CN107478823B - 一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚a的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，通过在Fe3O4磁纳米粒子悬液中添加1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺进行活化后，与适配体DNA1偶联制备Fe3O4‑DNA1悬液；在金纳米粒子上修饰适配体互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶，形成DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物；Fe3O4‑DNA1悬液、待测试样、DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物溶液混合，检测pH。本发明提出的方法，以金纳米材料为载体进行乙酰胆碱酯酶和互补链的功能化，通过目标物驱动功能化金/磁纳米粒子的组装，建立目标物浓度与pH值的线性关系，是一种简便快捷、高灵敏度、高选择性的检测方法。

Description

一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法
技术领域
本发明属于检测领域，具体地，涉及一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法。
背景技术
近几年，与双酚A相关的食品安全事件发生频繁，对人们的身心健康都产生了一定的影响和危害。双酚A是生产聚碳酸酯和环氧树脂等多种高分子材料的主要原料，也可用于抗氧剂、涂料、农药等精细化工品的生产。食品中双酚A的残留主要来源于食品原材料和食品包装材料：(1)双酚A在环境中难以降解，广泛存在于自然界中，尤其存在于环境水和塑料制品中，并在生物体内富集，通过食物链进入食品中；(2)由于双酚A是脂溶性的，因此在含脂肪较高的罐头等制品中，双酚A还可通过食品包装容器和塑料薄膜渗入食品中；(3)含有双酚A的物品经反复使用或暴露于高热环境也会导致双酚A浸入，进而被人体摄入。因此双酚A无处不在，从矿泉水瓶、婴儿奶瓶、医疗器械、各种罐头食品，甚至是眼镜片以及其他日用品的原材料中，都有它的身影，与我们的日常生活密切相关。由于双酚A的化学结构类似乙烯雌酚和雌二醇，因此也具有了与其他环境激素一样的生物效应，其能够通过模仿或干扰内源性雌激素从而发挥出一种拟雌激素作用。在生物体的生殖遗传、生长发育过程中，双酚A对机体免疫系统、呼吸系统、神经系统等各种方面均会产生不利的影响。
现阶段已报道关于双酚A的常用检测方法主要有色谱法(液相色谱法、液-质联用法、气相色谱法、气-质联用法)、分光光度法、荧光分析法、电化学分析法及酶联免疫法等。色谱法对样品的前处理过程要求严格，分析繁琐费时。分光光度法和荧光分光光度法仪器设备成本低，操作步骤简单，但检测方法的灵敏度相对偏低；电化学分析法虽然成本低，但双酚A在裸电极上电化学响应差，且易造成电极表面钝化，需对电极进行修饰实现增敏和抗污染。这些较为成熟的研究方法，都存在着明显的不足，同时难以实现原位检测。
发明内容
针对本领域存在的不足之处，本发明针对现有双酚A检测所依赖大型检测仪器，无法实现原位检测的不足，提供了一种基于乙酰胆碱酯酶放大原理，通过通用型pH试纸或pH计对双酚A实现定量检测的方法。
实现本发明目的的技术方案为：
一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，包括操作：
通过在Fe3O4磁纳米粒子上修饰EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，制成活化磁纳米粒子，再与DNA1(5′-NH3-(T)10-CCGGTGGGTG GTCAG GTGGG ATAGC GTTCC GCGTA TGGCC CAGCG CATCA CGGGT TCGCA CCA-3′)反应，制得Fe3O4-DNA1悬液。
在金纳米粒子上修饰适配体DNA1的互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶(AchE)，形成DNA2-AuNPs-AchE聚合物并分散于磷酸缓冲液中；
Fe3O4-DNA1悬液、待测试样、DNA2-AuNPs-AchE聚合物溶液混合，用磁铁分离，磁铁吸附的样品重悬于pH 6.0的乙酰胆碱(acetylcholine；Ach)溶液中，水解15min后用pH计或pH试纸进行检测。
