CN107412344B - 用于治疗宠物皮肤病的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物，每100g药物溶液中含有：氟康唑0.5‑3g、C18反式脂肪酸25‑35g、黄芩素0.5‑3g、丁香提取物0.5‑3g、茶树油0.5‑3ml、汉麻0.5‑2g、甘油4‑6g、卡泊姆0.2‑3g、三乙醇胺1‑2g，余量为蒸馏水。本发明制备的药物组合物药效好，减少治疗宠物皮肤病的时间，复发率低。

Description

用于治疗宠物皮肤病的药物组合物及其制备方法
技术领域
本发明属于皮肤病药物技术领域，具体涉及一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物及其制备方法。
背景技术
宠物皮肤病是一种接触性疾病，感染皮肤的真菌主要包括犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和须毛藓菌，细菌主要包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌等。该病具有病情顽固、治疗时间久、复发率高等特点，临床症状主要表现为不同程度的脱屑、脱毛和结痂，严重者大面积脱毛、皮肤红疹、油性结痂，甚至皮肤溃烂，严重危害了宠物健康。由于临床上该病病因复杂，常常呈现混合感染的情况，而治疗使用的抗生素只有少数对细菌、真菌均有较好效果，且使用抗生素易产生耐药性。而天然植物提取物因其有效成分多且含量低，可作用于细菌的不同靶位点和代谢繁殖的不同阶段，作用缓慢，故不易产生耐药性，保持治疗效果。如用黄芩、连翘、黄柏等10种植物提取物对大肠杆菌进行了耐药性诱导试验，结果显示传代菌对中药不易形成耐药性(曹翠萍等.西南农业学报，2007,20(5)：1101-1104.)。利用含黄连、丹参提取液的培养基对耐喹诺酮类药物的大肠杆菌进行培养，结果表明植物提取物可部分逆转大肠杆菌耐药性的作用(罗音久等.中兽医医药杂志，2006，5：7-9.)。目前植物提取物已成为抗生素重要的替代物之一。
氟康唑为氟代三唑类抗真菌药，1990年在美国上市，抗菌谱与酮康唑相似，抗菌活性比酮康唑强。其作用机制是抑制真菌细胞膜必要成分麦角甾醇合成酶，使麦角甾醇合成受阻，破坏真菌细胞壁的完整性，抑制其生长繁殖，对多种真菌均有效。氟康唑对白色念珠菌、大小孢子菌、新型隐球菌、表皮癣菌及荚膜组织胞浆菌等均有强力抗菌活性。临床主要用于各种真菌感染、隐球菌病、真菌性脑膜炎、肺部真菌感染、腹部感染、泌尿道感染及皮肤真菌感染等。
黄芩抗菌谱广，对多种革兰阳性菌、革兰阴性菌及螺旋体等的生长均有抑制作用。黄芩也具有抗真菌活性，对白色念珠菌、许兰毛癣菌等多种致病性真菌的生长有一定抑制作用。研究证明，黄芩素具有较强的抗菌作用，可能是黄芩抗菌作用的主要成分。黄芩素是黄芩中含量最高的黄酮类化合物之一，化学名称为5，6，7-三羟基黄酮。
丁香提取物是以乙醇为溶剂，从丁香中萃取得到，成分较为复杂。丁香中含有多种抑菌成分，如丁香酚、乙酰丁香酚、丁香烯、甲基正成基酮、苯甲醛、乙酸卞酯等，主要抑菌成分为丁香酚(关文强等.食品科学，2005，26(12)：227—230)。这些物质对假单胞菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等多种细菌有一定的抑制作用(关文强等.食品科学，2005，26(12)：227—230；周建新等.食品工业，2003(3)：24—25.)。丁香对人体螨虫也有较好的杀灭作用(黄丽娟等.中国中医眼科杂志，2007,17(4)：211-214.)。目前，丁香提取物主要用于食品防腐、杀螨虫等相关领域。
