CN107530389A - 用于在人和动物中处理“斑和缠结”的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

用于处理患者或动物中的脑“斑”和“缠结”的组合物和方法，其中所述方法包括施用治疗有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物。

Description

用于在人和动物中处理“斑和缠结”的组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年2月27日提交的美国临时申请62/126,026和2015年6月4日提交的美国临时申请62/170,822的优先权，这两个申请的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及绒毛钩藤和乌龙茶的植物提取物的共混组合物以及用于处理人和动物(即，例如老年狗和猫)的淀粉样变性和tau蛋白病中老化脑中聚集的“斑和缠结”的方法。此外，本发明涉及开发由绒毛钩藤和特定的乌龙茶的植物提取物的组合组成的营养共混组合物，以预防和处理创伤性脑损伤(TBI)、脑震荡(如在大多数运动员和军人/士兵中观察到的)、单次和反复打击头部以及慢性创伤性脑病(CTE)。

背景

在具有多种病症的脑中淀粉样变性和β-淀粉样蛋白“斑的聚集

阿尔茨海默氏病的特征在于以纤维形式作为细胞外淀粉样斑和作为脑血管壁内的淀粉样存在的称为β-淀粉样蛋白或Aβ的39至43个氨基酸肽的聚集。据信阿尔茨海默氏病中原纤维Αβ淀粉样沉积对患者有害，最终导致毒性和神经元细胞死亡，这是阿尔茨海默氏病的特征性标志。聚集证据表明淀粉样，更具体地说，Aβ原纤维的形成、沉积、聚集和/或存留是阿尔茨海默氏病发病机制的主要致病因素。此外，除了阿尔茨海默氏病之外，许多其他淀粉样疾病也涉及Aβ原纤维的形成、沉积、聚集和存留，包括唐氏综合征、涉及嗜刚果红样血管病(congophilic angiopathy)的病症，例如但不限于荷兰型遗传性脑出血、包涵体肌炎、拳击员痴呆、脑β-淀粉样血管病、与进行性核上性麻痹相关的痴呆、与皮层基底变性相关的痴呆和轻度认知损伤。

淀粉样病(淀粉样变性)根据淀粉样蛋白的类型以及潜在的疾病进行分类。淀粉样病具有许多共同特征，包括由独特类型的淀粉样蛋白组成的每种淀粉样。淀粉样病包括但不限于与阿尔茨海默氏病相关的淀粉样、唐氏综合征、犬功能障碍综合征(CDS)、犬认知功能障碍(CCD)(如在老年动物例如狗和猫中所见)、伴有荷兰型淀粉样变性的遗传性脑出血、拳击员痴呆、包涵体肌炎(Askanas等，Ann.Neurol.43：521-560,1993)和轻度认知损伤(其中将该特定淀粉样被称为β-淀粉样蛋白或Aβ)、与慢性炎症相关的淀粉样、各种形式的恶性肿瘤和家族性地中海热(其中将该特定淀粉样称为AA淀粉样或炎症相关淀粉样变性)、与多发性骨髓瘤和其他B细胞恶液质相关的淀粉样(其中将该特定淀粉样称为AL淀粉样)、与2型糖尿病相关的淀粉样(其中将该特定淀粉样称为胰淀素(amylin)或胰岛淀粉样多肽或IAPP)、与朊病毒病相关的淀粉样(该朊病毒包括克-雅病(Creutzfeld-Jakob disease)、格-施综合征(Gerstmann-Straussler syndrome)、库鲁病和动物瘙痒病(其中将该特定淀粉样称为PrP淀粉样))、与长期血液透析和腕管综合征相关的淀粉样(其中将特定淀粉样称为α2-微球蛋白淀粉样)、与老年性心脏淀粉样变性和家族性淀粉样变性多发性神经病相关的淀粉样蛋白(其中将该特定淀粉样称为甲状腺素运载蛋白或前白蛋白)以及与内分泌肿瘤(例如甲状腺髓样癌)相关的淀粉样(其中将该特定淀粉样称为降钙素原变体)。另外，发现形成淀粉样原纤维的α-突触核蛋白并且其为刚果红和硫黄素S阳性(用以检测淀粉样原纤维沉积物的特定菌株)是帕金森氏病(路易体病)患者脑中路易体的一部分(Lewy inHandbuch der Neurologie，M.Layandowski编著，Springer，Berlin，第920-933页，1912；Pollanen等，J.Neuropath.Exp.Neurol.52：183-191,1993；Spillantini等.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：6469-6473,1998；Arai等，Neurosc.Lett.259：83-86,1999)、多系统萎缩(Wakabayashi等，Acta Neuropath.96：445-452,1998)、路易体痴呆和阿尔茨海默氏病的路易体变体。为了本公开的目的，帕金森病因患该病(其是刚果红和硫黄素S阳性，并且主要含有β-折叠片二级结构)的患者的脑中产生原纤维的事实而现在被认为是也显示淀粉样病特征的疾病。

淀粉样作为阿尔茨海默氏病的治疗性靶标

阿尔茨海默氏病的特征在于称为β-淀粉样蛋白、Aβ或β/A4的39至43个氨基酸肽的沉积和聚集(Glenner和Wong，Biochem.Biophys.Res.Comm.120：885-890,1984；Masters等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82：4245-4249,1985；Husby等，Bull.WHO 71：105-108,1993)。Aβ通过蛋白酶切割衍生自称为β-淀粉样前体蛋白(APP)的较大前体蛋白，其中存在多种可变剪接变体。APP的最大量形式包括由696、751和770个氨基酸组成的蛋白质(Tanzi等，Nature31：528-530,19980)。

小Aβ肽是构成阿尔茨海默氏病患者脑中淀粉样沉积物或“斑”的主要成分。此外，阿尔茨海默氏病的特征在于存在许多神经原纤维状“缠结”，其由在神经元细胞质中异常聚集的成对螺旋丝组成(Grundke-Iqbal等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：4913-4917，1986；Kosik等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：4044-4048,1986；Lee等，Science 251：675-678,1991)。因此，阿尔茨海默氏病的病理学标志是存在“斑”和“缠结”两者，淀粉样沉积在斑的中部核心。在阿尔茨海默氏病脑中发现的另一种主要类型的病变是在脑实质内和位于脑外的脑膜血管壁内两者的血管壁中淀粉样的聚集。将定位于血管壁的淀粉样沉积物称为脑血管淀粉样或大脑血管淀粉样变性(congophilic angiopathy)(Mandybur，J.Neuropath.Exp.Neurol.45：79-90,1986；Pardridge等，J.Neurochem.49：1394-1401,1987)。

多年来，对于阿尔茨海默氏病中“淀粉样”的重要性以及该疾病的特征性“斑”和“缠结”是疾病的原因还是只是后果进行了持久的科学辩论。在过去几年内，目前的研究表明淀粉样确实是阿尔茨海默氏病的致病因素，而不应被视为仅仅是无辜的旁观者。细胞培养物中的阿尔茨海默氏Aβ蛋白已示出在短时间内引起神经细胞变性(Pike等，Br.Res.563：311-314,1991；J.Neurochem.64：253-265,1995)。研究表明，它是引起神经毒性作用的所有淀粉样的特征性纤维结构(主要由β-折叠片二级结构组成)。还已发现，Aβ在海马切片培养物中具有神经毒性(Harrigan等，Neurobiol.Aging 16：779-789,1995)，并且在转基因小鼠中诱导神经细胞死亡(Games等，Nature 373：523-527，1995；Hsiao等，Science 272：99-102,1996)。将阿尔茨海默氏Aβ注入大鼠脑也会引起记忆损伤和神经元功能障碍(Flood等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88：3363-3366,1991；Br.Res.663：271-276,1994)。

可能Aβ淀粉样直接参与阿尔茨海默氏病的发病机制的最有说服力的证据来自遗传研究。发现Aβ的产生可以由编码其前体－β-淀粉样前体蛋白的基因的突变引起(VanBroeckhoven等，Science 248：1120-1122,1990；Murrell等，Science 254：97-99，1991；Haass等，Nature Med.1：1291-1296,1995)。导致早期发病的家族性阿尔茨海默氏病的β-淀粉样前体蛋白基因中突变的鉴定是淀粉样对于该疾病致病过程至关重要的最强论据。已经发现几种报道的致病突变，其证实Αβ在引起家族性阿尔茨海默氏病中的重要性(综述于Hardy，Nature Genet.1：223-234,1992)。所有这些研究表明，提供治疗剂、药物或补充剂以在人和动物脑中减少、消除和/或预防纤维状Αβ形成、沉积、聚集和/或存留是有效的治疗。

在老化的人和动物脑中“斑和缠结”聚集

人脑是宇宙中最复杂的器官。其重量只有3磅，或占体重的约2％。然而使用20-30％的热量消耗，20％的氧气吸入以及25％的体内血液流动；它由85％的水组成(DanielG.Amen，M.D.12prescri ptions for creating a brain healthy life。来源：www.amenclinics.co m/cybcyb/12-prescriptions-for-creating-a-brain-healthy-life/)。脑中有约1000亿个神经细胞(即，神经元)，并且达到十亿个称为突触的连接(同上)。人脑随着年龄增长每天失去约85,000个皮质神经元，或者每隔秒约一个(DeepakChopra，MD和Rudolph Tanzi，Ph.D.Super Brain.Unleashing the Explosive Power ofYour Mind to Maximize Health,Happiness,and Spiritual Well Being，参见///www.chopra.c om/super-brain-by-deepak-chopra-rudolph-tanzi.)随着脑老化，从20岁开始，两种神经毒性蛋白质缓慢但有意聚集。第一种是称为“β-淀粉样蛋白”或Aβ的不溶性(聚集的)特定神经毒性蛋白的脑聚集。“斑”形式(在显微镜下看起来像脑中的“肉丸”)的β-淀粉样蛋白沉积物已示出有助于杀死导致海马依赖性记忆和认知衰退的健康神经元。艾伦·斯诺博士和联合发明人开发了一些专利方法以产生“试管中的斑”(与人脑中所见相同)，并使用这些方法来筛选和鉴定天然的“减少斑”的营养成分(美国专利号7,148,001，其全部内容通过引用并入本文)。

