CN107400689A - 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法 - Google Patents
一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107400689A CN107400689A CN201710881428.5A CN201710881428A CN107400689A CN 107400689 A CN107400689 A CN 107400689A CN 201710881428 A CN201710881428 A CN 201710881428A CN 107400689 A CN107400689 A CN 107400689A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protoplast
- aqueous solution
- lactococcus lactis
- silica nodule
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 70
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- 239000004309 nisin Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000000835 fiber Substances 0.000 title claims abstract description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 claims abstract description 41
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 claims abstract description 41
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 23
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 12
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 150000000996 L-ascorbic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 10
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000010041 electrostatic spinning Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims abstract description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 40
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 12
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 11
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 claims description 9
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 claims description 7
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000009413 insulation Methods 0.000 claims description 7
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 6
- 239000005030 aluminium foil Substances 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 229940064457 osmitrol Drugs 0.000 claims description 6
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 5
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 5
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 4
- 108010087005 glusulase Proteins 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 238000013329 compounding Methods 0.000 claims description 3
- -1 chloromethanes Alkane Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 238000009987 spinning Methods 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 229910021432 inorganic complex Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 7
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000001998 anti-microbiological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 abstract 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 abstract 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- JZFPYUNJRRFVQU-UHFFFAOYSA-N Niflumic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 JZFPYUNJRRFVQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 5
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 5
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 5
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 108010081495 driselase Proteins 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 3
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 3
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 108010093369 Multienzyme Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000002568 Multienzyme Complexes Human genes 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229910018540 Si C Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000819 hypertonic solution Substances 0.000 description 1
- 229940021223 hypertonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 229910052909 inorganic silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000005543 nano-size silicon particle Substances 0.000 description 1
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
Abstract
本发明公开了一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法，包括利用静电自组装法将乳酸乳球菌原生质体包裹在有机‑无机复合脂质形成的稳定硅质体中；将壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯完全溶解于乙酸溶液，加入甘油，再加入硅质体，通过静电纺丝制得纳米纤维膜，将其成卷装入层析柱中；配制蔗糖、大豆蛋白胨、L‑抗环血酸、磷酸氢二钠和硫酸镁的混合溶液，经过滤除菌后，以一定流速流经层析柱，经检测流出液中含有乳酸链球菌素。本发明固定化细胞的方法具有高效、抗染菌、产率高、产物浓度高的特点，便于后续产物分离和纯化。
Description
技术领域
本发明涉及一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法，属于生物化工领域。
背景技术
乳酸链球菌素(亦称乳链菌肽)，是一种天然生物活性抗菌肽，是利用生物技术提取的一种纯天然、高效、安全的多肽活性物质。它对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用，是目前世界上唯一被允许用作食品添加剂的细菌素。
固定化微生物细胞是在固定化酶的研究和应用的基础上发展起来的新技术，具有反应速度快、易于自动化等特点，不仅可以用于单一阶段的反应，而且对于多酶复合体系参与下的复杂生物合成反应更具有其独特的优点，因此，在食品饮料、酶制剂、抗生素、辅酶等的发酵生产中具有广泛的应用。
硅质体是一种类脂质体，是由一个分子连接两个疏水性的碳链和一个亲水性的有机硅烷分子组成的新型脂质分子，这种分子在水中通过自组装过程形成囊泡，囊泡表面覆盖有纳米级厚度的无机硅酸盐壳层，用稳定的Si-C键将无机层和有机层二分子体连接在一起。硅质体与传统的脂质体囊泡相比，是一种非常稳定的囊泡结构，是有机-无机的杂化材料。与传统的常规脂质体相比，硅质体表面的硅氧烷网络显著增加了脂质体及固定化细胞的稳定性，对表面活性剂、酸碱都有很好的耐受性。硅质体作为固定化细胞的载体，与其他常规载体相比，可以一个硅质体就装载一个细胞，细胞被束缚在硅质体内，获得极大的机械强度，极大的比表面积和抗污染能力。
