CN107488241A - 氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种氧化还原响应型的环糊精修饰的1‑甲基‑β‑咔啉‑3‑羧酸偶联物及其制备方法和应用，属于1‑甲基‑β‑咔啉‑3‑羧酸偶联物的制备领域。本发明选用胱胺为连接臂，将1‑甲基‑β‑咔啉‑3‑羧酸与β‑环糊精偶联，形成具有抗肿瘤活性的氧化还原响应型1‑甲基‑β‑咔啉‑3‑羧酸偶联物。本发明的新型β‑咔啉偶联物，不仅可以改善1‑甲基‑β‑咔啉‑3‑羧酸的溶解度及生物利用度，而且可以通过二硫键对肿瘤环境氧化还原的应答，实现对药物的智能靶向释放，从而显著提高抗肿瘤活性，在低剂量下发挥其抗肿瘤药效。本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1‑甲基‑β‑咔啉‑3‑羧酸偶联物能够应用于制备抗肿瘤药物。

Description

氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联 物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物，尤其涉及氧化还原响应型β-环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物及其制备方法，本发明还涉及该氧化还原响应型β-环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物在抗肿瘤中的应用，属于1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物的制备领域。
背景技术
恶性肿瘤是多发性疾病，对人类健康造成了严重危害。发展恶性肿瘤的临床化疗药物一直是肿瘤研究的热点之一。基于天然来源的药物越来越受到药物研发人员的重视。自从1841年Gobel首次从蒺藜科(Zygophyllaceae)植物骆驼蓬(Peganum harmala)中分离得到去氢骆驼蓬碱(Harmine)以来，β-咔啉类生物碱成为研究最为深入的咔啉类生物碱。β-咔啉类生物碱广泛分布于自然界中，具有抗焦虑、抗血栓、镇静、抗肿瘤等广谱的药理活性。因此，β-咔啉类生物碱的化学结构修饰合成一直备受关注。1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的衍生物可以通过与肿瘤细胞DNA之间通过嵌插作用而发挥其抗肿瘤作用，但是1-甲基-β-咔啉-3-羧酸作为抗肿瘤剂，其在体内溶解度低、生物利用度低以及毒副作用，影响了其作为抗肿瘤剂的临床应用。
肿瘤临床的化学治疗通常不容易获得满意疗效。在众多影响因素中，抗肿瘤药物的毒副作用至关重要。基于纳米载药体系实现对抗肿瘤药物的智能运输设计已成为医药领域的前沿学科，正逐步实现临床医学应用。抗肿瘤药物在体内运输过程中会受到氧化还原物质等内源性刺激。智能型药物载体在外界环境刺激下导致某些物理或化学性质的显著变化，从而产生特异性响应，改变药物进入人体内的方式和分布、控制药物释放速度并将其输送到靶器官的体系，因此可以提高药物的治疗效率，降低对正常组织和器官的侵袭。谷胱甘肽(GSH)是一种还原剂，能特异性地还原二硫键。研究发现，细胞内GSH的含量比细胞外液中高2～3个数量级。肿瘤组织细胞比正常组织细胞缺氧，肿瘤细胞中的GSH浓度比正常细胞高出4～7倍，呈现出还原性环境。含有二硫键的药物和载体通过细胞内吞作用进入肿瘤细胞后被GSH还原，连接药物和载体的二硫键断裂生成巯基，药物被有效地释放。
环糊精是一类D-型吡喃葡萄糖以1,4-苷键首尾相连的环状分子，具有疏水的内腔和亲水的外壁。其亲水外壁的羟基可以作为功能修饰的位点，而环糊精的空腔可用来与各种有机、无机和药物分子通过疏水、范德华力等非共价键的包结配位作用形成超分子体系。中国发明专利(公布号CN 102952207 A)公开了以β-环糊精为药物载体通过乙二胺为连接臂与1-甲基-β-咔啉-3-羧酸连接得到的化合物与阿霉素形成的超分子包结配合物，降低阿霉素的毒性，但并未公开该化合物对肿瘤的还原环境具有响应性应答，该化合物在6μmol/kg的高剂量下的肿瘤抑制率仅为31.60％。
因此，开发一种新的具有良好抗肿瘤活性的氧化还原响应型的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸衍生物，通过对肿瘤还原环境的应答实现对抗肿瘤剂1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的智能运输，增强1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的抗肿瘤活性，将具有重要的意义和临床应用价值。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种氧化还原响应型环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物，该化合物通过对肿瘤氧化还原环境的响应性应答，实现对抗肿瘤药物1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的智能靶向释放，提高抗肿瘤活性。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种所述氧化还原响应型环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物的制备方法。
本发明所要解决的第三个技术问题是将所述氧化还原响应型环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物应用于制备抗肿瘤药物。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