将在老化的脑中聚集并形成称为“缠结”的扭曲成对的螺旋丝的第二种神经毒性蛋白称为“tau蛋白”。神经原纤维状缠结在神经元内积聚，导致它们死亡，并在显微镜下看起来像“干意大利面条”。斯诺博士的实验室开发出了专用方法以在试管中形成“缠结”，然后使用这些测定法来鉴定“抑制缠结”的营养成分(参见下文的实施例)。因此，在老化的脑中，“斑和缠结”两者都会聚集，导致神经元死亡；神经细胞之间的连接(称为突触)解体(disintegrate)；记忆和认知逐渐衰退。已经示出能够解聚和减少“斑和缠结”聚集的化合物或试剂导致记忆改善和记忆衰退减轻(Karlnoski等，Suppression of amyloiddeposition leads to long-term reductions in Alzheimer’s pathologies inTg2576mice，J.Neurosc.29：4964-4971,2009；Vellas等，Long-term follow-up ofpatients immunized with AN1792：Reduced functional decline in antibodyresponders.Current Alz.Res.6：144-151,2009；Morgan等.Aβpeptide vaccinationprevents memory loss in an animal model of Alzheimer's disease.Nature 408：982-985,2000；Chen et al.A learning deficit related to age andβ-amyloidplaques in a mouse model of Alzheimer's disease.Nature 408：975-979,2000；Janus等，Aβpeptide immunization reduces behavioral impairment and plaques in amodel of Alzheimer's disease.Nature 408：979-985,2000；Schenk等.Immunizationwith amyloid-βattenuates Alzheimer-disease like pathology in PDAPPmouse.Nature 400：173-177,1999；Yanamandra等，Anti-tau antibodies that block tauaggregate seeding in vitro markedly decreases pathology and improvescognition in vivo.Neuron 80：402-414，2013；Dumont等,Bezafibrate administrationimproves behavioral deficits and tau pathology in P3015mice.Human MolecularGenetics 21：5091-5105，2012；Oddo等.Reduction of soluble Abeta和tau，but notsoluble Abeta alone,ameliorates cognitive decline in transgenic mice withplaques and tangles.J.Biol.Chem.281：39413-39423，2006；Santacruz等.Tausuppression in a neurodegenerative mouse model improves memoryfunction.Science 309：476-481，2005.)

可导致年龄相关记忆损伤(AAMI)，然后到轻度认知损伤(MCI)以及潜在的阿尔茨海默氏病的老化脑和不导致这些的脑之间的唯一差异是脑中“斑和缠结”的数目。患阿尔茨海默氏病的脑每平方毫米装载数十到数十万个“斑和缠结”，导致神经元死亡明显增加，导致失去突触(神经元之间的连接)，并发记忆丧失和认知衰退。

因此，β-淀粉样和tau是老化脑中的两种关键蛋白质，其聚集为已示出与记忆丧失和认知衰退直接相关的不溶性“斑和缠结”。目前还没有药物被批准用于减少和去除脑中的β-淀粉样蛋白“斑”和含tau蛋白的“缠结”两者。

在老化的狗和猫脑中“斑”的聚集

狗和猫也在他们的脑中聚集“斑”(并且在较小程度上“缠结”)，因为认为它们的变老促进记忆衰退和认知损伤。在人脑中聚集的相同的β-淀粉样蛋白(即，“斑”)和tau蛋白(“缠结”)也在老年狗(Papoiannou等，Immunohistochemical investigation of thebrain of aged dogs.I.Detection of neurofibrillary tangles and of 4-hydroxynonenal protein,an oxidative damage product,in senile plaques.Amyloid8:11-21,2001；Uchida等,Amyloid angiopathy with cerebral hemorrhage and senileplaque in aged dogs.Nihon Juigaku Zasshi 52:605-11,1990)和猫(Gunn-Moore等,Cognitive dysfunction and the neurobiology of ageing in cats.J SmallAnim.Pract.48:546-53,2007；Nakamura等.Senile plaques in very aged cats.ActaNeuropath.91:437-9,1996)中聚集。

犬认知功能障碍(CCD)(也称为认知功能障碍综合征或CDS)是在狗(和猫)中普遍存在的表现出如人中所见的痴呆或阿尔茨海默氏病症状的疾病。CCD造成脑的病理变化，从而减缓狗(和猫)的精神功能，导致记忆、运动功能和从生活的早期训练中学习的行为丧失。在狗和猫的脑中，罪魁祸首也是在脑中形成“斑”的β-淀粉样蛋白或Aβ。随着狗年龄的增长，越来越多的“斑”聚集，并且神经细胞死亡。尽管障碍的初步症状是轻度的，但是随着时间的推移它们逐渐恶化，也称为“认知衰退”。约5至7岁的老年狗和约十岁的猫发生淀粉样“斑”(与其15-20年的平均寿命成正比)。事实上，在超过十一岁的50％的狗中发现认知功能障碍综合征的临床体征，而到了15岁，68％的狗显示出至少一个体征。狗常常会发现自己在家中熟悉的地方感到混乱、在家中的一个区域花费长时间、不响应电话或命令，以及经历异常睡眠模式。

在其他高级哺乳动物(包括猴、熊、骆驼和马)的脑中也已经鉴定出了含有β-淀粉样蛋白的“斑”。(Nakamura等，Histopathological studies of senile plaques andcerebral amyloidosis in cynomolgus monkeys.J Med Primatol.27：244-52,1998；Capucchio等.studies.J Comp Pathol 142：61-73,2010；Nakamura等，Senile plaques inan aged two-humped(Bactrian)camel(Camelus bactrianus)，Acta Neuropathol90：415-8,1995；Uchida等，Senile plaques and other senile changes in the brain of anaged American black bear，Vet.Pathol.32：412-4,1995)。

Tau蛋白病和“缠结”

Tau在20世纪70年代中期作为微管相关蛋白被发现(Weingarten，1975)。除了在神经元和其他细胞中作为微管的稳定剂之外，已经发现它们在细胞分化、极化和轴突运输中起重要作用。正常tau是与微管结合的可溶性蛋白质，但是在一系列神经变性疾病(现在称为tau蛋白病)中，tau作为致病性不溶性原纤维蛋白质聚集。这些tau包涵体似乎调节这些神经变性疾病的痴呆和临床特征的严重程度。Tau蛋白病包括诸如以下疾病：阿尔茨海默氏病、具有tau包涵体的额颞叶变性(FTLD-tau)(例如皮克氏病)、进行性核上性麻痹和皮质基底变性、嗜银颗粒病(agyrophillic grain disease)、一些朊病毒疾病、肌萎缩性侧索硬化/帕金森综合征-痴呆复合征、慢性创伤性脑病和帕金森氏病的一些遗传形式(V.M.Lee等，Ann.Rev.Neurosci.24：1121-1159,2001；B.Omalu等，Neurosurgery 69(1)：173-83,2011；A Rajput等，Neurology 67：1506-1508,2006；G.Sanpere和I.Ferrer，ActaNeuropathol.117：227-246,2009)。

在脑中增加纤维状tau的最显著的作用之一是短期记忆的逐渐劣化；即，立即召回那些刚刚存储的记忆的能力(P.Ganannakopoulos等，Neurology 60：1495-1500,2003)。由于没有用于这些障碍的处理，重要的是找到可以靶向该致病性蛋白质并改善记忆缺陷的新发明。

在创伤性脑损伤(TBI)、脑震荡、头部创伤和慢性创伤性脑病(CTE)中脑中“缠结”的聚集

由tau蛋白组成的脑“缠结”也会在头部受到打击后在脑进行性聚集，包括脑震荡、头部受伤、创伤后应激障碍(PTSD)和爆炸诱发的创伤性脑损伤(见于具有由单次爆炸引起的创伤性头部受伤的士兵和军人)。影片“脑震荡”和NFL运动者协会都讨论了运动员在反复脑震荡和/或打击头部(称为创伤性脑损伤或TBI)后已经见到的痴呆型行为。意识丧失是脑震荡的临床标志，但不需要进行诊断。其他症状包括混乱、定向障碍，不稳定、头晕、头痛和视力紊乱。

