CN107531638B - 拆分外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的方法 - Google Patents

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Abstract

一种从含(±)‑石杉碱甲的外消旋混合物拆分出(‑)‑石杉碱甲的方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)‑石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(‑)‑石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。

Description

拆分外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的方法
技术领域
本发明的实施方式主要涉及一种拆分石杉碱甲的方法。
背景技术
天然的石杉碱甲是一种手性分子，也被称作L-石杉碱甲或(-)-石杉碱甲。人工合成的石杉碱甲可以外消旋混合物的形式存在，也被称作(±)-石杉碱甲。石杉碱甲衍生物可用于制药。
石杉碱甲是一种倍半萜类生物碱并且是一种有效可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂，其可从一种石松(如蛇足石杉)中提取。在中国，用石杉碱甲治疗肿胀，发热及血液疾病已有上百年的历史。在动物试验和临床试验中，石杉碱甲还被证实具有增强记忆力和保护神经的作用。最近还进行了石杉碱甲治疗阿尔兹海默症的双盲、安慰剂对照临床试验，该临床试验结果显示试验参与者的认知功能和生活质量均被提高了。中国已进行了许多关于石杉碱甲的临床试验，在其他对阿尔兹海默症日益关注的国家，如位于西半球的一些国家，石杉碱甲及其衍生物的医药用途也同样引起了极大地关注。
石杉碱甲按IUPAC命名法命名，为(1R,9S,13E)-1-氨基-13-亚乙基-11-甲基-6-氮杂三环 [7.3.1.0]十三-2(7),3,10-三烯-5-酮，其化学结构如下所示：
Figure GDA0001408750350000011
石杉碱甲可从多种植物中分离，比如石杉科，石松科或卷柏属。但是，石杉碱甲在这些植物中的含量非常低。例如，，石杉碱甲在石杉中的最高含量仅约0.05％。在中国，1995至2001年间的调查显示石杉碱甲在石杉中的含量随其收获时节和生长地区的不同而不同。石杉碱甲在石杉中的含量大致在46μg/g至133μg/g范围内。和其他植物相比，11种马尾杉中石杉碱甲的含量较高，大致在242μg/g至560μg/g范围内。
另外，蛇足石杉的生长周期约为8至10年，所以来源于天然植物的石杉碱甲是有限的，且其提取率非常低。进一步，伐木获取石杉碱甲会破坏植被(如采伐森林)。随着阿尔兹海默症患者日益增多及天然资源的缺乏，从植物中获取石杉碱甲的方式已无法满足其市场需求量。因此，人工合成的石杉碱甲已引起药物化学家的极大关注。
人工合成的石杉碱甲可通过多种合成路径制得。药学研究表明(-)-石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶的抑制活性比其对映异构体(+)-石杉碱甲高38至50倍。因此，(-)-石杉碱甲的不对称合成和手性拆分引起了人们的关注。
石杉碱甲的化学合成方法可分为2大类：不对称合成和外消旋混合物的手性拆分。
石杉碱甲的不对称合成分为2大类：由手性催化剂催化进行的不对称Michael-aldol 反应和不对称环化反应。不对称合成路径中，可通过β-酮酯与(-)-8-苯甲醇的酯交换反应得到手性酯。所述手性酯然后与异丁烯醛-DNPH经不对称Michael-aldol反应和缩醛反应，形成一种中间体。所述中间体可转化为甲磺酸酯，然后消除得到一种非对映异构体，并由色谱分离法纯化。所述不对称合成路径可如下所示：
Figure GDA0001408750350000021
但是，上述合成方法耗时长，且产率低，并且，需要用色谱分离法和大量的(-)-8-苯甲醇，因此，该路径不适于工业化生产。
β-酮酯与异丁烯醛-DNPH还可由金鸡纳属生物碱催化进行不对称Michael-aldol反应和缩醛反应。所述反应可如下所示：
Figure 2
上述反应的百分产率仅约45％(百分产率＝化合物2的摩尔数÷化合物1的摩尔数×100)，且选择性低，产生了超过三种比例为10:7:1的非对映异构体。因此，需要使用动态轴向压缩色谱进行后处理。
β-酮酯还可与烯丙基氯化钯二聚体，由二茂铁催化进行不对称环化反应。所述反应可如下所示：
Figure GDA0001408750350000031
虽然上述反应的选择性相对更高，但是其手性催化剂二茂铁很难合成，分离，纯化和回收，并且昂贵。因此，该方法多限于实验室应用。
所述石杉碱甲的手性拆分被分为2大类：重结晶拆分和色谱拆分。例如，(-)-联苯甲酰-L-酒石酸产生的2种非对映异构体盐可与石杉碱甲的一种前体反应。所述两种盐中的一种可在有机溶剂中重结晶，并在解离后得到石杉碱甲。所述方法可如下所示：
Figure GDA0001408750350000032
