CN107501219A - 不对称姜黄色素类化合物及其在制备抗胃癌药物中的应用 - Google Patents

不对称姜黄色素类化合物及其在制备抗胃癌药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属药物化学领域，具体涉及不对称姜黄色素类化合物在制备抗胃癌药物中的应用，这些化合物可有效地抑制胃癌细胞BGC‑823、SGC‑7901和MFC的生长，抑制胃癌细胞集落的形成，抑制胃癌细胞中NF‑κB信号通路，下调抗凋亡蛋白Bcl‑2及上调凋亡蛋白Bax的表达，诱导胃癌细胞凋亡，其中，活性化合物S06能有效增敏伊立替康的抗胃癌活性，可以作为一种潜在的抗胃癌化合物。

Description

不对称姜黄色素类化合物及其在制备抗胃癌药物中的应用
技术领域
本发明属药物化学领域，具体而言，本发明涉及特定的不对称姜黄色素类化合物在抗胃癌中的应用，这些不对称姜黄色素类化合物通过抑制NF-κB，从而达到很好的抗胃癌及增敏伊利替康的抗胃癌的作用。
背景技术
胃癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤之一，在各类癌症中死亡率居第二位。手术是早期胃癌的根治性方式，然而多数患者在诊断出患有癌症时都到了晚期，失去了手术的机会，即使在早期胃癌患者根治术后，术后复发率和转移率也很高。因此，化疗在胃癌的治疗中仍然占重要地位。目前胃癌一线化疗药物仍然以伊立替康等细胞毒类药物为主。该类药物不仅毒性较大，在杀死肿瘤细胞的同时，也杀死了人体的正常细胞，而且在持续用药后会容易产生化疗敏感性降低或耐受的问题。同细胞毒类药物相比，靶向抗肿瘤药物毒性较低，是目前抗肿瘤药物研究的热点。与肺癌等其它肿瘤相比，胃癌的靶向治疗药物的研究相对滞后。因此，亟待研发新型高效低毒的靶向抗胃癌药物。
NF-κB是一种核转录因子，与炎症、免疫等多种生物学效益相关。NF-κB信号通路高度活化等异常与胃癌在内的多种肿瘤的发生、发展及肿瘤化疗耐药具有密切的相关性，抑制NF-κB对相关肿瘤具有治疗前景。尽管现在有BAY-117082、BMS-345541、吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)、锦鸡菌素和小白菊内酯等多种NF-κB抑制剂的研究报道，但大部分抑制剂均已失败，目前尚无NF-κB抑制剂药物进入临床应用。
以天然产物为先导，研发新型抗肿瘤药物是目前药物研究的热点。姜黄素和它的不对称天然类似物单去甲氧基姜黄素是姜黄色素的主要成分，有研究显示它们可以抑制NF-κB的活性起到较好的抗肿瘤作用。以姜黄素为先导设计的姜黄素类似物也具有较好的抗肿瘤活性，其中部分化合物也能够通过抑制NF-κB通路起到抗肿瘤作用，如EF24等。但目前所报道的姜黄素类似物基本为具有对称结构的化合物，如EF24、B19等。而关于具有不对称结构的姜黄素类似物较少报道，基于靶向NF-κB通路起到抗肿瘤活性的不对称结构的姜黄素类似物极少报道。本发明人经过长期的研究实践，合成获得了特定的不对称姜黄色素类化合物，它们具有很好的抗胃癌活性。
发明内容
本发明目的在于提供10个姜黄色素类化合物在制备抗胃癌药物中的应用。
本发明的另一目的是提供一种用于胃癌的药物组合物，其含有治疗有效量的作为活性成分的权利要求1所述的姜黄色素类化合物中的任何一种或其可药用盐及其药用辅料。
具体而然，本发明所述10个姜黄色素类化合物为如下所述结构：
S01的分子式为C20H16Cl2O4，化学名称为：(3E,5E)-3-(2,4-dichlorobenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S02的分子式为C20H17ClO4，化学名称为：(3E,5E)-3-(2-chlorobenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S03的分子式为C23H24O7，化学名称为：(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(2,4,6-trimethoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S04的分子式为C21H20O6，化学名称为：(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(3-hydroxy-4-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S05的分子式为C22H22O6，化学名称为：(3E,5E)-3-(2,4-dimethoxybenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S06的分子式为C22H22O6，化学名称为：(3E,5E)-3-(2,3-dimethoxybenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S07的分子式为C22H22O6，化学名称为：(3E,5E)-3-(2,5-dimethoxybenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S12的分子式为C23H24O7，化学名称为：(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(3,4,5-trimethoxybenzylidene)dihydro-2Hpyran-4(3H)-one。S13的分子式为C22H19F3O5，化学名称为：(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(4-methoxy-2-(trifluoromethyl)benzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。S14的分子式为C21H17BrO6，化学名称为：(3E,5E)-3-((6-bromobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)methylene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one。