茶树油是通过蒸馏方式从港木桃金娘科白千层液提取出的植物精油。主要成分复杂，主要含有4-萜品醇和1，8-桉油素等(Cox SD等.J Appl Microbiol，2001，91(3)：492—497.)。因具有广谱抗细菌、抗真菌和抗炎等活性(王懿等.Herald of Medicine，2004，23(1)：363-365.)，常用于治疗口腔溃疡、牙龈炎、手足癣、皮肤感染等疾病，也是生产护肤品的原料。研究表明，对人体蠕形螨有较好的杀灭活性(walton SF等.Arcb Deematol，2004，l4O(5)：563—566)。
汉麻，入肺、膀胱和大肠经；能平喘截疟、解毒杀虫，主治疟疾、气喘、蛔虫病。经抗菌特性测试，发现汉麻纤维能强效抑制造成人体脚癣和股癣的须癣毛癣菌、红色毛癣菌、犬小孢子菌三种真菌。对白色念珠菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌均具有较好的抑制作用。可显著降低巨噬细胞产生的TNF和N0，以此来减少炎症，还可通过对环氧合酶和脂氧合酶的双重抑制来发挥止痛和抗炎作用。
当前治疗宠物皮肤病的药物存在治疗范围单一、抗生素耐药性等问题，需要一款疗效好、减少真菌、细菌耐药性的药物。
发明内容
本发明主要提供了一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物，该药物药效好，减少治疗宠物皮肤病的时间，复发率低。其技术方案如下：一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物，每100g药物溶液中含有：氟康唑0.5-3g、C18反式脂肪酸25-35g、黄芩素0.5-3g、丁香提取物0.5-3g、茶树油0.5-3ml、汉麻0.5-2g、甘油4-6g、卡泊姆0.2-3g、三乙醇胺1-2g，余量为蒸馏水。
优选的，每100g药物溶液中含有：氟康唑1-2g、C18反式脂肪酸28-32g、黄芩素1-2g、丁香提取物1-2g、茶树油1-2ml、汉麻0.5-1g、甘油4-6g、卡泊姆1-2g、三乙醇胺1-2g，余量为蒸馏水。
优选的，每100g药物溶液中含有：氟康唑1g、C18反式脂肪酸30g、黄芩素1g、丁香提取物1g、茶树油1ml、汉麻1g、甘油5g、卡泊姆1g、三乙醇胺1.5g，余量为蒸馏水。
一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)取配方量的卡泊姆在适量蒸馏水中充分容胀，加入甘油搅拌均匀，滴加三乙醇胺，搅拌至透明凝胶，得凝胶I；
(2)取配方量的黄芩素、丁香提取物、汉麻、茶树油、C18反式脂肪酸到蒸馏水中混匀，得混合物II；
(3)取配方量的氟康唑加蒸馏水研磨，和混合物II一同加入到凝胶I中，搅拌混匀，加蒸馏水使溶液达到100g，混合均匀即可。
皮肤是犬最大的器官，皮肤由表皮和真皮组成，借皮下组织与深部组织相连。皮下组织在解剖学上称浅筋膜，一般不认为它是皮肤的组成部位，但因它与皮肤关系密切，通常也在皮肤结构中叙述。皮肤的厚度随动物的种类不同而有很大差异，犬的皮肤厚度：0.5-5mm。人类和犬的皮肤有很大的区别，进行对比如下表1所示：
表1人与犬皮肤对比
类别 狗 人
皮肤pH值 7.5(偏碱) 5.5(偏酸)
表皮厚度 较薄，有3～5个细胞层 较厚，有10～15个细胞层
表皮更新时间 约20天 28天
毛发生长周期 有生长周期(会换毛) 持续生长
因犬皮肤的特殊性，适应于人类使用的皮肤病治疗药物不适应于犬使用。本发明针对犬皮肤的特殊性，研究的药物组合物对犬皮肤具有显著的治疗效果。
采用上述技术方案，本发明具有以下优点：
本发明制备的药物组合物对犬真菌、细菌、螨虫等引起的皮肤病，尤其是真菌性皮肤病的治疗效果好、复发率低，疗效可达92.5％以上，复发率仅为12.5％。应用该组合物治疗犬真菌、细菌及混合感染性皮肤病可减少真菌、细菌耐药性。且本发明制备的药物组合物为凝胶，针对犬皮肤较薄的现象，可以减少药物对犬皮肤的刺激。因本发明药物组合物药效高，减少治疗犬皮肤病的时间，减少治疗次数，减少动物的痛苦，增加动物福利。