经重复拆分和纯化得到的石杉碱甲具备高光学纯度，但是该方法操作繁复且产率低 (如，百分产率约为16.2％；百分产率＝终产物中(-)-石杉碱甲的质量÷外消旋混合物中(±)- 石杉碱甲的质量×100)。
发明内容
本发明的实施方式涉及一种制备光学纯(-)-石杉碱甲的方法。根据本发明的实施方式，石杉碱甲及其对映异构体可通过预备的手性高效液相色谱分离。本发明的实施方式主要涉及一种拆分人工合成的石杉碱甲(如，一种被称为(±)-石杉碱甲的外消旋混合物)，得到大体上光学纯的(-)-石杉碱甲的方法。
根据本发明的其中一个实施方式，一种从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物拆分出(-)- 石杉碱甲的方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(-)-石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。
所述醇可选自含1至6个碳原子的伯醇、含1至6个碳原子的仲醇及其混合物。
所述醇可包括甲醇、乙醇、异丙醇或其混合物。
所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比可为8:1至1:8。
所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比可为4:1至1:4。
所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比可为2:8至5:8。
所述流动相可进一步包含以流动相的总体积计的浓度小于5v％的有机碱。
所述有机碱在流动相中的浓度以流动相的总体积计可为0.1v％至5v％。
所述有机碱在流动相中的浓度以流动相的总体积计可为0.3v％至0.5v％。
所述有机碱可包括乙二胺、二乙胺、三乙胺或其混合物。
所述手性固定相的多聚糖衍生物可包括三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)直链淀粉、三 (3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)纤维素、三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素或其混合物。例如，所述手性固定相的多聚糖衍生物可包括三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。
所述手性固定相可包括含多聚糖衍生物的颗粒，且该颗粒平均粒径为5μm至20μm。例如，所述颗粒的平均粒径可为10μm至20μm。
所述的方法可进一步包括：如下制备两份溶液：所述含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物溶解于流动相中使得浓度在0.05g/ml至0.3g/ml范围内，其中所述手性高效液相色谱的流速ml/min与所述手性高效液相色谱的手性柱的直径mm的比值为1.2至3.5；将一份溶液注入到含所述手性柱的高效液相色谱的注入口中，其中，所述溶液的注入体积ml与该手性高效液相色谱的柱直径mm的比值为0.02至0.6；以及收集所得(-)-石杉碱甲。
所述的方法可进一步包括旋干所得(-)-石杉碱甲。
所述手性高效液相色谱可利用紫外灯检测器进行。
所述紫外灯检测器可用于检测波长在210至310nm范围内的紫外光。
所述手性柱的温度可为20至30℃。
与其他制备(-)-石杉碱甲的方法相比，本发明的实施方式具备以下特点：分离方法时间较短；方法步骤简单，产物光学纯度或对映异构体过剩值(ee)高(如，(-)-石杉碱甲的ee值可约为99.0％或以上，或约为99.5％或以上，其中ee值由(-)-石杉碱甲的高效液相色谱峰面积与(+)-石杉碱甲和(-)-石杉碱甲的高效液相色谱总峰面积之比计算得到)；以及产率较高(如，百分产率至少为48％，比如48％至50％；百分产率＝终产物中(-)-石杉碱甲的质量÷外消旋混合物中(±)-石杉碱甲的质量×100)。
根据本发明实施方式中使用的拆分技术，手性高效液相色谱的手性柱可包在一种材料中，从而可被使用1500至2000次，由此减少所述方法的实施方式的成本。本发明实施方式的成本低于利用手性催化剂制备(-)-石杉碱甲的实施方式(如，用于包裹所述高效液相色谱柱的材料的费用约为手性合成法所需材料总费用的5％)。
附图说明
所述附图与说明书结合，阐述了本发明的实施方式，并用于解释本发明的原理。
图1为根据例2，分离(±)-石杉碱甲的外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的手性拆分色谱图。
图2为根据例3，分离(±)-石杉碱甲的外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的手性拆分色谱图。
图3为根据例4，分离(±)-石杉碱甲的外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的手性拆分色谱图。
具体实施方式
