Hz,1H),5.96(s,1H),2.38(s,3H),2.27(s,3H)。
步骤2：制备4,6-二甲基-3-胺甲基吡啶酮
将1-甲基-4-氰基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮(14.8g，0.1mol)置于甲醇溶液中，加入5g自制雷尼镍和15毫升氨水，氮气置换后再用氢气置换，密闭条件下保持氢气压强为10MPa，缓慢升温至72℃搅拌过夜。停止反应，TLC监测反应完全后，冷却至室温并过滤去催化剂。真空浓缩反应液，得无色油状物，放置后固化。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ12.51(t,J＝5.9Hz,1H),5.91(s,1H),4.53(d,J＝5.9Hz,2H),4.19(Br,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H)。
2)1-甲基-4-胺甲基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮的制备：
步骤1：制备1-甲基-4-氰基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮和4-甲基-3-氰基-5,6,7,8-四氢喹啉酮
在一2L三颈瓶中，依次一次性加入700mL乙醇、140g乙酰环己酮、93g氰基乙酰胺和370g三乙烯二胺六水，加热至40℃，固体完全溶解，大约1小时后有固体出现，并于该温度下保温反应2天。TLC点板监测反应完全后趁热过滤，滤饼用50mL乙醇润洗，得白色固体物。将该固体物与200毫升乙醇混合回流打浆30分钟，冷却，过滤，得1、1’混合物，1H NMR显示混合物中n1:n1’＝89:11。
1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.31(s,1H),2.71(d,J＝5.2Hz,2H),2.36(d,J＝5.5Hz,2H),2.21(s,3H),1.75-1.59(m,4H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ160.37,160.21,150.39,116.61,113.41,98.34,29.42,23.80,22.18,21.46,17.31；m.p.>253℃分解；MS m/z:C11H12N4O：[M+Na]+211.09。
1’：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.06(s,1H),2.53(d,J＝5.2Hz,2H),2.40-2.32(m,2H),2.27(s,3H),1.80-1.54(m,4H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ160.45,160.19,149.07,116.89,113.54,100.71,27.49,23.65,22.11,21.05,18.86；；m.p.>246℃分解；MSm/z:C11H12N4O:[M+Na]+211.09.
步骤2：制备1-甲基-4-胺甲基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮
将1-甲基-4-氰基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮(18.8g，0.1mol)置于甲醇溶液中，加入5g自制雷尼镍和15毫升氨水，氮气置换后再用氢气置换，密闭条件下保持氢气压强为10MPa，缓慢升温至72℃搅拌过夜。停止反应，TLC监测反应完全后，冷却至室温并过滤去催化剂。真空浓缩反应液，得无色油状物，放置后固化。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.31(s,1H),4.53(d,J＝5.9Hz,2H),4.19(Br,2H),2.71(d,J＝5.2Hz,2H),2.36(d,J＝5.5Hz,2H),2.21(s,3H),1.75-1.59(m,4H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ161.32,158.21,150.28,116.16,114.31,96.24,29.40,23.88,22.28,21.56,17.30。
实施例2 1-环己基-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)胺的制备
步骤1：制备5-溴吲唑-3-羧酸
向无水醋酸(4L)中加入苯并吡唑-3-羧酸(81.1g，0.5mol)，加热至90℃，搅拌，直至固体物完全溶解。小心慢慢滴加液溴(160g，1mol)与无水醋酸(300mL)的混合溶液。控制滴加速度，使液溴尽可能不挥发出冷凝管。体系保温于90℃，搅拌过夜。次日，体系中有大量固体物析出。HPLC监测反应完成后，将反应体系冷至室温并放置3h以上，抽滤。固体物经少许乙酸乙酯、乙醚洗涤，干燥。将所得固体与乙醇(500mL)回流1h后，冷却，抽滤出白色固体，干燥。得5-溴苯并吡唑-3-羧酸102.2g，收率84.8％。
1H NMR(400MHz，CDCl3-d)δ:13.95(s,1H)；13.18(br，s,1H)；8.21(d,J＝1.2Hz，1H)；7.65(d，J＝7.0Hz,1H)；7.56(dd，J＝7.0,1.2Hz,1H)。
步骤2：制备5-溴吲唑-3-羧酸甲酯
将5-溴苯并吡唑-3-羧酸(120.52g,0.5mol)置于甲醇(600mL)中，冰浴冷却后小心加入浓硫酸(50mL)。撤去冰浴，升温回流过夜，TLC检测反应完成。减压下旋去溶剂后，将剩余物小心加入2升碎冰中，待冰融化完全后，抽滤，得大量白色片状固体。用乙酸乙酯萃取(500mL×2)滤液。合并有机相，再分别用水(1L)、饱和碳酸氢钠水溶液、水(1L)、饱和食盐水(1L)洗涤，有机相再用无水硫酸钠干燥后，真空浓缩，得到5-溴苯并吡唑-3-羧酸甲酯113g，产率89.0％。
1H NMR(400MHz，CDCl3-d)δ:14.13(s,1H)；8.21(d,J＝1.6Hz，1H)；7.67(d，J＝7.2Hz,1H)；7.59(dd，J＝7.2,1.6Hz,1H)；3.92(s，3H)。
步骤3：制备1-环己基-5-溴吲唑-3-羧酸甲酯