上述操作的前两步不分先后。
本发明优选技术方案包括，所述Fe3O4磁纳米粒子的粒径为50～200nm，Fe3O4磁纳米粒子经SiO2包覆、氨基化后与过量的EDC和NHS在室温下孵育20～40min，然后通过磁分离去除残留的EDC和NHS，取DNA1与活化的磁纳米粒子反应5～8h，然后重悬于超纯水中储存在2～6℃下备用。
所述Fe3O4磁纳米粒子可以按本领域所知的方法获得。
可选地，所述Fe3O4磁纳米粒子通过水热法合成，具体为：六水合三氯化铁和乙酸钠溶于乙二醇，然后加入少量聚乙二醇，搅拌后转移至水热反应釜中，在200～230℃下反应10～15h，反应完成后将得到的产物用无水乙醇洗3～8次，置于室温下干燥；
其中，六水合三氯化铁、乙酸钠、乙二醇、聚乙二醇的质量比为2∶3～6∶50～80∶1～2。
其中，所述的SiO2包覆、氨基化的操作为：Fe3O4磁纳米粒子溶于0.05～0.2M盐酸，超声5～15min，再用去离子水洗涤，磁铁分离去上清液，将Fe3O4均匀分散在溶液中，所述溶液由乙醇2～6体积份和超纯水1体积份组成，并加入质量浓度20～35％的氨水，
其中，Fe3O4磁纳米粒子、氨水的质量比为0.3∶2～5；
随后加入硅酸四乙酯，搅拌10～20h后，用乙醇和水洗涤、干燥，干燥后的磁纳米粒子与3-氨丙基-3-乙氧基硅烷(APTES)混合，加入无水乙醇，在50～70℃下反应5～8h。
可选地，所述Fe3O4磁纳米粒子和3-氨丙基-3-乙氧基硅烷的加入比例为0.1～0.5g∶5mL。
优选地，所述金纳米粒子的粒径在10～20纳米，修饰DNA2及乙酰胆碱酯酶(AchE)的方法为：金纳米粒子与10μM的DNA2(5’-SH-(T)10-CCCAC CTGAC CACCC ACCGG-3’)混合反应20～30h，离心分离除去未反应的试剂，弃上清，重悬于pH 7～8的缓冲液中，得DNA2-AuNPs偶联物；加入AchE到偶联物溶液中使得AchE的终浓度为100μg/mL，在室温下孵育60min，轻微振荡以形成DNA2-AuNPs-AchE聚合物。
更优选地，所述金纳米粒子通过以下方法制备：超纯水和质量浓度为0.2～0.5％的氯金酸溶液混合，加热至沸腾，7-8min后加入质量浓度为0.5～2％柠檬酸三钠溶液，溶液从无色变为红色后，停止加热，继续搅拌10～20min；
其中，超纯水、氯金酸溶液、柠檬酸三钠溶液的体积比为90～100∶1～5∶2。
其中，取金纳米粒子溶液与DNA2混合反应24h，以7000r/min离心20min除去未反应的试剂；其中，取金纳米粒子溶液与DNA2的体积比为50～200∶1。
所述的方法包括用标准溶液构建标准曲线的操作，具体为：取500μL Fe3O4-DNA1悬液置于2mL离心管中，加入1mL浓度为10pg/mL～100pg/mL的双酚A标准溶液，室温下孵育2h，磁铁分离弃上清，形成Fe3O4-DNA1-BPA聚合物；
再加入500μL DNA2-AuNPs-AchE悬液，室温下孵育4h，磁铁分离，用Tris缓冲液洗涤2次，重悬于25mM，pH 6.0乙酰胆碱溶液中，水解15min后用pH计或pH试纸进行检测，构建pH值和双酚A关联的标准曲线。
本发明方法具有以下优点：
由于日常生活中双酚A检测样品多是饮用水，超市、批发商的消费流通环节中的一些含包装的快速消费品，这些样品的检测通常具有时效性，需要原位快速检测。而目前常用的检测方法较为复杂、费时。本方法分别以金纳米材料为载体进行乙酰胆碱酯酶和互补链的功能化，磁纳米材料为载体进行适配体功能化，通过目标物驱动功能化金/磁纳米粒子的组装，利用乙酰胆碱酯酶催化底物，改变反应体系的pH值，建立目标物浓度与pH值的线性关系，通过通用的pH试纸和pH计实现快速、灵敏的双酚A原位检测。
本发明的方法以金纳米材料为载体进行乙酰胆碱酯酶和互补链的功能化，磁纳米材料为载体进行适配体功能化，通过目标物驱动功能化金/磁纳米粒子的组装，利用乙酰胆碱脂酶催化底物，改变反应体系的pH值，建立目标物浓度与pH值的线性关系，从而建立新型易携、简便快捷、高灵敏度、高选择性的检测方法。
本发明所提供的探针灵敏度高、选择性好、检测限低；检测所需仪器设备简便易携、简便快捷，可用于现场原位检测。
附图说明
图1为磁性纳米粒子Fe3O4(a)，AuNPs(b)和Fe3O4-AuNPs的透射电镜图；
图2为BPA浓度与ΔpH之间的标准曲线，
图3为功能化金/磁纳米粒子检测双酚A的原理图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
