CN107496376A - 一种口服结肠定位给药的纳米‑微球载体及其制备方法与应用 - Google Patents

一种口服结肠定位给药的纳米‑微球载体及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种口服结肠定位给药的纳米‑微球载体及其制备方法与应用。本发明提供的纳米‑微球载体，它包括内核和外壳，所述内核为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒，外壳为纤维素硫酸钠。本发明载体制作简单，能有效保护药物活性且能将药物准确递定送至结肠，并能长时间紧密结合于结肠黏膜，提高局部药物浓度，促进药物吸收，能广泛用于制备口服给药或者联合给药中。

Description

一种口服结肠定位给药的纳米-微球载体及其制备方法与 应用
技术领域
本发明涉及一种口服结肠定位给药的纳米-微球载体及其制备方法与应用，属于医药技术领域。
背景技术
口服结肠定位给药系统(oral colon-specific drug delivery system)，是指通过适当的方法，使药物经口服后避免在胃和小肠中释放，运送至回盲部后才开始释放，从而发挥局部或全身治疗作用的一种新型给药系统。通过结肠靶向给药，使药物能够直接作用于病变部位，减少由于药物在胃肠道上端吸收而引起的副作用，并使生物大分子类药物能够实现口服给药。对于治疗炎性肠道疾病(inflammatory bowel disease，IBD)来说，一般口服给药不仅无法使药物以高浓度分散于作用部位，而且还有较大副作用，口服结肠定位给药系统使药物能够直接作用于病变部位，提高局部药物浓度，从而减轻由于药物在胃肠道上端吸收而引起的副作用，达到有效地治疗结肠局部疾病的目的。
在口服结肠定位给药系统中，载体材料的选择十分关键，在活性功能成分的释放、导向等方面具有决定性作用。其中，天然多糖具有良好的生物相容性和生物降解性，越来越多地用于口服结肠定位给药材料的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种口服结肠定位给药的纳米-微球载体及其制备方法与应用。本发明载体制作简单，能有效保护药物活性且能将药物准确递定送至结肠，并能长时间紧密结合于结肠黏膜，提高局部药物浓度，促进药物吸收，能广泛用于制备口服给药或者联合给药中。
本发明提供的纳米-微球载体，它包括内核和外壳，所述内核为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒，外壳为纤维素硫酸钠。
上述的纳米-微球载体中，所述纳米-微球载体的粒径可为20～100μm，具体可为40μm、80μm或40～80μm；
所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝到巯基壳聚糖上制备得到；
所述巯基壳聚糖中游离巯基含量为50～300μmol/g，具体可为120μmol/g、240μmol/g、300μmol/g、120～240μmol/g、240～300μmol/g或100～300μmol/g；
所述巯基壳聚糖、所述聚苹果酸酯和所述脱氧胆酸酯的质量比可为1∶0.5～5∶0.5～10，具体可为1∶2.8∶5.4、1.5∶2.35∶3.65、1.2∶3.14∶4.22或1∶1.5～3∶2～6。
本发明还提供了所述的纳米-微球载体的制备方法，包括入下步骤：1)在溶剂中，将巯基壳聚糖、聚苹果酸酯和脱氧胆酸酯混合，进行接枝共聚合，得到脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物；
2)将脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物加入离子交联剂溶液中，灭菌进行交联反应，然后干燥，得到脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒；
3)将步骤2)制得的所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒与纤维素硫酸钠水溶液混合，然后加入所述离子交联剂溶液混合，反应，即得到所述纳米-微球载体。
上述的制备方法中，所述巯基壳聚糖中游离巯基含量可为50～300μmol/g，具体可为120μmol/g、240μmol/g、300μmol/g、120～240μmol/g、240～300μmol/g或100～300μmol/g；
所述接枝共聚合的温度可为-5～50℃，具体可为10℃，时间可为3～17h，具体可为5h，调节pH值至7；
所述巯基壳聚糖、所述聚苹果酸酯和所述脱氧胆酸酯的质量比可为1∶0.5～5∶0.5～10，具体可为1∶2.8∶5.4、1.5∶2.35∶3.65、1.2∶3.14∶4.22或1∶1.5～3∶2～6；
所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液为所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物溶于醋酸盐缓冲液，其溶液的pH值为4.5，浓度可为10～200μmol/g；