溶解5-溴苯并吡唑-3-羧酸甲酯(102.03g，0.4mol)于干N,N-二甲基甲酰胺(600mL)中，一次性加入无水碳酸钾(110.4g，0.8mol)，搅拌10分钟，滴加溶有溴代环己烷(71.75g，0.44mol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液。反应体系于80℃反应过夜。TLC监测反应完成，将体系倒入1kg碎冰中，并用水稀释，并用乙酸乙酯萃取(1.5L×3)水相。合并有机相，分别用水(2L×3)、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。在减压条件下除去乙酸乙酯后，将残余混合物用硅胶拌干后，在200-300硅胶柱上采用流动相为石油醚︰乙酸乙酯＝40︰1的柱层析条件提纯得到白色产物1-环己基-5-溴吲唑-3-羧酸甲酯48.2g，收率35.7％和2-环己基-5-溴吲唑-3-羧酸甲酯32.1g，收率23.8％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(d,J＝1.8Hz,1H),7.77(d,J＝9.0Hz,1H),7.45(dd,J＝9.1,1.9Hz,1H),6.20–5.94(m,1H),3.39(s,3H),1.89(d,J＝12.2Hz,2H),1.64(dd,J＝38.0,12.4Hz,2H),1.48–0.99(m,6H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ161.04,145.27,129.54,124.84,124.66,123.82,120.73,117.93,62.72,60.02,32.57,25.84,25.00。
步骤4：制备5-溴-1-环己基吲唑-3-羧酸
溶解5-溴-1-环己基吲唑-3-羧酸甲酯(33.72g，0.1mol)于甲醇(250mL)中，慢慢滴加含氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)的饱和水溶液，室温搅拌过夜，TLC检测酯未水解完全。升温至40℃并搅拌过夜后TLC检测酯水解完全。冷至室温并慢慢滴加2M稀盐酸调pH＝3-4，并用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，合并有机相并经水、饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥。有机溶液经减压浓缩得油状物，放置，油状物固化为白色固体5-溴-1-环己基吲唑-3-羧酸30.7g，收率95％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.86(s,1H),8.18(d,J＝1.8Hz,1H),7.77(d,J＝9.0Hz,1H),7.45(dd,J＝9.1,1.9Hz,1H),6.20–5.94(m,1H),1.89(d,J＝12.2Hz,2H),1.64(dd,J＝38.0,12.4Hz,2H),1.48–0.99(m,6H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ161.04,145.27,129.54,124.84,124.66,123.82,120.73,117.93,62.72,32.57,25.84,25.00。
步骤5：制备5-溴-1-环己基-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)胺
溶解5-溴-1-环己基吲唑-3-羧酸(32.32g，0.1mol)和4,6-二甲基-3-氨甲基吡啶酮(30.44g，0.2mol)于干二甲亚砜(250mL)中，随后加入HOAT(27.2g，0.2mol)和EDCI(38.2g，0.2mol)，室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，将体系混合物倒入碎冰中，有大量固体物析出，搅拌，待冰完全融化后，抽滤得滤饼。将固体混合物用硅胶拌干后，在200-300硅胶柱上采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝50︰1的柱层析条件提纯得到白色产物5-溴-1-环己基-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)胺27.8g，收率60.8％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ12.35(s,1H),7.88(t,J＝6.2Hz,1H),7.65(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.51(d,J＝1.7Hz,1H),6.80(d,J＝8.8Hz,1H),5.96(s,1H),4.76(d,J＝6.1Hz,2H),4.62–4.40(m,1H),2.47(s,3H),2.39(s,3H),2.10–1.76(m,6H),1.46(m,2H),1.38–1.24(m,2H)；13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.64,157.38,142.74,136.72,132.48,127.00,125.66,123.32,122.85,119.80,109.87,109.73,106.28,65.79,34.80,32.04,25.69,25.34,19.57,18.64。
步骤6：制备1-环己基-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)胺
将5-溴-1-环己基-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)胺(457.4mg，1.0mmol)，6-(4-甲基哌嗪)吡啶-3-硼酸频哪酯(334mg，1.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(40mg，0.05mmol)加入到圆底烧瓶中，随后加入二氧六环(5mL)和3.6N的碳酸钠水溶液(1mL)，氮气置换三次并在氮气氛围中，100℃加热4小时。TLC监测反应完成，减压下旋去有机溶剂后加水稀释并用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相分别用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。