将对创伤性脑损伤的长期后果称为慢性创伤性脑病(CTE)，其为tau蛋白病的形式(即，在脑中含有tau蛋白的“缠结”)。CTE是一种在遭受反复脑创伤的人群中发现的进行性变性疾病，包括不引起即时症状的对头部的亚脑震荡攻击。该疾病以前称为拳击员痴呆(DP)，即“受拳击而昏沉(punch-drunk)”，因为它最初是在具有拳击史的人中发现的。CTE现在已经在职业运动员的脑中找到，其中包括踢足球的NFL运动员、容易头部受伤的运动员，包括打冰球、橄榄球、滑雪、滑板、特技表演、骑马、围栏以及参与者反复经历脑创伤的所有其他接触运动的那些运动员。患有CTE的个体示出许多痴呆体征，例如记忆丧失、攻击性、混乱和抑郁症，这可能在创伤后几年或几十年内出现。在2015年9月，退伍军人事务部和波士顿大学的研究人员宣布，他们已经在96％的它们检查过的NFL足球运动员中鉴定出CTE，而在所有足球运动员中的79％中鉴定出CTE(Jason Breslow，New：87deceased NFL playerstest positive for brain disease.Frontline 2016年1月9日)。

显微镜下的神经病理学是清楚的-主要存在由tau蛋白组成的“缠结”的聚集，所述“缠结”类似于在阿尔茨海默氏病患者脑中所见的“缠结”。还存在一些β-淀粉样蛋白沉积(即，“斑”)，但这通常是不常见的，而较少的特征则是脑中的“缠结”聚集。这些发现表明，对头部的打击可导致近乎即时的脑“缠结”聚集，从而导致痴呆样症状，包括记忆丧失和认知衰退。有助于减少和/或清除脑“缠结”的营养品的鉴定将是各类运动员、NFL球员、军人及其士兵每天的非凡补充。

公开内容

本发明的一个目的是提供来自绒毛钩藤的植物提取物和乌龙茶提取物的组合，以开发认知和记忆补充剂，从而预防、减少和/或清除人脑中的“斑和缠结”。基于多种植物提取物甚至来自相同植物来源的各种植物提取物对于溶解斑和缠结具有不同的效果这一出乎意料的发现，本发明预测乌龙茶提取物(特别是LOTE)与绒毛钩藤提取物组合相比于其他植物提取物或单独每种提取物具有出乎意料的和意想不到的活性。

本发明的另一个目的是提供来自绒毛钩藤的植物提取物与乌龙茶提取物的组合以生产老年狗的宠物食品补充剂，其减少脑淀粉样“斑”并改善认知、记忆、短期记忆、集中和专注。

本发明的另一个目的是提供来自绒毛钩藤的植物提取物与乌龙茶提取物的组合以生产用于老年猫的宠物食品补充剂，其减少脑淀粉样“斑”并改善认知、记忆、短期记忆、集中和专注。

虽然一些保健品提供者已经提出，绒毛钩藤(Uncaria tomentosa)可用于处理各种状况(ailment)，没有任何一处存在该化合物任何用于或建议用于处理tau原纤维形成、沉积、聚集和/或存留，例如在tau蛋白病中发生的那些。此外，没有一处表明某些其他化合物与绒毛钩藤组合用于处理tau蛋白病以预防和/或处理例如创伤性脑损伤(TBI)、脑震荡(如在大多数运动员和军人/士兵中观察到的)、创伤后应激障碍、头部创伤、对头部的打击(单次或反复)和慢性创伤性脑病(CTE)可能具有协同或补充效力。

本发明的另一个目的是提供来自绒毛钩藤的植物提取物与乌龙茶提取物的组合以生产脑“缠结”的有效预防剂和/或减少剂，例如在具有创伤性脑损伤(TBI)、脑震荡(如在大多数运动员和军人/士兵中观察到的)、创伤后应激障碍、头部创伤、对头部的打击(单次或反复)和慢性创伤性脑病(CTE)的人中发现的那些。

本发明清楚地证实绒毛钩藤(猫爪)的植物提取物与乌龙茶植物提取物的特定组合有效用于1)抑制tau原纤维形成(对于早期至中期tau蛋白病的患者而言是重要的)；2)抑制tau原纤维生长(对于早期至中期tau蛋白病的患者而言是重要的)；和3)引起预先形成的tau原纤维的溶解/破坏(对于晚期tau蛋白病而言是重要的)。

本发明的一个目的是使用绒毛钩藤(也称为Una de Gato或猫爪)的树皮内部和/或根部来处理/抑制tau蛋白病中的tau蛋白沉积、聚集和/或存留，与下文所公开的乌龙茶提取物组合，以达到有益的治疗效果。绒毛钩藤或猫爪也被称为但不限于Paraguayo、Garabato、Garbato casha、Tambor huasca、Una de gavilan、鹰爪、猫的指/趾甲和猫舒勒(Schuler)的指/趾甲。

本发明的另一个目的是提供绒毛钩藤与乌龙茶提取物(不论商业来源如何，并且无论用于人消费的最终形式如何，即丸剂、片剂、囊片剂、软和硬明胶胶囊剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、vegicaps、液滴剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、茶叶袋剂、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、栓剂、无菌注射溶液剂、无菌包装粉剂、树皮束和/或树皮粉末)用于抑制tau原纤维形成、沉积、聚集和/或存留的用途，而不管其临床环境如何。

通过本文公开的发明满足了本发明的这些及其他这样的目的，如从下文的公开将变得显而易见。

应用

本发明的应用提供了来自绒毛钩藤的植物提取物和特定的乌龙茶提取物有益于产生脑“斑”(并且在较小程度上“缠结”)并且具有如犬认知功能障碍(CCD)中所定义的痴呆的老年狗和猫的用途。

我们早些时候发现并公开了一种天然植物产品，其来自植物绒毛钩藤或猫爪的树皮内部和/或根，我们称为在WIPO国际公开号W098/51302中名称为“Composition and Methods for Treating Alzheimer's Disease and otherAmyloidoses”，1998年11月19日，其全部内容通过引用并入本文。如其中所公开的，单独的该植物化合物在破坏和/或溶解淀粉样沉积物和其他聚集物方面具有出乎意料的效力，并且被认为是阿尔茨海默氏病、II型糖尿病及其他淀粉样变性中淀粉样形成的有效抑制剂。

然而，我们的数据现在证实，本文公开的具有特定乌龙茶提取物(称为“LOTE”)的制剂在处理Tau蛋白病和其中在脑中发现“缠结”的疾病(例如在患脑震荡、头部受伤和/或头部创伤的人中的TBI、CTE)以及含有过量“脑中斑”的疾病(例如在老年狗和猫中(犬认知功能障碍))方面具有出乎意料的和迄今未知的有效效力。

本发明涉及包含以下中的一种或多种的混合组合物用于淀粉样变性的治疗性干预的用途：乌龙茶提取物和被称为‘703’或‘PTI-703’的绒毛钩藤提取物包含在不同的商业制剂中的乌龙茶提取物和/或的混合组合物的使用示出对淀粉样原纤维形成的抑制和淀粉样原纤维的解聚的意想不到的效果。

本发明应用于这些需要是特别有益的，因为本发明是唯一有效地提供来自绒毛钩藤的树皮内部和根部的提取物与乌龙茶提取物一起使用以使患Tau蛋白病、淀粉样病、脑中的“斑和/或缠结”的人患者以及具有创伤性脑损伤(TBI)、脑震荡(如在大多数运动员和军人/士兵中观察到的)、创伤后应激障碍、头部创伤、对头部的打击(单次或反复)和慢性创伤性脑病(CTE)的那些人患者受益的系统。

本发明应用于这些需要是特别有益的，因为本发明是唯一有效地提供来自绒毛钩藤的树皮内部和根部的提取物与乌龙茶提取物一起使用，以使患有tau蛋白病的人患者受益的系统，这是由于新发现的绒毛钩藤与乌龙茶提取物组合有效抑制tau原纤维形成、抑制tau原纤维生长、抑制纤维状tau蛋白聚糖相互作用、纤维状tau糖胺聚糖相互作用并导致溶解和/或破坏预先形成的tau原纤维的能力。

使用各种测定针对淀粉样蛋白原纤维聚集抑制和解聚在体外筛选超过25种茶提取物以及咖啡和藜的提取物。选择一种领先(lead)乌龙茶提取物，并与组合进行测试。发现该特定的领先乌龙茶提取物(LOTE)和的组合比单独的茶提取物或更抑制淀粉样原纤维形成，而LOTE和的组合也具有快速分解(在15分钟内)预先形成的淀粉样原纤维的能力。

本发明还涉及包含以下中的一种或多种的混合组合物用于tau蛋白病的治疗性干预的用途：乌龙茶提取物和被称为‘703’或‘PTI-703’的绒毛钩藤提取物PTI-00703。包含在不同商业制剂中的乌龙茶提取物和/或PTI-00703的混合组合物的使用示出对抑制tau原纤维形成和tau原纤维解聚的意想不到的效果。

针对体外tau原纤维聚集抑制和解聚筛选超过25种茶提取物以及咖啡和藜的提取物。选择一种领先乌龙茶提取物并与组合进行测试。发现该特定领先乌龙茶提取物(LOTE)和的组合比单独的茶提取物或更为抑制tau原纤维形成，并且还具有快速解聚预先形成的tau原纤维的能力。

还发现该特定的领先乌龙茶提取物(LOTE)与的组合比单独的茶提取物或更为抑制β-淀粉样蛋白原纤维形成，并且还具有快速解聚预先形成的淀粉样原纤维的能力。

优选的药理学试剂优选地具有治疗有效量的绒毛钩藤，其剂量范围为约10至约1,000mg/kg患者体重，更优选在约10至约100mg/kg患者体重的范围内。

所述组合物优选地具有治疗有效量的混合组合物领先乌龙茶提取物(LOTE)和其剂量范围为约0.1至约500mg/kg患者体重，更优选在约1.0至约100mg/kg患者体重的范围内。