所述交联反应的温度可为10～70℃，具体可为28℃或20～50℃，时间为5～24h，具体可为12h或10～20h；所述干燥采用10～100℃真空干燥1～10h，具体可为25℃真空干燥3h；
步骤2)中，所述脱氧胆酸酯与所述离子交联剂的质量比可为1～30∶1，具体可为27∶1、3.65∶0.17、4.22∶0.215或10～30∶1；
所述离子交联剂溶液为N-羟基琥珀酰亚胺水溶液，浓度可为0.1～5g/mL，具体可为1g/mL、1.7g/mL、2.15g/mL或1～3g/mL；
步骤3)中，所述巯基壳聚糖与所述纤维素硫酸钠的质量比可为0.5～10∶1；
所述纤维素硫酸钠水溶液的浓度可为0.01～0.2g/mL，具体可为0.015g/mL；
所述纤维素硫酸钠水溶液与所述离子交联剂溶液的质量比为1～50∶1；
所述反应的温度为室温，时间可为10～80min，具体可为30min。
本发明中，所述室温指的是10～30℃。
本发明所述纳米-微球载体的制备方法中，步骤1)中还包括了过滤得到沉淀，沉淀用乙醇洗涤，再置于透析袋中纯水透析分离所述纳米-微球载体的步骤；具体可用乙醇洗涤两次，透析24h。
本发明还提供了上述的制备方法制备得到的所述纳米-微球载体。
本发明所述纳米-微球载体在制备口服结肠给药的药物中的应用。
本发明所述纳米-微球载体应用制备口服结肠给药的药物时，所述药物的载体为所述纳米-微球载体；
所述药物的活性成分为蛋白质多肽药物和/或核酸药物。
本发明进一步提供了一种口服结肠定位给药的纳米-微球，它包括药物和所述纳米-微球载体；
所述药物包括蛋白质多肽药物和/或核酸药物；
所述纳米-微球载体包括内核和外壳，所述内核为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒，外壳为纤维素硫酸钠；
所述内核包载所述药物。
本发明中，所述载体包载的所述药物具体可为增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)质粒。
上述的口服结肠定位给药的纳米-微球的粒径为20～100μm，具体可为40μm、80μn或40～80μm。
本发明进一步提供了上述的纳米-微球的制备方法，包括如下步骤：1)在溶剂中，将巯基壳聚糖、聚苹果酸酯和脱氧胆酸酯混合，进行接枝共聚合，得到脱氧胆酸聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物；
2)将离子交联剂溶液与所述药物的混合，然后将所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液加入中，灭菌进行交联反应，然后干燥，得到脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒；
3)将步骤2)制得的所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒与纤维素硫酸钠水溶液混合，然后加入所述离子交联剂溶液混合，反应，即得到所述纳米-微球载体。
上述的制备方法中：所述巯基壳聚糖中游离巯基含量可为50～300μmol/g，具体可为120μmol/g、240μmol/g、300μmol/g、120～240μmol/g、240～300μmol/g或100～300μmol/g；所述溶剂为乙酸；
所述接枝共聚合的温度可为-5～50℃，具体可为10℃或0～40℃，时间可为3～17h，具体可为5h，调节pH值至7；
所述巯基壳聚糖、所述聚苹果酸酯和所述脱氧胆酸酯的质量比可为1∶0.5～5∶0.5～10，具体可为1∶2.8∶5.4、1.5∶2.35∶3.65、1.2∶3.14∶4.22或1∶1.5～3∶2～6；
所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液为所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物溶于醋酸盐缓冲液，其溶液的pH值为4.5，浓度可为10～200gmol/g；
所述交联反应的温度可为10～70℃，具体可为28℃，时间为5～24h，具体可为12h；所述干燥采用10～100℃真空干燥1～10h，具体可为25℃真空干燥3h；
步骤2)中，所述离子交联剂溶液与所述药物的质量比为0.2～25∶1；
所述脱氧胆酸酯与所述离子交联剂的质量比为1～30∶1，具体可为27∶1、3.65∶0.17、4.22∶0.215或10～30；
所述离子交联剂溶液为N-羟基琥珀酰亚胺水溶液，浓度可为0.1～5g/mL，具体可为1g/mL、1.7g/mL、2.15g/mL或1～3g/mL；
步骤3)中，所述巯基壳聚糖与所述纤维素硫酸钠的质量比可为0.5～10∶1；
所述纤维素硫酸钠水溶液的浓度可为0.01～0.2g/mL，具体可为0.015g/mL；
