具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究,出乎意料地发现了一系列具备广谱且优异的抗病毒活性的噻唑类衍生物。同时,这些化合物具有较低的毒性。在此基础上完成了本发明。
本发明人针对宿主细胞的核酸合成反应设计化合物,通过对化合物的毒性和功能进行筛选而得到最佳的候选化合物。由于病毒复制严重依赖于宿主细胞的核酸资源,病毒感染引起的过度炎症反应也依赖于基因表达,因此,阻止宿主细胞的核酸合成一方面可以抑制病毒复制,另一方面可以抑制过度的炎症反应。在正常细胞中,由于基因合成和表达处于一定的稳态,不会过分依赖新的核酸合成,因此本发明的化合物对正常细胞的毒性较小,而对病毒感染的细胞效果更为显著。
术语定义
本文中涉及到的一些基团定义如下:
本文中,“烷基”是指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基,优选的烷基包括长2-8个碳原子、1-6个、1-4个碳原子、1-3个碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、庚基等。烷基可以被1个或多个取代基取代,例如被卤素或卤代烷基取代。例如,烷基可以是被1-4个氟原子取代的烷基,例如三氟甲基,或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。
本文中,“环烷基”是指含有脂环结构的饱和烷基,例如,C3-C6环烷基。在具体的实施方式中,所述环烷基包括但不限于:环丙基、环丁基、环戊基或环己基。本文所述的环烷基可以是取代或未取代的,包括但不限于被一个或多个卤素原子,例如氟原子取代。
本文中,“氨基”是指结构式为“NRxRy”的基团,其中,Rx和Ry可独立选自H或C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基。在具体的实施方式中,本文所述的“氨基”是指NH2。
在本文中,“卤素”是指氟、氯、溴和碘。在优选的实施方式中,卤素是氯或氟;更优选氟。
本发明的化合物
本发明人出乎意料地发现了一系列具备广谱且优异的抗病毒活性的噻唑类衍生物。这些化合物在动物实验中显示出优异的抗病毒活性。
在具体的实施方式中,本发明的化合物是式I所示化合物或其药学上可接受的盐:
式中,
R1选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷基;
R2独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、CN、NO2、羟基、NRaRb;
Ra、Rb可独立选自H或C1-C6烷基
R3选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基;
R4选自:H、卤素;
m为0~4的整数;
n为0~5的整数。
在优选的实施方式中,在优选的实施方式中,本发明的化合物如式II所示:
式中,
R5和R6独立选自:H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、羟基、NH2;
R7、R8和R9独立选自:H、卤素;
R1和R3如上所述。
在进一步的实施方式中,R1选自:H、C1-C6烷基,优选C1-C3烷基;R3选自:H、取代或未取代的C1-C6烷基,优选C1-C3烷基;R5和R6独立选自:H、卤素,优选F,未取代的或卤素,优选F取代的C1-C3烷基;R7和R8独立选自:H、卤素,优选Cl;R9是H。
病毒
本文所用的术语“病毒”与本领域技术人员通常理解的含义相同,其由核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成的或仅由蛋白质构成(例如朊病毒)。病毒个体微小,结构简单。病毒没有细胞结构,由于没有实现新陈代谢所必需的基本系统,所以病毒自身不能复制。但是当它接触到宿主细胞时,它的核酸物质侵入宿主细胞内,借助后者的复制系统,按照病毒基因的指令复制新的病毒。
本发明人出乎意料地发现一系列噻唑类衍生物对病毒感染具备良好的治疗效果。在具体的实施方式中,本文所述的病毒是指RNA病毒(RNA virus)。RNA病毒是生物病毒的一种,它们的遗传物质由核糖核酸组成(RNA ribonucleic acid),通常核酸是单链的(ssRNAsingle-stranded RNA),也有双链的(dsRNA double-stranded RNA)。
在具体的实施方式中,本文所述的RNA病毒包括但不限于:流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。在优选的实施方式中,所述流感病毒包括但不限于:H3N2流感病毒、H1N1流感病毒、H7N9流感病毒。
在上述化合物的基础上,本发明进一步提供一种用于治疗RNA病毒感染的药物组合物,该组合物含有治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐,以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括但不限于无机和有机酸盐,例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐;以及与碱例如钠羟基、三(羟基甲基)胺基甲烷(TRIS,胺丁三醇)和N-甲基葡糖胺形成的无机和有机碱盐。
虽然每个人的需求各不相同,本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性成分的最佳剂量。一般情况下,本发明的化合物或其药学上可接受的盐,对哺乳动物每天口服给药,药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克。例如,单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克,最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次,每天为一片或多片,每片含有约0.1到50毫克,合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。
本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式,包括但不限于被配制成用于肠外,皮下,静脉,肌肉,腹腔内,透皮,口腔,鞘内,颅内,鼻腔或外用途径给药的形式,用于治疗肿瘤和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗,有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用,或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病,但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药的剂量将根据病人的年龄,健康与体重,并行治疗的种类,治疗的频率,以及所需治疗效益来决定。
本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物,只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类。本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗溃疡性结肠炎。
