CN107488716B - 流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的快速方法，在常规的变性杂交步骤前增加一个避光冰浴的操作，让端粒探针有充足的时间进入细胞内部，并且在DNA变形后能快速、有效地与端粒DNA进行杂交，提高杂交的效率和成功率；采用1％的多聚甲醛作为固定液，固定效果更好、更加稳定，使用更加方便；在杂交缓冲液中添加70％去离子甲醛，可以在长时间进行探针杂交时保护细胞结构和DNA的稳定性，以提高杂交的成功率。通过上述改进，使本方法相对于传统测定染色体端粒长度的方法更加快速、精确，适用于长期、大规模的研究工作。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法。
背景技术
端粒是短的多重复的非转录序列(TTAGGG)及一些结合蛋白组成特殊结构，除了提供非转录DNA的缓冲物外，它还能保护染色体末端免于融合和退化，在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长及寿命方面具有重要作用，并与细胞凋亡、细胞转化和永生化密切相关。当细胞分裂一次，每条染色体的端粒就会逐次变短一些。构成端粒的一部分基因约50～200个核苷酸，会因多次细胞分裂而不能达到完全复制(丢失)，以至细胞终止其功能不再分裂。因此，严重缩短的端粒是细胞老化的信号。在某些需要无限复制循环的细胞中，端粒的长度在每次细胞分裂后，被能合成端粒的特殊性DNA聚合酶-端粒酶所保留。
染色体端粒长度与衰老密切相关，可以作为人体衰老的指标。目前常用的染色体端粒长度的测定方法，主要包括地高辛探针标记的DNA印迹法(Southern blot)、端粒限制性片段(TRF)印迹法和实时定量PCR法。这些方法均具有耗时长、操作繁琐、精确度低等缺陷，不适用于长期大规模的研究工作。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法。
本发明具体技术方案如下：
本发明提供了一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括如下步骤：
S1：细胞样品预处理：收集待测细胞的单细胞悬液，洗涤后进行冰浴固定，固定结束后将固定液洗脱，得到待测细胞样品；
S2：端粒杂交：向所述待测细胞样品中加入端粒杂交液，在避光条件下进行冰浴，取出后进行高温水浴变性，并在避光、室温条件下进行杂交，得到待测杂交样品；所述端粒杂交液为含有0.3mg/ml端粒探针的杂交缓冲液，所述端粒探针的碱基序列如下：
Tel-PNA：FITC-dipeptide-CCCTAACCCTAACCCTAA；
本方法在高温水浴变性之前加入一个避光、冰浴的操作，目的是让端粒探针有充足的时间进入细胞内部，并且在DNA变性后能快速、有效地与端粒DNA进行杂交，提高杂交的效率和成功率，同时通过避光避免端粒探针的荧光染料FITC发生降解；荧光染料与端粒分子无法直接连接，因此需要通过一个二肽分子作为连接分子进行连接，本方法中优选为两个赖氨酸(Lys)分子形成的二肽；
S3：洗涤备用：向所述待测杂交样品加入洗脱液进行洗脱，共洗脱三次，弃去洗脱液后加入FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用；
S4：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，并计算染色体端粒的长度。
进一步地，所述步骤S1中，所述固定液为1％的多聚甲醛。
1％的多聚甲醛溶液作为固定液，相对于常用的Cytofix/Cytoperm试剂和4％的甲醛溶液来说，固定效果更好、性质更稳定，并且对细胞更加温和，使用更加方便。
进一步地，所述步骤S1中，所述洗脱使用的洗脱液为含有5％小牛血清和0.1％皂苷的磷酸缓冲液。
小牛血清和皂苷均具有抑制端粒酶活性的作用，可以防止实验过程中端粒酶对端粒产生影响、从而影响实验效果；同时，皂苷还是一种性质温和的表面活性剂，在提高洗脱效果、清除杂质的同时对细胞的损伤更小。
进一步地，所述步骤S2中，所述杂交缓冲液为至少含有70％去离子甲醛的20mMTris缓冲液。
杂交缓冲液中添加70％去离子甲醛，可以在长时间进行探针杂交时保护细胞结构和DNA的稳定性，以提高杂交的成功率。
进一步地，所述杂交缓冲液中还含有1％牛血清白蛋白。
牛血清白蛋白可以起到维持渗透压、调节pH平衡的作用，可以维持反应环境稳定、有助于杂交反应的顺利进行。
进一步地，所述步骤S1包括如下步骤：
S1.1：收集待测细胞的单细胞悬液，每管细胞数量为5～10*105；
S1.2：向所述单细胞悬液中加入2ml磷酸缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S1.3：向沉淀中加入250μl固定液，冰浴放置20min进行固定；