具体实施方式
以下实施例中的实验方法如无特殊规定，均为常规方法，所涉及的实验试剂及材料如无特殊规定均为常规生化试剂和材料。
实施例1
一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物，每100g药物溶液中含有：氟康唑1g、C18反式脂肪酸30g、黄芩素1g、丁香提取物1g、茶树油1ml、汉麻1g、甘油5g、卡泊姆1g、三乙醇胺1.5g，余量为蒸馏水。
上述药物组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)取配方量的卡泊姆在适量蒸馏水中充分容胀，加入甘油搅拌均匀，滴加三乙醇胺，搅拌至透明凝胶，得凝胶I；
(2)取配方量的黄芩素、丁香提取物、汉麻、茶树油、C18反式脂肪酸到蒸馏水中混匀，得混合物II；
(3)取配方量的氟康唑加蒸馏水研磨，和混合物II一同加入到凝胶I中，搅拌混匀，加蒸馏水使溶液达到100g，混合均匀即可。
实施例2
一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物，每100g药物溶液中含有：氟康唑2g、C18反式脂肪酸28g、黄芩素0.5g、丁香提取物3g、茶树油3ml、汉麻0.5g、甘油6g、卡泊姆2g、三乙醇胺1g，余量为蒸馏水。
上述药物组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)取配方量的卡泊姆在适量蒸馏水中充分容胀，加入甘油搅拌均匀，滴加三乙醇胺，搅拌至透明凝胶，得凝胶I；
(2)取配方量的黄芩素、丁香提取物、汉麻、茶树油、C18反式脂肪酸到蒸馏水中混匀，得混合物II；
(3)取配方量的氟康唑加蒸馏水研磨，和混合物II一同加入到凝胶I中，搅拌混匀，加蒸馏水使溶液达到100g，混合均匀即可。
实施例3
一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物，每100g药物溶液中含有：氟康唑0.5g、C18反式脂肪酸35g、黄芩素3g、丁香提取物2g、茶树油0.5ml、汉麻2g、甘油4g、卡泊姆3g、三乙醇胺2g，余量为蒸馏水。
上述药物组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)取配方量的卡泊姆在适量蒸馏水中充分容胀，加入甘油搅拌均匀，滴加三乙醇胺，搅拌至透明凝胶，得凝胶I；
(2)取配方量的黄芩素、丁香提取物、汉麻、茶树油、C18反式脂肪酸到蒸馏水中混匀，得混合物II；
(3)取配方量的氟康唑加蒸馏水研磨，和混合物II一同加入到凝胶I中，搅拌混匀，加蒸馏水使溶液达到100g，混合均匀即可。
实施例4
利用本发明药物组合物抗真菌效果对比试验
按照如下方法进行：
(一)供试菌种：犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和须毛藓菌；
(二)试验处理：
处理I：氟康唑溶液+黄芩素溶液
处理II：汉麻溶液
处理III：茶树油溶液
处理IV：丁香提取物溶液
处理Ⅵ：实施例1制备的药物组合物。
(三)试验方法
(1)菌悬液的准备：挑取供试菌，接种至1ml YEPD培养液，于37℃、200rpm振荡培养，活化两次后，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至YEPD培养液中，用上述方法再次活化16h后，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液调整菌液浓度至l×105～5×105CFU/ml。
(2)含菌平板的制备：在无菌条件下，吸取0.1ml的菌悬液加入灭菌好的培养皿中，倒入15ml左右融化冷却至40℃的普通琼脂平板，轻轻摇动使培养基与菌种混合均匀。