本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如,由传统的混合,制粒,制锭,溶解,或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时,可结合固体辅料和活性化合物,选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后,加工颗粒混合物,获得片剂或锭剂芯。
合适的辅料特别是填料,例如糖类如乳糖或蔗糖,甘露醇或山梨醇;纤维素制剂或钙磷酸盐,例如磷酸三钙或磷酸氢钙;以及粘结剂,例如淀粉糊,包括玉米淀粉,小麦淀粉,大米淀粉,马铃薯淀粉,明胶,黄芪胶,甲基纤维素,羟丙基甲基纤维素,羧甲基纤维素钠,或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要,可增加崩解剂,比如上面提到的淀粉,以及羧甲基淀粉,交联聚乙烯吡咯烷酮,琼脂,或褐藻酸或其盐,如海藻酸钠。辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂,例如,硅石,滑石,硬脂酸盐类,如镁硬脂酸钙,硬脂酸或聚乙二醇。如果需要,可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此,可以应用浓缩糖类溶液。此类溶液可以含有阿拉伯树胶,滑石,聚乙烯吡咯烷酮,聚乙二醇和/或二氧化钛,漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣,可使用适当的纤维素溶液,例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如,用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。
在进一步的研究中,本发明人出乎意料地发现,本发明的化合物与其它抗病毒药物,例如奥司他韦联用可以产生更佳的治疗效果。因此,本发明还提供了一种药物组合物,所述药物组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐与其它抗病毒药物,例如奥司他韦的组合,以及药学上可接受的载体或赋形剂。
在优选的实施方式中,本发明的药物组合物中的化合物是16号化合物。
因此,本发明还提供一种治疗RNA病毒感染的方法,该方法包括给予需要治疗的对象以本发明的化合物或包含本发明化合物的药物组合物。
给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法,可根据患者的实际情况加以确定。这些方法包括但不限于肠外、皮下、静脉、肌肉、腹腔内、透皮、口腔、鞘内、颅内、鼻腔或外用途径给药。
本发明也包括本发明化合物在制备治疗RNA病毒感染的药物中的用途。
此外,本领域技术人员基于本领域的公知常识和本发明的内容可以知晓,本发明化合物因其中所含的羧基而能形成盐或酯,进而可以形成前药。
本发明的优点
1.本发明首次发现了一系列具备广谱且优异的抗病毒活性的噻唑类衍生物;
2.本发明的化合物对正常细胞的毒性较低
3.本发明的化合物为研究和开发新一代抗病毒药物奠定了物质基础,从而具备很重要的学术价值与现实意义。
以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述,但以下实施例不构成对本发明的限制,所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法,均属于本发明范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则百分比和份数按重量计算。
实施例1:
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑1
2-甲基氨基硫脲(1-1)
称取2.5g(17.3mmol)甲基肼硫酸盐于250ml单口瓶中,加入100ml乙醇,搅拌下加入1.6g(20.8mmol)硫氰酸铵,加热至回流,反应72h后,将反应液冷至室温,抽滤,滤液旋干硅胶柱层析(DCM/MeOH=40:1),分第二个副产物,得白色粉末状固体0.63g,产率34.2%。1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ7.36(s,2H),4.89(s,2H),3.41(s,3H).GC-MS(EI)calcd forC2H7N3S[M]+105.0,found 105.0.
2-甲基-1-(2-羧基苄差基)氨基硫脲(1-2)
称取80mg(0.76mmol)化合物(1)于50ml单口瓶中,加入20ml乙醇,搅拌下加入邻羧基苯甲醛114mg(0.76mmol),加热至回流,TLC监测反应至原料转化完全,将反应液冷至室温,旋干溶剂,硅胶柱层析(DCM/MeOH=120:1),得白色粉末状固体100mg,产率56%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.36(br,1H),8.56(s,1H),8.51(s,1H),8.31(d,J=7.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.88(d,J=8Hz,1H),7.59(t,J=7.2Hz,1H),7.50(t,J=7.2Hz,1H),3.77(s,3H).LC-MS(ESI)calcd for C10H12N3O2S[M+H]+238.1,found 238.1.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑1
称取100mg(0.42mmol)化合物(2)于50ml单口瓶中,加入10ml乙醇,搅拌下加入65μL(0.42mmol)2’-氯-2-溴苯乙酮,升温至回流,TLC跟踪反应至原料转化完全,将反应液冷至室温,旋干溶剂,硅胶柱层析(DCM/MeOH=120:1),得黄色粉末状固体106mg,产率67.9%,Mp.210.4-212.0℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.30(s,1H),8.62(s,1H),8.02(d,J=7.6Hz,1H),7.98–7.90(m,2H),7.66(t,J=7.6Hz,1H),7.56–7.49(m,2H),7.47(s,1H),7.43(td,J1=7.4Hz,J2=1.2Hz,1H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),3.68(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.98,168.57,147.11,136.94,135.17,133.42,132.48,131.51,131.09,130.98,130.75,130.16,129.45,129.19,127.63,126.51,111.41,32.88.HRMS(ESI)calcd for C18H15N3O2SCl[M+H]+372.0574,found 372.0575.