下述的详细说明旨在说明本发明的具体实施方式，而非限制本发明的保护范围。本发明实施方式的等同方式对本领域技术人员是显而易见的，且旨在落入本发明的保护范围内。另外，在本发明上下文中，术语“石杉碱甲”被广义地使用并包括任一种形式的，可用于治疗人类或动物的石杉碱甲或石杉碱甲同类物。例如文中所用的术语“石杉碱甲”包括天然或人工合成的(-)-石杉碱甲及其混合物。
如本文所用到的，术语“约”，“大致上(大体上)”或其他相似修饰语仅为表示近似的术语，并非表示程度的术语，其旨在反映本领域技术人员所能认识到的，用于测量或计算数值中的内在偏差。另外，本文中列举的任何数值范围均旨在包括纳入该列举范围内的相同数值精度的所有子范围。例如，范围“1.0至10.0”旨在包括所列数值1.0与所列数值10.0之间(含该两数值)的所有子范围，换句话说，其最小数值等于或大于1.0，同时最大数值等于或小于10.0，比如，2.4至7.6。本文所列举的任何最大数值限均旨在包括纳入其范围内的所有比其小的数值限，同时本说明书所列举的任何最小数值限均旨在包括纳入其范围内的所有比其大的数值限。因此，申请人为明确列举纳入在本文中明确列举范围内的任一子范围，保留了修改权利要求书及说明书的权利。所有这些范围旨在涵盖在本说明书范围内，因此明确列举任一上述子范围的修改将符合专利法的规定。
本发明的实施方式涉及一种通过工业规模的预备手性高效液相色谱拆分外消旋石杉碱甲的方法。例如，所述方法的实施方式包括通过预备手性高效液相色谱分离人工合成的石杉碱甲。所述方法的实施方式高效且操作简单。所述方法的实施方式的产率和其得到的(-)- 石杉碱甲的最终光学纯度均较高。例如，所述方法的实施方式具有至少99.0％的最终光学纯度或对映异构体过剩值(ee)(如，所述产物中，(-)-石杉碱甲的摩尔数可占(-)-石杉碱甲和(+)- 石杉碱甲总摩尔数的99.0mol％)，且所述对映异构体过剩值(ee)可至少为99.8％(如，(-)- 石杉碱甲的摩尔数可占(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲总摩尔数的99.8mol％)。例如，(-)-石杉碱甲的对映异构体过剩值(ee)可至少为99.0％，或者可约至少为99.5％，其中ee值由(-)-石杉碱甲的高效液相色谱峰面积与(+)-石杉碱甲和(-)-石杉碱甲的高效液相色谱总峰面积之比计算得到。根据所述方法的实施方式，手性分离步骤的百分产率约为48％至50％(百分产率＝终产物中(-)-石杉碱甲的质量÷外消旋混合物中(±)-石杉碱甲的质量×100)，该百分产率已接近理论产率。
根据本发明的其中一个实施方式，一种从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中拆分出 (-)-石杉碱甲的方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(-)-石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。
石杉碱甲及其对映异构体可根据本领域任一种合适的方法制得。例如，石杉碱甲及其对映异构体可根据Campiani G.等人(Campiani G.,Sun L.Q.,Kozikowski A.P.,"APalladium-catalyzed route to Huperzine A and Its Analogues and TheirAnticholinesterase Activity,"J.Org.Chem.,1993,58,7660)所描述的方法制得。例如，外消旋石杉碱甲可用β-酮酯作为原材料制得。所述外消旋物可通过工业规模的预备高效液相色谱分离。所述合成路径可如下所示：
Figure GDA0001408750350000071
在某些实施方式中，手性高效液相色谱的色谱柱(手性柱)包括手性纤维。所述手性高效液相色谱所可利用流动相进行，其流动相包括二氯甲烷、三氯甲烷或其混合物。所述流动相也可包括醇(如低级醇)。例如，所述手性高效液相色谱的流动相可包括二氯甲烷、三氯甲烷，和/或醇(如低级醇)。所述流动相可进一步包括有机碱。所述醇可包括含1至6 个碳原子的伯醇，含1至6个碳原子的仲醇或其混合物。例如，所述醇可包括甲醇、乙醇、异丙醇或其混合物。所述有机碱可包括乙二胺、二乙胺、三乙胺或其混合物。例如，所述有机碱可包括二乙胺。
所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的组分的体积(如，二氯甲烷的体积、三氯甲烷的体积及其混合物的体积)与醇的体积比可为8:1至1:8。例如，选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的组分的体积(如，二氯甲烷的体积、三氯甲烷的体积及其混合物的体积)与醇的体积比可为4:1至1:4或2:8至5:8。所述流动相可进一步包含以流动相的总体积计的浓度小于5v％的有机碱。所述有机碱在流动相中的体积浓度(V/V)可在0.1vol％至5vol％范围内。例如，所述有机碱在流动相中的体积浓度(V/V)以流动相的总体积计可为0.1vol％至0.5vol％或0.3vol％至0.5vol％。