静电纺丝纳米纤维膜比常规的固定化载体，具有孔隙率高，比表面积大，孔洞连通性好的特点，能够降低底物的扩散阻力，有利于提高固定化细胞的反应活性。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种具有高效、抗染菌、产率高、产物浓度高的固定化细胞方法生产乳酸链球菌素，并便于后续产物分离和纯化。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法，包括如下步骤：
步骤一：制备乳酸乳球菌原生质体硅质体：称取质量比为0.1～0.2:1～3的有机-无机复合脂质与乳酸乳球菌原生质体，优选0.15:2；将有机-无机复合脂质溶于三氯甲烷中，蒸发除去三氯甲烷得到类脂质薄膜；乳酸乳球菌原生质体悬浮于甘露醇水溶液中，然后加入到所得类脂质薄膜中，搅拌混匀并迅速加热到45～50℃，优选48℃，热激10～30s同时水浴超声，冷却至4℃后静置，经脂质体挤出器挤出，得到粒径均一的乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液；
步骤二：制备纳米纤维膜：取壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯溶解于乙酸水溶液中，加入甘油，再加入步骤一制得的乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液，搅拌混匀，通过静电纺丝制得纳米纤维膜，将其成卷填入带保温夹套的层析柱中；
步骤三：配制蔗糖、大豆蛋白胨、L-抗环血酸、磷酸氢二钠和硫酸镁的混合水溶液，经过滤除菌后，流经步骤二制备的层析柱，收集流出液，即得。
步骤一中，所述乳酸乳球菌原生质体通过如下步骤获得：
步骤a：取乳酸乳球菌菌体用无菌水充分洗涤，离心取沉淀；
步骤b：配制酶解液：分别取步骤a沉淀质量2～4％的溶壁酶、蜗牛酶、纤维素酶和崩溃酶，以质量体积比0.1:5～10g/mL加入到含有0.3～0.5mol/L KCl和0.2～0.4mol/LMgSO4的水溶液中，搅拌充分溶解，再经过滤除菌，制得酶解液；
步骤c：将步骤a得到的沉淀加入到步骤b得到的酶解液中，涡旋混匀，25～30℃下水浴酶解3～8h后，离心取沉淀即得乳酸乳球菌原生质体。
步骤一中，所述有机-无机复合脂质的结构式如下：
该结构在硅质体中形成一层稳定的极薄且具有一定刚性的致密网状膜，可以约束原生质体，使原生质体不会因为环境渗透压的改变而破裂，极大的延长了原生质体的作用时间；另外，由于有机-无机复合脂质于磷脂结构相似，因此，硅质体结合了脂质体和二氧化硅纳米颗粒的双重优点，避免了脂质体和二氧化硅纳米颗粒各自的缺陷，能够最大限度地减少对原生质体的毒性，保证原生质体内蛋白和酶的正常生理功能，同时不会阻碍小分子物质的进出细胞。
步骤一中，所述有机-无机复合脂质与三氯甲烷的混合质量体积比为100-200:10mg/mL，优选150:10mg/mL；所述甘露醇水溶液的浓度为100-180g/L，乳酸乳球菌原生质体与甘露醇水溶液的混合质量体积比为1～3:10g/mL，优选2:10g/mL；所述脂质体挤出器采用聚碳酸酯滤膜，滤膜的孔径为0.5～1.0μm，优选1.0μm。
步骤二中，所述壳聚糖的粘均分子量为5.0×105，脱乙酰度为80～85％，优选85％；所述聚乙烯醇重均分子量为180000～200000，优选200000；所述聚氧化乙烯重均分子量为1×106～1×107，优选1×107；所述乙酸水溶液体积浓度为1～2％；所述壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯的质量比为1～2:2～4:7～9，优选2:3:8，壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯以总的质量浓度1.5～2％溶解于乙酸水溶液中，优选1.8％；所述甘油的加入量与乙酸水溶液的质量体积比为1～2g/L，优选1.5g/L；所述乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液的加入量与乙酸水溶液的体积比为1:100～500，优选1:400。
步骤二中，所述静电纺丝的接收装置采用铝箔，喷头到接收装置的距离为5～30cm，优选20cm；电压为3～30KV，优选20KV；喷射流量为1～5mL/h，优选1mL/h。
步骤三中，所述混合水溶液中蔗糖浓度为15～30g/L，优选20g/L；大豆蛋白胨浓度为15～30g/L，优选20g/L；L-抗环血酸浓度为0.2～1.0g/L，优选0.5g/L；磷酸氢二钠浓度为5～20g/L，优选8g/L；硫酸镁浓度为0.1～0.8g/L，优选0.5g/L。
步骤三中，所述混合水溶液的流速为0.2～0.5mL/h，优选0.2mL/h；层析柱夹套温度控制在27～32℃，优选30℃。
有益效果：
1、本申请的方法采用连续操作，操作简单，原材料转化效率高，耗时较少，可连续生物合成乳酸链球菌素。
2、本申请采用硅质体作为细胞的直接载体，有效的束缚住细胞，并通过高渗溶液制备原生质体减小细胞体积，这有利于细胞在硅质体中的装载率和保持硅质体的稳定性，自组装的乳酸乳球菌原生质体硅质体，能持久保持细胞的活性，提高生产效率，降低细胞的损失率。
3、本申请采用静电纺丝做成反应介质，利用其孔隙率大，扩散阻力小的优势和硅质体组合，能够获得最大的反应接触面积，发挥最大的反应效率。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