采取类似的方法,本发明人利用相应的起始材料进一步合成了以下化合物:
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-乙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑2
Mp.203.3-204.1℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.64(s,1H),7.98–7.91(m,3H),7.66(t,J=7.5Hz,1H),7.56–7.46(m,2H),7.45–7.39(m,2H),7.34(t,J=6.8Hz,1H),4.32(q,J=6.8Hz,2H),1.27(t,J=7.0Hz,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.56,168.36,147.34,137.00,135.42,133.53,132.50,131.53,131.12,130.92,130.72,130.22,129.42,129.19,127.62,126.62,111.22,40.38,10.33.HRMS(ESI)calcdfor C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0728.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-丙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑3
Mp.172.6-173.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.35(br,1H),8.65(s,1H),7.98(d,J=8.0Hz,1H),7.95-7.92(m,2H),7.67(t,J=7.2Hz,1H),7.54(d,J=8.0Hz,1H),7.5(t,J=7.6Hz,1H),7.45-7.42(m,2H),7.36(t,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),4.25(t,J=7.2Hz,2H),1.82-1.73(m,2H),0.97(t,J=7.4Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.54,168.22 146.95,136.63,134.96,133.17,132.11,131.10,130.74,130.55,130.34,129.82,129.04,128.80,127.26,126.09,110.77,46.31,17.98,11.17.HRMS(ESI)calcdfor C20H19N3O2SCl[M+H]+400.0887,found400.0879.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-异丙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑4
Mp.185.4-187.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.35(br,1H),8.91(s,1H),7.99(d,J=8.0Hz,1H),7.95-7.92(m,2H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.54(d,J=8.0Hz,1H),7.52(t,J=7.6Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),5.22-5.11(m,1H),1.57(d,J=6.8Hz,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.22,168.21,146.90,137.32,135.23,133.14,132.07,131.06,130.64,130.58,130.39,129.88,128.97,128.78,127.28,125.91,111.12,49.61,18.07,18.07.HRMS(ESI)calcd for C20H19N3O2SCl[M+H]+400.0887,found 400.0885.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-(2-丁基)-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑5
Mp.170.5-170.6℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.91(s,1H),7.99(d,J=8.0Hz,1H),7.95-7.90(m,2H),7.67(t,J1=7.6Hz,1H),7.55-7.48(m,2H),7.46-7.42(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),5.00-4.93(m,1H),2.35-2.24(m,1H),1.92-1.81(m,1H),1.54(d,J=6.8Hz,3H),0.88(t,J=7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.66,168.19,146.97,137.03,135.24,133.19,132.13,131.04,130.67,130.58,130.39,129.70,128.98,128.77,127.29,125.91,111.04,55.67,25.26,16.33,11.14.HRMS(ESI)calcd for C21H21N3O2SCl[M+H]+414.1043,found 414.1029.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-(2-戊基)-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑6
Mp.146.7-147.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.35(br,1H),8.91(s,1H),7.98(d,J=7.6Hz,1H),7.94(d,J=8.0Hz,1H),7.91(dd,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.49(t,J=7.6Hz,1H),7.46-7.42(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),5.14-5.06(m,1H),2.34-2.25(m,1H),1.82-1.73(m,1H),1.53(d,J=6.8Hz,3H),1.34-1.24(m,2H),0.89(t,J=7.4Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.68,168.20,146.98,137.04,135.30,133.20,132.14,131.00,130.68,130.59,130.40,129.68,128.99,127.30,125.90,111.09,53.81,34.20,19.46,16.46,13.60.HRMS(ESI)calcd for C22H23N3O2SCl[M+H]+428.1200,found 428.1193.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-羟乙基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑7
Mp.187.9-188.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.24(br,1H),8.75(s,1H),7.98-7.01(m,3H),7.66(t,J=7.6Hz,1H),7.54(d,J=8.0Hz,1H),7.49(t,J=7.6Hz,1H),7.45-7.41(m,2H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),4.35(t,J=6.4Hz,2H),3.76(t,J=6.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.64,168.23,146.87,136.89,134.91,133.15,131.99,131.19,130.71,130.46,130.32,130.16,129.04,128.79,127.22,126.28,110.78,56.24,47.46.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O3SCl[M+H]+402.0679,found402.0678.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-2-羧基苄叉基)肼基]噻唑8