将有机溶剂在减压下除去，固体混合物用硅胶拌干后，在200-300硅胶柱上采用流动相为二氯甲烷︰甲醇＝40︰1的柱层析条件提纯得到白色产物1-环己基-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)胺425.9mg，收率76.9％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.86(s,1H),8.50(dd,J＝8.8,2.1Hz,2H),7.93(t,J＝6.2Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),5.94(s,1H),4.63(d,J＝6.2Hz,2H),4.40(dq,J＝10.8,5.0Hz,1H),3.64(t,J＝5.0Hz,4H),2.59(t,J＝5.0Hz,4H),2.44(s,3H),2.39(s,3H),2.33(s,3H),2.12–1.87(m,7H),1.47(q,J＝12.7Hz,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.16,162.52,158.43,150.58,146.33,142.33,139.19,137.11,136.61,132.94,126.51,125.47,123.75,122.76,119.78,109.80,109.60,106.92,58.76,54.82,46.12,45.18,34.83,32.44,29.71,25.67,19.75,18.95。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C31H37N6O3{[M+H]+}541.292 7,found 541.2934。
实施例3 2-环己基-5-[(6-吗啡啉-4-基)吡啶-3-基]-2H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶酮-3-基)甲胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在第四步反应时以2-环己基-5-溴吲唑-3-羧酸甲酯为原料，得到目的化合物，产率82％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ12.88(s,1H),8.61(d,J＝1.6Hz,1H),7.95(t,J＝6.2Hz,1H),7.66–7.60(m,3H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.38(d,J＝7.9Hz,2H),5.96(s,1H),4.64(d,J＝6.1Hz,2H),4.49–4.31(m,1H),3.73(t,J＝4.6Hz,4H),2.48(t,J＝4.6Hz,4H),2.44(s,3H),2.36(s,3H),2.03(td,J＝11.7,10.6,4.2Hz,3H),1.98–1.88(m,3H),1.78(dt,J＝13.2,3.3Hz,1H),1.46(dddd,J＝17.0,13.3,8.0,3.7Hz,2H),1.37–1.19(m,3H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.59,162.49,150.71,142.85,140.10,139.41,137.33,136.35,135.54,129.60,127.34,126.18,123.63,122.51,120.76,109.78,109.58,67.02,58.73,53.64,34.84,32.45,25.67,25.33,19.76,18.84。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C31H37N6O3{[M+H]+}541.292 7,found 541.2931。
实施例4 1-(4-甲氧基-1-丁基)-5-[(4--吗啡啉-4-基)甲基吡啶基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在步骤3中使用1-溴-4-甲氧基丁烷为原料，得到目的化合物，产率64％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.42(s,1H),8.53(d,J＝1.6Hz,1H),8.00(t,J＝6.0Hz,1H),7.61–7.51(m,3H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(d,J＝7.9Hz,2H),4.60(d,J＝6.0Hz,2H),4.29(t,J＝7.1Hz,2H),3.65(t,J＝4.6Hz,4H),3.45(s,2H),3.26(t,J＝6.2Hz,2H),3.18(s,3H),2.91(t,J＝6.0Hz,2H),2.38(dt,J＝11.2,5.1Hz,6H),2.26(s,3H),1.91(p,J＝7.2Hz,2H),1.73–1.57(m,4H),1.47(dq,J＝12.6,6.4Hz,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.97,162.24,150.95,140.89,140.20,140.00,137.83,136.44,135.53,129.59,127.31,126.53,123.57,121.61,120.77,114.59,109.46,72.03,67.02,63.14,58.59,53.65,49.28,34.48,26.92,26.78,25.04,22.41,22.34,16.69。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C35H44N5O4{[M+H]+}598.339 3,found 598.3364。
实施例5 1-环己基-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在最后一步中使用1-甲基-4-胺甲基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮为原料，得到目的化合物，产率75％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.61(s,1H),8.58(t,J＝5.8Hz,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.10(s,1H),7.83(d,J＝8.9Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,1.4Hz,1H),6.39(d,J＝8.8Hz,1H),5.67–5.37(m,1H),4.68(d,J＝5.7Hz,2H),3.31(t,J＝5.0Hz,4H),2.94(t,J＝6.3Hz,2H),2.62(s,2H),2.27(t,J＝5.3Hz,6H),2.22(s,3H),2.16(dd,J＝11.2,3.4Hz,2H),1.99–1.92(m,2H),1.90(s,3H),1.82–1.66(m,5H),1.64–1.50(m,2H),1.36(dtd,J＝13.1,9.7,3.7Hz,1H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.92,159.54,158.20,150.38,146.43,145.96,141.34,135.72,133.70,127.37,125.81,125.08,120.90,120.35,119.09,114.99,114.82,106.51,60.90,54.54,46.05,45.05,35.99,33.68,29.70,27.52,25.71,25.41,24.85,22.25,16.50。