CN107549585A - 一种抗菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
植物源抗菌肽抗菌机制独特，不易使微生物产生耐药性，能直接杀灭多种微生物，是一类大有开发前景的抗菌剂。本发明提供一种具有高效抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌生长的核桃多肽提取物。以脱脂核桃粉为原料，先经过粉碎，采用中性酶酶解技术提取制备核桃多肽提取物，核桃多肽提取物具有抑菌广谱性。本发明的核桃多肽提取物，制备方法简便，所得提取物抑菌效果显著，可用于食品保鲜贮藏中，为植物源抗菌肽在食品工业中的应用提供更好的发展。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物源抗菌肽的制备及应用。核桃抗菌性多肽是从胡桃科胡桃属的核桃果肉中提取分离得到的抗菌性物质，对特定菌株具有显著的抗菌功效，可用于食品保鲜贮藏中。
背景技术
食品腐败问题一直存在于食品工业中，其中由于微生物引起的影响最为明显。化学防治方法是目前使用的主导方法，但因其对环境和人畜的危害而遭到质疑。本世纪20年代以来发现的抗生素，对人类的健康做出巨大的贡献，但随着抗生素的大量使用，微生物耐药性增强的问题日渐突出。天然绿色、回归自然是现代人生活的追求，随着人们对自身健康问题的愈发重视，寻求安全、高效、环保的天然防腐剂已成为必然趋势。从植物资源中寻找抗菌效能高的抗菌肽已成为研究焦点。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种具有高效抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌生长的广谱性抑菌效果的核桃多肽抗菌剂，并应用于食品贮藏保鲜中。
本发明的目的之二在于提供一种具有高效抗菌效果的核桃多肽抗菌剂的制备方法。
1、本发明提供一种抗菌剂，此抗菌剂由核桃多肽提取物和水混合而成，可用于果蔬保鲜。
2、本发明还提供了一种抗菌剂的制备方法。
3、本发明提供的抗菌剂可抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌。
本发明中核桃多肽提取物可抑制真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，对酿酒酵母、毕赤酵母、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为10.56mg/mL、10.86mg/mL、15.58mg/mL、20.92mg/mL和10.89mg/mL。
具体实施方式
本发明提供了一种核桃多肽提取物抗菌剂的制备方法及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
本发明提供一种抗菌剂，抗菌剂由核桃多肽提取物和水构成。
本发明提供的抗菌剂，其中核桃多肽提取物的制备方法，具体操作方法如下：
1.将脱脂后的核桃果肉粉碎至一定目数，得脱脂核桃粉，脱脂核桃粉粒径范围在10目～100目。
2.作为优选，粉碎的粒度为10目～20目。
3.在圆底烧瓶中，称取一定质量所述的脱脂核桃粉，先加入蒸馏水，使水的体积与脱脂核桃粉的比值在50：1至30：1之间，其中，体积单位为毫升，质量单位为克；加入中性蛋白酶，加酶量控制在5000-8000U/g脱脂核桃粉；调节pH值在5-8之间；酶解温度控制在35-60℃，酶解时间2-8h，得酶解液。
4.作为优选，水的体积与脱脂核桃粉质量的比值为35～40：1；加酶量控制在6000-7000U/g脱脂核桃粉；pH值在6-8之间；酶解温度控制在40-50℃，酶解时间3-5h。
5.酶解液85℃灭酶10min，8000r/min离心20min，制得上清液。
6.将上清液用旋转蒸发仪脱除大部分的水(水浴温度控制在40-60℃)，将上述浓缩液移到培养皿，置于冷冻干燥机中进行干燥，得核桃多肽提取物。
7.作为优选，旋转蒸发仪水浴温度控制在45-55℃。
本发明还提供了一种上述抗菌剂的制备方法，具体操作方法如下：
1.将核桃多肽提取物用水稀释至30-70mg/mL，8000r/min离心10min，取上清液，制得抗菌剂，可喷洒于蔬菜水果表面，用于蔬菜水果的保鲜。
2.作为优选，核桃多肽提取物用水稀释至40-60mg/mL。
优选的，所述抗菌剂可抑制真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，优选用于抑制真菌，其中，所述真
菌优选为酿酒酵母和/或毕赤酵母。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：核桃多肽提取物的制备