本发明首先公开了一种氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物，化学名称为6-(1-甲基-β-咔啉-3-羧酸胱氨酰基)-6-脱氧-β-环糊精，其结构为式Ⅰ所示：
其中，β-CD为β-环糊精。
本发明进一步公开了一种制备所述环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物的方法，包括以下步骤：将6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精与1-甲基-β-咔啉-3-羧酸进行缩合反应，得到式Ⅰ所示结构的化合物，即得。其中，所述6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精的结构为式Ⅱ所示：
其中，β-CD为β-环糊精。
本发明所述环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物的制备方法中，所述缩合反应具体包括：将1-甲基-β-咔啉-3-羧酸用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解，室温下加入1-羟基苯并三唑(HOBT)，冰浴下加入N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)，进行活化；然后加入6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精进行脱水缩合。
本发明所述6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精的制备包括：(1)将β-环糊精与Ts2O反应，制得单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精；(2)将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精与胱胺反应，制得6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精，即得。其中，步骤(2)所述将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精与胱胺反应，包括：将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精用N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后加入胱胺，油浴、氮气保护下反应，终止反应，即得。
本发明所述1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的制备包括：(a)在酸性条件下(浓硫酸和水)，将L-色氨酸与乙醛在室温下反应，得到(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸；(b)冰浴下，向甲醇中加入二氯亚砜，然后加入(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸，反应得到(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；(c)将(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯在冰浴下用丙酮溶解，然后加入高锰酸钾，在室温下反应制得1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；(d)将1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯用氢氧化钠溶液溶解，油浴下反应得到1-甲基-β-咔啉-3-羧酸，即得。
本发明所述氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物能够应用于制备智能运输抗肿瘤药物的药物载体。本发明所述环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物可以作为一种药物载体，与临床上应用的抗肿瘤药物形成超分子包结配合物，这一超分子包结配合物能通过对肿瘤还原环境的响应性应答，实现对包结在β-环糊精空腔内的抗肿瘤化合物进行有效释放，从而降低抗肿瘤化合物的毒性，使其在低剂量下发挥抗肿瘤作用。
本发明所述氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物还能够应用于制备抗肿瘤药物。
体外还原响应释放实验结果表明，本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物对还原剂GSH有良好的还原响应性，药物对肿瘤环境具有刺激响应释放的能力。
体外细胞毒实验结果证明，本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物在GSH的刺激响应下可以增强药物在细胞内的释放，从而提高对肿瘤细胞的增殖抑制率；在其给药剂量100μmol/L条件下，加入谷胱甘肽乙酯实验组比未加谷胱甘肽乙酯对照组的肿瘤细胞抑制率显著增加，因为当加入谷胱甘肽乙酯培养细胞后，细胞核内的谷胱甘肽浓度升高，高的谷胱甘肽浓度促进了药效团的释放，从而增强了对肿瘤细胞的抑制率。