本发明中，用MTT法测定了所合成化合物(浓度设置为10μM)对胃癌细胞BGC-823、SGC-7901和MFC的生长抑制活性。结果显示，本专利所示的10个有效化合物均对三株肿瘤细胞表现出较好的生长抑制活性，以S04、S06、S07和S12的活性最明显(详情见实施例2)。
本发明中，选择S06进行了深入的活性和机制研究。S06对BGC-823和SGC-790的半数生长抑制浓度(IC50)分别为3.51μM和1.55μM，也能剂量依赖性的抑制两种胃癌细胞集落的形成(详情见实施例3)。在胃癌细胞BGC-823和SGC-790中，S06均能剂量依赖性地抑制TNFɑ诱导的IκB-α的降解，有效抑制NF-κB信号通路(详情见实施例5)；有效下调NF-κB调控的抗凋亡蛋白bcl-2的表达，上调凋亡蛋白cl-PARP、cl-caspase3和bax的表达(详情见实施例4)。
伊立替康为喜树碱的半合成衍生物，是胃癌等肿瘤常用的化疗治疗药物。然而，其毒性大，治疗一段时间后容易引起耐药，找到高效低毒的靶向药物与其联用是克服伊立替康以上缺陷的有效办法。Jill Gilbert M D和Chen M C发现NF-κB信号通路的激活是伊立替康获得性耐药的主要因素，目前尚无靶向NF-κB增敏伊立替康疗效的药物研究或临床应用药物。姜黄素作为从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素，是抑制NF-κB制剂之一，它可影响细胞生存、增值、耐药和凋亡。有研究显示姜黄素和伊立替康联用，可通过下调NF-κB逆转伊立替康耐药，从而提高伊立替康治疗癌症的敏感性。本发明的有效化合物S06能够靶向NF-κB起到好的抗胃癌效果。因此，我们选择S06与伊立替康联用，结果发现，S06可以有效增敏伊立替康抑制胃癌细胞生长和细胞集落形成的效果(详情见实施例6)。本发明证明了姜黄色素类似物可以增强抗胃癌药物的疗效。NF-κB通过的激活与多种抗胃癌药(如5-FU、Phenethyl isothiocyanate(PEITC)、顺铂、长春新碱)疗效降低相关，因此S06可能也能够基于抑制NF-κB通路，对这些化疗药物的抗胃癌活性起到增敏作用。
本发明所述抗癌化合物可以应用于胃癌相关疾病的治疗，所述疾病与NF-κB通路激活相关。另外本发明所述抗癌化合物还可能用于NF-κB通路激活其他相关癌症的治疗，这里未展开研究。
本发明还提供一种用于治疗胃癌的药物组合物，含有治疗有效量的活性成分和药用辅料；
所述的活性成分包含所述的化合物或其可药用盐。
本文中所用“药用辅料”指药学领域常规的药物载体。从辅料种类上看，使用了我国市场规模前十大药用辅料分别为药用明胶胶囊、蔗糖、淀粉、薄膜包衣粉、1，2-丙二醇、PVP、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、微晶纤维素、HPC和乳糖。具体细分包括了稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖糊精乳糖和微晶纤维素(MCC)等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙/镁、聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。
作为优选，所述的活性成分为所述的化合物或其可药用盐与伊立替康的组合。
本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。所述药物的制剂形式包括注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、软膏剂、控释或缓释剂或纳米制剂。本发明可以组合物的形式通过口服，鼻吸入、直肠或者肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。
下面将结合实施例及说明书附图详细说明本发明。
附图说明
图1为实施例1化学合成路线图和产物结构图。(A)不对称姜黄色素化合物的合成路线。试剂和条件：(a)环己烷，对甲苯磺酸，90℃回流；(b)无水乙醇，78℃回流；(c)10％HCl，室温；(d)HCl(g)，室温。
(B)化合物的化学结构。
图2 S系列化合物对胃癌细胞生长抑制的筛选。以5×103个细胞/孔的密度将细胞接种于96孔培养板，每孔100μL培养基。在37℃含5％CO2的培养箱内培养24h后用计量为20μM的化合物(CUR和BMS-345541作阳性对照，S11和S15作阴性对照)孵育BGC-823(A)，SGC-7901(B)和MFC(C)胃癌细胞72h。每孔加MTT溶液(5mg/mL用PBS配制)20μL，在培养箱内继续培养4h。弃去培养液，再每孔加入150μL DMSO，振荡10min充分溶解结晶物后，于酶联免疫监测仪在490nm波长测定各孔光吸收值(A)。通过细胞生长抑制率评价化合物对细胞生长抑制的作用。抑制率＝(1-A实验组/A对照组)×100％。每组设定3个复孔。