除非特别说明，本发明所采用的技术手段，为本领域常规的技术手段。
实施例1
(1)制备分散性良好，粒径为100nm的磁纳米粒子(Fe3O4)；
磁性纳米材料(Fe3O4)采用水热法合成。准确称取2g六水合三氯化铁和4.8g乙酸钠溶于60mL乙二醇中，然后加入1.5g聚乙二醇在机械搅拌器作用下充分搅拌2h，将黄色液体全部转移至带有聚四氟乙烯内胆(100mL)的密闭不锈钢水热反应釜中，在210℃油浴锅中加热反应12h。反应完成后将得到的黑色物质用无水乙醇重复洗6次，置于室温下真空干燥。
所得磁性纳米材料(Fe3O4)形貌见图1之a，其粒径在100nm左右。
(2)制备适配体功能化的磁纳米粒子，将纳米粒子的优良特性与核酸适配体(DNA1)良好的特异性集于一体；
准确称取0.3g Fe3O4溶于0.1M盐酸(100mL)，超声10min，再用去离子水洗涤5次，磁铁分离去上清液，将Fe3O4均匀分散在150mL溶剂中(乙醇∶超纯水，体积比4∶1)，并加入1.5mL氨水(质量浓度28％)，随后加入硅酸四乙酯3mL，在20℃下快速搅拌16h，用乙醇和水洗涤得到的Fe3O4@SiO2，真空干燥。分散在5mL溶液中备用。
取5mL二氧化硅包裹的磁纳米粒子，加入30mL无水乙醇和5mL3-氨丙基-3-乙氧基硅烷(APTES)。60℃加热搅拌，反应6h。冷却至室温后，磁铁分离，无水乙醇洗涤三次后最终分散于5mL无水乙醇中备用。
将氨基化后的Fe3O4@SiO2硅包磁纳米粒子重悬于超纯水中(5mg/mL)，与过量的EDC(200nM)和NHS(100nM)在室温下孵育30min(等体积混合)，然后通过磁分离去除残留的EDC和NHS。取10μM DNA1与活化的硅包磁纳米粒子反应6h(等体积混合)，然后将Fe3O4-DNA1悬液用去离子水洗涤4次，重悬于超纯水中储存在4℃下备用。
(3)制备金纳米粒子；
采用柠檬酸钠还原HAuCl4法合成AuNPs。在洁净的三口烧瓶中加入97.5mL超纯水和2.5mL质量浓度为0.412％(10mM)氯金酸溶液，搅拌并加热至沸腾，7-8min后加入2mL质量浓度为1％柠檬酸三钠溶液，溶液从无色变为红色后，停止加热，继续搅拌15min。
所得AuNPs形貌见图1之b，其粒径在13nm左右。
(4)在金纳米粒子上修饰核酸适配体的互补链(DNA2)及乙酰胆碱酯酶(AchE)：
取500μL金纳米粒子与5μL 10μM的DNA2(5’-SH-(T)10-CCCAC CTGAC CACCCACCGG-3’)混合反应24h，以7000r/min离心20min除去未反应的试剂。弃上清，重悬于500μLTris缓冲液(pH 7.4)，制得DNA2-AuNPs偶联物。
加入AchE到AuNPs偶联物溶液中使得AchE的终浓度为100μg/mL，在室温下孵育60min，轻微振荡以形成DNA2-AuNPs-AchE聚合物。
用10mM，pH 6.0的磷酸盐缓冲液(含0.5％w/vBSA)洗涤、离心三次以除去多余的AchE并分散于500μL磷酸缓冲液中。
(5)检测体系的构建；
取500μL Fe3O4-DNA1探针溶液置于2mL离心管中，加入1mL(10pg/mL-100pg/mL)双酚A标样中，室温下孵育2h，磁铁分离弃上清，经洗涤后重悬于500μL的液体中。取500μLFe3O4-DNA1-BPA加入500μL DNA2-AuNPs-AchE，室温下孵育4h，磁铁分离，用Tris缓冲液洗涤2次，重悬于25mM，pH 6.0Ach溶液中，水解15min后用pH计进行检测。
图1之c，d分别为当溶液中有100ng/mL和0.1ng/mL BPA时的透射电镜图。通过形貌观察发现，功能化磁性纳米粒子表面修饰了双酚A适配体，可特异性识别双酚A，而功能化的金纳米粒子表面修饰了双酚A适配体互补链和乙酰胆碱酯酶，可催化体系中的乙酰胆碱，改变体系中的pH值。
图2为构建的BPA浓度与ΔpH之间的标准曲线。用6.0-pH＝ΔpH，6.0是水解之前体系的pH值，加入乙酰胆碱酯酶后，体系pH出现有规律的变化。
图3为检测双酚A的原理图，本发明的关键在于构建功能化的金/磁纳米粒子，通过目标物浓度介导乙酰胆碱酯酶催化底物改变检测体系的pH值，建立目标物浓度与pH值的线性关系。不存在目标物的情况下，组装效率最高，存在目标物的情况下，组装效率较低；在磁分离的作用下，组装效率决定了检测体系中存在乙酰胆碱酯酶的浓度，乙酰胆碱酯酶的浓度决定了pH值的变化。
从超市购买的自来水，采用加标法进行原位快速检测。检测过程如上述。作为对比，把待测样品换成加标后的自来水进行检测。检测结果见表1。