S1.4：向固定的细胞中加入1ml洗脱液Ⅰ进行洗涤，离心并弃去上清，重复上述操作，得到待测细胞样品。
该步骤的目的是对细胞样品进行处理，去除杂质，以便后续实验操作。
进一步地，所述步骤S2包括如下步骤：
S2.1：向所述待测细胞样品中加入1ml杂交缓冲液进行洗涤，离心、弃去上清；
S2.2：向洗涤过的所述待测细胞样品中加入300μl端粒杂交液，在避光条件下冰浴30min，所述端粒杂交液为含有0.3mg/ml端粒探针的杂交缓冲液；
S2.3：将样品从冰浴中取出，置于85～87℃的流动水浴中15min；
S2.4：将样品从水浴中取出，在避光条件下室温放置2h，得到待测杂交样品。
该步骤的目的是使端粒探针连接到细胞染色体上，以便成功实现杂交。
进一步地，所述步骤S3包括如下步骤：
S3.1：向所述待测杂交样品中加入1ml洗脱液Ⅱ，室温放置10min，离心并弃去上清，重复上述操作；
S3.2：向沉淀中加入3ml洗脱液Ⅲ，室温放置10min，离心并弃去上清；
S3.3：向沉淀中加入1ml FACS缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S3.4：向沉淀中加入200μl FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用。
该步骤的目的是对得到的样品进行洗涤，以除去杂质，便于后续的测定分析。
进一步地，所述洗脱液Ⅱ为中性的含有70％去离子甲醛的10mM Tris缓冲液；
所述洗脱液Ⅲ为磷酸缓冲液；
所述FACS缓冲液为含有5％小牛血清的磷酸缓冲液；
所述洗脱液Ⅱ和所述洗脱液Ⅲ中均添加有0.1％牛血清白蛋白和0.1％吐温-20。
与杂交缓冲液不同，此处洗脱液Ⅱ中牛血清白蛋白主要起到阻断剂的作用，防止反应结束后发生二次杂交、影响实验结果；吐温-20是一种良好的表面活性剂，可以提高杂质的亲水性，使之更易于洗脱。
进一步地，所述步骤S4包括如下步骤：
S4.1：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，得到所述悬浮样品中染色体端粒的平均荧光强度；
S4.2：使用荧光量子标准微球制作FITC标记的荧光量子标准曲线；
本方法中所用的荧光量子标准微球为FITC-labeled fluorescent calibrationbeads(Quantum TM-24Premixed；Bangs Laboratories)；
S4.3：将细胞样品的平均荧光强度转化为等值荧光分子数；
S4.4：根据所述细胞样品染色体端粒的等值荧光分子数，计算染色体端粒长度。
该步骤的目的是对细胞染色体端粒的荧光强度进行测定，并据此计算出染色体端粒长度。
本发明的有益效果如下：本发明提供了一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，在常规的变性杂交步骤前增加一个避光冰浴的操作，让端粒探针有充足的时间进入细胞内部，并且在DNA变性后能快速、有效地与端粒DNA进行杂交，提高杂交的效率和成功率；采用1％的多聚甲醛作为固定液，固定效果更好、更加稳定，使用更加方便；在杂交缓冲液中添加70％去离子甲醛，可以在长时间进行探针杂交时保护细胞结构和DNA的稳定性，以提高杂交的成功率。通过上述改进，使本方法相对于传统测定染色体端粒长度的方法更加快速、精确，适用于长期、大规模的研究工作。
附图说明
图1为实验例2中待测样品的流式图；
图2为实施例2中标准曲线的流式图；
图3为实施例2中得到的荧光量子标准曲线；
图4为实施例3中老年人外周血单个核细胞染色体端粒长度的曲线图；
图5为实施例3中年轻人外周血单个核细胞染色体端粒长度的曲线图；
其中：Peak1:4.48Kb；Peak2:7.49Kb；Peak3:14.37Kb。
具体实施方式
下面结合附图和以下实施例对本发明作进一步详细说明。需要说明的是，以下实施例中所用磷酸缓冲液、Tris缓冲液等试剂均为常规试剂，其成分的改进均是在常规配制方法的基础上进行的直接添加，因此不再对其现有的常规配制方法进行详细说明。
实施例1
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括如下步骤：
S1：细胞样品预处理：收集待测细胞的单细胞悬液，洗涤后进行冰浴固定，固定结束后将固定液洗脱，得到待测细胞样品；
S2：端粒杂交：向所述待测细胞样品中加入含有0.3mg/ml端粒探针的端粒杂交液，在避光条件下进行冰浴，取出后进行高温水浴变性，并在避光、室温条件下进行杂交，得到待测杂交样品，所述端粒探针的碱基序列如下：
Tel-PNA：FITC-Lys-Lys-CCCTAACCCTAACCCTAA；
S3：洗涤备用：向所述待测杂交样品加入洗脱液进行洗脱，共洗脱三次，弃去洗脱液后加入FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用；