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C35H44N7O2{[M+H]+}594.355 6,found 594.3526。
实施例6 1-(4-甲氧基-1-丁基)-5-[(6-吗啡啉-4-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶酮-3-基)甲胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在最后一步中使用4-(5-甲基吡啶-2-基)吗啉-3-硼酸频哪酯为原料，得到目的化合物，产率68％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.07(s,1H),8.51(dd,J＝4.7,2.0Hz,2H),8.05(t,J＝6.1Hz,1H),7.85(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.57(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.44(d,J＝8.7Hz,1H),6.71(d,J＝8.8Hz,1H),5.97(s,1H),4.64(d,J＝6.0Hz,2H),4.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.91–3.75(m,4H),3.60–3.49(m,4H),3.35(t,J＝6.2Hz,2H),3.28(s,3H),2.44(s,3H),2.38(s,3H),2.06–1.91(m,2H),1.62–1.47(m,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.63,162.29,158.61,150.50,146.32,143.00,140.01,137.57,136.61,132.89,126.87,125.89,123.63,122.34,119.83,109.78,109.70,106.75,72.02,66.77,58.60,49.30,45.73,34.95,26.90,26.77,19.71,18.81。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C30H37N6O4{[M+H]+}545.287 6,found 545.2886。
实施例7 2-环己基-5-[4-(吗啡啉-4-基)甲基]苯基-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶酮-3-基)甲胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在步骤4反应时以2-环己基-5-溴吲唑-3-羧酸甲酯为原料，同时在步骤5中1-甲基-4-氰基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮使用得到目的化合物，产率72％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ12.88(s,1H),8.61(d,J＝1.6Hz,1H),7.95(t,J＝6.2Hz,1H),7.66–7.60(m,3H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.38(d,J＝7.9Hz,2H),5.96(s,1H),4.64(d,J＝6.1Hz,2H),4.49–4.31(m,1H),3.73(t,J＝4.6Hz,4H),3.54(s,2H),2.48(t,J＝4.6Hz,4H),2.44(s,3H),2.36(s,3H),2.03(td,J＝11.7,10.6,4.2Hz,3H),1.98–1.88(m,3H),1.78(dt,J＝13.2,3.3Hz,1H),1.46(dddd,J＝17.0,13.3,8.0,3.7Hz,2H),1.37–1.19(m,3H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.59,162.49,150.71,142.85,140.10,139.41,137.33,136.35,135.54,129.60,127.34,126.18,123.63,122.51,120.76,109.78,109.58,67.02,63.15,58.73,53.64,34.84,32.45,25.67,25.33,19.76,18.84。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C33H40N5O3{[M+H]+}554.313 1,found 554.3132。
实施例8 1-环己基-5-[4-(吗啡啉-4-基)甲基]苯基-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
