CN107509635A - 一种八角茴香离体组培快繁方法 - Google Patents

一种八角茴香离体组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种八角茴香离体组培快繁方法，特征是单叶互生，革质，披针形至长椭圆形，先端急尖或渐尖，基部楔形，全缘，下面被柔毛，叶脉羽状，中脉下陷，侧脉稍凸起，叶柄粗壮。花单生于叶腋，花圆球形，淡粉红色或深红色，花柱短，基部肥厚，柱头细小。瞢荚果成星芒状排列，幼时绿色，成熟时有红棕色，星状体径约3厘米，开裂。种子扁卵形，棕色有光泽。本发明以八角茴香种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得了八角茴香离体再植株，建立八角茴香组织培养快速繁殖技术体系，为节约栽培生产中的用种量,提高其药材的产量提供一条行之有效的途径。

Description

一种八角茴香离体组培快繁方法
技术领域
本发明属于培育技术领域，具体地说，涉及一种八角茴香离体组培快繁方法。
背景技术
八角茴香又名：大茴香、大料、舶茴香、八角大茴、大八角、八角。形态特征：常绿乔木，高10余米，树皮灰色至红褐色。单叶互生，革质，披针形至长椭圆形，先端急尖或渐尖，基部楔形，全缘，下面被柔毛，叶脉羽状，中脉下陷，侧脉稍凸起，叶柄粗壮。花单生于叶腋，花圆球形，淡粉红色或深红色，花柱短，基部肥厚，柱头细小。瞢荚果成星芒状排列，幼时绿色，成熟时有红棕色，星状体径约2.5~3厘米，开裂。种子扁卵形，棕色有光泽。第一次花期2~3月，果期8~9月。第二次花期在第一次果期之后，第二次果期为翌年2~3月。果实采摘后，微火烘干，或用开水浸泡片刻，待果实转红后晒干。生长环境：分布于广西、云南、广东、福建、贵州、台湾地区。此物多生长温暖多雾，湿度较大的山地。性味功能：味辛、甘、性温。温阳散寒，理气止痛。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以八角茴香种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得八角茴香离体再植株，建立八角茴香组织培养快速繁殖技术体系，设备简单，操作容易，见效快，繁育的树苗粗壮，成活率高的一种八角茴香离体组培快繁方法。
本发明的一种八角茴香组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）无菌苗的获得：选取饱满的八角茴香种子,用75%酒精消毒65s，再用0.1%升汞溶液消毒16min，最后用无菌水漂洗6次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中，接种后每天光照25小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养21天后统计萌发率，萌发培养基为：1/2MS+0.06mg/LNAA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.6cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养，接种后每天光照15小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后统计诱导率；愈伤诱导培养基为：MS+4.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA+1.2mg/L KT+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养32天后统计增殖情况；增殖培养基为：MS+2.2mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养32天后统计分化情况；分化培养基为：MS+1.2mg/LKT+2.2mg/LNAA+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养32天后统计生根情况；生根培养基为：1/2MS+1.2mg/LIBA+0.6mg/L NAA+1.2%活性炭+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，8天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:2:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,16天将薄膜揭去,然后室外培养,隔天浇一次水,移栽32天后统计成活率。
本发明的优点是：以八角茴香种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得了八角茴香离体再植株，建立八角茴香组织培养快速繁殖技术体系，为节约栽培生产中的用种量，提高其药材的产量提供了一条行之有效的途径。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
（1）无菌苗的获得：选取饱满的八角茴香种子,在超净工作台中用手术剪刀剥去种皮，用70%酒精消毒31s,再0.1%升汞溶液消毒9min,最后用无菌水漂洗4次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中。接种后置于每天光照25小时，光照强度为1200lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养21天后萌发率达到95%。所述的萌发培养基为：1/2MS+0.03mg/L NAA+16g/L蔗糖+3.6g/L琼脂，pH为5.6。
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.6cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养。接种后置于每天光照11小时，光照强度为1200lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后诱导率达到90%。愈伤诱导培养基为：MS+1.6mg/L 6-BA+0.35mg/LNAA+0.8mg/L KT+24g/L蔗糖+4.6g/L琼脂，pH为5.5。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2200lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后增殖倍数达到4.6倍。增殖培养基为：MS+1.6mg/L 6-BA+0.35mg/L NAA+20g/L蔗糖+3.9g/L琼脂，pH为5.5。
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生。接种后置于每天光照11小时，光照强度为2200lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后分化率达到90%，平均不定芽数为4.5个。分化培养基为：MS+0.8mg/LKT+1.6mg/L NAA+31g/L蔗糖+4.6g/L琼脂，pH为5.5。
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照11小时，光照强度为2200lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后生根率92%。生根培养基为：1/2MS+0.8mg/L IBA+0.25mg/L NAA+0.6%活性炭+14g/L蔗糖+3.6g/L琼脂，pH为5.5。
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，6天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:2:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,11天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽31天后成活率达到92%以上。
实施例2
（1）无菌苗的获得：选取饱满的八角茴香种子,在超净工作台中用手术剪刀剥去种皮，用75%酒精消毒46s,再0.2%升汞溶液消毒11min,最后用无菌水漂洗4次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中。接种后置于每天光照25小时，光照强度为1600lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为76%的条件下培养21天后萌发率达到100%。萌发培养基为：1/2MS+0.06mg/L NAA+19g/L蔗糖+3.9g/L琼脂，pH为5.8。
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.8cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为1400lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后诱导率达到91%。愈伤诱导培养基为：MS+2.1mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+1.7mg/L KT+29g/L蔗糖+5.6g/L琼脂，pH为5.8。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.8cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2400lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后增殖倍数达到5.0倍。增殖培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+26g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.8。
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.8cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生。接种后置于每天光照13小时，光照强度为2400lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后分化率达到92.8%，平均不定芽数为4.9个。分化培养基为：MS+1.2mg/LKT+1.8mg/L NAA+28g/L蔗糖+5.3g/L琼脂，pH为5.6。
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照15小时，光照强度为2800lx，置于培养温度为28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后生根率95.2%。生根培养基为：1/2MS+1.2mg/L IBA+0.6mg/L NAA+0.8%活性炭+18g/L蔗糖+4.3g/L琼脂，pH为5.6。
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应,4天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝2:1:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,12天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽28天后成活率达到94%。

Claims (1)

1.一种八角茴香离体组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）无菌苗的获得：选取饱满的八角茴香种子,用75%酒精消毒65s，再用0.1%升汞溶液消毒16min，最后用无菌水漂洗6次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中，接种后每天光照25小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养21天后统计萌发率，萌发培养基为：1/2MS+0.06mg/LNAA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.6cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养，接种后每天光照15小时，光照强度为2200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后统计诱导率；愈伤诱导培养基为：MS+4.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA+1.2mg/L KT+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养32天后统计增殖情况；增殖培养基为：MS+2.2mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养32天后统计分化情况；分化培养基为：MS+1.2mg/LKT+2.2mg/LNAA+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为70%的条件下培养32天后统计生根情况；生根培养基为：1/2MS+1.2mg/LIBA+0.6mg/L NAA+1.2%活性炭+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9；
（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，8天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:2:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,16天将薄膜揭去,然后室外培养,隔天浇一次水,移栽32天后统计成活率。
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