以下实施例中，乳酸链球菌素效价的HPLC检测方法如下：
色谱柱采用汉邦Lichrosphore C18(4.6×250mm，5μm)，流动相：A：10％(v/v)乙腈水溶液，含0.01％(v/v)三氟乙酸；B：90％(v/v)乙腈水溶液，含0.01％(v/v)三氟乙酸。洗脱程序：0-12min，76％A相，24％B相；12-32min，A相由76％降到55％；32-40min，A相由55％上升到76％。流速为1.6mL/min，柱温室温，检测波长为220nm。
孔隙率测试：取样品，精确称量其干重W0，在称量瓶中加入一定量的无水乙醇，放入样品，待乙醇充分浸入后称量瓶和样品的总重量W1，然后取出湿样品，再称得称量瓶的重量W2；将比重瓶中装满无水乙醇，称重W3，将湿样品放入比重瓶，装满乙醇到规定刻度后称重为W4。
按照以下公式计算孔隙率。
式中，P为孔隙率，％。
实施例1
乳酸乳球菌原生质体的制备，步骤如下：
(1)取3g乳酸乳球菌菌体用无菌水充分洗涤，离心取沉淀。
(2)配制酶解液：取溶壁酶0.1g，蜗牛酶0.1g，纤维素酶0.1g，崩溃酶0.1g，加入到含有0.3mol/L KCl和0.4mol/L MgSO4的10mL水溶液中，充分溶解，再经过滤除菌，制得酶解液。
(3)将沉淀加入到酶解液中，涡旋混匀，30℃水浴酶解8h后，离心，沉淀即为乳酸乳球菌原生质体。
实施例2
乳酸乳球菌原生质体的制备，步骤如下：
(1)取4g乳酸乳球菌菌体用无菌水充分洗涤，离心取沉淀。
(2)配制酶解液：取溶壁酶0.1g，蜗牛酶0.1g，纤维素酶0.1g，崩溃酶0.1g，加入到含有0.5mol/L KCl和0.2mol/L MgSO4的5mL水溶液中，充分溶解，再经过滤除菌，制得酶解液。
(3)将沉淀加入到酶解液中，涡旋混匀，25℃水浴酶解3h后，离心，沉淀即为乳酸乳球菌原生质体。
实施例3
(1)称取150mg有机-无机复合脂质溶于10mL三氯甲烷中，旋转蒸发除去三氯甲烷，圆底烧瓶瓶底形成一层透明的类脂质薄膜；将2g乳酸乳球菌原生质体用10mL 180g/L甘露醇水溶液悬浮，加入到所得的类脂质薄膜中，充分搅拌混匀并迅速加热到48℃，热激20s同时水浴超声；迅速冷却至4℃，静置12h后，经脂质体挤出器(聚碳酸酯滤膜孔径为1.0μm)挤出，得到粒径均一的乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液。
(2)按照质量比为2:3:8称取壳聚糖(粘均分子量5.0×105，脱乙酰度85％)、聚乙烯醇(重均分子量为200000)和聚氧化乙烯(重均分子量为1×107)以总质量浓度1.8％完全溶解于体积溶度为2％的乙酸水溶液中，加入乙酸水溶液质量体积比为1.5g/L的甘油，再按照乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液与乙酸水溶液的体积比1:400加入步骤(1)中制得的硅质体悬液，4℃搅拌至完全混匀，采用静电纺丝法，利用铝箔作为接收装置，接收距离设置为20cm，电压为20KV，以1mL/h的喷射流量制得纳米纤维膜，测定其孔隙率为97.5％，将其成卷填入带保温夹套的层析柱中；
(3)按照20g/L蔗糖，20g/L大豆蛋白胨，0.5g/L L-抗环血酸，8g/L磷酸氢二钠，0.5g/L硫酸镁的浓度配制混合水溶液，经过滤除菌后，以0.2mL/h的流速流经步骤(2)的层析柱夹套水温控制在30℃，收集流出液利用HPLC测定乳酸链球菌素效价。
连续操作30d，乳酸链球菌素平均效价达到1200IU/mL，即该方法的生产率为1200IU/(mL·h)。
实施例4
(1)称取100mg有机-无机复合脂质溶于10mL三氯甲烷中，旋转蒸发除去三氯甲烷，圆底烧瓶瓶底形成一层透明的类脂质薄膜；将3g乳酸乳球菌原生质体用10mL 100g/L甘露醇水溶液悬浮，加入到所得的类脂质薄膜中，充分搅拌混匀并迅速加热到45℃，热激10s同时水浴超声；迅速冷却至4℃，静置12h后，经脂质体挤出器(聚碳酸酯滤膜孔径为0.5μm)挤出，得到粒径均一的乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液；
(2)按照质量比为1:2:7称取壳聚糖(粘均分子量5.0×105，脱乙酰度80％)、聚乙烯醇(重均分子量为180000)和聚氧化乙烯(重均分子量为1×106)以总质量浓度1.5％完全溶解于体积浓度为2％的乙酸水溶液中，加入乙酸水溶液质量体积比为1g/L的甘油，再按照乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液与乙酸水溶液的体积比为1:100加入步骤(1)中制得的硅质体悬液，4℃搅拌至完全混匀，采用静电纺丝法，利用铝箔作为接收装置，接收距离设置为5cm，电压为3KV，以1mL/h的喷射流量制得纳米纤维膜，测定其孔隙率为94.7％，将其成卷填入带保温夹套的层析柱中；
(3)按照15g/L蔗糖，15g/L大豆蛋白胨，0.2g/L L-抗环血酸，5g/L磷酸氢二钠，0.1g/L硫酸镁的浓度配制混合水溶液，经过滤除菌后，以0.2mL/h的流速流经步骤(2)的层析柱，夹套水温控制在27℃，收集流出液利用HPLC测定乳酸链球菌素效价。
连续操作30d，乳酸链球菌素平均效价达到1080IU/mL，即该方法的生产率为1080IU/(mL·h)。
实施例5