优选的药剂还可以具有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。药剂优选地具有大于50％的原纤维抑制活性或效力。

植物物质优选由商购获得的以下构成：丸剂、片剂、囊片剂、软和硬明胶胶囊剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、vegicaps、液滴剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、茶叶袋剂、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、栓剂、无菌注射溶液剂、无菌包装粉剂、树皮束和/或树皮粉剂，其含有绒毛钩藤、其提取物或衍生物(并且可以从市售的明胶包衣的胶囊剂中获取，所述胶囊剂含有绒毛钩藤的干粉、提取物或其衍生物)与特定乌龙茶提取物组合。

本发明的一个目的是使用绒毛钩藤(也称为Una de Gato或猫爪)的树皮内部和/或根来处理/抑制淀粉样变性中淀粉样沉积、聚集和/或存留，与下文所公开的乌龙茶提取物相结合，以获得有益的治疗效果。绒毛钩藤或猫爪也被称为但不限于Paraguiayo、Garabato、Garbato casha、Tambor huasca、Una de gavilan、鹰爪、猫的指/趾甲和猫舒勒的指/趾甲。

本发明的另一个目的是提供绒毛钩藤与乌龙茶提取物(不论商业来源如何，并且无论用于人消费的最终形式如何，即丸剂、片剂、囊片剂、软和硬明胶胶囊剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、vegicaps、液滴剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、茶叶袋剂、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、栓剂、无菌注射溶液剂、无菌包装粉剂、树皮束和/或树皮粉末)用于抑制淀粉样原纤维形成、沉积、聚集和/或存留的用途，而不管其临床环境如何。

本发明应用于这些需要是特别有益的，因为本发明是唯一有效地提供来自绒毛钩藤的树皮内部和根部的提取物与特定乌龙茶提取物一起使用，以使患有淀粉样变性的人患者和年老的哺乳动物(例如随着年老而在脑中产生淀粉样“斑”的狗和猫)受益的系统，这是由于新发现的绒毛钩藤与乌龙茶提取物组合最显著和有效地抑制淀粉样原纤维形成、抑制淀粉样原纤维生长、并导致溶解和/或破坏预先形成的淀粉样原纤维的能力。

还公开了一种用于治疗患者中的tau蛋白病的方法，其包括向患者施用治疗有效量的植物物质的步骤，所述植物物质来自绒毛种钩藤属的植物，与乌龙茶提取物组合。所述植物物质优选口服施用，例如以口服胶囊、饮料制剂或任何其它方法，或通过气溶胶喷雾或肠胃外可注射或不可渗透的形式。

附图简述

本专利或申请文件包含至少一幅彩色附图。本专利或专利申请公布的副本将由专利局根据要求并支付必要的费用提供。

图1用领先乌龙茶提取物(LOTE)和孵育后通过硫黄素T荧光测定法和刚果红结合测量的Aβ1-42聚集图

图2A-C刚果红、硫黄素S的代表性图和Aβ原纤维+/-LOTE和的电子显微照片

图3用LOTE和孵育后，通过硫黄素T荧光测定和刚果红结合测量的Aβ1-40聚集图

图4用增加浓度的LOTE和处理后的Aβ1-40的圆二色性光谱

图5A-G来自各种内部测试的数据用于表征筛选Tau聚集抑制剂的TauRD原纤维。

图6用茶提取物孵育后，通过硫黄素S荧光测定测量的tau聚集图。

图7用LOTE和PTI-00703孵育后，通过硫黄素S荧光测定测量的tau聚集图。

图8用LOTE处理后，通过圆二色性光谱测量的tau二级结构图。

图9利用PTI-00703和LOTE的tau原纤维形成的电子显微照片。

图10用PTI-00703和LOTE处理的预先形成的tau原纤维的电子显微照片。

详述

“治疗有效量”通常是指当施用于受试者或动物以治疗疾病时足以影响所需疾病治疗程度的量。“治疗有效量”或“治疗有效剂量”优选相对于未经处理的受试者抑制、减少、破坏、分解tau原纤维形成、沉积、聚集和/或存留，或处理与这些病症相关的疾病(例如，tau蛋白病)至少20％、更优选至少40％、甚至更优选至少60％、还更优选至少80％。用于处理哺乳动物受试者的本发明化合物或其组合物的有效量为约0.1至约1000mg/Kg受试者体重/天，例如约1至约100mg/Kg/天，特别是约10至约100mg/Kg/天。认为所公开的组合物剂量的广泛范围是安全且有效的。

适于用本发明组合物处理的“淀粉样病”或“淀粉样变性”是与淀粉样蛋白原纤维形成、沉积、聚集和/或存留有关的疾病，所述淀粉样蛋白原纤维特别是选自以下的淀粉样蛋白的原纤维：β-淀粉样蛋白或Αβ、AA淀粉样、AL淀粉样、IAPP淀粉样、PrP淀粉样、α2-微球蛋白淀粉样、转甲状腺素蛋白、前白蛋白和降钙素原，特别是Aβ和IAPP淀粉样。合适的这样的疾病包括阿尔茨海默氏病、唐氏综合症、轻度认知损伤(MCI)、犬认知性功能障碍(CDD)、创伤性脑损伤(TBI)、慢性创伤性脑病(CTE)、脑震荡、听力创伤、对头部的单次和多次打击、创伤后应激障碍、拳击员痴呆、多系统萎缩、包涵体肌炎、伴有荷兰型淀粉样变性的遗传性脑出血、C型尼曼-皮克病、脑β-淀粉样血管病、与皮质基底变性相关的痴呆、2型糖尿病的淀粉样变性、慢性炎症的淀粉样变性、恶性和家族性地中海热的淀粉样变性、多发性骨髓瘤和B细胞性恶液质的淀粉样变性、朊病毒病的淀粉样变性、克-雅病、格-施综合征、库鲁病、瘙痒病、与腕管综合征相关的淀粉样变性、老年性心脏淀粉样变性、家族性淀粉样变性多发性神经病以及与内分泌肿瘤相关的淀粉样变性。

“原纤维生成”是指tau原纤维、细丝、包涵体、沉积物、包涵体等的形成、沉积、聚集和/或存留。

“抑制原纤维生成”是指抑制此类淀粉样“斑”或tau“缠结”原纤维样沉积物的形成、沉积、聚集和/或存留。

“破坏原纤维或原纤维生成”是指破坏通常存在于预占优势的β-片二级结构中的预先形成的β-淀粉样或tau原纤维。通过本发明化合物进行的这样的破坏可以包括通过各种方法例如圆二色性光谱、硫黄素S荧光测定、SDS-PAGE/蛋白质印迹或负染色电子显微镜评估的β-淀粉样或tau原纤维的显著减少或分解，如本申请中提供的实施例所证实的。

“哺乳动物”包括人和非人哺乳动物两者，例如伴侣动物(狗、猫等)、实验室动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠等)和农场动物(牛、马、羊、山羊、猪等)。

“斑”是指在作为脑老化、轻度认知损伤(MCI)、阿尔茨海默氏病的病理学标志的脑的各个区域(包括海马、脑皮质、额叶皮质等)中发现的由β-淀粉样蛋白或Aβ组成的肉丸状“淀粉样沉积物”，并且发现于老化的哺乳动物例如狗、猫(称为犬认知性功能障碍或CDD)、猴、北极熊、马等中。认为淀粉样“斑”在脑中的聚集导致神经变性、突触和神经元之间的连接丧失、认知衰退、记忆衰退和丧失，以及集中和专注的丧失。

“缠结”是指在作为脑老化、轻度认知损伤、阿尔茨海默氏病、脑震荡、创伤性脑损伤(TBI)、对头部的单次和反复打击、创伤后应激障碍、慢性创伤性脑病(CTE)等的病理学标志的脑的各个区域(包括海马、脑皮质、额叶皮质等)中发现的由tau蛋白组成的“干的”条状“缠结沉积物”。

适于用本发明化合物处理的“Tau蛋白病”也是与tau原纤维的形成、沉积、聚集或存留有关的疾病。合适的疾病包括阿尔茨海默氏病、具有tau包涵体(FTLD-tau)的额颞叶变性(例如皮克氏病)、进行性核上性麻痹和皮质基底变性、嗜银颗粒病(agyrophillic graindisease)、一些朊病毒病、关岛型肌萎缩性侧索硬化症/帕金森综合征-痴呆复合征(也称为Lytico Bodig病)、拳击员痴呆、慢性创伤性脑病、帕金森氏病以及特别是帕金森氏病的一些遗传形式、缠结主导型痴呆(神经原纤维缠结类似于阿尔茨海默氏病，但没有淀粉样斑)。

Tau原纤维是通用术语，其指的是均具有共同形态特性、染色特征和x射线衍射光谱的一组不同但特异性的细胞内或细胞外蛋白质沉积物。

疾病的“处理”包括在可能易患疾病但尚未经历或出现疾病症状的哺乳动物中防止发生疾病(预防性处理)。处理也可以意指抑制疾病(减缓或阻止其发展)、提供疾病的症状或副作用的减轻(包括姑息处理)，以及缓解疾病(使疾病消退)，例如通过破坏预先形成的tau原纤维。处理不需要绝对。一种这样的预防性处理可以使用所公开的化合物来处理轻度认知损伤(MCI)。