S4：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，并计算染色体端粒的长度。
实施例2
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例1所述的操作步骤，其中所用的固定液为1％的多聚甲醛。
实施例3
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例2所述的操作步骤，其中洗脱使用的洗脱液为含有5％小牛血清和0.1％皂苷的磷酸缓冲液。
实施例4
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例3所述的操作步骤，其中所用的杂交缓冲液为至少含有70％去离子甲醛的20mM Tris缓冲液，其中还含有1％牛血清白蛋白。
实施例5
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例1所述的操作步骤，其中所述步骤S1包括如下步骤：
S1.1：收集待测细胞的单细胞悬液，每管细胞数量为5～10*105；
S1.2：向所述单细胞悬液中加入2ml磷酸缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S1.3：向沉淀中加入250μl固定液，冰浴放置20min进行固定；
S1.4：向固定的细胞中加入1ml洗脱液Ⅰ进行洗涤，离心并弃去上清，重复上述操作，得到待测细胞样品。
实施例6
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例5所述的操作步骤，其中所用的固定液为1％的多聚甲醛；所用的洗脱液Ⅰ为含有5％小牛血清和0.1％皂苷的磷酸缓冲液。
实施例7
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例1所述的操作步骤，其中所述步骤S2包括如下步骤：
S2.1：向所述待测细胞样品中加入1ml杂交缓冲液进行洗涤，离心、弃去上清；
S2.2：向洗涤过的所述待测细胞样品中加入300μl端粒杂交液，在避光条件下冰浴30min，所述端粒杂交液为含有0.3mg/ml端粒探针的杂交缓冲液；
S2.3：将样品从冰浴中取出，置于85～87℃的流动水浴中15min；
S2.4：将样品从水浴中取出，在避光条件下室温放置2h，得到待测杂交样品。
实施例8
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例7所述的操作步骤，其中所用的杂交缓冲液为中性的含有70％去离子甲醛的20mM Tris缓冲液，其中含有1％牛血清白蛋白。
实施例9
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例1所述的操作步骤，其中所述步骤S3包括如下步骤：
S3.1：向所述待测杂交样品中加入1ml洗脱液Ⅱ，室温放置10min，离心并弃去上清，重复上述操作；
S3.2：向沉淀中加入3ml洗脱液Ⅲ，室温放置10min，离心并弃去上清；
S3.3：向沉淀中加入1ml FACS缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S3.4：向沉淀中加入200μl FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用。
实施例10
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例9所述的操作步骤，其中所用的洗脱液Ⅱ为中性的含有70％去离子甲醛的10mM Tris缓冲液，其中含有蛋白和0.1％吐温-20；所用的洗脱液Ⅲ为磷酸缓冲液，其中含有蛋白和0.1％吐温-20；所用的FACS缓冲液为含有5％小牛血清的磷酸缓冲液。
实施例11
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例1所述的操作步骤，其中所述步骤S4包括如下步骤：
所述步骤S4包括如下步骤：
S4.1：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，得到所述悬浮样品中染色体端粒的平均荧光强度；
S4.2：使用荧光量子标准微球制作FITC标记的荧光量子标准曲线；
S4.3：将细胞样品的平均荧光强度转化为等值荧光分子数；
S4.4：根据所述细胞样品染色体端粒的等值荧光分子数，计算染色体端粒长度。
实施例12
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括如下步骤：
S1.1：收集待测细胞的单细胞悬液，每管细胞数量为5～10*105；
S1.2：向所述单细胞悬液中加入2ml磷酸缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S1.3：向沉淀中加入250μl固定液，冰浴放置20min进行固定，所述固定液为1％的多聚甲醛；