体内抗肿瘤活性实验结果表明，本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物在1μmol/kg的给药剂量下的肿瘤抑瘤率为47.87％，显示出优秀的抗肿瘤性能。剂量依赖性研究表明，依次降低本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物的剂量，在1μmol/kg、0.1μmol/kg、0.01μmol/kg的剂量下，各组瘤重之间相比，p<0.05，表明各个剂量组之间差异性显著，符合量效关系。其中，在0.01μmol/kg剂量下的肿瘤抑瘤率为18.62％，表明本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物在低剂量下仍能发挥出抗肿瘤作用。
本发明氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物具有优秀的抗肿瘤活性，为新型抗肿瘤化合物的开发提供了良好的基础，在肿瘤治疗领域展现出潜在的应用前景。
本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
本发明选用胱胺为连接臂，将β-环糊精主面6位上的羟基与1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联，形成具有还原响应的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸衍生物，不仅可以通过药物载体β-环糊精改善1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的溶解度及生物利用度，而且还可以通过对肿瘤还原环境的应答，实现对抗肿瘤药物1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的智能运输，增强1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的抗肿瘤活性，使其在远低于6μmol/kg的低剂量下发挥抗肿瘤作用。
附图说明
图1为本发明化合物(7)的合成路线；
图2为本发明化合物(7)在体外还原响应的HPLC图；其中，由上至下，纵坐标分别为0、25、60、75、100、125mAU；0、60、100、150mAU；0、50、100、150、200mAU；横坐标分别为5、10、15、20、25、30min；7为化合物(7)，GSH为还原型谷胱甘肽，GSSG为氧化型谷胱甘肽；
图3为谷胱甘肽乙酯对本发明化合物(7)细胞毒活性的影响；
图4为本发明化合物(7)的体内肿瘤量效关系。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1制备(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸(1)
将0.2ml浓硫酸逐滴加入80ml水中，将L-色氨酸(2.0g，9.79mmol)加入到水溶液中，超声溶解后加入40％的乙醛溶液2ml，室温下搅拌6h。中止反应时加入氨水调pH至6～7，混合液于4℃冰箱静置过夜。减压过滤得到白色固体(1.8g，80％)。ESI/MS(m/z):231[M+H]+。
实施例2制备(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2)
在250ml茄瓶中加入甲醇75ml，冰浴下逐滴加入二氯亚砜(6.6ml，60.06mmol)，冰浴下搅拌30min后，缓慢加入(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸(5g，21.64mmol)，反应9-10h，将反应溶剂抽干，加入乙醚20ml磨洗3遍，得到白色固体。将得到的白色固体用乙酸乙酯100ml溶解，加入饱和碳酸氢钠溶液室温下搅拌30min后萃取，将乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥30min，旋去乙酸乙酯得浅黄色油状物(4.8g，90.57％)。ESI/MS(m/z):245[M+H]+。
实施例3制备1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(3)
在250ml茄瓶中加入(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(4.8g，19.59mmol)，冰浴下加入丙酮将其溶解，少量多次加入高锰酸钾(6.2g，39.24mmol)，室温下反应6h后移除溶剂，加入甲醇50ml复溶。柱层析分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝60:1，Rf＝0.3)得到白色固体(1.6g，34％)。ESI/MS(m/z):241[M+H]+。
实施例4制备1-甲基-β-咔啉-3-羧酸(4)
在250ml茄瓶中1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2.5g，10.37mmol)，用2mol/L NaOH溶液50mL将其溶解，60℃油浴下搅拌6h后终止反应，冷却至室温，在冰浴下加入饱和硫酸氢钾溶液调pH至2。减压过滤收集沉淀，得到淡黄色粉末(1.56g，60％)。ESI/MS(m/z):227[M+H]+。
实施例5制备单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精(5)
将β-环糊精(10g，88mmol)溶解到220ml 50℃水中，冰浴下加入Ts2O(4.261g，13mmol)搅拌2h。向反应液中滴加10％NaOH水溶液终止反应，继续搅拌20min后将固体过滤。将滤液pH值调为中性，将析出的固体过滤后得白色固体(3.0g，26.7％)。ESI/MS(m/z):1290.2[M+H]+。
实施例6制备6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精(6)