所述纤维素硫酸钠水溶液与所述离子交联剂溶液的质量比或体积比可为1～50∶1；
所述反应的温度为室温，时间为可为10～80min，具体可为30min。
本发明具有以下优点：
本发明载体能在pH值1.2-7.4的高离子强度环境下保持结构稳定，胃肠道稳定性好且其纤维素硫酸钠外壳能被结肠菌群产生的纤维素酶特异性降解定点释放出脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒子，该纳米粒子能黏附于结肠粘膜，显著提高在肠道炎症部位的药物浓度，显著增强用于肠道局部炎症治疗的蛋白质多肽药物或核酸药物的抗炎功效。
本发明包载增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)质粒的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球在口服结肠给药中的应用，具有良好的胃肠道稳定性；纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球的包载能提高质粒DNA(pDNA)的转染效率。
本发明载体制作简单，能有效保护药物活性且能将药物准确递定送至结肠，并能长时间紧密结合于结肠黏膜，提高局部药物浓度，促进药物吸收，能广泛用于制备口服给药或者联合给药中。
附图说明
图1为本发明实施例1的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球纳米-微球扫描电镜照片。
图2为本发明实施例2的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球扫描电镜照片。
图3为本发明实施例5的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球在结肠组织中转染的荧光显微照片，其中图3(a)为本发明实施例3制备得到的载pEGFP的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球在结肠组织中转染的白光显微照片，图3(b)为载EGFP质粒的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球在结肠组织中转染的荧光显微照片。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、粒径约为40μm的纤维素硫酸钠-巯基壳聚糖纳米-微球。
(1)将0.5g(游离巯基含量为120μmol/g)巯基壳聚糖溶于0.5ml的乙酸中，加入1.4g聚苹果酸酯以及2.7g脱氧胆酸酯，10℃下搅拌5h，调节PH值至7，过滤，沉淀用10ml乙醇洗涤两次，置于纯水中透析24h，即得脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物，0.1g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入0.1ml去离子水溶解；
(2)以胰岛素为模型药物，将NHS溶液和0.5g胰岛素混合后将脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物缓慢滴加至混合溶液中；
(3)将溶液混合均匀后放入灭菌试管中，放入恒温摇床中，28℃培养12h，25℃真空干燥3h，即得脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝的两亲性巯基壳聚糖纳米粒。
(4)将上述纳米粒与15ml 0.015g/mL的纤维素硫酸钠(NaCS)水溶液搅拌混合均匀后加入0.12ml、0.3g/mLNHS水溶液，室温搅拌30min，旋转蒸发仪40℃旋蒸20min，除去溶剂，微球析出，得到粒径40μm的纤维素硫酸钠-巯基壳聚糖纳米-微球，其扫描电镜照片如图1所示。
实施例2、粒径约为80μm的纤维素硫酸钠-巯基壳聚糖纳米-微球
(1)将1.5g(游离巯基含量为240μmol/g)巯基壳聚糖溶于0.5ml的乙酸中，加入2.35g聚苹果酸酯以及3.65g脱氧胆酸酯，10℃下搅拌5h，调节PH值至7，过滤，沉淀用10ml乙醇洗涤两次，置于纯水中透析24h，即得脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物，0.17g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入0.1ml去离子水溶解；
(2)以胰岛素为模型药物，将NHS溶液和0.5g胰岛素混合后将脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液(即脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物溶于醋酸盐缓冲液，其溶液的pH值为4.5，浓度为150μmol/g)缓慢滴加至混合溶液中；