也称为“de Gato”(西班牙语)或“猫爪”(英文)的植物绒毛钩藤是指在秘鲁亚马逊雨林内生长的木本藤蔓。这种缓慢生长的藤蔓需要20年的时间才能达到成熟，并且随着它附着并包裹在本地树上可以生长至长达100多英尺。它在海拔二至八千英尺的丘陵地发现了很多。该藤蔓被称为“猫爪”，这是因为其独特的弯曲的爪状刺从其叶子的基部突出。绒毛钩藤预期具有免疫支持、抗炎、抗病毒、抗诱变和抗氧化特性。例如，预期抗炎特性对处理关节炎、风湿病、滑囊炎和痛风有益处。不受理论的约束，认为处理关节炎疼痛的有益效果可能部分是由于其清洁消化道并有助于从体内除去毒素的能力。此外，绒毛钩藤或猫爪预期会减轻疼痛，并且预期有助于减轻与例如化疗、放射处理和AZT使用相关的疼痛。

绒毛钩藤或猫爪也预期可用于在AID患者中阻止病毒感染、在早期停止病毒感染、对抗机会性感染并减小一些皮肤肿瘤和囊肿的存活大小。绒毛钩藤还可用于处理各种状况，包括癌症、AID、克罗恩病、呼吸道感染、变态反应、疱疹、前列腺问题、狼疮、EB病毒、慢性疲劳综合征以及各种胃肠障碍。

对于绒毛钩藤的其它和进一步信息和背景，读者还可参考发明人的WIPO国际公开号WO98/51302，其全部内容通过引用并入本文。

其它方面和利用

本发明的另一个实施方案是在施用于患者之前在一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂中配制含有绒毛钩藤和乌龙茶提取物的药物共混物。

在另一个实施方案中，可以使用合适的载体、赋形剂和稀释剂(包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水浆、甲基纤维素、苯甲酸甲酯和苯甲酸丙基羟基酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油)进一步调制任何形式市售获得的绒毛钩藤。制剂还可包括润滑剂、润湿剂、乳化剂和混悬剂、防腐剂、甜味剂或调味剂。本发明的组合物可以配制成在施用于患者后提供活性成分的快速、持续或延迟的反应。所述组合物优选配制成单位剂量形式，每个剂量含有约1至约10,000mg的绒毛钩藤(或其活性成分)，更通常为约500至约2,000mg的绒毛钩藤(或其活性成分)。

然而，应当理解，施用的治疗剂量将由医师根据包括待治疗的临床病症、受tau原纤维聚集影响或怀疑受到影响的器官或组织以及所选施用途径的相关情况来确定。因此，上述剂量范围无意于以任何方式限制本发明的范围。

术语“单位剂型”是指适合于人受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位含有计算产生所需治疗效果的预定量的与合适的药物载体相结合的活性物质。

由于新发现的绒毛钩藤与乌龙茶提取物组合抑制tau原纤维形成、抑制tau原纤维生长、抑制tau原纤维蛋白多糖相互作用、抑制tau原纤维-糖胺聚糖相互作用并引起预先形成的tau原纤维的溶解和/或破坏的能力，使用来自绒毛钩藤的树皮内部和根部的提取物及其混合物有益于患tau蛋白病的人患者。

组合物和施用

通常，通过本领域已知的任何通常方式，将分离的和/或纯化的绒毛钩藤和乌龙茶植物提取物以治疗有效量的单独或与至少一种公开的提取物组合施用。施用将通过以下途径之一：口服、局部和合成(例如，透皮、鼻内或栓剂)或肠胃外(例如肌内、皮下或静脉内注射)。组合物可以采取片剂、丸剂、胶囊剂、半固体剂、粉剂、缓释制剂、溶液剂、混悬剂、酏剂、气雾剂或任何其它合适的组合物的形式，并且包含至少一种药学上可接受的赋形剂。合适的赋形剂是本领域普通技术人员公知的，并且它们和配制组合物的方法可以在标准参考文献中找到，如Alfonso A R：Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company，Easton，Pa，1985。合适的液体载体，特别是用于注射溶液剂的液体载体，包括水、盐水溶液、葡萄糖水溶液和醇类。

特别地，化合物可以口服施用，例如作为片剂、糖衣剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂、糖浆剂或酏剂。在一个实施方案中，只有一种这样的化合物以任何特定的剂型施用。旨在用于口服使用的组合物可以制备为本领域已知的用于制备营养组合物的任何方法，并且这样的组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以便提供营养雅致和可口的制剂。

片剂含有与适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的植物提取物。这些赋形剂包括例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如玉米淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁或硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者它们可以通过已知技术进行包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时间内提供存留的作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。也可以将口服使用的制剂制备成硬明胶胶囊，其中将化合物与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊混合，其中将活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

水性混悬剂包含与适于制备水性混悬剂的赋形剂混合的化合物。这样的赋形剂包括例如混悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；以及作为天然磷脂的分散和润湿剂，例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物；例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七烷基乙氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸例如己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨醇单油酸酯。水性混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和/或一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。

油状混悬剂可以通过将提取物混悬在植物油中来配制，所述植物油例如油菜籽油、橄榄油、芝麻油或椰子油中，或在矿物油例如液体石蜡中。油性混悬剂可以含有增稠剂，例如蜂蜡、手蜡或鲸蜡醇。可以加入例如如下所述的甜味剂和矫味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂(例如，抗坏血酸)来保存。

适于通过加入水制备水性混悬剂的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、混悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和混悬剂通过上文已经描述的那些来例示。还可以存在其它赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和试剂。

植物提取物也可以是水包油乳剂的形式。植物油(例如，橄榄油或花生油)或矿物油的油相，例如液体石蜡或其混合物。合适的乳化剂可以是天然树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶、天然磷脂例如大豆、卵磷脂和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如与环氧乙烷的脱水山梨糖醇酯，例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。所述乳剂还可含有甜味剂和矫味剂。糖浆剂和酏剂可以用甜味剂(例如甘油、山梨糖醇或蔗糖)来配制。这样的制剂还可以含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。

以下非限制性实施例仅以说明的方式给出，并不应认为限制本公开，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，其许多明显的变化是可能的。

实施例

组合物制备

对于这些研究，从各供应商获得市售的茶叶或提取物。为了从茶叶中提取茶提取物，将2g茶叶在100℃去离子水中提取20分钟，偶尔混合。通过>10μm截止过滤器过滤茶提取物以除去大颗粒物。在干冰/乙醇中快速冷冻提取物，然后冻干，得到干燥的浓缩粉末。对干燥粉末称重并重悬于DMSO中以制备浓缩的100mg/ml储液。将储液稀释成聚集反应物，使得DMSO在最终反应物中的浓度小于0.28％。

由乌龙茶(AuNutra Industries Inc.，Chino，CA)制备LOTE。是一种由秘鲁绒毛钩藤树皮内部(RFI Ingredients，Blauvelt，NY)的水提取物制成的粉末提取物。已经描述了用于制备的方法，例如在WIPO国际公开号W098/51302中。乌龙茶和/或绒毛钩藤的乙醇提取物在本发明的范围内。

实施例1：本发明的组合物是阿尔茨海默氏Aβ原纤维或聚集物的有效破坏剂/抑制 剂

发现所述组合物是Aβ蛋白原纤维或聚集物的有效破坏剂/抑制剂。在一组研究中，对组合物引起阿尔茨海默氏病的预先形成的淀粉样原纤维分解/破坏/解聚的效力(即，由Aβ1-42或Aβ1-40组成)进行了分析。

A部分：硫黄素T荧光测定法

在该研究中，采用硫黄素T荧光测定法来确定组合物的作用。硫黄素T特异性结合纤维状淀粉样，并且该结合在485nm处产生与形成的淀粉样原纤维量成正比的荧光增强。荧光越高，形成的淀粉样原纤维的量越多(Nakai等，Lab.Invest.65：104-110,1991；LevineIII，Protein Sci.2：404-410,1993；Amyloid Tnt.J.Exp.Med.Clin.Invest.2:1-6,1995)。

在该研究中，将40μl的1mg/ml溶液(在蒸馏水中)或预纤维化的人Aβ1-42(rPeptide)在37℃下单独(对照)或在LOTE+(受试组合物：Aβ重量比为1:1和1:0.1)(称为“Cognitive Clarity^TM”)的存在下孵育3天。反应物中的Aβ的最终浓度为在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中为0.4mg/ml(88μM)，pH 7.4+0.02％叠氮化钠在100μl终体积中。在共孵育3天后，将12.5μl的每种孵育混合物转移到含有37.5μl PBS和200μl硫黄素T溶液(即，125μM硫黄素T在62.5mM磷酸盐缓冲液中，pH6.8)的96孔微量滴定板。减去单独缓冲液或作为空白的单独的组合物后，使用ELISA板荧光计在485nm(444nm激发波长)处读取发射荧光。

3天孵育的结果示于图1中。用“Cognitive Clarity”(即 的组合)孵育Aβ1-42引起剂量依赖性破坏

预先形成的Aβ1-42原纤维的分解/解聚。在受试组合物：Αβ重量比为0.1：1时，LOTE+PTI-00703抑制62.8％的原纤维。在等重量当量(受试组合物：Aβ重量比为1:1)时，对硫黄素T荧光的抑制为93.6％。该研究表明，该独特的组合是Aβ原纤维型阿尔茨海默氏病的有效的破坏剂/抑制剂，并以剂量依赖的方式发挥其作用。