将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精(500mg，0.39mmol)(5)用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)10ml溶解，加入胱胺(296.4mg，1.95mmol)，70℃油浴、氮气保护下反应10h后终止反应，将反应体系恢复至室温。处理后得到淡黄色固体(352mg，71.1％)。ESI/MS:1270.2[M+H]+。
实施例7制备6-(1-甲基-β-咔啉-3-羧酸胱氨酰基)-6-脱氧-β-环糊精(7)
将1-甲基-β-咔啉-3-羧酸(137.12mg，0.61mmol)(4)用DMF(12ml)溶解，室温下加入HOBt(89.38mg，0.67mmol)，冰浴下加入DCC(137.1mg，0.67mmol)，活化2h。2h后加入6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精(6)(704mg，2.20mmol)。24h后，将DCU滤掉，旋去DMF。柱层析分离纯化得白色固体(49.6mg，9.8％)(图1),Q-TOF/MS(m/z):1477.4[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ＝11.944(s,1H),8.793(s,1H),8.674(s,1H),8.357(d,1H),7.601-7.656(m,2H),7.260-7.308(m,1H),5.691-5.721(m,14H),4.831(s,7H),3.334-3.640(m,46H),2.846-2.958(m,8H),2.543(s,3H).13CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝165.39,141.37,141.27,139.35,136.35,128.75,127.87,122.60,121.90,120.38,112.66,102.43,82.02,73.52,72.90,72.49,62.47,60.37,49.06,48.71,38.75,37.77,20.90。
实验例1本发明化合物(7)的体外还原响应释放实验
本发明化合物(7)的化学结构中含有二硫键(S-S)，结构简写为CD-S-S-K，化合物在还原环境中则会被还原剂(如还原型谷胱甘肽GSH)断裂，生成含有巯基(-SH)的还原产物，将会得到CD-SH，KSH，GSSG等产物，且极性发生改变。因此利用HPLC可以检测到处于还原环境中本发明化合物(7)的峰消失，在另一处则出现还原产物的新峰，以及GSH的氧化产物GSSG的峰的出现(图2)。说明本发明化合物(7)对还原剂GSH有良好的还原响应性，药物对肿瘤环境具有刺激响应释放的能力。
实验例2谷胱甘肽乙酯对本发明化合物(7)细胞毒活性的影响
选取处于对数生长期且生长状况良好的A2780细胞系(人卵巢癌细胞)、MCF-7细胞系(人乳腺癌细胞)、CaCo-2细胞系(人结肠腺癌细胞)、CaES-17细胞系(人食管癌细胞)、BGC-823细胞系(人胃癌细胞系)以5×105个/ml接种于96孔板中，每孔加100μL带细胞的培养基。在37℃、5％CO2条件下，培养4h待细胞贴壁后，实验组吸掉旧培养基加入含10mM GSH-OEt的培养基100μL培养2h；对照组继续用普通培养基培养。2h后将实验组孔内的培养基吸出并用1×PBS洗三次再加入普通培养基。将实验组与对照组加入浓度相等的药液培养48h，48h后加入MTT溶液(5mg/ml)进行染色，每孔25μL。连续培养4h后，将上清去掉并加入100μLDMSO溶液。在摇床上摇20min，待沉淀完全溶解后用酶标仪在490nm波长下检测吸光度。结果见表1。
在体外细胞毒实验中，分别评价了本发明化合物(7)在给药剂量100μmol/L条件下加入谷胱甘肽乙酯(GSH-OEt)对于A2780、MCF-7、CaCo-2、CaES-17、BGC-823五株肿瘤细胞的细胞活性的影响。实验结果显示(图3)，就A2780细胞而言，在100μmol/L的给药剂量下，未加谷胱甘肽乙酯的对照组和加谷胱甘肽乙酯的实验组的抑制率分别为17.62％±2.56％、35.71％±3.36％；MCF-7细胞在100μmol/L的给药剂量下，对照组和实验组的抑制率分别为26.81％±4.28％、36.5％±2.72％；CaCo-2细胞在100μmol/L的给药剂量下，对照组和实验组的抑制率分别为13.91％±2.29％、49.64％±3.05％；CaES-17细胞在100μmol/L的给药剂量下，对照组和实验组的抑制率分别为38.06％±2.31％、59.80％±1.24％；BGC-823细胞在100μmol/L的给药剂量下，对照组和实验组的抑制率分别为7.88％±0.69％、33.01％±2.13％。加入谷胱甘肽乙酯的实验组比未加谷胱甘肽乙酯对照组的抑制率显著增加。这是因为当加入谷胱甘肽乙酯培养细胞后，细胞核内的谷胱甘肽浓度升高，高的谷胱甘肽浓度促进了药效团的释放，从而增强了对肿瘤细胞的抑制率。
表1谷胱甘肽乙酯对本发明化合物(7)细胞毒活性的影响*
*n＝6。
实验例3荷S180小鼠移植性肿瘤模型评价化合物(7)体内抗肿瘤活性实验
无菌条件下取接种于ICR小鼠7-10天的S180肉瘤细胞，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为1.2×107个/ml，接种于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0.2ml瘤液。健康ICR雄性小鼠静息一天后，第二天在每只小鼠腋下接种S180细胞液0.2ml，并在接种后随机分为5组。肿瘤接种24h后，即第三天起，每组分别连续9天给药，实验组小鼠每日灌胃给药0.2ml本发明化合物7的水溶液(分别为10nmol/kg、100nmol/kg、1μmol/kg)。空白组小鼠每日灌胃给药0.2ml生理盐水。对照组小鼠每日腹腔注射0.2ml阿霉素水溶液(2μmol/kg)。第12天对各组小鼠脱椎处死，取出每只小鼠的肿瘤称重，最后统计化合物的抑瘤率。化合物的疗效以瘤重抑制百分率表示，抑瘤率按公式计算：抑瘤率＝(生理盐水组平均瘤重－实验组平均瘤重)/生理盐水组平均瘤重；统计方法采用独立样本T检验。实验结果见表2和图4。