以1-甲基-4-氰基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮为原料，经过与合成实例3类似的反应，得到目的化合物，产率81％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.76(s,1H),8.42(t,J＝5.8Hz,1H),8.07(s,1H),7.77(d,J＝9.0Hz,1H),7.45(d,J＝9.0Hz,1H),7.37(d,J＝7.7Hz,2H),6.98(d,J＝7.7Hz,2H),5.48(tt,J＝10.1,5.0Hz,1H),4.65(d,J＝5.7Hz,2H),3.39(t,J＝4.5Hz,4H),3.04(s,2H),2.88(t,J＝6.3Hz,2H),2.18(t,J＝6.3Hz,2H),2.10(q,J＝5.2,4.8Hz,8H),1.88(d,J＝13.4Hz,2H),1.78(s,3H),1.74–1.58(m,4H),1.49(qd,J＝12.5,9.1,3.9Hz,2H),1.29(dtd,J＝19.4,16.1,14.8,5.0Hz,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ164.07,159.63,150.20,146.64,141.57,140.02,136.48,129.44,127.66,126.79,126.08,120.80,120.44,118.86,116.46,114.88,66.73,62.96,60.96,53.34,35.89,33.68,27.55,25.73,25.41,24.83,22.29,16.35。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C36H44N5O3{[M+H]+}594.344 4,found 594.3428。
实施例9 1-(4-甲氧基-1-丁基)-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
以1-甲基-4-氰基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮为原料，经过与合成实例3类似的反应，同时在步骤3中使用1-溴-4-甲氧基丁烷为原料，得到目的化合物，产率81％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.32(s,1H),8.43(d,J＝1.6Hz,1H),8.41(d,J＝2.6Hz,1H),7.99(t,J＝6.0Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.49(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),6.64(d,J＝8.8Hz,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),4.29(t,J＝7.1Hz,2H),3.55(t,J＝4.9Hz,4H),3.25(t,J＝6.2Hz,2H),3.18(s,3H),2.91(t,J＝6.0Hz,2H),2.50(t,J＝5.0Hz,4H),2.37(t,J＝6.0Hz,2H),2.29(s,3H),2.25(s,3H),1.90(p,J＝7.3Hz,2H),1.78–1.56(m,4H),1.47(dq,J＝12.6,6.4Hz,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.88,162.26,158.44,151.00,146.27,140.88,139.97,137.60,136.54,132.94,126.38,125.84,123.62,121.56,119.70,114.61,109.68,106.92,72.01,58.58,54.80,49.27,46.10,45.16,34.49,27.35,26.88,26.76,25.02,22.38,22.32,16.68。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C34H44N7O3{[M+H]+}598.350 6,found 598.3541。
实施例10 1-(4-甲氧基-1-丁基)-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶酮-3-基)甲胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在步骤3中使用1-溴-4-甲氧基丁烷为原料，得到目的化合物，产率76％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ12.98(s,1H),8.51–8.50(m,1H),8.49(d,J＝2.6Hz,1H),8.04(t,J＝6.1Hz,1H),7.83(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.57(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),6.72(d,J＝8.8Hz,1H),5.96(s,1H),4.63(d,J＝6.1Hz,2H),4.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.63(t,J＝5.1Hz,4H),3.35(t,J＝6.2Hz,2H),3.28(s,3H),2.58(t,J＝5.0Hz,4H),2.43(s,3H),2.37(s,6H),2.05–1.92(m,2H),1.64–1.46(m,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.57,162.30,158.45,150.53,146.28,142.97,139.97,137.54,136.56,132.99,126.38,125.88,123.62,122.34,119.70,109.79,109.68,106.93,72.02,58.59,54.81,49.29,46.12,45.17,34.94,26.89,26.76,19.71,18.81。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C31H40N7O3{[M+H]+}558.319 3,found 558.3173。