(3)将溶液混合均匀后放入灭菌试管中，放入恒温摇床中，28℃培养12h，25℃真空干燥3h，即得脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝的两亲性巯基壳聚糖纳米粒。
(4)将上述纳米粒与25ml 0.015g/mL的纤维素硫酸钠(NaCS)水溶液搅拌混合均匀后加入0.23ml 0.8g/mLNHS水溶液，室温搅拌30min，旋转蒸发仪40℃旋蒸20min，除去溶剂，微球析出，得到粒径80μm的纤维素硫酸钠-巯基壳聚糖纳米-微球载体，其扫描电镜照片如图2所示。
实施例3、粒径约为20～100μm载质粒增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)的纤维素硫酸钠-巯基壳聚糖纳米-微球的制备
(1)将1.2g(游离巯基含量为300μmol/g)巯基壳聚糖溶于0.5ml的乙酸中，加入3.14g乳酸-聚苹果酸酯以及4.22g脱氧胆酸酯，10℃下搅拌5h，调节PH值至7，过滤，沉淀用10ml乙醇洗涤两次，置于纯水中透析24h，即得脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物，0.215g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入0.1ml去离子水溶解；
(2)将0.1g pEGFP缓慢加入上述NHS溶液中，涡旋震荡30s后将脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物缓慢滴加至混合溶液中；
(3)将溶液混合均匀后放入灭菌试管中，放入恒温摇床中，28℃培养12h，25℃真空干燥3h，即得脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝的两亲性巯基壳聚糖纳米粒。
(4)将上述纳米粒与30ml 0.015g/mL的纤维素硫酸钠(NaCS)水溶液搅拌混合均匀后加入36ml 1.2g/mLNHS水溶液，室温搅拌30min，旋转蒸发仪40℃旋蒸20min，除去溶剂，微球析出，得到粒径20～100μm的载pEGFP的纤维素硫酸钠-巯基壳聚糖纳米-微球。
实施例4、载pEGFP的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球包封率的测定
本发明实施例3制备得到的100mg纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球加入1mL纤维素酶溶解掉外壳纤维素硫酸钠，加入1mL去离子水中分离出脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖-pEGFP纳米粒，分离出的脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖-pEGFP纳米复合物按照如下公式测定包封率。
其中，Xt为未经包封前pEGFP的总浓度，Xc为上清液中质粒EGFP的总浓度。
测得本发明实施例3制备得到的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球的包封率75.56±1.32％。
实施例5、载pEGFP的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球在小鼠结肠中的转染功效
取C57BL/6小鼠24只，小鼠禁食12小时，可自由饮水，称重，随机分为二组，每组12只，分别灌胃本发明实施例3制备得到的载pEGFP的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球和等质量的EGFP质粒，给药2天后，脱颈处死小鼠，迅速解剖取出肠组织进行冰冻切片。如图3所示，由图3结果证明本发明载pEGFP的纤维素硫酸钠-脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米-微球转染效果明显优于裸EGFP质粒。

Claims (10)

1.一种纳米-微球载体，它包括内核和外壳，所述内核为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒，外壳为纤维素硫酸钠。
2.根据权利要求1所述的纳米-微球载体，其特征在于：所述纳米-微球载体的粒径为20～100μm；
所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝到巯基壳聚糖上制备得到；
所述巯基壳聚糖中游离巯基含量为50～300μmol/g；
所述巯基壳聚糖、所述聚苹果酸酯和所述脱氧胆酸酯的质量比可为1∶0.5～5∶0.5～10。
3.权利要求1或2所述的纳米-微球载体的制备方法，包括入下步骤：1)在溶剂中，将巯基壳聚糖、聚苹果酸酯和脱氧胆酸酯混合，进行接枝共聚合，得到脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物；