Mp.209.3-210.7℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ14.02(br,1H),8.66(s,1H),8.21(d,J=8.0Hz,1H),8.17(s,1H),8.02(d,J=8.0Hz,1H),7.95(d,J=7.6Hz,1H),7.56-7.53(m,2H),7.43(t,J=7.6Hz,1H),7.37(t,J=7.6Hz,1H),3.70(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.33,167.17,146.79,138.38,135.01,132.91,131.12,130.70,130.37,129.14,128.57,128.25,128.20,127.26,127.04,125.10,122.40,111.51,32.68.HRMS(ESI)calcd for C19H14N3O2SClF3[M+H]+440.0447,found440.0433.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(4-甲基-2-羧基苄叉基)肼基]噻唑9
Mp.231.3-232.5℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.30(br,1H),8.59(s,1H),7.96(d,J=7.6Hz,1H),7.92(d,J=8.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.54(d,J=7.6Hz,1H),7.49-7.46(m,2H),7.43(t,J=7.6Hz,1H),7.36(t,J=7.6Hz,1H),3.66(s,3H),2.38(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.60,168.35,146.68,138.54,136.64,133.03,132.70,132.07,131.11,130.86,130.67,130.34,129.83,129.00,127.21,126.04,110.84,32.39,20.69.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0738.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基-4-氟苄叉基)肼基]噻唑10
Mp.228.6-229.7℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.28(br,1H),8.14(s,1H),7.93(dd,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),7.61(dd,J1=7.0Hz,J2=1.8Hz,1H),7.55-7.49(m,3H),7.44-7.41(m,1H),7.36(td,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),3.68(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.55,168.01,159.74(d,1J=249Hz),146.67,133.68,133.10,131.50,131.12,130.72,130.32,130.10(d,3J=8.8Hz),129.06,127.23,125.53(d,4J=3.1Hz),121.75(d,2J=11.8Hz),118.76(d,2J=22Hz),111.13,32.28.HRMS(ESI)calcd forC18H14N3O2FSCl[M+H]+390.0479,found 390.0475.
(E)-5-甲基-4-苯基-2-[1-甲基-2-(4-甲基-2-羧基苄叉基)肼基]噻唑11
Mp.243.2-245.2℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.24(br,1H),8.54(s,1H),7.91(d,J=8.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.64-7.53(m,2H),7.46-7.42(m,3H),7.33(t,J=7.4Hz,1H),3.60(s,3H),2.44(s,3H),2.38(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.35,165.40,145.43,138.33,135.76,135.16,132.68,132.22,130.86,129.62,128.24,128.24,127.85,127.85,127.06,125.89,119.27,31.85,20.68,12.24.HRMS(ESI)calcd forC20H20N3O2S[M+H]+366.1276,found 366.1273.
(E)-5-甲基-4-苯基-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑12
Mp.222.7-224.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.58(s,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,1H),7.68-7.63(m,3H),7.50-7.43(m,3H),7.34(t,J=7.4Hz,1H),3.62(s,3H),2.44(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.24,165.36,145.47,135.66,135.13,134.90,131.98,130.58,129.70,128.59,128.25,128.25,127.86,127.86,127.09,125.94,119.44,31.93,12.24.HRMS(ESI)calcd for C19H16N3O2S[M-H]-350.0963,found 350.0951.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑13
Mp.208.8-209.8℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.46(br,1H),8.60(s,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.92(d,J=8.0Hz,1H),7.64(t,J=7.4Hz,1H),7.56(d,J=7.6Hz,1H),7.49-7.39(m,4H),3.56(s,3H),2.15(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.98,166.46,144.56,136.46,135.29,134.54,133.25,132.50,132.31,131.05,130.72,130.26,130.01,129.09,127.49,126.42,121.85,32.46,12.16.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0727.
(E)-5-乙基-4-(2-氯苯基)-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑14
Mp.223.9-223.9℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.57(br,2H),8.79(s,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.88(d,J=8.0Hz,1H),7.62(t,J=7.5Hz,1H),7.56–7.51(m,1H),7.46(t,J=7.5Hz,1H),7.44-7.36(m,3H),2.49(q,J=7.5Hz,1H),1.13(t,J=7.5Hz,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ169.28,165.92,144.14,140.84,135.89,135.46,133.99,133.03,133.02,131.46,130.81,130.73,130.60,129.73,128.09,127.73,127.01,20.99,17.25.HRMS(ESI)calcd for C19H17N3O2SCl[M+H]+386.0730,found 386.0729.