(1)称取200mg有机-无机复合脂质溶于10mL三氯甲烷中，旋转蒸发除去三氯甲烷，圆底烧瓶瓶底形成一层透明的类脂质薄膜；将1g乳酸乳球菌原生质体用10mL 180g/L甘露醇水溶液悬浮，加入到所得的类脂质薄膜中，充分搅拌混匀并迅速加热到50℃，热激30s同时水浴超声；迅速冷却至4℃，静置12h后，经脂质体挤出器(聚碳酸酯滤膜孔径为0.8μm)挤出，得到粒径均一的乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液；
(2)按照质量比为2:4:9称取壳聚糖(粘均分子量5.0×105，脱乙酰度80％)、聚乙烯醇(重均分子量为180000)和聚氧化乙烯(重均分子量为1×106)以总质量浓度为2％完全溶解于体积溶度为2％的乙酸水溶液中，加入乙酸水溶液质量体积比为2g/L的甘油，再按照乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液与乙酸水溶液的体积比为1:500加入步骤(1)中制得的硅质体悬液，4℃搅拌至完全混匀，采用静电纺丝法，利用铝箔作为接收装置，接收距离设置为30cm，电压为30KV，以5mL/h的喷射流量制得纳米纤维膜，测定其孔隙率为93.8％，将其成卷填入带保温夹套的层析柱中；
(3)按照30g/L蔗糖，30g/L大豆蛋白胨，1.0g/L L-抗环血酸，20g/L磷酸氢二钠，0.8g/L硫酸镁的浓度配制混合水溶液，经过滤除菌后，以0.5mL/h的流速流经步骤(2)的层析柱，夹套水温控制在32℃，收集流出液利用HPLC测定乳酸链球菌素效价。
连续操作30d，乳酸链球菌素平均效价达到1020IU/mL，即该方法的生产率为1020IU/(mL·h)。
对比例1
(1)将3g乳酸乳球菌原生质体用5mL 180g/L甘露醇水溶液悬浮，制得乳酸乳球菌原生质体悬液；
(2)按照质量比为1:2:7称取壳聚糖(粘均分子量5.0×105，脱乙酰度85％)、聚乙烯醇(分子量为200000)和聚氧化乙烯(分子量为1×107)以总质量浓度为1.8％完全溶解于体积溶度为2％的乙酸水溶液，加入乙酸水溶液质量体积比为2g/L的甘油，再按照乳酸乳球菌原生质体悬液与乙酸水溶液的体积比为1:400加入步骤(1)中制得的乳酸乳球菌原生质体悬液，4℃搅拌至完全混匀，采用静电纺丝法，利用铝箔作为接收装置，接收距离设置为20cm，电压为20KV，以1mL/h的喷射流量制得纳米纤维膜，测定其孔隙率为95.2％，将其成卷填入带保温夹套的层析柱中；
(3)按照20g/L蔗糖，20g/L大豆蛋白胨，0.5g/L L-抗环血酸，8g/L磷酸氢二钠，0.5g/L硫酸镁的浓度配制混合水溶液，经过滤除菌后，以0.2mL/h的流速流经步骤(2)的层析柱，夹套水温控制在30℃，收集流出液利用HPLC测定乳酸链球菌素效价。
连续操作30d，乳酸链球菌素平均效价为280IU/mL，即该方法的生产率为280IU/(mL·h)。
对比例2
(1)将3g乳酸乳球菌菌体用5mL水溶液悬浮，制得乳酸乳球菌菌体悬液；
(2)按照质量比为1:2:7称取壳聚糖(粘均分子量5.0×105，脱乙酰度85％)、聚乙烯醇(分子量为200000)和聚氧化乙烯(分子量为1×107)以总质量浓度为1.8％完全溶解于体积溶度为2％的乙酸水溶液，加入乙酸水溶液质量体积比为2g/L的甘油，再按照乳酸乳球菌菌体悬液与乙酸溶液的体积比为1:400加入步骤(1)中制得的乳酸乳球菌菌体悬液，4℃搅拌至完全混匀，装入注射器，滴入1mol/L NaOH溶液中成微球，将微球用水洗至中性，测定微球孔隙率为83.6％，装入带保温夹套的层析柱中；
(3)按照20g/L蔗糖，20g/L大豆蛋白胨，0.5g/L L-抗环血酸，8g/L磷酸氢二钠，0.5g/L硫酸镁的浓度配制混合水溶液，经过滤除菌后，以0.2mL/h的流速流经步骤(2)的层析柱，夹套水温控制在30℃，收集流出液利用HPLC测定乳酸链球菌素效价。
连续操作30d，乳酸链球菌素平均效价为120IU/mL，即该方法的生产率为120IU/(mL·h)。
本发明提供了一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
Claims (10)
1.一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：制备乳酸乳球菌原生质体硅质体：称取质量比为0.1～0.2:1～3的有机-无机复合脂质与乳酸乳球菌原生质体；将有机-无机复合脂质溶于三氯甲烷中，蒸发除去三氯甲烷得到类脂质薄膜；乳酸乳球菌原生质体悬浮于甘露醇水溶液中，然后加入到所得类脂质薄膜中，搅拌混匀并迅速加热到45～50℃，热激10～30s同时水浴超声，冷却至4℃后静置，经脂质体挤出器挤出，得到乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液；
步骤二：制备纳米纤维膜：取壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯溶解于乙酸水溶液中，加入甘油，再加入步骤一制得的乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液，搅拌混匀，通过静电纺丝制得纳米纤维膜，将其成卷填入带保温夹套的层析柱中；
步骤三：配制蔗糖、大豆蛋白胨、L-抗环血酸、磷酸氢二钠和硫酸镁的混合水溶液，经过滤除菌后，流经步骤二制备的层析柱，收集流出液，即得。
2.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤一中，所述乳酸乳球菌原生质体通过如下步骤获得：
步骤a：取乳酸乳球菌菌体用无菌水洗涤，离心取沉淀；