2)将脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物加入离子交联剂溶液中，灭菌进行交联反应，然后干燥，得到脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒；
3)将步骤2)制得的所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒与纤维素硫酸钠水溶液混合，然后加入所述离子交联剂溶液混合，反应，即得到所述纳米-微球载体。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述巯基壳聚糖中游离巯基含量为50～300μmol/g；所述溶剂为乙酸；
所述接枝共聚合的温度为-5～50℃，时间为3～17h，调节pH值至7；
所述巯基壳聚糖、所述聚苹果酸酯和所述脱氧胆酸酯的质量比为1∶0.5～5∶0.5～10；
所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液为所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物溶于醋酸盐缓冲液，其溶液的pH值为4.5，浓度为10～200μmol/g；
所述交联反应的温度为10～70℃，时间为5～24h；所述干燥采用10～100℃真空干燥1～10h；
步骤2)中，所述脱氧胆酸酯与所述离子交联剂的质量比为1～30∶1；
所述离子交联剂溶液为N-羟基琥珀酰亚胺水溶液，浓度为0.1～5g/mL；
步骤3)中，所述巯基壳聚糖与所述纤维素硫酸钠的质量比为0.5～10∶1；
所述纤维素硫酸钠水溶液的浓度为0.01～0.2g/mL；
所述纤维素硫酸钠水溶液与所述离子交联剂溶液的质量比或体积比为1～50∶1；
所述反应的温度为室温，时间为10～80min。
5.权利要求1或2所述纳米-微球载体在制备口服结肠给药的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述药物的载体为所述纳米-微球载体；
所述药物的活性成分为蛋白质多肽药物和/或核酸药物。
7.一种口服结肠定位给药的纳米-微球，它包括药物和权利要求1或2所述纳米-微球载体；
所述药物包括蛋白质多肽药物和/或核酸药物；
所述纳米-微球载体包括内核和外壳，所述内核为脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒，外壳为纤维素硫酸钠；
所述内核包载所述药物。
8.根据权利要求7所述的纳米-微球，其特征在于：所述纳米-微球的粒径为20～100μm。
9.权利要求7或8所述的纳米-微球的制备方法，包括如下步骤：1)在溶剂中，将巯基壳聚糖、聚苹果酸酯和脱氧胆酸酯混合，进行接枝共聚合，得到脱氧胆酸聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物；
2)将离子交联剂溶液与所述药物的混合，然后将所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液加入中，灭菌进行交联反应，然后干燥，得到脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒；
3)将步骤2)制得的所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖纳米粒与纤维素硫酸钠水溶液混合，然后加入所述离子交联剂溶液混合，反应，即得到所述纳米-微球载体。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述巯基壳聚糖中游离巯基含量为50～300μmol/g；所述溶剂为乙酸；
所述接枝共聚合的温度为-5～50℃，时间为3～17h，调节pH值至7；
所述巯基壳聚糖、所述聚苹果酸酯和所述脱氧胆酸酯的质量比为1∶0.5～5∶0.5～10；
所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物的溶液为所述脱氧胆酸与聚苹果酸双接枝两亲性巯基壳聚糖聚合物溶于醋酸盐缓冲液，其溶液的pH值为4.5，浓度为10～200μmol/g；
所述交联反应的温度为10～70℃，时间为5～24h；所述干燥采用10～100℃真空干燥1～10h；
步骤2)中，所述离子交联剂溶液与所述药物的质量比为0.2～25∶1；
所述脱氧胆酸酯与所述离子交联剂的质量比为1～30∶1；
所述离子交联剂溶液为N-羟基琥珀酰亚胺水溶液，浓度为0.1～5g/mL；
步骤3)中，所述巯基壳聚糖与所述纤维素硫酸钠的质量比为0.5～10∶1；
所述纤维素硫酸钠水溶液的浓度为0.01～0.2g/mL；
所述纤维素硫酸钠水溶液与所述离子交联剂溶液的质量比或体积比为1～50∶1；
所述反应的温度为室温，时间为10～80min。
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