(E)-5-甲基-4-(2-氯苯基)-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑15
Mp.217.6-217.8℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.7(br,2H),8.77(s,1H),7.99(d,J=7.6Hz,1H),7.87(d,J=7.2Hz,1H),7.62(t,J=7.4Hz,1H),7.562-7.543(m,1H),7.481-7.397(m,4H),2.14(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.65,165.18,144.49,140.16,135.25,134.56,133.21,132.46,130.83,130.14,130.03,129.11,127.45,126.37,119.49,12.15.HRMS(ESI)calcd for C18H15N3O2SCl[M+H]+372.0574,found372.0569.
(E)-4-(2-氯苯基)-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑16
Mp.200.2-200.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.2(br,1H),12.4(br,1H),8.82(s,1H),8.00(d,J=7.6Hz,1H),7.89-7.86(m,2H),7.64(t,J=7.4Hz,1H),7.53(dd,J1=7.6Hz,J2=1.2Hz,1H),7.49(td,J1=7.6Hz,J2=1.2Hz,1H),7.42(td,J1=7.6Hz,J2=1.2Hz,1H),7.36(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.63,167.77,147.63,140.76,135.08,133.71,132.43,131.54,131.23,130.83,130.83,130.26,129.47,129.28,127.69,126.47,109.26.HRMS(ESI)calcd for C17H13N3O2SCl[M+H]+358.0417,found 358.0417.
(E)-5-甲基-4-苯基-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑17
Mp.215.9-216.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.7(br,2H),8.77(s,1H),7.99(d,J=7.6Hz,1H),7.87(dd,J1=8.0Hz,J2=1.2Hz,1H),7.63-7.59(m,3H),7.48-7.43(m,3H),7.33(t,J=7.2Hz,1H),2.43(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.66,164.72,146.00,140.05,135.64,135.24,132.36,130.83,130.12,129.08,128.73,128.73,128.35,128.35,127.51,126.33,117.61,12.74.HRMS(ESI)calcd for C18H16N3O2S[M+H]+338.0963,found 338.0954.
(E)-4-苯基-2-(2-羧基苄叉肼基)噻唑18
Mp.163.8-165.6℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.45(br,1H),12.49(br,1H),8.81(s,1H),7.99(d,J=7.6Hz,1H),7.87(m,3H),7.63(t,J=7.4Hz,1H),7.47(t,J=7.2Hz,1H),7.41(t,J=7.6Hz,2H),7.33(s,1H),7.30(t,J=7.4Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.53,168.53,150.97,140.58,135.02,134.99,132.31,130.74,130.15,129.15,128.96,128.96,127.90,126.34,125.90,125.90,104.20.HRMS(ESI)calcd forC18H16N3O2S[M-H]-322.0650,found 322.0656.
(E)-4-(2,5-二氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑19
Mp.268.4-269.5℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.31(br,1H),8.63(s,1H),8.02-8.00(m,2H),7.93(d,J=7.2Hz,1H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J=7.6Hz,1H),7.50(t,J=7.2Hz,1H),7.43(dd,J1=7.2Hz,J2=2.8Hz,1H),3.68(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.68,168.15,145.13,136.79,134.70,134.21,132.14,132.06,131.85,130.59,130.17,129.76,129.20,128.84,128.58,126.13,112.31,32.49.HRMS(ESI)calcd for C18H14N3O2SCl2[M+H]+406.0184,found406.0187.
(E)-4-苯基-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑20
Mp.205.6-206.8℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.31(br,1H),8.62(s,1H),8.02(d,J=7.6Hz,1H),7.94-7.91(m,3H),7.66(t,J=7.2Hz,1H),7.49(t,J=7.2Hz,1H),7.45-7.40(m,3H),7.31(t,J=7.2Hz,1H),3.71(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ169.45,168.20,150.18,136.35,134.80,134.49,132.07,130.60,129.71,128.76,128.56,128.56,127.59,126.09,125.54,125.54,105.97,32.51.HRMS(ESI)calcd for C18H16N3O2S[M+H]+338.0963,found 338.0963.
(E)-4-(3-氯苯基)-2-[1-甲基-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑21
Mp.244.7-245.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.32(br,1H),8.63(s,1H),8.01(d,J=7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.93(d,J=7.6Hz,1H),7.88(d,J=8.0Hz,1H),7.66(t,J=7.6Hz,1H),7.61(s,1H),7.50(t,J=7.6Hz,1H),7.45(t,J=7.6Hz,1H),7.37(d,J=8.0Hz,1H),3.71(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ169.57,168.18,148.56,136.64,136.50,134.72,133.48,132.06,130.59,130.44,129.76,128.81,127.28,126.12,125.16,124.05,107.56,32.52.HRMS(ESI)calcd for C18H15N3O2SCl[M+H]+372.0574,found372.0574.