实施例11 1-环己基-5-[6-(吗啡啉-4-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在最后一步中使用4-(5-甲基吡啶-2-基)吗啉-3-硼酸频哪酯为原料，得到目的化合物，产率76％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.63(s,1H),8.43(d,J＝5.9Hz,1H),8.41(d,J＝2.5Hz,1H),8.05(s,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,1H),7.67–7.56(m,1H),7.41(dd,J＝9.0,1.5Hz,1H),6.22(d,J＝8.7Hz,1H),5.50(tt,J＝9.9,4.6Hz,1H),4.61(d,J＝5.8Hz,2H),3.46(t,J＝4.7Hz,4H),3.04(t,J＝4.8Hz,4H),2.89(t,J＝6.4Hz,2H),2.23(t,J＝6.3Hz,2H),2.15–1.98(m,4H),1.86(s,4H),1.74–1.60(m,6H),1.49(qt,J＝12.8,4.0Hz,2H),1.37–1.20(m,1H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ162.95,158.49,157.35,149.35,145.39,145.01,140.39,134.78,132.75,130.46,126.25,125.42,124.16,119.81,119.55,118.14,113.93(d,J＝2.6Hz),105.30,68.65,65.35,59.92,44.41,34.89,32.63,26.50,24.70,24.39,23.85,21.26,15.48。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C34H41N6O3{[M+H]+}581.324 0,found 581.3229。
实施例12 1-环戊基-5-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是在步骤3中使用溴代环戊烷为原料，同时在步骤5中使用1-甲基-4-胺甲基-5,6,7,8-四氢异喹啉酮为原料，得到目的化合物，产率76％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.72(s,1H),8.42(d,J＝6.0Hz,1H),8.40(d,J＝2.3Hz,1H),8.01(s,1H),7.73(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.41(d,J＝9.0Hz,1H),6.25(d,J＝8.7Hz,1H),5.96(p,J＝7.6Hz,1H),4.59(d,J＝5.7Hz,2H),3.18(t,J＝4.9Hz,4H),2.88(t,J＝6.3Hz,2H),2.17(dt,J＝9.8,6.1Hz,10H),2.13(s,3H),1.95(dq,J＝13.4,7.4Hz,2H),1.80(s,3H),1.75–1.53(m,6H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.99,159.62,158.23,150.35,146.44,145.95,141.43,135.66,133.76,128.04,125.76,125.10,121.11,120.41,119.10,114.98,114.65,106.42,62.42,54.53,46.08,45.01,35.91,33.77,27.46,24.93,24.83,22.27,16.43。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C34H42N7O2{[M+H]+}580.340 0,found 580.3393。
实施例13 1-环戊基-5-[4-(吗啡啉-4-基)甲基]苯基-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是步骤3中使用溴代环戊烷为原料，同时在最后一步中使用6-吗啉-苯基-3-硼酸频哪酯酯为原料，得到目的化合物，产率79％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.88(s,1H),8.34(t,J＝5.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.74(d,J＝8.9Hz,1H),7.44(d,J＝9.0Hz,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,2H),6.95(d,J＝7.7Hz,2H),5.97(p,J＝7.7Hz,1H),4.64(d,J＝5.8Hz,2H),3.37(t,J＝4.5Hz,4H),3.00(s,2H),2.90(d,J＝6.6Hz,2H),2.28–2.13(m,6H),2.08(t,J＝4.4Hz,4H),2.00–1.89(m,2H),1.77(s,3H),1.73–1.56(m,6H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.08,158.68,149.17,145.62,140.58,138.99,135.43,135.15,128.41,127.35,125.74,125.06,119.97,119.54,117.82,115.29,113.82,65.68,61.92,61.41,52.28,34.79,32.77,28.66,26.44,23.93,23.79,21.27,15.25。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C35H42N5O3{[M+H]+}580.328 8,found 580.3262。
实施例14 1-(4-甲氧基-1-丁基)-5-[6-(吗啡啉-4-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是步骤3中使用1-溴-4-甲氧基丁烷为原料，同时在最后一步中使用6-吗啉-苯基-3-硼酸频哪酯酯为原料，得到目的化合物，产率68％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.18(s,1H),8.53(d,J＝1.6Hz,1H),8.51(d,J＝2.5Hz,1H),8.06(t,J＝6.1Hz,1H),7.85(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.58(dd,J＝8.7,1.7Hz,1H),7.44(d,J＝8.7Hz,1H),6.71(d,J＝8.8Hz,1H),4.67(d,J＝6.0Hz,2H),4.38(t,J＝7.1Hz,2H),3.86(t,J＝4.8Hz,4H),3.56(t,J＝4.8Hz,4H),3.35(t,J＝6.2Hz,2H),3.27(s,3H),3.00(t,J＝6.0Hz,2H),2.46(t,J＝5.9Hz,2H),2.34(s,3H),1.99(p,J＝7.3Hz,2H),1.75(tt,J＝11.8,6.5Hz,4H),1.56(dq,J＝12.7,6.4Hz,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.86,162.27,158.62,150.99,146.34,140.71,140.02,137.65,136.62,132.87,126.91,125.86,123.66,121.68,119.88,114.57,109.69,106.75,72.04,66.79,58.61,49.30,45.74,34.49,27.36,26.91,26.78,25.05,22.41,22.33,16.76。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C33H41N6O4{[M+H]+}585.318 9,found 585.3201。