图3化合物S06对胃癌细胞生长的影响。(A)S06抑制BGC-823和SGC-7901细胞的IC50。S06(60μM，60/5μM，60/25μM，60/125μM或50/625μM)孵育细胞72h后染色测量OD值。(B)以1×103个细胞/孔的密度将细胞接种到6孔板，每孔培养基的体积为1mL培养过夜。用S06(1，2.5，5μM)及对照药BAY 11-7082(5μM)孵育BGC-823细胞和SGC-7901细胞孵育于在37℃含5％CO2的培养箱内培养至肉眼可见克隆形成约12h。用PBS液洗涤3次，甲醛固定15min，再用染液染色。用新的培养基替换掉原有的培养基再培养14d。
图4活化合物S06对细胞凋亡的影响。以4×105个细胞/孔的密度将细胞接种到6孔板，每孔培养基体积1mL。培养24h后用S06(2.5，5μM)及阳性药BAY 11-7082(5μM)孵育SGC-7901或BGC-823细胞48h后再收蛋白。加裂解液提取总蛋白。取96孔板，每个孔加入18μLPBS，2μL以上蛋白样品和180μL考马斯亮蓝，震荡5min混匀，用酶标仪595nm处测定其吸光度，根据标准曲线计算其蛋白浓度。测定蛋白浓度后，将蛋白样品煮沸10min，于-20℃保存。配10％的聚丙烯酰胺凝胶，上样60μg，每孔20μL(用loading buffer补齐到上样体积)，用(浓缩胶90V，分离胶120V，共90min)进行电泳分离蛋白条带。再用300mA的转膜电流(90min)将目标蛋白条带转至PVDF膜。用5％脱脂牛奶将膜于室温封闭1.5h后，用TBST洗脱(7min×3次)，再用一抗在4℃摇床孵育过夜，用TBST洗脱(7min×3次)，再用二抗于室温孵育1h，用TBST洗脱(7min×3次)后，曝光仪内曝光。
图5化合物S06对NF-κB的活性的影响。用S06(1，2.5，5μM)及阳性药BAY 11-7082(5μM)孵育SGC-7901细胞24h。再用TNF-ɑ(1ng/ml)刺激30min后收蛋白检测。
图6化合物S06和伊立替康联用对细胞生长的影响。(A)不同计量和配比的化合物孵育BGC-823细胞48h后倒置显微镜拍片。(B)用细胞分析仪检测细胞生长密度。(C)不同计量和配比的化合物孵育BGC-823细胞72h后MTT染色，酶标仪检测。(D)不同计量和配比的化合物孵育BGC-823细胞12h后，用新的培养基替换掉原有的培养基再培养11d。数据用mean±s.d.表示，*P<0.05和**P<0.01表示与DMSO比；##P<0.01表示与S06比；+P<0.05和++P<0.01,表示与相应剂量的单用伊立替康组比。
具体实施方式
本发明在以下的实施例中进一步说明。这些实施例只是为了说明的目的，而不是用来限制本发明的范围。
实施例1化合物的合成
称取50mmoL的吡喃酮和75mmoL的吗啡啉于圆底烧瓶中，加入反应溶剂环己烷50mL和催化剂对甲苯磺酸1g。在90℃回流4h后将反应溶剂旋蒸除去，得到少量浅黄色液体。在上述含有浅黄色液体的圆底烧瓶中加入25mmoL 3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，加入反应溶剂无水乙醇30mL，78℃下回流。用TLC检测，以365nm呈黄色的对称副产物刚刚出现为反应终点。上述反应液经冷却后，加入适量稀盐酸，调pH至2～3，室温下搅拌，产生沉淀，过滤，烘干得到中间体粗产物备用。
称取上述中间体粗产物和相应的取代苯甲醛各1mmoL于圆底烧瓶中，加入少量的无水乙醇作溶剂，通入HCl气体(由NaCl和浓H2SO4实验室自制)作为催化剂，室温搅拌。用TLC检测反应，如有大量沉淀产生，过滤，烘干得终产物。如无沉淀产生，用石油醚/乙酸乙酯作为流动相，用柱层析纯化得终产物S系列。经硅胶柱色谱纯化后得纯度均大于98％的化合物。具体合成路线和产物结构见图1。化合物及其理化性质如下所述：
有效化合物(3E,5E)-3-(2,4-dichlorobenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S01).Brown powder,59.04％yield；mp 219.7-223.8℃.1H-NMR(d-DMSO),δ:8.313(s,1H,Ar’-CH＝C),7.780(dd,J＝1.8Hz,9.6Hz,1H,Ar-H6’),7.765(d,J＝2.4Hz,1H,Ar-H3’),7.669(s,1H,Ar-CH＝C),7.634(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H5),7.497(d,J＝1.8Hz,1H,Ar-H2),7.328(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H6),6.902(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H5),4.885(s,2H,Ar-C＝C-CH2),4.667(s,2H,Ar’-C＝C-CH2),3.704(s,3H,O-CH3).HRMS m/z:391.0506(M+1)+,calcd for C20H16Cl2O4:390.04.