S1.4：向固定的细胞中加入1ml洗脱液Ⅰ进行洗涤，离心并弃去上清，重复上述操作，得到待测细胞样品；所述洗脱液Ⅰ为含有5％小牛血清和0.1％皂苷的磷酸缓冲液；
S2.1：向所述待测细胞样品中加入1ml杂交缓冲液进行洗涤，离心、弃去上清；所述杂交缓冲液为中性的含有70％去离子甲醛的20mM Tris缓冲液，其中含有1％牛血清白蛋白；
S2.2：向洗涤过的所述待测细胞样品中加入300μl端粒杂交液，在避光条件下冰浴30min，所述端粒杂交液为含有0.3mg/ml端粒探针的杂交缓冲液；
S2.3：将样品从冰浴中取出，置于85～87℃的流动水浴中15min；
S2.4：将样品从水浴中取出，在避光条件下室温放置2h，得到待测杂交样品；
S3.1：向所述待测杂交样品中加入1ml洗脱液Ⅱ，室温放置10min，离心并弃去上清，重复上述操作；所述洗脱液Ⅱ为中性的含有70％去离子甲醛的10mM Tris缓冲液，其中含有蛋白和0.1％吐温-20；
S3.2：向沉淀中加入3ml洗脱液Ⅲ，室温放置10min，离心并弃去上清；所述洗脱液Ⅲ为磷酸缓冲液，其中含有蛋白和0.1％吐温-20；
S3.3：向沉淀中加入1ml FACS缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清，所述FACS缓冲液为含有5％小牛血清的磷酸缓冲液；
S3.4：向沉淀中加入200μl FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用；
S4.1：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，得到所述悬浮样品中染色体端粒的平均荧光强度；
S4.2：使用荧光量子标准微球制作FITC标记的荧光量子标准曲线；
S4.3：将细胞样品的平均荧光强度转化为等值荧光分子数；
S4.4：根据所述细胞样品染色体端粒的等值荧光分子数，计算染色体端粒长度。
对照例1
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例5中的各步骤，其中使用的固定液为Cytofix/Cytoperm试剂。
对照例2
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例5中的各步骤，其中使用的洗脱液Ⅰ中的皂苷替换为吐温-20。
对照例3
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例7中的各步骤，其中使用的杂交缓冲液为20mM的Tris缓冲液。
对照例4
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，不经过避光冰浴、直接进行高温水浴变性，其余步骤与实施例7相同。
对照例5
一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，包括实施例12中的各步骤，其中步骤S1.2中使用的固定液为4％的甲醛溶液；步骤S1.4中使用的洗脱液Ⅰ中的皂苷替换为吐温-20；步骤S2.1中使用的杂交缓冲液为20mM的Tris缓冲液，并且不经过避光冰浴、直接进行高温水浴变性。
实验例1
不同测定方法效果比较
采集体外培养的细胞样品，分别采用实施例5、7、12的方法作为实验组1～3，采用对照例1～5的方法作为对照例1～5，对细胞样品进行处理，并对染色体端粒的平均荧光强度进行比较。结果见表2。
表2通过不同方法测得的细胞染色体端粒平均荧光强度结果
| 组别 | MFI测定值 |
| 实验组1 | 81.7 |
| 实验组2 | 82.2 |
| 实验组3 | 85.4 |
| 对照组1 | 76.6 |
| 对照组2 | 74.3 |
| 对照组3 | 75.8 |
| 对照组4 | 73.7 |
| 对照组5 | 70.6 |
由表2可知，实验组1～3的细胞染色体端粒平均荧光强度测定结果均显著高于对照组各组，并且其中对照组5的测定结果最低，表明采用对照组各组的方法测得的细胞染色体端粒长度较实验组各组偏低。说明本发明提供的测定方法能够准确、有效地测定细胞染色体端粒长度，其中做出的几项改进均能有效缩小测定的误差，提高测定的精度。
实验例2
细胞样品染色体端粒长度测定
取体外培养细胞样品，通过实施例12提供的的方法，对细胞染色体端粒长度进行测定，同时用与端粒不相关的DNA序列作为阴性对照。
流式分析结果如图1所示，实验组的MFI为85.4，对照组的MFI为7.8，由此可以计算出细胞样品染色体端粒的平均荧光强度MFI＝85.4-7.8＝77.6。
图2和图3分别为为荧光量子标准微球的平均荧光强度的流式图和标准曲线，具体数值见表1。
表1荧光量子标准微球的平均荧光强度测定结果
| 荧光量子标准微球 | 标准MESF | MFI测定值 |
| R2 | 0 | 4.3 |
| R3 | 3348 | 25.5 |