实施例15 1-环己基-5-[6-(吗啡啉-4-基)吡啶-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰[(1-甲基-3-氧-2,3,5,6,7,8-六氢喹啉-4-基)甲基]胺
经过与合成实例3类似的反应，只是步骤3中使用溴代环戊烷为原料，同时在最后一步中使用6-吗啉-吡啶-3-硼酸频哪酯酯为原料，得到目的化合物，产率80％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.55(s,1H),8.48(d,J＝2.5Hz,1H),8.40(t,J＝5.9Hz,1H),8.11(s,1H),7.82(d,J＝8.9Hz,1H),7.69(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.47(dd,J＝9.0,1.6Hz,1H),6.29(d,J＝8.8Hz,1H),6.05(p,J＝7.6Hz,1H),4.67(d,J＝5.9Hz,2H),3.55(t,J＝4.8Hz,4H),3.11(t,J＝4.8Hz,4H),2.99(t,J＝6.4Hz,2H),2.38–2.19(m,4H),2.03(dt,J＝10.6,4.4Hz,2H),1.95(s,3H),1.85–1.66(m,4H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.92,159.63,158.39,150.36,146.45,146.05,141.32,135.84,133.76,128.00,126.51,125.20,121.09,120.84,119.15,114.89,106.33,66.39,62.48,45.43,35.85,33.76,27.45,24.92,24.90,22.31,16.52。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C33H39N6O3{[M+H]+}567.308 4,found 567.3106。
实施例16 2-环己基-5-[(6-吗啡啉-4-基)吡啶-3-基]-2H-吲唑-3-甲酰(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶酮-3-基)甲胺
经过与合成实例6类似的反应，只是在最后一步反应时以2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-5-硼酸频那醇酯为原料，得到目的化合物，产率85％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.86(s,1H),8.50(dd,J＝8.8,2.1Hz,2H),7.93(t,J＝6.2Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),5.94(s,1H),4.63(d,J＝6.2Hz,2H),4.40(dq,J＝10.8,5.0Hz,1H),3.64(t,J＝5.0Hz,4H),2.59(t,J＝5.0Hz,4H),2.44(s,3H),2.39(s,3H),2.33(s,3H),2.12–1.87(m,7H),1.47(q,J＝12.7Hz,2H)。
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ165.16,162.52,158.43,150.58,146.33,142.33,139.19,137.11,136.61,132.94,126.51,125.47,123.75,122.76,119.78,109.80,109.60,106.92,58.76,54.82,46.12,45.18,34.83,32.44,29.71,25.67,19.75,18.95。
HR-MS(ESI-TOF)m/z:Calcd for C32H40N7O2{[M+H]+}554.324 3,found 554.3215。
实施例17本发明化合物抑制肿瘤细胞株增殖的实验
乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-453和BT-474，黑色素瘤细胞株WM-266-4、CHL-1和A875，弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-6、Pfeiffer均购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，DMEM、RPMI 1640培养基、胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自Biosharp公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；MTT试剂购自Sigma公司。
乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-453和BT-474，黑色素瘤细胞株WM-266-4、CHL-1和A875,弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(SU-DHL-6)和弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株(Pfeiffer)均用含10％胎牛血清(FBS)、100IU/mL青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基培养于37℃、5％CO2的培养箱中培养。