将脱脂后的核桃果肉粉碎至20目，在圆底烧瓶中，称取一定质量的脱脂核桃粉，先加入蒸馏水，使水的体积与脱脂核桃粉质量的比值为35：1，加入中性蛋白酶，加酶量控制在6000U/g，调节pH值为7，酶解温度控制在45℃，酶解时间4h；之后85℃灭酶10min，8000r/min离心20min，制得上清液；将上清液用旋转蒸发仪脱除大部分的水(水浴温度控制在45℃)，将上述浓缩液移到培养皿，置于冷冻干燥机中进行干燥，得核桃多肽提取物。
实施例2：核桃多肽抗菌剂的配制
将核桃多肽提取物用无菌水稀释至40mg/mL，8000r/min离心10min，上清液为核桃多肽抗菌剂。
实施例3：核桃多肽抗菌剂的配制
将核桃多肽提取物用无菌水稀释至60mg/mL，8000r/min离心10min，上清液为核桃多肽抗菌剂。
实施例4：核桃多肽提取物的抗菌作用
采用双层平板打孔法，考察了实施例1得到的核桃多肽提取物的抑菌作用，发现核桃多肽提取物可抑制真菌的生长，对酿酒酵母和毕赤酵母的最低抑菌浓度分别为10.56mg/mL和10.86mg/m。
实施例5：核桃多肽提取物的抗菌作用
采用双层平板打孔法，考察了实施例1得到的核桃多肽提取物的抑菌作用，发现核桃多肽提取物可抑制革兰氏阳性菌的生长，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别15.58mg/mL和20.92mg/mL。
实施例6：核桃多肽提取物的抗菌作用
采用双层平板打孔法，考察了实施例1得到的核桃多肽提取物的抑菌作用，发现核桃多肽提取物可抑 制革兰氏阴性菌的生长，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为10.89mg/mL。
实施例7：核桃多肽抗菌剂的应用
选取新鲜、无破伤等明显缺陷的圣女果，将实施例2得到的核桃多肽抗菌剂，每天定点向其表面喷洒适量抗菌剂(以果蔬表面湿润且无大水珠附着为准)，同时以日常喷洒蒸馏水为对照组，置于室温下(25℃)下贮存观察。贮存5天时对照组圣女果基本全部腐坏，而此时处理组还完好无损，直至15天才全部腐坏，由此得出本发明得到的核桃多肽抑菌剂对圣女果的防腐保鲜效果将近为市场销售员平日对圣女果保鲜效果的3倍。
实施例8：核桃多肽抗菌剂的应用
选取新鲜、无破伤等明显缺陷的黄瓜，将实施例3得到的核桃多肽抗菌剂，每天定点向其表面喷洒适量抗菌剂(以果蔬表面湿润且无大水珠附着为准)，同时以日常喷洒蒸馏水为对照组，置于室温下(25℃)下贮存观察。贮存8天时对照组圣女果基本全部腐坏，而此时处理组还完好无损，直至18天才全部腐坏，由此得出本发明得到的核桃多肽抑菌剂对圣女果的防腐保鲜效果将近为市场销售员平日对圣女果保鲜效果的2-3倍。
本发明设计的核桃多肽抗菌剂可有效抑制真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长繁殖，可以广泛应用于食品保鲜贮藏中，具有广泛的实用性。
本发明得到的核桃多肽抗菌剂可用于更多果蔬，如葡萄、柑橘、苹果、梨、猕猴桃、黄瓜、冬瓜、丝瓜、南瓜等果蔬的防腐保鲜，具有广泛的实用性。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上的实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种抗菌剂，其特征在于，包括核桃多肽提取物。
2.根据权利要求1所述的抗菌剂，其特征在于，还包括水。
3.根据权利要求1所述的抗菌剂，其特征在于，所述核桃多肽提取物按照如下方法进行制备：
将脱脂后的核桃果肉粉碎后，得脱脂核桃粉，将脱脂核桃粉与水混合，再加入中性蛋白酶，进行酶解反应，得到酶解液；
将所述酶解液灭酶后离心，得到上清液；
将上述上清液浓缩后冷冻干燥，得到核桃多肽提取物。
4.根据权利要求3所述的抗菌剂，其特征在于，所述脱脂核桃粉粒径范围在10目～100目，所述水的体积与脱脂核桃粉的质量比值为(30～50)：1。
5.根据权利要求3所述的抗菌剂，其特征在于，所述中性蛋白酶的加入量为5000-8000U/g脱脂核桃粉，所述酶解的pH为5-8，酶解温度为35-60℃，酶解时间为2-8小时。
6.根据权利要求2所述的抗菌剂，其特征在于，所述核桃多肽提取物与水的质量体积比为30-70mg/mL。
7.根据权利要求1所述的抗菌剂，其特征在于，所述抗菌剂用于抑制真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
8.根据权利要求7所述的抗菌剂，其特征在于，所述抗菌剂用于抑制真菌。
9.根据权利要求8所述的抗菌剂，其特征在于，所述抗菌剂用于抑制酿酒酵母和/或毕赤酵母。
10.一种抗菌剂的制备方法，其特征在于，将核桃多肽提取物以及水混合后离心，取上清液，得到抗菌剂。
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| CN107549585B (zh) | 2020-12-01 |
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