表1实际样品测定
本发明建立了基于乙酰胆碱酯酶的酶联增敏检测平台，采用通用型pH试纸及pH计建立了双酚A的原位快速检测新方法。检测结果表明该方法具有良好的线性相关性，且其检测灵敏度得到了有效提高，该酶联放大生物传感器法的检测限为5×10-12g/mL，低于国家标准检测限(3×10-8g/mL)；可实现现场原位、定量的快速检测。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 长沙理工大学
<120> 一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法
<130> KHP171114246.7
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 63
<212> DNA
<213> DNA1
<400> 1
ccggtgggtg gtcaggtggg atagcgttcc gcgtatggcc cagcgcatca cgggttcgca 60
cca 63
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> DNA2
<400> 2
cccacctgac cacccaccgg 20

Claims (7)

1.一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，其特征在于，包括操作：
通过在Fe3O4磁纳米粒子上修饰1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，制备活化后的Fe3O4磁纳米粒子，再与DNA1偶联，制备Fe3O4-DNA1悬液；
在金纳米粒子上修饰适配体DNA1的互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶，形成DNA2-AuNPs-AchE聚合物并分散于磷酸缓冲液中；
Fe3O4-DNA1悬液、待测试样、DNA2-AuNPs-AchE聚合物溶液混合，用磁铁分离，磁铁吸附的样品重悬于pH 6.0的乙酰胆碱溶液中，水解后用pH计或pH试纸进行检测；
其中，所述Fe3O4磁纳米粒子的粒径为50～200nm，Fe3O4磁纳米粒子经SiO2包覆、氨基化后与过量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺在室温下孵育20～40min，然后通过磁分离去除残留的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，取DNA1与活化的磁纳米粒子反应5～8h，然后重悬于超纯水中储存在2～6℃下备用；所述的氨基化的操作为：Fe3O4磁纳米粒子经SiO2包覆后，加入硅酸四乙酯，搅拌10～20h后，用乙醇和水洗涤、干燥，干燥后的磁纳米粒子、与3-氨丙基-3-乙氧基硅烷混合，所述Fe3O4磁纳米粒子和3-氨丙基-3-乙氧基硅烷的接入比例为0.1～0.5g：5mL；加入无水乙醇，在50～70℃下反应5～8h。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Fe3O4磁纳米粒子通过水热法合成，具体为：六水合三氯化铁和乙酸钠溶于乙二醇，然后加入少量聚乙二醇，搅拌后转移至水热反应釜中，在200～230℃下反应10～15h,反应完成后将得到的产物用无水乙醇洗3～8次，置于室温下干燥；
其中，六水合三氯化铁、乙酸钠、乙二醇、聚乙二醇的质量比为2：3～6：50～80：1～2。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的SiO2包覆的操作为：Fe3O4磁纳米粒子溶于0.05～0.2M盐酸，超声5～15min，再用去离子水洗涤，磁铁分离去上清液，将Fe3O4均匀分散在溶液中，所述溶液由乙醇2～6体积份和超纯水1体积份组成，并加入质量浓度20～35％的氨水，
其中，Fe3O4磁纳米粒子、氨水的质量比为0.3：2～5。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述金纳米粒子的粒径在10～20纳米，修饰DNA2及乙酰胆碱酯酶(AchE)的方法为：金纳米粒子与10μM的DNA2混合反应20～30h，离心分离除去未反应的试剂，弃上清，重悬于pH 7～8的缓冲液中，得DNA2-AuNPs偶联物；加入AchE到偶联物溶液中使得AchE的终浓度为100μg/mL，在室温下孵育60min，轻微振荡以形成DNA2-AuNPs-AchE聚合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述金纳米粒子通过以下方法制备：超纯水和质量浓度为0.2～0.5％的氯金酸溶液混合，加热至沸腾，7-8min后加入质量浓度为0.5～2％柠檬酸三钠溶液，溶液从无色变为红色后，停止加热，继续搅拌10～20min；