| R4 | 9039 | 61.9 |
| R5 | 21855 | 168.0 |
| R6 | 60657 | 434.7 |
根据FITC标记的荧光量子标准曲线，计算出细胞样品染色体端粒的等值荧光分子数MESF＝10485，并根据经验公式bp＝MESF*0.459，计算出细胞样品染色体端粒的长度为5.19Kb。
实验例3
端粒长度与细胞衰老程度的关系
分别从75岁的老年人和25岁的年轻人的外周血中提取出单个核细胞，通过实施例12提供的方法，对外周血单个核细胞染色体端粒长度进行测定，并进行比较。
图4和图5分别为老年人和年轻人外周血单个核细胞染色体端粒长度的曲线图，从图中可知，老年人外周血单个核细胞染色体端粒长度只有一个种群，其长度为3.94Kb；年轻人外周血单个核细胞染色体端粒长度共有三个种群，其长度分别为4.48Kb、7.49Kb以及14.37Kb。由此可知年轻人染色体端粒的长度均大于老年人，种群数也多于老年人。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 沃森克里克（北京）生物科技有限公司
<120> 流式细胞仪测定染色体端粒长度的快速方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 1
ccctaaccct aaccctaa 18
Claims (2)
1.一种流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，其特征在于，该方法应用于非诊断目的，包括如下步骤：
S1：细胞样品预处理：收集待测细胞的单细胞悬液，洗涤后进行冰浴固定，固定结束后将固定液洗脱，得到待测细胞样品；所述洗脱使用的洗脱液Ⅰ为含有5%小牛血清和0.1%皂苷的磷酸缓冲液；
S2：端粒杂交：向所述待测细胞样品中加入端粒杂交液，在避光条件下进行冰浴，取出后进行高温水浴变性，并在避光、室温条件下进行杂交，得到待测杂交样品；所述端粒杂交液为含有0.3mg/ml端粒探针的杂交缓冲液，所述杂交缓冲液为含有70%去离子甲醛和1%牛血清白蛋白的20mM Tris缓冲液，所述端粒探针的碱基序列如下：
Tel-PNA：FITC-Lys-Lys-CCCTAACCCTAACCCTAA；
S3：洗涤备用：向所述待测杂交样品加入洗脱液进行洗脱，共洗脱三次，弃去洗脱液后加入FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用；
S4：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，并计算染色体端粒的长度；
步骤S1中，所述固定液为1%的多聚甲醛；
步骤S1包括如下步骤：
S1.1：收集待测细胞的单细胞悬液，每管细胞数量为5~10*105；
S1.2：向所述单细胞悬液中加入2ml磷酸缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S1.3：向沉淀中加入250μl固定液，冰浴放置20min进行固定；
S1.4：向固定的细胞中加入1ml洗脱液Ⅰ进行洗涤，离心并弃去上清，重复上述操作，得到待测细胞样品；
步骤S2包括如下步骤：
S2.1：向所述待测细胞样品中加入1ml杂交缓冲液进行洗涤，离心、弃去上清；
S2.2：向洗涤过的所述待测细胞样品中加入300μl端粒杂交液，在避光条件下冰浴30min，所述端粒杂交液为含有0.3mg/ml端粒探针的杂交缓冲液；
S2.3：将样品从冰浴中取出，置于85~87℃的流动水浴中15min；
S2.4：将样品从水浴中取出，在避光条件下室温放置2h，得到待测杂交样品；
步骤S3包括如下步骤：
S3.1：向所述待测杂交样品中加入1ml洗脱液Ⅱ，室温放置10min，离心并弃去上清，重复上述操作；
S3.2：向沉淀中加入3ml洗脱液Ⅲ，室温放置10min，离心并弃去上清；
S3.3：向沉淀中加入1ml FACS缓冲液进行洗涤，离心并弃去上清；
S3.4：向沉淀中加入200μl FACS缓冲液进行悬浮，得到悬浮样品，低温保存备用；
所述洗脱液Ⅱ为中性的含有70%去离子甲醛的10mM Tris缓冲液；
所述洗脱液Ⅲ为磷酸缓冲液；
所述FACS缓冲液为含有5%小牛血清的磷酸缓冲液；
所述洗脱液Ⅱ和所述洗脱液Ⅲ中均添加有0.1%牛血清白蛋白和0.1%吐温-20。
2.如权利要求1所述的流式细胞仪测定染色体端粒长度的方法，其特征在于，所述步骤S4包括如下步骤：
S4.1：用流式细胞仪对所述悬浮样品进行分析，得到所述悬浮样品中染色体端粒的平均荧光强度；
S4.2：使用荧光量子标准微球制作FITC标记的荧光量子标准曲线；
S4.3：将细胞样品的平均荧光强度转化为等值荧光分子数；
S4.4：根据所述细胞样品染色体端粒的等值荧光分子数，计算染色体端粒长度。
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