B部分：刚果红

在刚果红结合测定中，对受试组合物改变β-淀粉样与刚果红结合的能力进行量化。在该测定中，将Aβ1-42(如为硫黄素T测定法制备的)单独(对照)或用增加量的受试组合物孵育3天，然后通过0.2μm过滤器进行真空过滤。然后用刚果红(125μM刚果红，100mMTris，50mM NaCl，pH7)染色过滤器后，对过滤器中保留的Aβ1-42的量进行定量。在适当洗涤过滤器后，在受试组合物存在下，过滤器上刚果红色的任何降低(与不存在受试组合物的情况下淀粉样蛋白的刚果红染色相比)指示受试组合物减少/改变聚集的和亲和的Aβ的量的能力。

在一项研究中，在不存在或存在增加量的(受试组合物：Aβ比例为1:1和0.1:1时)的情况下测定Aβ原纤维结合刚果红的能力。3天孵育的结果如图1所示。引起Αβ与刚果红结合的剂量依赖性抑制。在受试组合物：Αβ重量比为0.1:1时，抑制20.9％的刚果红结合(p<0.001)。在等重量当量(受试组合物：Aβ重量比为1:1)时，刚果红结合的抑制为58.6％(p<0.001)。

类似于刚果红结合测定的结果，该研究还表明，特定的领先乌龙茶提取物(LOTE)和的该组合是如通过硫黄素T荧光测定法评估的Aβ原纤维的有效破坏剂/抑制剂，并且以剂量依赖的方式发挥其作用(图1)。的组合在受试组合物：Aβ重量比为0.1:1(图1)时引起硫黄素T结合剂量依赖性降低70％(p<0.001)(表明Aβ原纤维的破坏/减少)，而在受试组合物：Aβ重量比为1:1(图1)时为95％。

C部分：基于载玻片的刚果红结合、硫黄素S和电子显微镜

在基于载玻片的刚果红评估中，用Aβ1-42孵育刚果红染料，点在载玻片上，并在偏振光下成像。由刚果红结合的淀粉样原纤维在偏振光下发出特征性“苹果-绿色双折射光”。在本研究中，将在有或无受试组合物的情况下，将预纤维化的0.4mg/ml Aβ1-42(为硫代黄素T评估制备)孵育3天。将10μl刚果红溶液(溶解在1L dH20中的250mg刚果红染料(54％纯；Sigma))加入到10μl的Aβ1-42-/+受试组合物中，并通过涡旋混合30秒。用刚果红溶液在室温下孵育样品10分钟。然后将样品以2000g离心3分钟，并除去10μl上清液。将2μl甘油加入沉淀中并通过上下移液混合15次。涡旋样品，然后将10μl染色的蛋白质点在18孔5MM HTC(R)可高压灭菌的蓝色载玻片上。用小圆形盖玻片覆盖样品，然后立即在偏振光下成像。用配备了带有Q-成像Retiga 1300数码相机的HBO 100照明器的Zeiss Axioscope 2Plus显微镜捕获图像。

在图2A(左图)中，代表性图示出未经处理的Aβ1-42具有特征性的苹果-绿色双折射并且大量的原纤维蛋白均匀分布在视野内。在图2A(右图)中，用LOTE+PTI-00703(与Αβ42为0.1:1重量比)处理导致刚果红染色的原纤维实质上较少，证实植物提取物组合可以减少和分解/溶解预先形成的Aβ1-42预先形成的原纤维。

与硫黄素T相似，硫黄素S是与纤维状淀粉样蛋白结合的相关阴离子染料，并且可用于检测与玻璃显微镜载玻片结合的纤维状蛋白。在本研究中，将具有或不具有受试组合物的预纤维化的Aβ1-42(如针对硫黄素T评估制备的)孵育3天。将4μl的0.4mg/mlΑβ1-42-/+受试组合物点在18孔5MM HTC(R)高压灭菌的蓝色载玻片上。使样品风干2小时。将10μl的硫黄素S溶液(31mg硫黄素S溶于50mL dH2O中)缓慢地加到载玻片上的干燥蛋白质上。将蛋白质染色1分钟，然后用移液管取出硫黄素溶液。将40μl的70％乙醇溶液轻轻移液到染色的蛋白质上1分钟以冲洗。用移液管轻轻取出该溶液。将2μl的Vectashield(Vector)载体介质加到染色的蛋白质上，然后用圆形盖玻片覆盖。在荧光灯下观看图像，并使用配备了带有Q-成像Retiga 1300数码相机的HBO 100照明器的Zeiss Axioscope 2Plus显微镜捕获图像。

在图2B(左图)中，未经处理的Aβ1-42的代表性图示出大量的硫黄素S荧光原纤维均匀分布在视野内。用(与Αβ1-42为0.1:1重量比)孵育预先形成的Αβ1-42原纤维72小时示出荧光原纤维显著减少(图2B，右图)。

在图2B(右图)中，代表性图示出用LOTE+PTI-00703处理，硫黄素S-荧光原纤维消失。

采用负染色电子显微术(EM)分析来独立监测不同组合物破坏预先形成的Aβ原纤维的有效性。在这些实验中，在不存在(对照)或存在增加浓度的受试组合物的情况下孵育预先形成的Aβ1-42原纤维(如针对硫黄素T测定法制备的)。在孵育3天后，将10μl的样品点到网格上，用2％的乙酸双氧铀染色，并用JEOL 1010透射电子显微镜以8,000×至30,000×放大率可视化。

在图2C(下图)中，EM分析确认了在不存在处理的情况下Aβ原纤维的形成(即，图2C，对照)。在没有处理的情况下(2C，左图)，Aβ形成了大块原纤维，均匀地覆盖了该区域。还通过硫黄素T评估对这些样品进行了测试，并确认是硫黄素T荧光阳性原纤维。在 的存在下(图2C，右图)，成块的Aβ原纤维的数目显著减少并溶解。这些结果与示出利用处理硫黄素T荧光减少的硫黄素T的荧光测定数据及示出利用处理刚果红结合减少的刚果红结合数据密切相关。使用这些独立的方法，我们已经确定并验证了与组合的领先乌龙茶提取物(LOTE)(即 )作为有效的Aβ破坏剂/抑制剂。

实施例2：本发明的组合物直接抑制/破坏Aβ在体外转化为含有β片的原纤维结构

A部分：硫黄素T荧光法

为了测试是否能抑制Aβ的β片形成，采用与实施例1中所述相同的硫黄素T测定法，但代替的是用Aβ1-40作为底物。与Aβ1-42相似，Aβ1-40形成硫黄素T阳性聚集物，但需要在37℃下孵育>24小时，振荡使其完全成纤维化。由于Aβ1-40在评估开始时处于非纤维状状态，所以该蛋白质可以在组合物存在下聚集以测量聚集抑制。将冻干的人Aβ1-40(rPeptide)在dH2O中溶解至1mg/mL(220μM)。在单独的试管中，在PBS中制备各种浓度的受试组合物储液，使得含有相等体积的受试组合物储液和Aβ溶液的最终反应将导致最终的Aβ浓度为0.5mg/mL(110μM)，受试组合物：Aβ重量比为1:1、0.5:1、1:1和0.2:1。然后将包含Aβ+受试组合物的反应(或作为Aβ聚集的对照的Aβ+PBS)孵育2天。将孵育混合物以1:10稀释至0.05mg/mL。将Aβ和50μl每种稀释的孵育混合物转移到含有200μL硫黄素T溶液(即，62.5mM磷酸盐缓冲液中的125μM硫黄素T，pH6.8)的96孔微量滴定板中。减去单独的PBS缓冲液或作为空白的单独的组合物后，使用ELISA板荧光计在485nm(444nm激发波长)处读取荧光。

图3中所示的该研究的结果表明本发明的干扰了Aβ聚集，如通过硫黄素T荧光素评估的其防止原纤维形成的能力所示。在受试组合物：Αβ重量比为0.2:1时，抑制14.1％的原纤维，而在0.5:1时，抑制73％的原纤维(p<0.001)。在相等重量当量(受试组合物：Aβ重量比为1:1)时，磺黄素T荧光的抑制为89.3％(p<0.001)。本研究表明，如通过硫黄素T荧光测定评估的，是富含β片的Aβ原纤维形成的有效抑制剂，并且该组合以剂量依赖的方式发挥其作用。

B部分：刚果红

为了测试是否能够抑制Aβ的β片形成，采用与实施例1中所述相同的刚果红测定法，但代替的是以Aβ1-40作为底物。在该测定中，将Aβ1-40(针对ThioT测定法制备)和受试组合物孵育2天，然后通过0.2μm过滤器真空过滤。然后，用刚果红(125μM刚果红，100mM Tris，50mM NaCl，pH 7)对过滤器进行染色后，对保留在过滤器中的Aβ1-40的量进行定量。在适当洗涤过滤器后，在受试组合物的存在下，过滤器上刚果红色的任何降低(与不存在受试组合物的情况下淀粉样蛋白的刚果红染色相比)表明受试组合物减少/改变聚集和亲和的Aβ的量的能力。

在一项研究中，在不存在或存在增加量的的情况下(在受试组合物：Aβ的重量比为1:1、0.5:1和0.2:1时)，测定Aβ原纤维结合刚果红的能力。2天孵育的结果如图3所示。 引起对刚果红的Aβ结合的剂量依赖性抑制。在受试组合物：Αβ重量比为0.2：1时，LOTE+PTI-00703抑制41.7％的刚果红结合，而在0.5:1时，抑制62.5％的刚果红结合(p<0.001)。在等重量当量(受试组合物：Aβ重量比为1:1)时，刚果红结合的抑制为83.3％(p<0.001)。与硫黄素T荧光测定法的评估类似，本研究还表明，如通过Aβ原纤维结合刚果红评估的， 是Aβ原纤维的有效抑制剂，并且以剂量依赖的方式发挥其作用。