其中，超纯水、氯金酸溶液、柠檬酸三钠溶液的体积比为90～100：1～5：2。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，取金纳米粒子溶液与DNA2混合反应24h，以7000r/min离心20min除去未反应的试剂；其中，取金纳米粒子溶液与DNA2的体积比为50～200：1。
7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，包括用标准溶液构建标准曲线的操作，具体为：取500μL Fe3O4-DNA1悬液置于2mL离心管中，加入1mL浓度为10pg/mL～100pg/mL的双酚A标准溶液，室温下孵育2h，磁铁分离弃上清；
再加入500μL DNA2-AuNPs-AchE，室温下孵育4h，磁铁分离，用Tris缓冲液洗涤2次，重悬于25mM，pH 6.0乙酰胆碱溶液中，水解15min后用pH计或pH试纸进行检测，构建pH值和双酚A关联的标准曲线。
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CN108362872A (zh) * 2018-01-10 2018-08-03 浙江工商大学 一种非诊断目的的鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的定量检测方法
CN110702765A (zh) * 2018-07-24 2020-01-17 宁波海歌电器有限公司 便携式食品危害因子检测仪
CN110702766A (zh) * 2018-07-24 2020-01-17 宁波海歌电器有限公司 利用便携式食品危害因子检测仪检测食品危害因子的方法
CN112945923B (zh) * 2021-02-03 2024-06-14 长沙理工大学 一种界面增敏型检测试剂及其制备方法和应用
CN113092556B (zh) * 2021-03-09 2022-05-24 宁波大学 基于基因编辑技术的双信号输出检测转基因大豆的电化学传感器的制备方法及其应用
CN113933289A (zh) * 2021-09-03 2022-01-14 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103007846A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 无锡百运纳米科技有限公司 一种载蛋白的磁性微球的制备方法
CN103926398A (zh) * 2014-04-30 2014-07-16 洛阳惠尔纳米科技有限公司 一种免疫磁珠的制备方法
CN104049087A (zh) * 2014-06-05 2014-09-17 青岛科技大学 一种检测l-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103007846A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 无锡百运纳米科技有限公司 一种载蛋白的磁性微球的制备方法
CN103926398A (zh) * 2014-04-30 2014-07-16 洛阳惠尔纳米科技有限公司 一种免疫磁珠的制备方法
CN104049087A (zh) * 2014-06-05 2014-09-17 青岛科技大学 一种检测l-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Au掺杂Fe3O4纳米粒子酶传感器的制备及其应用于有机磷农药检测的研究;闵红等;《化学学报》;20071031;第65卷(第20期);第2303-2305页 *
基于新型纳米材料的双酚A电化学传感器研究;郭晓飞;《中国优秀硕士学位论文全文数据库》;20170215(第2期);第11-14页 *

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