在某些实施方式中，所述手性固定相的多聚糖衍生物包括选自三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)直链淀粉、三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)纤维素、三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素及其混合物的材料。例如，所述手性固定相的多聚糖衍生物可包括三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。
所述手性柱(如手性色谱柱)可包括手性纤维，可人工填充或选择购买(如选择购买可用的手性柱)所述手性柱(如手性色谱柱)。所述手性柱外包材料的平均粒径可选择为5μm至20μm或10μm至20μm。所述手性柱的直径可选为1cm至10cm(如2cm至5cm)。例如，所述手性柱的直径可为5cm。
在某些实施方式中，所述预备手性高效液相色谱为工业规模的并适于(-)-石杉碱甲的工业化生产。
所述流动相的流动速率可根据所述手性柱的尺寸选择，可选择任一种适合所述手性柱的尺寸的流动速率。例如，当所述手性柱的尺寸为250mm(长)×50mm(宽或直径) 时，所述流动相的流动速率可为60ml/min至120ml/min，或者80ml/min至100ml/min。其他尺寸手性柱的适合流动速率可通过前述流动速率与手性柱尺寸之间的关系确定。例如，所述流动速率可根据一个方程式设置：流动速率(ml/min)÷所述柱直径(mm)＝1.2至3.5。所述手性高效液相色谱的实施方式可利用紫外灯检测器进行。所述紫外灯检测器可用来定性和/或定量被所述手性高效液相色谱分离的组分。所述紫外灯检测器可检测波长在210至310 nm范围内的紫外光。例如，所述紫外灯检测器可检测波长在240至280nm范围内的紫外光。在某些实施方式中，所述紫外灯检测器用于检测经手性高效液相色谱分离的组分所反射，发射和/或吸收的254nm波长的紫外光。
本发明实施方式的特征如下步骤：
(1)使所述(±)-石杉碱甲外消旋混合物溶解于所述流动相中，制得两份外消旋混合物的浓度在0.05g/ml至0.3g/ml范围内的溶液。
(2)根据所述方程式设置的流动速率：流动速率(ml/min)÷所述柱直径(mm) ＝1.2至3.5。所述紫外灯检测器的检测波长可为254nm，以及所述分离方法在20至30℃温度下进行(如，所述手性柱的温度可在20至30℃的范围内，比如为30℃)。
(3)将步骤(1)中制得的一份溶液注入到含所述手性柱的高效液相色谱的注入口中。其中，注入体积可根据一个方程式计算得到：注入体积(ml)÷柱直径(mm)＝0.02 至0.6。
(4)收集所得(-)-石杉碱甲，使其旋干可获得光学纯或大体上光学纯的(-)-石杉碱甲。
本发明不局限于通过拆分外消旋(±)-石杉碱甲获得(-)-石杉碱甲。例如，还可利用本发明的实施方式分析石杉碱甲的光学纯度。
下文中，将用示例说明本发明的某些实施方式。应了解到，这些示例仅用于说明本发明的某些实施方式，而不能被理解为限制了本发明的保护范围。
示例1
利用β-酮酯作为原材料，并根据Campiani G.等人(Campiani G.,Sun L.Q.,Kozikowski A. P.,"A Palladium-catalyzed route to Huperzine A and ItsAnalogues and Their Anticholinesterase Activity,"J.Org.Chem.,1993,58,7660)所描述的方法制得外消旋(±)-石杉碱甲。
示例2
通过工业规模的预备手性高效液相色谱，使外消旋物(-)-石杉碱甲从例1中制得的 (±)-石杉碱甲外消旋混合物中分离出。图1为根据示例2，分离(±)-石杉碱甲的外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的手性拆分色谱图。实验条件(如装置和条件)如下所示：
设备：从北京通恒科技有限公司获得的工业规模预备高效液相色谱(Pilot6000)，最大流速为500ml/min。
手性柱：从Interchim公司(法国)获得的DAC50柱，其尺寸为250mm(长)× 50mm(直径)。
手性柱外包材料：平均粒径为10μm的三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。
手性柱温度：30℃。
紫外光检测器检测波长：254nm。
流动相：含甲醇和二氯甲烷的混合溶液(体积比为20：80)，其中还含以流动相总体积计浓度为0.5％的二乙胺。
流动速率：80ml/min。
注入体积：20ml。
根据Interchim公司提供的说明书使所述三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素填入 DAC50柱。所述DAC50柱为手性柱，并与所述工业规模预备高效液相色谱相连。使20g例1中制得的(±)-石杉碱甲外消旋混合物溶解于流动相中，制得100ml样品溶液(所述20g(±)- 石杉碱甲外消旋混合物溶解于流动相并稀释到100ml)。