为了检测新化合物对细胞的增殖影响。收集处于对数生长期的细胞，调整细胞浓度为1000～5000个/mL的单细胞悬液，按照每孔100μL接种于96孔板中。将化合物储备液(10mM/L溶于DMSO)用培养基稀释成不同浓度，采用三倍稀释法。按每孔100μL的体积加入96孔板中，最高浓度为30μM,最低浓度为0.1μM，每个药物浓度设置3个复孔，并用含0.1％DMSO培养基和纯培养基处理细胞作为阴性对照，置细胞培养箱中继续培养4天或6天，采用MTT检测细胞线粒体脱氢酶活性，并计算新化合物对肿瘤细胞的半数有效抑制浓度(IC50，μM)值(表1)。
表1化合物对三种淋巴瘤细胞株的增殖作用(MTT法)
Claims (19)
1.吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，结构如式I所示：
其中，W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；
R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基、-CF3、-NO2、C1～C4烷氧基、卤素；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；
R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基；m＝1～6；
R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基；n＝0～4；
R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
2.根据权利要求1所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
3.根据权利要求2所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C8环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
4.根据权利要求3所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、-CF3、C5～C8环烷基、
C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～6；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
5.根据权利要求4所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基、C1～C4烷基、
C1～C4烷氧基或苄基，m＝1～4；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
6.根据权利要求5所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基、C1～C4烷基或
m＝1～4；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
7.根据权利要求6所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为-CF3、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、-NO2、-NH2、卤素、
苄基或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
8.根据权利要求7所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、
或C5～C8环烷基，n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
9.根据权利要求8所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为C1～C4烷基或
n＝0～4；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
10.根据权利要求9所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0～2；R7为-H、C1～C4烷基、C5～C8环烷基或苄基。
11.根据权利要求10所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0～2；R7为-H、C1～C4烷基或苄基。
12.根据权利要求11所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0～2；R7为-H或C1～C4烷基。
13.根据权利要求12所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：W、X、Y、Z独立地为N或C；V为O或N；R1～R3独立地为-H、C1～C4烷基；或，R2和R3组合形成环，所述环为C5～C6环烷基；R4、R5独立地为-H、C5～C8环烷基或
m＝1～4；R6独立地为
n＝0或1；R7为-H或C1～C4烷基。
14.根据权利要求1所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物，其特征在于：所述吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的结构式为：
15.权利要求1～14任一项所述吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的盐。
16.药物组合物，是由权利要求1～14任一项所述的吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。
17.权利要求15所述吲唑-甲酰胺-吡啶酮衍生物的盐、权利要求16所述药物组合物在制备抗肿瘤药物或自身免疫疾病药物中的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于：所述的肿瘤为脑癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、肾脏癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤或甲状腺癌。
19.根据权利要求17所述的用途，其特征在于：所述的自身免疫性疾病为银屑病或红斑狼疮。
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