(E)-5-甲基-4-(2-氯苯基)-2-[1-(2-戊基)-2-(2-羧基苄叉基)肼基]噻唑22
Mp.89.9-90.1℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ13.29(br,1H),8.85(s,1H),7.98(d,J=8.0Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,1H),7.65(t,J=7.6Hz,1H),7.56-7.54(m,1H),7.51-7.41(m,4H),5.05-4.96(m,1H),2.29-2.22(m,1H),2.16(s,3H),1.75-1.67(m,1H),1.46(d,J=7.2Hz,3H),1.28-1.23(m,2H),0.87(t,J=7.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ168.23,166.06,144.08,136.14,135.46,134.09,132.79,132.09,131.93,130.58,129.64,129.60,129.48,128.56,126.95,125.73,121.62,53.39,34.01,19.41,16.35,13.58,11.52.HRMS(ESI)calcd for C23H25N3O2SCl[M+H]+442.1356,found 442.1354.
(E)-2-((2-(4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(52)
熔点:167.3-167.9℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(s,1H),8.82(s,1H),8.00(d,J=8.0Hz,1H),7.88(d,J=7.6Hz,1H),7.62(t,J=7.6Hz,1H),7.49-7.43(m,3H),7.37(s,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),6.88(dd,J1=8.4Hz,J2=2.0Hz,1H),3.80(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.67,168.52,159.99,150.90,140.75,136.52,135.04,132.36,130.81,130.40,130.12,129.26,126.43,118.41,113.80,111.31,104.71,55.52.HRMS(ESI)calcd for C18H14N3O3S[M-H]-352.0756,found352.0754.Purity:95.56%(tR7.94min).
(E)-2-((2-(4-(3-氨基甲酰基苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(53)
熔点:297.9-298.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.20(s,1H),8.83(s,1H),8.39(s,1H),8.05(s,1H),8.00(dd,J1=7.2Hz,J2=3.2Hz,2H),7.88(d,J=7.6Hz,1H),7.80(d,J=7.6Hz,1H),7.63(t,J=7.6Hz,1H),7.51-7.46(m,2H),7.41(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.77,168.67,168.44,150.57,140.83,135.19,135.14,135.02,132.40,130.83,130.36,129.31,129.03,128.62,126.91,126.46,125.36,105.00.HRMS(ESI)calcdfor C18H15N4O3S[M+H]+367.0865,found 367.0863.Purity:97.89%(tR 7.832min).
(E)-2-((2-(4-(对甲苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(54)
熔点:225.5-226.1℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(s,1H),8.83(s,1H),8.00(d,J=7.2Hz,1H),7.88(d,J=7.6Hz,1H),7.75(d,J=8.0Hz,2H),7.62(t,J=7.6Hz,1H),7.47(t,J=7.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.21(t,J=8.0Hz,2H),2.32(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.73,168.55,151.12,140.69,137.26,135.04,132.50,132.29,130.80,130.56,129.63,129.22,126.39,125.96,103.37,21.27.HRMS(ESI)calcd for C18H14N3O2S[M-H]-336.0807,found 336.0808.Purity:96.31%(tR13.17min).
(E)-2-((2-(4-(2,5-二氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(55)
熔点:205.0-206.0℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.20(s,1H),8.84(s,1H),7.99(d,J=7.2Hz,1H),7.95(d,J=6.4Hz,1H),7.88(d,J=8.0Hz,1H),7.62(t,J=7.2Hz,1H),7.57(d,J=8.4Hz,1H),7.52(s,1H),7.47(t,J=7.6Hz,1H),7.41(dd,J1=8.8Hz,J2=2.8Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):168.67,167.90,146.07,141.15,135.02,134.92,132.65,132.33,132.28,130.82,130.74,130.62,129.74,129.35,129.03,126.46,110.57.HRMS(ESI)calcd for C17H10N3O2SCl2[M-H]-389.9871,found389.9871.Purity:97.66%(tR 9.88min).
(E)-2-((2-(4-(2,5-二氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(56)
熔点:238.1-239.4℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.80(s,1H),8.87(s,1H),8.40(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.96-7.89(m,4H),7.64(t,J=7.6Hz,1H),7.54-7.46(m,4H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6):168.75,168.68,151.02,140.83,135.07,133.65,132.92,132.58,132.40,130.85,130.39,129.29,128.63,128.57,128.05,126.90,126.47,124.57,124.43,105.15.HRMS(ESI)calcd for C21H16N3O2S[M+H]+374.0963,found 374.0959.Purity:96.39%(tR 19.11min).