在上述条件下，使所述样品溶液注入所述预备手性高效液相色谱，分离出(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲并记录其色谱。图1为在示例2条件下，(±)-石杉碱甲外消旋混合物的手性拆分色谱。
收集分别与图1中7.5至9.8分钟处，12.5至20分钟处的信号相对应的组分。前者(与7.5至9.8分钟处的信号相对应的组分)包括石杉碱甲的对映异构体((+)-石杉碱甲)，后者(与12.5至20分钟处的信号相对应的组分)包括石杉碱甲的对映异构体((-)-石杉碱甲)。将(-)-石杉碱甲旋干。旋干后，(-)-石杉碱甲的质量为1.85g，用安捷伦1260无限四元泵液相色谱系统分析(从美国安捷伦公司获得)分析其光学纯度，得到对映异构体过剩值的测试值为99.8％(以(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲总摩尔数计得的(-)-石杉碱甲浓度为99.8mol％的)。
示例3
通过工业规模的预备手性高效液相色谱，使外消旋物(-)-石杉碱甲从例1中制得的 (±)-石杉碱甲外消旋混合物中分离出。图2为根据示例3，分离(±)-石杉碱甲的外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的手性拆分色谱图。实验条件(如装置和条件)如下所示：
设备：从北京通恒科技有限公司获得的工业规模预备高效液相色谱(Pilot6000)，最大流速为500ml/min。
手性柱：从Interchim公司(法国)获得的DAC50柱，其尺寸为250mm(长)× 50mm(直径)。
手性柱外包材料：平均粒径为10μm的三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。
手性柱温度：30℃。
紫外光检测器检测波长：254nm。
流动相：含甲醇和二氯甲烷的混合溶液(体积比为40：60)，其中还含以流动相总体积计浓度为0.5％的二乙胺。
流动速率：80ml/min。
注入体积：20ml。
根据Interchim公司提供的说明书使所述三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素填入 DAC50柱。所述DAC50柱为手性柱，并与所述工业规模预备高效液相色谱相连。使20g例1中制得的(±)-石杉碱甲外消旋混合物溶解于流动相中，制得100ml样品溶液(所述20g(±)- 石杉碱甲外消旋混合物溶解于流动相并稀释到100ml)。
在上述条件下，使所述样品溶液注入所述预备手性高效液相色谱，分离出(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲并记录其色谱。图2为在示例3条件下，(±)-石杉碱甲外消旋混合物的手性拆分色谱。
收集分别与图2中7.5至11.0分钟处，11.5至20分钟处的信号相对应的组分。前者(与7.5至11.0分钟处的信号相对应的组分)包括石杉碱甲的对映异构体((+)-石杉碱甲)，后者(与11.5至20分钟处的信号相对应的组分)包括石杉碱甲的对映异构体((-)-石杉碱甲)。将(-)-石杉碱甲旋干。旋干后，(-)-石杉碱甲的质量为1.88g，用安捷伦1260无限四元泵液相色谱系统(从美国安捷伦公司获得)分析其光学纯度，得到对映异构体过剩值的测试值为99.8％(以(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲总摩尔数计得的(-)-石杉碱甲浓度为99.8mol％的)。
示例4
通过工业规模的预备手性高效液相色谱，使外消旋物(-)-石杉碱甲从例1中制得的 (±)-石杉碱甲外消旋混合物中分离出。图3为根据示例4，分离(±)-石杉碱甲的外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的手性拆分色谱图。实验条件(如装置和条件)如下所示：
设备：从北京通恒科技有限公司获得的工业规模预备高效液相色谱(Pilot6000)，最大流速为500ml/min。
手性柱：从Interchim公司(法国)获得的DAC50柱，其尺寸为250mm(长)× 50mm(直径)。
手性柱外包材料：平均粒径为10μm的三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。
手性柱温度：30℃。
紫外光检测器检测波长：254nm。
流动相：含甲醇和二氯甲烷的混合溶液(体积比为80：20)，其中还含以流动相总体积计浓度为0.5％的二乙胺。
流动速率：80ml/min。
注入体积：20ml。
根据Interchim公司提供的说明书使所述三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素填入 DAC50柱。所述DAC50柱为手性柱，并与所述工业规模预备高效液相色谱相连。使5g例1中制得的(±)-石杉碱甲外消旋混合物溶解于流动相中，制得100ml样品溶液(所述5g(±)-石杉碱甲外消旋混合物溶解于流动相并稀释到100ml)。