步骤b：配制酶解液：分别取步骤a沉淀质量2～4％的溶壁酶、蜗牛酶、纤维素酶和崩溃酶，以质量体积比0.1:5～10g/mL加入到含有0.3～0.5mol/L KCl和0.2～0.4mol/LMgSO4的水溶液中，搅拌溶解，再经过滤除菌，制得酶解液；
步骤c：将步骤a得到的沉淀加入到步骤b得到的酶解液中，涡旋混匀，25～30℃下水浴酶解3～8h后，离心取沉淀即得乳酸乳球菌原生质体。
3.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤一中，所述有机-无机复合脂质的结构式如下：
4.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤一中所述有机-无机复合脂质与三氯甲烷混合的质量体积比为100～200:10mg/mL；所述甘露醇水溶液的浓度为100～180g/L，乳酸乳球菌原生质体与甘露醇水溶液混合的质量体积比为1～3:10g/mL。
5.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤一中，所述脂质体挤出器采用聚碳酸酯滤膜，滤膜的孔径为0.5～1.0μm。
6.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤二中，所述壳聚糖的粘均分子量为5.0×105，脱乙酰度为80～85％；所述聚乙烯醇重均分子量为180000～200000；所述聚氧化乙烯重均分子量为1×106～1×107；所述乙酸水溶液体积浓度为1～2％；所述壳聚糖、聚乙烯醇和聚氧化乙烯的质量比为1～2:2～4:7～9，以总的质量浓度1.5～2％溶解于乙酸水溶液中。
7.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤二中，所述甘油的加入量与乙酸水溶液的质量体积比为1～2g/L；所述乳酸乳球菌原生质体硅质体悬液的加入量与乙酸水溶液的体积比为1:100～500。
8.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤二中，所述静电纺丝的接收装置采用铝箔，喷头到接收装置的距离为5～30cm，电压为3～30KV，喷射流量为1～5mL/h。
9.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤三中，所述混合水溶液中蔗糖浓度为15～30g/L，大豆蛋白胨浓度为15～30g/L，L-抗环血酸浓度为0.2～1.0g/L，磷酸氢二钠浓度为5～20g/L，硫酸镁浓度为0.1～0.8g/L。
10.根据权利要求1所述的生产乳酸链球菌素的方法，其特征在于，步骤三中，所述混合水溶液的流速为0.2～0.5mL/h；层析柱夹套温度控制在27～32℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710881428.5A CN107400689B (zh) | 2017-09-26 | 2017-09-26 | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710881428.5A CN107400689B (zh) | 2017-09-26 | 2017-09-26 | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107400689A true CN107400689A (zh) | 2017-11-28 |
| CN107400689B CN107400689B (zh) | 2020-01-14 |
Family
ID=60388698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710881428.5A Active CN107400689B (zh) | 2017-09-26 | 2017-09-26 | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107400689B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108152281A (zh) * | 2017-12-11 | 2018-06-12 | 南通大学 | 一种壳聚糖溶液改性试纸制备方法 |
| CN108669213A (zh) * | 2018-04-26 | 2018-10-19 | 天津大学 | 一种nisin热敏脂质体及其制备方法和应用 |
| CN110373897A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-10-25 | 南通大学 | 一种天然耐洗的抗菌丝、毛织物整理方法 |
| CN110512352A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-11-29 | 南通大学 | 一种长效抗菌非织造布的制备方法 |
| CN110565376A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-12-13 | 南通大学 | 一种芳香抗菌防水非织造布的制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105002240A (zh) * | 2015-07-07 | 2015-10-28 | 汕头大学 | 一种抗菌素及其制备方法与应用 |