有效化合物(3E,5E)-3-(2-chlorobenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S02).Deep yellow powder,65.62％yield；mp 166.6-168.8℃.1H-NMR(d-CDCl3),δ:8.003(s,1H,Ar’-CH＝C),7.797(s,1H,Ar-CH＝C),7.459(dd,J＝1.8,9.0Hz,1H,Ar-H6’),7.277-7.328(m,2H,Ar-H4’,Ar-H5’),7.113(dd,J＝2.4Hz,7.2Hz,1H,Ar-H3’),6.975(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H6),6.879(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H5),6.872(s,1H,Ar-H2),4.957(d,J＝1.8Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.755(d,J＝1.8Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.935(s,3H,O-CH3).HRMS m/z:357.0906(M+1)+,calcd for C20H17ClO4:356.08.
有效化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(2,4,6-trimethoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S03).Blackgreen powder,88.53％yield；mp 189.1-193.3℃.1H-NMR(d-CDCl3),δ:7.802(s,1H,Ar-CH＝C),7.749(s,1H,Ar’-CH＝C),6.958(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H6),6.870(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H5),6.863(s,1H,Ar-H2),6.135(s,2H,Ar-H3’,Ar-H5’),4.939(d,J＝1.2Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.426(d,J＝1.2Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.921(s,3H,3-OCH3),3.850(s,3H,4’-OCH3),3.816(s,6H,2’-OCH3,6’-OCH3).HRMS m/z:413.1611(M+1)+,calcd for C23H24O7:412.15.
有效化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(3-hydroxy-4-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S04).Blachish powder,69.56％yield；mp 161.1-164.3℃.1H-NMR(d-DMSO),δ:7.593(s,1H,Ar’-CH＝C),7.519(s,1H,Ar-CH＝C),7.015(d,J＝8.4Hz,2H,Ar-H6’,Ar-H6),6.855-6.881(m,4H,Ar-H2,Ar-H2’,Ar-H5,Ar-H5’),4.913(d,J＝1.2Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.864(d,J＝1.2Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.824(s,3H,3-OCH3),3.821(s,3H,4’-OCH3).LC-MS m/z:369.09(M+1)+,calcd forC21H20O6:368.13.
有效化合物(3E,5E)-3-(2,4-dimethoxybenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S05).Greenyellow powder,76.21％yield；mp 192.1-195.5℃.1H-NMR(d-CDCl3),δ:8.069(s,1H,Ar’-CH＝C),7.751(s,1H,Ar-CH＝C),6.995(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H6’),6.960(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H6),6.860(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H5),6.862(s,1H,Ar-H2),6.508(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H,Ar-H5’),6.485(d,J＝2.4Hz,1H,Ar-H3’),4.938(d,J＝1.8Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.813(d,J＝1.2Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.927(s,3H,2’-OCH3),3.857(s,3H,4’-OCH3),3.850(s,3H,3-OCH3).HRMS m/z:383.1506(M+1)+,calcd for C22H22O6:382.14.