在上述条件下，使所述样品溶液注入所述预备手性高效液相色谱，分离出(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲并记录其色谱。图3为在示例4条件下，(±)-石杉碱甲外消旋混合物的手性拆分色谱。
收集分别与图3中9.5至15.5分钟处，19.5至30分钟处的信号相对应的组分。前者(与9.5至15.5分钟处的信号相对应的组分)包括石杉碱甲的对映异构体((+)-石杉碱甲)，后者(与19.5至30分钟处的信号相对应的组分)包括石杉碱甲的对映异构体((-)-石杉碱甲)。将(-)-石杉碱甲旋干。旋干后，(-)-石杉碱甲的质量为0.48g，用安捷伦1260无限四元泵液相色谱系统(从美国安捷伦公司获得)分析其光学纯度，得到对映异构体过剩值的测试值为 99.8％(以(-)-石杉碱甲和(+)-石杉碱甲总摩尔数计得的(-)-石杉碱甲浓度为99.8％的)。
本发明的实施方式：分离方法时间较短；方法步骤简单，产物光学纯度或对映异构体过剩值(ee)高(如，(-)-石杉碱甲的ee值可至少为99.0％，或至少为99.5％，其中ee值由(-)-石杉碱甲的高效液相色谱峰面积与(+)-石杉碱甲和(-)-石杉碱甲的高效液相色谱总峰面积之比计算得到)；以及产率较高(如，百分产率至少为48％，比如48％至50％；百分产率＝终产物中(-)-石杉碱甲的质量÷外消旋混合物中(±)-石杉碱甲的质量×100)。
虽然本文仅以某些实施方式说明本发明，但应了解到，本发明保护范围不局限于本文揭示的实施方式，相反地，其旨在覆盖所附权利要求书的精神及范围内的各种修改，改编及其等同替换。在本文及权利要求书中，术语“约”和“大致上(大体上)”仅为表示近似的术语，并非表示程度的术语，其反映了本领域技术人员所能理解的，与测量、有效数字及可互换性相关的内在偏差。另外，应了解到，本文及权利要求书中，除特别说明外，即使某些数值前没有术语“约”，也应理解为被此术语所修饰。

Claims (10)

1.一种从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中拆分出(-)-石杉碱甲的方法，其特征在于，所述方法包括：
通过手性高效液相色谱从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(-)-石杉碱甲；
所述手性高效液相色谱所用的流动相由甲醇、二氯甲烷和二乙胺组成；以及
所述手性高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物，其中，所述多聚糖衍生物为三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)纤维素、三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素或其混合物；
其中，所述二氯甲烷的体积与甲醇的体积的体积比为8:2至2:8，所述二乙胺的浓度以流动相的总体积计为0.5v％。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二氯甲烷的体积与甲醇的体积的体积比为2:8至5:8。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述手性固定相的多聚糖衍生物为三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多聚糖衍生物为多聚糖衍生物颗粒，所述颗粒平均粒径为5μm至20μm。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述颗粒的平均粒径为10μm至20μm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：
如下制备两份溶液：所述含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物溶解于流动相中使得浓度在0.05g/ml至0.3g/ml范围内，其中所述手性高效液相色谱的流速ml/min与所述手性高效液相色谱的手性柱的直径mm的比值为1.2至3.5；
将一份溶液注入到含所述手性柱的高效液相色谱的注入口中，其中，所述溶液的注入体积ml与该手性高效液相色谱的柱直径mm的比值为0.02至0.6；以及
收集所得(-)-石杉碱甲。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，进一步包括旋干所得(-)-石杉碱甲。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述手性高效液相色谱是利用紫外灯检测器进行的。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述紫外灯检测器用于检测波长在210至310nm范围内的紫外光。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述手性柱的温度为20至30℃。
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