(E)-2-((2-(4-(萘-2-基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)苯甲酸(57)
熔点:227.1-228.1℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.35(s,1H),8.83(s,1H),8.01(d,J=6.0Hz,1H),7.96(d,J=6.8Hz,2H),7.88(d,J=6.0Hz,1H),7.74-7.71(m,4H),7.64(t,J=6.4Hz,1H),7.48(t,J=6.0Hz,3H),7.42(s,1H),7.38(t,J=6.0Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):169.31,169.31,151.40,141.42,140.82,140.22,135.75,134.93,133.11,131.52,130.98,130.12,129.97,128.62,127.99,127.63,127.26,127.14,105.26.HRMS(ESI)calcd for C23H18N3O2S[M+H]+400.1120,found 400.1114.Purity:97.60%(tR 9.16min).
(E)-2-((2-(4-(2-氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)-6-氟苯甲酸(58)
熔点:211.2-211.7℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.40(s,1H),8.18(s,1H),7.86(dd,J1=7.6Hz,J2=1.6Hz,1H),7.69(d,J=8.0Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.41(t,J=7.6Hz,1H),7.37(s,1H),7.35(t,J=7.6Hz,1H),7.29(t,J=8.8Hz,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):167.56,166.14,160.51,158.06,147.64,138.21,138.17,133.94,133.89,133.68,131.54,131.25,130.83,129.53,127.72,122.04,116.51,116.29,109.58.HRMS(ESI)calcd for C17H10N3O2SClF[M-H]-374.0166,found374.0164.Purity:97.09%(tR12.05min).
(E)-2-((2-(4-(2-氯苯基)噻唑-2-基)亚肼基)甲基)-3-氨基苯甲酸(59)
mp 220.9-221.6℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.8(s,1H),11.1(s,1H),7.93(s,1H),7.89(d,J=7.2Hz,1H),7.62(d,J=7.6Hz,1H),7.52-7.43(m,3H),7.12(d,J=7.2Hz,1H),7.08(d,J=8.4Hz,1H),6.77(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ165.84,155.22,154.28,147.07,146.30,133.99,132.71,131.65,131.51,131.09,130.33,129.73,128.14,121.28,114.49,113.14,111.55.Purity:97.06%(tR19.58min).
实施例2(活性评价)
细胞水平抑制病毒复制的活性试验
药物IC50(half inhibitory concentration)的测定:MDCK细胞或者Vero细胞或者RD细胞铺至96孔板,培养12h后生长至90%以上备用。药物用2倍系列梯度稀释(1×10-1至1×10-10)。单层MDCK细胞吸去培液,PBS洗一遍,每孔加入相应稀释度药物溶液50μl,同时每孔加入含有100倍TCID50的病毒液50ul,每个稀释度做四个复孔。37℃,5%CO2培养3-5天后,观察CPE(细胞病变)的产生,记录四个复孔中可保护细胞不产生CPE的阳性孔和不能保护细胞产生CPE的阴性孔的数目,找出能可抑制半数细胞产生病变的药物稀释倍数,根据按Reed和Muench公式计算出该药物的IC50。
药物TC50(half toxicity concentration)的测定:MDCK细胞或者Vero细胞或者RD细胞铺至96孔板,培养12h后生长至90%以上备用。药物用2倍系列梯度稀释(1×10-1至1×10-10)。单层MDCK细胞吸去培液,PBS洗一遍,每孔加入相应稀释度药物溶液100μl,每个稀释度做四个复孔。37℃,5%CO2培养3-5天后,观察药物毒性导致的细胞死亡,记录四个复孔中发生细胞死亡的阳性孔和不发生细胞死亡的阴性孔的数目,找出导致半数细胞死亡的药物稀释倍数,根据按Reed和Muench公式计算出该药物的TC50。
本发明人在哺乳动物细胞上检测了本发明化合物对病毒感染引起的细胞病变(cytopathic effect,CPE)的抑制效果。结果表明:
16号化合物在流感病毒的宿主细胞MDCK上的TC50>50uM,对流感病毒的抑制效果IC50约为2uM(图1);
10号化合物对人手足口病毒EV71具有一定抑制效果(图2);
16号化合物对人呼吸道合胞病毒RSV具有一定的抑制效果(图3)。
本发明化合物对H3N2(流感病毒)在宿主细胞A549(人肺表皮细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物对H1N1(流感病毒)在宿主细胞A549(人肺表皮细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物对H7N9(流感病毒)在宿主细胞A549(人肺表皮细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物编号 |