(3)抑菌直径的测定：采用滤纸片法。用打孔器将定性滤纸打成直径为6mm的滤纸片，于160℃干热灭菌15min，在无菌条件下加入灭菌药液(处理组I、II、III)，充分浸泡1h，干燥，每个含菌平板均匀贴3片，每组作3个平行作为重复，最后，量取抑菌圈直径，取平均值。
(4)联合抑菌试验：采用单药纸片搭桥法。将(3)中制备的纸片贴于含菌平板上，将含汉麻、茶树油、丁香的纸片分别放置于氟康唑+黄芩素药敏纸片旁边，两种药敏纸片的距离略大于已测得的氟康唑+黄芩素范围。若氟康唑+黄芩素抑菌圈向汉麻或茶树油纸片迁移，判定为正相关；若抑菌圈逆向迁移，判定为减小作用；若抑菌圈没有变化，判定为无关作用。
(5)数据分析：所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，差异显著性分析通过P≤0.05水平检验。
结果抑菌圈直径(见表2)显示本发明药物组合物对三种细菌的抑菌圈直径显著大于其他处理(P≤0.05)，说明加入汉麻、茶树油、丁香提取物的本发明药物组合物的抑菌效果显著增强。
联合抑菌试验显示，犬小孢子菌培养基中氟康唑抑菌圈向汉麻、丁香都有明显迁移，向茶树油方向抑菌圈没有变化；石膏样小孢子菌培养基中氟康唑抑菌圈向汉麻有明显迁移，向丁香、茶树油方向轻微迁移，但不明显；须毛藓菌培养基中抑菌圈向汉麻方向明显迁移，丁香和茶树油方向有轻微迁移。结果表明，针对引起宠物真菌性皮肤病的三种主要真菌，氟康唑+黄芩、汉麻、茶树油、丁香的抑菌效果呈正相关，即抑菌呈协同作用。
表2本发明药物组合物抗真菌效果对比试验结果
Figure BDA0001290517770000081
实施例5
利用本发明药物组合物防治细菌效果对比试验
按照如下方法进行
(一)供试菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌，以上菌株购自国家兽医微生物菌种保藏中心(北京市海淀区中关村南大街8号)。
(二)试验处理：
处理I：氟康唑溶液+黄芩素溶液处理II：汉麻溶液
处理III：茶树油溶液
处理IV：丁香溶液
处理Ⅵ：实施例1制备的药物组合物。
(三)试验方法
(1)菌悬液的准备：挑取供试菌种进行斜面活化后，置于37℃恒温培养箱培养24h，重复2次。在无菌条件下，在活化好的供试菌中挑取单菌落，接种于营养肉汤培养基中，摇床培养过夜(37℃，120rpm)，调节菌种浓度到l×106～1×107cfu/ml。
(2)含菌平板的制备：在无菌条件下，吸取0.1ml的菌悬液加入灭菌好的培养皿中，倒入15ml左右融化冷却至40℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻摇动使培养基与菌种混合均匀。
(3)抑菌直径的测定：采用滤纸片法。用打孔器将定性滤纸打成直径为6mm的滤纸片，于160℃干热灭菌15min，在无菌条件下加入灭菌药液，充分浸泡1h，干燥，每个含菌平板均匀贴3片，每组作3个平行作为重复，于37℃恒温培养箱中培养24h后，测量各处理组的抑菌圈直径(mm)。
(4)联合抑菌试验：采用单药纸片搭桥法。将(3)中制备的纸片贴于含菌平板上，将含汉麻、丁香或茶树油的纸片分别放置于氟康唑+黄芩旁边，两种药敏纸片的距离略大于已测得的氟康唑+黄芩抑菌圈范围。若氟康唑+黄芩抑菌圈向其他纸片迁移，判定为正相关；若抑菌圈逆向迁移，判定为减小作用；若抑菌圈没有变化，判定为无关作用。
(5)数据分析：所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，差异显著性分析通过P≤0.05水平检验。
结果抑菌圈直径(见表3)显示本发明药物组合物(处理IV)对三种细菌的抑菌圈直径显著大于其他处理(P≤0.05)，说明加入丁香提取物和茶树油的本发明药物组合物的抑菌效果显著增强。