| CN105802950A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-07-27 | 天津工业大学 | 一种串珠状静电纺纳米纤维固定化酵母菌及其制备方法 |
| CN105969671A (zh) * | 2016-06-13 | 2016-09-28 | 辽宁大学 | 一种桦褐孔菌原生质体的制备和转化方法 |
| CN106906253A (zh) * | 2017-03-28 | 2017-06-30 | 南京工业大学 | 一种利用表面固定化技术发酵生产l‑乳酸的方法 |
-
2017
- 2017-09-26 CN CN201710881428.5A patent/CN107400689B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105002240A (zh) * | 2015-07-07 | 2015-10-28 | 汕头大学 | 一种抗菌素及其制备方法与应用 |
| CN105802950A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-07-27 | 天津工业大学 | 一种串珠状静电纺纳米纤维固定化酵母菌及其制备方法 |
| CN105969671A (zh) * | 2016-06-13 | 2016-09-28 | 辽宁大学 | 一种桦褐孔菌原生质体的制备和转化方法 |
| CN106906253A (zh) * | 2017-03-28 | 2017-06-30 | 南京工业大学 | 一种利用表面固定化技术发酵生产l‑乳酸的方法 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| KENNETH TODAR, PHD: "Lactococcus lactis: nominated as the Wisconsin State Microbe", 《HTTP://TEXTBOOKOFBACTERIOLOGY.NET/FEATURED_MICROBE.HTML》 * |
| 周斌: "响应面法优化乳酸链球菌素发酵培养基成分", 《中国酿造》 * |
| 平其能: "《现代药剂学》", 31 October 1998, 中国医药科技出版社 * |
| 康传哲: "硅质体作为新型药物载体的研究进展", 《西南国防医药》 * |
| 张秀明: "培养条件对乳酸乳球菌N302合成乳酸链球菌素的影响", 《南开大学学报(自然科学版)》 * |
| 李纪龙: "新型有机-无机杂化陶瓷型脂质体"Cerasome"的研究与应用", 《材料导报:综述篇》 * |
| 蒋宫平: "脂质体制备方法的里程碑-挤出法", 《沈阳药科大学学报》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108152281A (zh) * | 2017-12-11 | 2018-06-12 | 南通大学 | 一种壳聚糖溶液改性试纸制备方法 |
| CN108669213A (zh) * | 2018-04-26 | 2018-10-19 | 天津大学 | 一种nisin热敏脂质体及其制备方法和应用 |
| CN108669213B (zh) * | 2018-04-26 | 2021-06-08 | 天津大学 | 一种nisin热敏脂质体及其制备方法和应用 |
| CN110373897A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-10-25 | 南通大学 | 一种天然耐洗的抗菌丝、毛织物整理方法 |
| CN110373897B (zh) * | 2019-07-15 | 2021-09-10 | 南通大学 | 一种天然耐洗的抗菌丝、毛织物整理方法 |
| CN110512352A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-11-29 | 南通大学 | 一种长效抗菌非织造布的制备方法 |
| CN110565376A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-12-13 | 南通大学 | 一种芳香抗菌防水非织造布的制备方法 |
| CN110565376B (zh) * | 2019-08-12 | 2022-04-22 | 南通大学 | 一种芳香抗菌防水非织造布的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107400689B (zh) | 2020-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107400689A (zh) | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产乳酸链球菌素的方法 | |
| CN106693909B (zh) | 一种苯硼酸修饰的磁性纳米粒子及其制备方法和应用 | |
| CN100427593C (zh) | 固定化酶的丝素纳米颗粒及其制备方法 | |
| CN100389754C (zh) | 利用啤酒废酵母细胞作为壁材制备微胶囊的方法 | |
| CN102634068A (zh) | 一种制备功能纳米颗粒/细菌纤维素复合膜的方法及其装置 | |
| CN111840322B (zh) | 一种万古霉素修饰的黑磷量子点抗菌剂、制备方法及应用 | |