有效化合物(3E,5E)-3-(2,3-dimethoxybenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S06).Yellow powder,73.34％yield；mp 188.6-191.9℃.1H-NMR(d-DMSO),δ:7.806(s,1H,Ar’-CH＝C),7.622(s,1H,Ar-CH＝C),7.138-7.150(m,1H,Ar-H6’,Ar-H5’),7.021(dd,J＝1.8,8.4Hz,1H,Ar-H6),6.903(d,J＝1.8Hz,1H,Ar-H2),6.874(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H5),6.781(t,J＝6.6Hz,1H,Ar-H4’),4.926(d,J＝1.2Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.760(d,J＝1.8Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.837(s,3H,2’-OCH3),3.828(s,3H,3’-OCH3),3.742(d,J＝2.4Hz,6H,3-OCH3).HRMS m/z:383.1508(M+1)+,calcd for C22H22O6:382.14.
有效化合物(3E,5E)-3-(2,5-dimethoxybenzylidene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S07).Yellow powder,78.51％yield；mp 160.2-165.1℃.1H-NMR(d-CDCl3),δ:8.017(s,1H,Ar’-CH＝C),7.764(s,1H,Ar-CH＝C),6.966(d,J＝8.4Hz,1H,Ar-H6),6.900(dd,J＝3.0Hz,6.0Hz,1H,Ar-H5),6.876(s,1H,Ar-H2),6.863(dd,J＝2.4Hz,8.4Hz,1H,Ar-H6’),6.630(s,1H,Ar-H2’),6.630(d,J＝3.0Hz,1H,Ar-H5’),4.944(d,J＝1.8Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),4.800(d,J＝1.8Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),3.928(s,3H,2’-OCH3),3.823(s,3H,3-OCH3),3.787(s,6H,5’-OCH3).HRMS m/z:383.1508(M+1)+,calcd for C22H22O6:382.14.
有效化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-((5-methylthiophen-2-yl)methylene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S11).Cyan powder,62.82％yield；mp 174.5-177.7℃.1H-NMR(d-CDCl3),δ:7.861(s,1H,Ar’-CH＝C),7.759(s,1H,Ar-CH＝C),7.128(d,J＝3.6Hz,1H,H5’),6.962(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H6),6.823-6.847(m,3H,H4’,Ar-H3,Ar-H5),4.920(dd,J＝1.2Hz,6.0Hz,4H,CH2-O-CH2),3.924(s,3H,3-OCH3),2.555(s,3H,3’-CH3).LC-MS m/z:343.10(M+1)+,calcd for C19H18O4S:342.09.
有效化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(3,4,5-trimethoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S12).Cyan powder,83.24％yield；mp 183.0-185.6℃.1H-NMR(d-CDCl3),δ:7.774(s,1H,Ar-CH＝C),7.751(s,1H,Ar’-CH＝C),6.973(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H6),6.868(s,2H,Ar-H2,Ar-H5),6.546(s,2H,Ar-H2’,Ar-H6’),6.954(dd,J＝1.2Hz,7.2Hz,CH2-O-CH2),3.930(s,3H,3-OCH3),3.911(s,3H,4’-OCH3),3.899(s,6H,3’-OCH3,5’-OCH3).HRMS m/z:413.1611(M+1)+,calcd for C23H24O7:412.15.
有效化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(4-methoxy-2-(trifluoromethyl)benzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S13).Olivine powder,71.55％yield；mp 139.0-143.8℃.1H-NMR(d-DMSO),δ:9.771(s,1H,-OH),7.783(s,1H,Ar’-CH＝C),7.635(s,1H,Ar-CH＝C),7.344(d,J＝2.4Hz,1H,Ar-H2),7.326(d,J＝2.4Hz,1H,Ar-H6’),7.293(dd,J＝2.4Hz,2.8Hz,1H,Ar-H6),7.019(d,J＝1.8Hz,1H,Ar-H3’),6.917(dd,J＝2.4Hz,2.8Hz,1H,Ar-H5’),6.876(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H5),4.930(d,J＝1.2Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.711(d,J＝1.2Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.882(s,3H,3-OCH3),3.826(s,3H,4’-OCH3).HRMS m/z:421.1269(M+1)+,calcd for C22H19F3O5:420.12.