联合抑菌试验(见表3)显示，金黄色葡萄球菌培养基中抑菌圈向汉麻、丁香有明显迁移，向茶树油方向的抑菌圈没有变化；大肠杆菌培养基中抑菌圈向丁香有明显迁移，向汉麻、茶树油方向的抑菌圈轻微迁移；链球菌培养基中抑菌圈向汉麻、丁香和茶树油方向有轻微迁移。结果表明，针对引起皮肤细菌感染的三种主要细菌，氟康唑+黄芩与汉麻、丁香、茶树油的抑菌效果呈正相关，即抑菌呈协同作用。
表3本发明药物组合物防治细菌效果对比试验结果
Figure BDA0001290517770000091
Figure BDA0001290517770000101
实施例6
利用本发明药物组合物治疗宠物皮肤病药效及复发率对比试验
按照如下方法进行：
(一)试验动物：部分地区宠物医院临床诊断为真菌、细菌及混合感染性皮肤病，且病情严重的犬。剔除已用过此类药物的犬。
(二)试验药物
处理I：氟康唑溶液+黄芩素溶液
处理II：实施例1制备的本发明药物组合物。
(三)试验方法
将患犬分别用两种药物进行治疗，每日2次，连用14天。
疗效判定标准为：
治愈：一个疗程结束后，所有炎症消失，恢复正常。
有效：一个疗程结束后，炎症减轻，但未恢复至发病前状态。
无效：一个疗程结束后，临床症状无明显变化，甚至较重。
在本次治疗试验后2个月内进行回访，对复发情况进行观察。通过刮片镜检的方式对复发情况进行记录。
结果(见表4)显示用药一个疗程后，处理II的治愈率(治愈数占治疗总数的百分比)为80％、有效率(有效率为治愈数加上有效数占治疗总数的百分比)为92.5％、复发率为12.5％，处理II的治愈率、有效率、复发率显著高于处理I(P<0.05)；处理II的无效率(无效数占治疗总数的百分比)为7.5％，显著低于处理I(P<0.05)。说明本发明药物组合物药效明显高于之前的氟康唑+黄芩素溶液。
表4本发明药物组合物治疗皮肤病的药效对比试验结果
组别 处理I 处理II
治疗总数(只) 40 40
治愈数(只) 25 32a
有效数(只) 4 5
无效数(只) 8 3a
治愈率(％) 60％ 80％a
有效率(％) 72.5％ 92.5％a
无效率(％) 20％ 7.5％a
复发数(只) 9 5
复发率(％) 22.5％ 12.5％a
备注：a表示组间差异显著。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种用于治疗宠物皮肤病的药物组合物的制备方法，其特征在于：每100g药物溶液中含有：氟康唑0.5-3g、C18 反式脂肪酸25-35g、黄芩素0.5-3g、丁香提取物0.5-3g、茶树油0.5-3ml、汉麻0.5-2g、甘油4-6g、卡泊姆0.2-3g、三乙醇胺1-2g，余量为蒸馏水；
所述制备方法包括以下步骤：
(1)取配方量的卡泊姆在适量蒸馏水中充分溶胀，加入甘油搅拌均匀，滴加三乙醇胺，搅拌至透明凝胶，得凝胶I；
(2)取配方量的黄芩素、丁香提取物、汉麻、茶树油、C18 反式脂肪酸到蒸馏水中混匀，得混合物II；
(3)取配方量的氟康唑加蒸馏水研磨，和混合物II一同加入到凝胶I中，搅拌混匀，加蒸馏水使溶液达到100g，混合均匀即可。
2.根据权利要求1所述的用于治疗宠物皮肤病的药物组合物的制备方法，其特征在于：每100g药物溶液中含有：氟康唑1-2g、C18 反式脂肪酸28-32g、黄芩素1-2g、丁香提取物1-2g、茶树油1-2ml、汉麻0.5-1g、甘油4-6g、卡泊姆1-2g、三乙醇胺1-2g，余量为蒸馏水。
3.根据权利要求1所述的用于治疗宠物皮肤病的药物组合物的制备方法，其特征在于：每100g药物溶液中含有：氟康唑1g、C18 反式脂肪酸30g、黄芩素1g、丁香提取物1g、茶树油1ml、汉麻1g、甘油5g、卡泊姆1g、三乙醇胺1.5g，余量为蒸馏水。
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