C部分：CD光谱

进行CD光谱以确定在易发生聚集的情况下抑制Aβ1-40β片二级结构形成的效力。由于β片结构是Aβ原纤维的特征，因此监测蛋白质的二级结构可以提供组合物抑制聚集的有效性的额外证明。在25℃下，在JASCO J-810型旋光分光计上分析具有增加的-/+浓度组合物的Aβ1-40样品的CD光谱。并从相同的样品制备中平行分析CD光谱和Thio T评估，以便将来自两个独立评估的结果相关联。

在图4中，用处理的Aβ1-40的CD光谱表明含β-片的原纤维的剂量依赖性抑制。在218nm处的最小值表明β片结构的存在。在218nm处的椭率的正向偏移表示较少的β片结构。在受试组合物：Αβ重量比为0.2:1时，证实与未处理的相比减少了30.9％。0.5:1的示出与对照相比减少了53.9％的β片结构。在相等重量当量(受试组合物：Aβ重量比为1:1)时，与对照相比减少了64.8％的β片结构。

这些数据验证了具有显著的抑制Aβ异常组装成原纤维状、β片装配体的能力，并以更少的病原形式维持Aβ1-40。

使用重组Tau重复结构域进行Tau聚集抑制剂的体外筛选

在体外筛选以鉴定tau聚集抑制剂期间，我们发现在相同的实验条件下，商业购买的全长tau蛋白(Tau441；来自rPeptide)的成对螺旋丝(PHF)的形成(>11天；数据未示出)比来自tau重复结构域(TauRD；含有Tau441的Q244-E372)(≥24小时)(S.Barghorn等，MethodsMol Biol，299：35-51,2005)的那些慢得多。

由于非常短的周转时间和共同的聚集特性，我们使用TauRD进行体外筛选以鉴定本发明的tau聚集抑制剂。由于TauRD蛋白不是商业上可获得的，所以我们为该项目生产了自己的蛋白质。将编码人TauRD的cDNA片段克隆到细菌表达载体中，然后在大肠杆菌中表达构建体。然后选择表现出高水平TauRD表达的细菌克隆进行蛋白质纯化。接着通过热稳定性处理和阳离子交换色谱纯化重组TauRD蛋白，如稍加修改的(S.Barghorn等，Methods MolBiol，299：35-51,2005)所述。采用该方法，我们实现了每升细菌培养物的蛋白质产量为20mg)。通过独立评估评价和验证经纯化TauRD的聚集和PHF形成，所述独立评估包括硫黄素S(ThioS)荧光测定法、结合原纤维后荧光的染料(图5D)、圆二色性(CD)光谱法(检测蛋白质二级结构变化的方法，图5B和5C)以及电子显微镜(图5E-G)。这些结果一致地证实，在37℃下用等摩尔肝素(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)孵育同时以800至1000rpm振荡≥1天时，TauRD(10μM)能够形成含ThioS阳性、β片的PHF。

在图5A中，通过SDS-PAGE/银染以>95％的典型纯度评价用大肠杆菌纯化的TauRD(15kDa)蛋白。图5B-C是未聚集的TauRD蛋白和聚集的TauRD蛋白的CD光谱的实例。在等摩尔(10μΜ)比的TauRD和肝素的存在下于20mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)中，在37℃下振荡孵育0-120h制备TauRD聚集物。在不存在肝素的情况下，未聚集的TauRD的CD光谱是在195nm处具有椭率最小值的无规卷曲(图5B)。在肝素存在下，CD光谱示出在20-120h(图5C)，TauRD蛋白从时间0的无规卷曲(最小值在195nm处)到β片(最小值在218nm处)的时间依赖性构象变化。图5D是通过ThioS荧光测定随时间推移监测的TauRD聚集的实例。图5D中的结果示出孵育20小时后ThioS阳性TauRD原纤维的形成。在不存在没有原纤维形成的肝素的情况下，tauRDThioS信号在所有时间点都是<200任意单位(A.U.)的荧光。通过图5E-G中的负染色EM确认Tau原纤维形成。代表性图示出用肝素孵育48小时后Tau原纤维的形成。图5E示出时间0时的TauRD单体(标尺(Bar)＝200nm)。图5F-G示出在48小时时形成TauRD原纤维(标尺＝50nm)。发现直的和成对的螺旋丝两者。

实施例3：通过硫黄素S荧光测定法筛选鉴定新型Tau聚集抑制剂

用于测量原纤维形成的公知方法是硫黄素T(ThioT)荧光测定法(H.Naiki等，Lab.Invest.65:104-110,1991；H.Levine III，Protein Sci.2:404-410，1993；H.LevineIII，Amyloid 2：1-6,1995；H.Naiki和K.Nakakuki，Lab.Invest.74：374-383,1996)。已知ThioT结合原纤维蛋白，并且荧光增加与原纤维形成的增加相关，而荧光的减少与由分解和/或破坏引起的原纤维减少相关。我们用一种具有相似特性的相关阴离子染料硫黄素S(ThioS)代替ThioT来改良，因为硫黄素S已被证明更灵敏，并且可重复用于定量Tau PHF(数据未示出；P.Friedhoff等，Biochemistry，37(28)：10223-30,1998)。采用ThioS荧光测定法来评估上述混合组合物是否能够引起原纤维分解/破坏。

在等摩尔比的TauRD和肝素(各10μM)在20mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)中的存在下制备聚集的tau原纤维。在37℃下孵育反应混合物并振荡(800-1000rpm)24小时至72小时。用0.14mg/ml TauRD与肝素以不同重量:重量浓度测试受试组合物。平行设置不含TauRD的相同反应混合物(+增加浓度的受试组合物)以用作背景对照。对于所有受试化合物，背景ThioS荧光读数非常低，通常为含TauRD的孔的<5％。

在24至72小时的共孵育后，将50μl每种孵育混合物转移到含50μl磷酸盐缓冲盐水(PBS；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)和25μl硫黄素S溶液(500mM硫黄素S；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，PBS，pH 7.4)的黑色96孔微量滴定板(Santa Cruz Biotechnology，Inc.，Dallas，TX)中。使用ELISA板荧光计，在减去单独缓冲液或单独使用组合物作为空白后，在485nm(444nm激发波长)处读取荧光。

使用Prism版本5软件(GraphPad Software)通过非线性回归[(Log[抑制剂]对标准化响应；变量斜率)]计算tau聚集抑制50％，IC₅₀。在初步筛选中，受试化合物表现出广泛的抑制tau蛋白原纤维形成的活性：IC₅₀值范围为<14mg/ml(小于或等于评估中tauRD的浓度)至无穷大(即，完全没有活性)。结果表明，抑制活性是受试对象特异性的。还对几个样品破坏预先形成的tau原纤维的能力进行了测试(破坏测定)。

对超过25种茶提取物对ThioS阳性tau聚集物的抑制进行了测试。大多数茶是乌龙茶提取物。图6是在几种乌龙茶提取物、甘菊茶和绿茶的存在下聚集的tau的ThioS荧光的实例。用0.14mg/mL(10μM)tauRD和等摩尔肝素孵育增加浓度的提取物24至72小时，在37℃以1000rpm振荡。领先乌龙茶提取物(LOTE)比其他乌龙茶、甘菊茶或绿茶提取物更为抑制tau聚集物。LOTE以0.23:1的组合物:tau(重量:重量)抑制tau聚集50％(IC₅₀)。该实验表明，LOTE具有超过其他组合物的抑制tau异常组装成原纤维、致病性装配体的优异能力。

在鉴定出具有优异的tau聚集抑制作用的茶提取物之后，在tau聚集抑制评估中将领先乌龙茶提取物(LOTE)单独或与组合孵育。特定的乌龙茶和的组合与单独的LOTE或相比更为抑制ThioS阳性tau聚集物(*通过配对t检验显著，p<0.05)(图7)。该领先乌龙茶提取物与的组合是tau聚集/纤维生成的有效抑制剂，其可用作tau蛋白病的新型治疗剂。

实施例4.通过圆二色性(CD)光谱分析蛋白质二级结构确认由领先乌龙茶提取物 抑制Tau聚集

CD是提供蛋白质的结构已经改变的与染料无关的确认的强有力方法。CD测量左旋和右旋圆偏振光之间的吸收差。蛋白质含有表现出以椭率为单位测量的不同CD信号的不对称元素。硫黄素S荧光、tau聚集物具有218nm的椭率最小值，这是含有β片的蛋白质的特征。非聚集的tau具有在195nm处的特征性椭率最小值，表明无规卷曲结构。进行CD光谱测定以确定每种组合物在易发生聚集的条件下在TauRD中抑制β片二级结构形成的效力。用增加浓度的化合物由含+/-TauRD的样品获取CD光谱，并在25℃下于JASCO J-810型旋光分光计上分析。由相同的样品制备物平行分析CD光谱和ThioS测定，以便将来自两个独立评估的结果相关联。

在图8中，用领先乌龙茶提取物(LOTE)或甘菊茶提取物处理tau 48小时。用LOTE处理的Tau剂量依赖性地抑制转化为含有β片的原纤维。在最高浓度的LOTE处理下，tau保持可溶性、无规卷曲形式，最小值在约195nm。相反，在最高浓度的甘菊茶提取物处理下，tau仍然变成与未处理对照类似的聚集的β片结构。这些数据确认，LOTE相对于其他组合物具有抑制tau异构组装成纤维状、β片装配体并维持非致病性可溶性无规卷曲形式的tau的显著能力。