有效化合物(3E,5E)-3-((6-bromobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)methylene)-5-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S14).Yellowpowder,72.57％yield；mp 212.9-216.7℃.1H-NMR(d-DMSO),δ:9.749(s,1H,-OH),7.662(s,1H,Ar’-CH＝C),7.633(s,1H,Ar-CH＝C),7.396(s,1H,Ar-H3’),7.030(d,J＝1.8Hz,1H,Ar-H2),6.923(dd,J＝1.8Hz,8.4Hz,1H,Ar-H6),6.906(s,1H,Ar-H6),6.882(d,8.4Hz,1H,Ar-H5),6.157(s,2H,O-CH2-O),4.924(d,J＝1.2Hz,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.760(d,J＝1.8Hz,2H,Ar-C＝C-CH2),3.837(s,3H,O-CH3).LC-MS m/z:445.08(M+1)+,calcd for C21H17BrO6:444.02.
有效化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-(indolin-3-ylmethylene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S15).Orange powder,48.36％yield；mp230.4-234.5℃.1H-NMR(d-DMSO),δ:11.997(s,1H,-NH),9.649(s,1H,-OH),7.996(s,1H,1’-CH),7.799(d,J＝7.8Hz,1H,6’-CH),7.626(d,J＝14.4Hz,2H,Ar-H6,Ar-H5),7.484(d,J＝7.8Hz,1H,3’-CH),7.233(t,J＝7.2Hz,1H,5’-CH),7.184(t,J＝7.2Hz,1H,4’-CH),7.005(s,1H,Ar-H2),6.872(s,2H,Ar-CH＝C,Ar’-CH＝C),4.913(s,2H,Ar’-C＝C-CH2),4.864(s,2H,Ar-C＝C-CH2),3.828(s,3H,O-CH3).LC-MS m/z:362.12(M+1)+,calcd for C22H21NO4:361.13.
对比化合物(3E,5E)-3-(4-hydroxy-3-methoxybenzylidene)-5-((5-methylthiophen-2-yl)methylene)dihydro-2H-pyran-4(3H)-one(S11).Cyan powder,62.82％yield；mp 174.5-177.7℃.1H-NMR(d-CDCl3,600MHz),δ:7.861(s,1H,Ar’-CH＝C),7.759(s,1H,Ar-CH＝C),7.128(d,J＝3.6Hz,1H,H5’),6.962(d,J＝7.8Hz,1H,Ar-H6),6.823-6.847(m,3H,H4’,Ar-H3,Ar-H5),4.920(dd,J＝1.2Hz,6.0Hz,4H,CH2-O-CH2),3.924(s,3H,3-OCH3),2.555(s,3H,3’-CH3).LC-MS m/z:343.10(M+1)+,calcd for C19H18O4S:342.09
实施例2 S系列化合物对胃癌细胞生长抑制的筛选。
用MTT法检测姜黄素类似物对胃癌细胞生长的抑制作用。这些类似物对胃癌细胞BGC-823，SGC-7901和MFC的结果分别如图2A，B和C所示。大部分化合物对三株胃癌细胞生长的抑制率达到60％以上。化合物S01、S02、S04、S06、S07和S12-14对BGC-823细胞增值的抑制活性比BMS-345541高，并且超过姜黄素十倍多。化合物S01-07和S12-14对SGC-7901细胞增值的抑制活性均比BMS-345541高，并且超过姜黄素两倍。化合物S04，S06，S07和S12对MFC细胞增值的抑制活性比BMS-345541高，并且超过姜黄素两倍多。S04，S06，S07和S12这四个化合物对这三组胃癌细胞增值均具有较好的抑制活性。
实施例3化合物S06对胃癌细胞生长的影响。