IC50(uM) |
TC50(uM) |
SI(TC50/IC50) |
1 |
2.32 |
26 |
11 |
2 |
5.73 |
45 |
8 |
8 |
0.59 |
39 |
66 |
8-1 |
0.86 |
96 |
117 |
9 |
0.53 |
44 |
83 |
9-1 |
0.67 |
219 |
327 |
10 |
0.28 |
45 |
161 |
10-1 |
0.49 |
253 |
516 |
11 |
14 |
54 |
|
12 |
1.09 |
59 |
54 |
12-1 |
2.30 |
248 |
108 |
16 |
1.2 |
>50 |
>41.7 |
23 |
0.35 |
54 |
|
23-1 |
0.67 |
102 |
152 |
55 |
6.9 |
624 |
|
化合物对RSV(人呼吸道合胞病毒)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物对EV71(人手足口病毒)在宿主细胞RD(人恶性胚胎横纹肌瘤细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物编号 |
IC50(uM) |
TC50(uM) |
SI(TC50/IC50) |
1 |
0.14 |
1 |
7.1 |
2 |
0.23 |
1 |
4.3 |
8 |
0.09 |
1 |
11 |
8-1 |
0.19 |
2 |
10.5 |
9 |
0.12 |
1 |
8.3 |
9-1 |
0.33 |
3 |
9 |
10 |
0.05 |
0.5 |
10 |
10-1 |
0.18 |
1 |
5.6 |
12 |
0.25 |
1 |
4 |
12-1 |
0.39 |
2 |
5 |
16 |
0.30 |
1 |
3.3 |
23-1 |
0.37 |
2 |
5.4 |
55 |
0.51 |
3.1 |
6 |
化合物对Dengue Virus 2(登革病毒2型)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物编号 |
IC50(uM) |
TC50(uM) |
SI(TC50/IC50) |
1 |
0.11 |
16 |
145 |
2 |
0.35 |
24 |
68.6 |
8 |
0.09 |
19 |
211 |
8-1 |
0.20 |
65 |
325 |
9 |
0.17 |
18 |
106 |
9-1 |
0.31 |
39 |
125.8 |
10 |
0.05 |
23 |
460 |
10-1 |
0.15 |
45 |
300 |
12 |
0.26 |
17 |
65 |
12-1 |
0.39 |
23 |
59 |
16 |
0.12 |
20 |
167 |
23-1 |
0.39 |
78 |
200 |
55 |
0.63 |
69 |
110 |
化合物对Zika Vrius(寨卡病毒)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物编号 |
IC50(uM) |
TC50(uM) |
SI(TC50/IC50) |
1 |
0.10 |
13 |
130 |
2 |
0.45 |
24 |
53 |
8 |
0.12 |
19 |
158 |
8-1 |
0.25 |
66 |
264 |
9 |
0.15 |
15 |
100 |
9-1 |
0.33 |
42 |
127 |
10 |
0.06 |
21 |
350 |
10-1 |
0.17 |
89 |
523 |
12 |
0.23 |
13 |
56.5 |
12-1 |
0.30 |
33 |
110 |
16 |
0.15 |
20 |
133 |
23-1 |
0.29 |
76 |
262 |
55 |
0.33 |
68 |
206 |
化合物对JEV(日本脑炎病毒)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC50和药物半数有毒浓度TC50
化合物编号 |
IC50(uM) |
TC50(uM) |
SI(TC50/IC50) |
1 |
0.15 |
12 |
80 |
2 |
0.35 |
16 |
45.7 |
8 |
0.10 |
17 |
170 |
8-1 |
0.23 |
36 |
156 |
9 |
0.15 |
11 |
73.3 |
9-1 |
0.32 |
32 |
100 |
10 |
0.06 |
13 |
216 |
10-1 |
0.16 |
49 |
306 |
12 |
0.13 |
13 |
100 |
12-1 |
0.31 |
43 |
138.7 |
16 |
0.20 |
20 |
100 |
23-1 |
0.29 |
36 |
124 |
小鼠体内感染的抗病毒活性试验
在小鼠攻毒实验中,使用致死剂量的H7N9禽流感病毒(1MLD50)滴鼻感染小鼠,16号化合物(10mg/kg)可以达到阳性药奥司他韦(OLS,20mg/kg)相似的治疗效果,表现为感染小鼠体重回升。16号化合物与奥司他韦联合使用效果更佳(图4)。在存活率上,与单独使用奥司他韦相比,16号化合物与奥司他韦联合使用能将H7N9重度感染小鼠的存活率提高25%(图5)。
讨论:
通过体外细胞实验和体内的小鼠攻毒实验验证,本发明的化合物具有较好的抗流感病毒、抗手足口病毒、抗登革热病毒等急性感染病毒的能力,在与现有的抗病毒药物,例如奥司他韦联用后能将H7N9重度感染小鼠的存活率提高25%。具有开发成广谱抗病毒药物的前景。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。