表2不同剂量的主体分子对ICR小鼠肿瘤形成的影响*
瘤重用表示，n＝12；阿霉素用Dox；a)与NS组相比，p<0.01；b)与0.1μmol/kg组相比，p<0.05；与Dox组相比，p<0.05。c)与0.01μmol/kg组相比，p<0.05。
在体内小鼠移植性肿瘤模型中，分别对阳性对照组阿霉素(Dox)、本发明化合物(7)进行抗肿瘤评价，得出以下结果：(1)阿霉素(Dox)在2μmol/kg的给药剂量下的抑瘤率为63.29％，与生理盐水组进行统计学差异分析得到p<0.01，表示差异性极显著。(2)本发明化合物(7)在1μmol/kg的给药剂量下的抑瘤率为47.87％，与生理盐水组进行统计学差异分析得到p<0.01，表示差异性极显著，说明本发明化合物(7)在1μmol/kg显示出优秀的抗肿瘤性能。化合物(7)的剂量依赖性研究表明，依次降低化合物(7)的剂量，在1μmol/kg、0.1μmol/kg、0.01μmol/kg的剂量下，各组瘤重之间相比，p<0.05，表明各个剂量组之间差异性显著，符合量效关系。并且本发明化合物(7)在0.01μmol/kg的剂量下的抑瘤率为18.62％，与生理盐水组进行统计学差异分析得到p<0.05，表示差异性显著，表明本发明化合物(7)在0.01μmol/kg的低剂量下仍能发挥出抗肿瘤作用。

Claims (9)

1.一种氧化还原响应型的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物，其特征在于，其为式Ⅰ所示结构的化合物：
其中，β-CD为β-环糊精。
2.一种制备权利要求1所述的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物的方法，其特征在于，包括以下步骤：将6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精与1-甲基-β-咔啉-3-羧酸进行缩合反应，即得。
3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于：所述6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精的结构为式Ⅱ所示：
其中，β-CD为β-环糊精。
4.按照权利要求2所述的方法，其特征在于：所述缩合反应是将1-甲基-β-咔啉-3-羧酸用N,N-二甲基甲酰胺溶解，室温下加入1-羟基苯并三唑，冰浴下加入N,N'-二环己基碳二亚胺，进行活化；然后加入6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精进行脱水缩合。
5.按照权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精的制备包括：
(1)将β-环糊精与Ts2O反应，制得单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精；(2)将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精与胱胺反应，制得6-胱氨酰基-6-脱氧-β-环糊精，即得。
6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精与胱胺反应，包括：将单(6-氧-6-对甲苯磺酰基)-β-环糊精用N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后加入胱胺，油浴、氮气保护下反应，终止反应，即得。
7.按照权利要求2所述的方法，其特征在于，所述1-甲基-β-咔啉-3-羧酸的制备包括：
(a)在酸性条件下，将L-色氨酸与乙醛在室温下反应，得到(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸；
(b)冰浴下，向甲醇中加入二氯亚砜，然后加入(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸，反应得到(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；
(c)将(3S)-1,2,3,4-四氢甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯在冰浴下用丙酮溶解，然后加入高锰酸钾，在室温下反应制得1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；
(d)将1-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯用氢氧化钠溶液溶解，油浴下反应得到1-甲基-β-咔啉-3-羧酸，即得。
8.权利要求1所述的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物在制备智能运输抗肿瘤药物的药物载体中的应用。
9.权利要求1所述的环糊精修饰的1-甲基-β-咔啉-3-羧酸偶联物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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