| CN105349587B (zh) | 一种提高甘油酯型鱼油中epa和dha含量的方法 | |
| CN107418995B (zh) | 一种石榴皮单宁液态发酵制备的鞣花酸及其制备方法 | |
| CN103446964A (zh) | 一种羧基功能化的超支化磁性介孔二氧化硅复合微球的制备 | |
| CN115403474B (zh) | 脂质化合物及其在核酸递送中的应用 | |
| CN107625966A (zh) | 一种自组装式脂质‑介孔硅核/壳复合型纳米药物载体及其制备方法 | |
| CN109717186B (zh) | 一种环境友好型生物膜抑制分子的精准控释方法 | |
| CN107048349A (zh) | 一种复方羊肚菌菌丝体多糖颗粒剂 | |
| CN105111253B (zh) | 一种提取分离神经节苷脂的方法 | |
| CN107686836A (zh) | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产虫草素的方法 | |
| CN107400693A (zh) | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产虾青素的方法 | |
| CN107475345A (zh) | 一种自组装硅质体静电纺丝纤维膜固定化细胞生产灵芝酸的方法 | |
| CN101670255A (zh) | 超浓乳液法制备功能化磁性高分子微球的方法 | |
| CN108059619A (zh) | 一种碱基乙酰胺甘油醚分子，其化学合成方法及其在基因治疗领域的应用 | |
| CN114287634A (zh) | 包埋益生菌的阿拉伯胶复合纤维/胶囊及其制备方法和应用 | |
| CN104814928B (zh) | 一种载二氢杨梅素三元复合脂质体的制备方法 | |
| CN110156845A (zh) | 一种内酯型槐糖脂的制备方法 | |
| CN102925378A (zh) | 一种奇异变形杆菌菌株及其转化大豆苷元生产s-雌马酚的方法 | |
| CN104911214B (zh) | 一种硒化铜纳米材料的生物调控制备方法 | |
| CN106636252A (zh) | 干巴菌胞外多糖及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210611 Address after: 226019 No.205, building 6, Nantong University, No.9, Siyuan Road, Nantong City, Jiangsu Province Patentee after: Center for technology transfer, Nantong University Address before: 226019 Jiangsu city of Nantong province sik Road No. 9 Patentee before: NANTONG University |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Wang Tianqi Inventor after: Zhang Qingyou Inventor after: Tang Jiapeng Inventor after: Ge Yan Inventor after: Fu Haihong Inventor before: Tang Jiapeng Inventor before: Ge Yan Inventor before: Fu Haihong |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 226019 inside Nantong University, No. 9, Siyuan Road, Nantong City, Jiangsu Province Patentee after: Nantong University Technology Transfer Center Co.,Ltd. Address before: 226019 No.205, building 6, Nantong University, No.9, Siyuan Road, Nantong City, Jiangsu Province Patentee before: Center for technology transfer, Nantong University |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211116 Address after: Room 3006, floor 3, building 4, yard 12, Jinxing Road, Daxing District, Beijing 102600 Patentee after: Likang Rongjian (Beijing) Biomedical Technology Co., Ltd Address before: 226019 inside Nantong University, No. 9, Siyuan Road, Nantong City, Jiangsu Province Patentee before: Nantong University Technology Transfer Center Co., Ltd |
|
| TR01 | Transfer of patent right |