实施例5：通过负染色显微术(EM)测定的PTI-00703+LOTE抑制Tau蛋白原纤维生成 和预先形成的Tau原纤维解聚

采用EM分析独立监测组合物抑制tau纤维生成的有效性。在这些实验中，通过在不存在(对照)或存在增加浓度的受试组合物的情况下孵育等摩尔比的TauRD蛋白和肝素(各10μM)来装配tau原纤维。孵育2天后，将样品点到网格上，用2％乙酸双氧铀染色，并用JEOL1010透射电子显微镜以8,000×至30,000×放大率可视化。

在图9的左图中，EM分析确认在不存在处理的情况下tau原纤维的形成。在没有处理的情况下，tau形成了与人tau蛋白病中发现的那些相似的成对的直的和螺旋丝的混合物(V.M.Lee等，Ann.Rev.Neurosci.24：1121-159,2001)。还通过ThioS评估和CD对这些样品进行了测试，并且确认为ThioS荧光阳性和β片结构。在和(图9，中图和右图)的存在下，tau原纤维变短和稀疏，表明tau原纤维形成的抑制。在用和LOTE两者处理的tau样品中，很明显原纤维甚至更少。这些结果与示出ThioS荧光减少和β片结构减少的ThioS荧光测定和CD分析密切相关。使用三种独立的方法，我们已经确定和验证了PTI-00703+领先乌龙茶提取物作为tau聚集/微纤维生成的有效抑制剂。

利用EM分析，预先形成的tau原纤维示出在和LOTE两者的存在下快速解聚。用等摩尔肝素孵育TauRD以形成原纤维，如先前评估中所述。用或不用受试组合物稀释TauRD，并在37℃下以各种时间点振荡孵育。在每个时间点，评估tauRD+/-受试化合物的ThioS荧光并快速冷冻用于EM分析。在无处理的图10(左图)中，预纤维化的tau保留在长丝中。在下一个图中，发现预纤维化的tau在的存在下快速解聚。在早至用 孵育的15分钟，tau原纤维比无处理的更短且更稀疏。通过ThioS测定也确认了tau原纤维的破坏(数据未示出)。这些数据表明，的组合物不仅可以抑制tau聚集，还可以使预先形成的tau原纤维解聚。

实施例6： 用于改善认知和记忆的其它体内测试

采用其它体内研究测试植物提取物组合在减少脑“斑和缠结”负载以及改善认知和记忆方面的有效性。选择40至60名男性和女性进行临床研究。受试者具有年龄相关性记忆损伤(AAMI)，并预期在6个月的研究期内记忆丧失症状恶化，但在其他方面一般健康状况良好。

本研究包括安慰剂组，即受试者分为两组，其中一组接受+乌龙茶提取物组合胶囊(含有+乌龙茶提取物的两个390mg胶囊，与用餐(优选午餐)以1：1重量/重量组合)，另一组接受安慰剂(两个胶囊，包含没有研究产品活性成分的胶囊)。患者对于与轻度认知损伤(MCI)相关的记忆、认知、集中、关注、推理和其他症状进行了基准测试。试验组受试者接受治疗剂量的联合研究产品提取物或安慰剂6个月，分析短期记忆、认知、集中和专注，在处理的0、1、3和6个月检查。关于记忆、集中和专注度的准确记录保留在两组的基准症状中，并且在研究结束时，比较这些结果。结果也在每个组的成员之间进行比较。此外，将每名患者的结果与研究开始之前每名患者报告的症状进行比较。通过典型的认知衰退、短期记忆衰退、认知、集中和专注和/或与年龄相关损伤(AAMI)相关的相关行为破坏来说明组合+乌龙茶提取物研究产品的活性。

本文提供的所有参考文献和专利公开的全部内容通过引用并入本文。

Claims (24)

1.一种组合物，其包含治疗有效量的与乌龙茶提取物组合的绒毛钩藤提取物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其配制用于通过选自以下的途径之一施用：丸剂、片剂、囊片剂、软或硬明胶胶囊剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、vegicaps、液滴剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、饮料制剂、冷或热茶饮料剂、糖浆剂、茶叶袋剂、气雾剂、栓剂、无菌注射溶液剂或无菌包装粉剂。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中100mg至500mg的绒毛钩藤提取物与100mg至500mg的乌龙茶提取物组合。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中100mg至500mg的绒毛钩藤提取物与100mg至500mg的乌龙茶提取物组合，并且配制成200mg至1000mg的胶囊。

5.一种用于在有此需要的哺乳动物中处理淀粉样变性的方法，包括施用治疗有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述淀粉样变性选自阿尔茨海默氏病、唐氏综合征、拳击员痴呆、认知功能障碍综合征、犬认知功能障碍、多系统萎缩、包涵体肌炎、伴有荷兰型淀粉样变性的遗传性脑出血、C型尼曼-皮克病、脑β-淀粉样血管病、与皮质基底变性相关的痴呆、2型糖尿病的淀粉样变性、慢性炎症的淀粉样变性、恶性和家族性地中海热的淀粉样变性、多发性骨髓瘤和B细胞性恶液质的淀粉样变性、朊病毒病的淀粉样变性、克-雅病、格-施综合征、库鲁病、瘙痒病、与腕管综合征相关的淀粉样变性、老年性心脏淀粉样变性、家族性淀粉样变性多发性神经病以及与内分泌肿瘤相关的淀粉样变性。

7.一种处理淀粉样蛋白原纤维的形成、沉积、聚集或存留的方法，包括用有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物处理所述原纤维。

8.根据权利要求7所述的方法，其中将所述提取物配制用于通过选自以下的途径之一施用：丸剂、片剂、囊片剂、软或硬明胶胶囊剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、vegicaps、液滴剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、冷或热饮料制剂、糖浆剂、茶叶袋剂、气雾剂、栓剂、无菌注射溶液剂或无菌包装粉剂。

9.一种处理含有β-淀粉样蛋白的“斑”的形成、沉积、聚集或存留的方法，包括用有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物处理所述斑。

10.一种用于在有此需要的人或哺乳动物中处理tau蛋白病的方法，包括施用治疗有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述tau蛋白病选自阿尔茨海默氏病、具有tat包涵体(FLTD-tau)的额颞叶变性、皮克氏病、进行性核上性麻痹、皮质基底变性、嗜银颗粒病、朊病毒病、关岛型肌萎缩性侧索硬化症-帕金森综合征-痴呆复合征(也称为Lytico Bodig病)、帕金森氏病、缠结主导型痴呆、神经节瘤、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、多发性脑膜瘤、亚急性硬化性全脑炎、铅毒性脑病、结节性硬化症、哈-斯二氏病、脂褐质沉积症、创伤性脑损伤(TBI)、慢性创伤性脑病(CTE)、拳击员痴呆、脑震荡、单次或反复打击头部以及创伤后应激障碍。

12.一种处理含tau蛋白的缠结的形成、沉积、聚集或存留的方法，包括用有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物处理所述缠结。

13.根据权利要求11所述的方法，其中将所述提取物配制用于通过选自以下的途径之一施用：丸剂、片剂、囊片剂、软或硬明胶胶囊剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、vegicaps、液滴剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、饮料制剂、糖浆剂、茶叶袋剂、气雾剂、栓剂、无菌注射溶液剂或无菌包装粉剂。

14.一种用于改善患有淀粉样病的患者的认知表现和/或减缓认知衰退的方法，包括施用治疗量的绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物以在所述患者中减少β-淀粉样蛋白斑或原纤维的形成、沉积、聚集或存留。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的施用量为约100mg至500mg的绒毛钩藤提取物和约100mg至500mg的乌龙茶提取物。

16.一种用于在患有年龄相关记忆损伤(AAMI)、轻度认知损伤(MCI)或阿尔茨海默氏病的患者中改善学习、记忆、认知、集中和/或专注的方法，包括施用治疗有效量的绒毛钩藤提取物与乌龙茶提取物的组合。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合的施用量为约100mg至500mg的绒毛钩藤提取物和约100mg至500mg的乌龙茶提取物。

18.一种在经历过单次或多次脑震荡、创伤性脑损伤(TBI)、慢性创伤性脑病(CTE)、创伤后应激障碍、脑老化、轻度认知损伤或阿尔茨海默氏病的患者中预防、减轻或处理脑部缠结的方法。

19.根据权利要求18所述的方法，包括用有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物处理所述缠结。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合的施用量为约100mg至500mg的绒毛钩藤提取物和约100mg至500mg的乌龙茶提取物。

21.一种用于在老年狗或猫的脑中预防、减少或处理斑和缠结的方法，所述方法包括用有效量的包含绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的组合物处理所述斑”和“缠结。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的施用量为约100mg至500mg的绒毛钩藤提取物和约100mg至500mg的乌龙茶提取物。

23.一种用于在遭受斑和缠结的脑形成、沉积、聚集和/或存留的老年狗或猫中改善认知表现和/或减轻认知衰退的方法，包括施用治疗量的绒毛钩藤和乌龙茶提取物。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述绒毛钩藤提取物和乌龙茶提取物的施用量为约100mg至500mg的绒毛钩藤提取物和约100mg至500mg的乌龙茶提取物。