从MTT实验中筛选中活性较好的化合物S06，对其进行进一步的生物学评价。测量了化合物S06对BGC-823和SGC-7901细胞株的IC50。结果显示S06对BGC-823细胞的IC50为3.51μM，对SGC-7901细胞的IC50为1.55μM(图3A)。通过集落形成实验研究化合物对细胞增殖的影响。胃癌细胞用不同浓度S06(1，2.5，5μM)处理。结果显示S06可以剂量依赖地抑制细胞集落的形成(图3B)。用浓度为5μM的S06处理组几乎无可见集落形成。S06 5μM时的疗效明显优于同浓度的阳性药BAY11-7082。由此可见化合物S06具有药用前景。
实施例4化合物S06对细胞凋亡的影响。
为了研究化合物S06对胃癌细胞凋亡的影响，我们进行Hoechst 33258实验。Hoechst 33258染色法显示凋亡细胞核数量在用S06处理后明显增加(图4A)。此外还测试了S06对参与细胞凋亡的NF-κB相关基因产物的影响，以及对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞cl-PARP、cl-caspase 3、bax和bcl-2表达水平的影响。图4B显示S06可显著降低bcl-2蛋白的表达，同时升高cl-PARP、cl-caspase 3和bax的表达。
实施例5化合物S06对NF-κB的活性的影响。
IκB-α作为IκB家族的重要成员，它在调节NF-κB通路的活性中起着重要的作用。IκB-α的显著降低被作为NF-κB通路激活的一种重要指标。TNF-α作为一种细胞毒性因子，它能引起IκB-α磷酸化，从而诱导NF-κB活化。采用Western blot方法检测IκB-α的降解，图5显示S06可抑制TNF-ɑ诱导的IκB降解，从而抑制NF-κB信号传递。结果表明，S06可能通过抑制NF-κB及参与细胞凋亡的NF-κB相关基因产物的表达，从而抑制癌细胞增殖和增强细胞凋亡，起到抗癌的作用。
实施例6化合物S06和伊立替康联用对细胞生长的影响。
作为喜树碱衍生物的主要制品，伊立替康为常见的化疗药物之一，且对胃癌有一定的效果。但伊立替康治疗过程中易产生耐药，从而降低药效或需大剂量才达到治疗效果。伊立替康耐药机制很复杂，其中NF-κB通路的高度激活是伊立替康治疗耐药的主要原因之一。因此，抑制或调节NF-κB和其下游的靶标是治疗胃癌和伊立替康耐药的主要方法。联合伊立替康和NF-κB抑制剂可有效治疗胃癌。为了解不对称姜黄素S06是否可增强胃癌细胞株对伊立替康化疗敏感性，我们通过细胞计数法，MTT法和克隆形成法比较联用伊立替康和S06以及单用伊立替康或S06。在细胞计数实验里(图6A、6B)，S06(1μM)与伊立替康(160/2，160/3μM)联用的活细胞数比单用伊立替康(160/2，160/3μM)或S06(1μM)少。在MTT实验里(图6C)，S06(1μM)与伊立替康(160/2μM)联用比单用S06活性高3倍，比单用伊立替康活性高2倍左右。S06(1μM)与伊立替康(160/3μM)联用比单用S06活性高2.5倍，比单用伊立替康活性高10倍左右。在细胞集落形成实验(图6D)中发现了同样的趋势，伊立替康和S06合用对菌落形成的抑制作用比伊立替康(160/4μM)或S06(1μM)单一用药有效。结果表明，联用伊立替康和S06可以增强胃癌细胞株对伊立替康化疗的敏感性。

Claims (9)

1.一种不对称姜黄色素类化合物，其特征在于，为以下化合物或其可药用盐中的一种：
2.一种如权利要求1所述的不对称姜黄色素类化合物在制备抗胃癌药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的化合物在制备抗胃癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗胃癌药物通过抑制NF-κB通路激活而治疗胃癌。
4.根据权利要求2所述的化合物在制备抗胃癌药物中的应用，其特征在于，所述的化合物优选自以下化合物：
5.根据权利要求2或4所述的化合物在制备抗胃癌药物中的应用，其特征在于，所述的化合物用于增敏伊立替康的抗胃癌活性。
6.根据权利要求2所述的化合物在制备抗胃癌药物中的应用，其特征在于，所述的化合物优选自以下化合物或其可药用盐中的一种：
7.一种用于治疗胃癌的药物组合物，其特征在于，含有治疗有效量的活性成分和药用辅料；所述的活性成分包含权利要求1所述的化合物或其可药用盐。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的活性成分为权利要求1所述的化合物或其可药用盐与伊立替康的组合。
9.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的制剂形式选自注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、软膏剂、控释或缓释剂和纳米制剂。
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