CN107383227A - 一种百合多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种百合多糖的提取方法，属于食品加工领域，包括以下步骤：首先以饱满的麝香百合鳞茎作为原料，将其清洗后剥离鳞片，将所得鳞片于特定条件下经过乙醇浸漉处理，将处理所得的物质采用超声波方式进行提取，再将所得物质采用自制的活性液进行酶解处理，可使百合鳞茎中的多糖进一步提取得到，酶解后再利用中性蛋白酶对其进行纯化处理，上述步骤相结合的处理工艺得到的百合多糖，可以较为完全的保持其营养成分，还能提高百合多糖的提取率和纯化率。
Description
【技术领域】
本发明涉及食品加工领域，尤其是一种百合多糖的提取方法。
【技术背景】
麝香百合，是一种美丽的花卉，花极香，含有芳香油，可作香料，其鳞茎呈球形或近球形，高2.5-5厘米，鳞片白色，麟茎及花均具有清热解毒，润肺止咳的功效，可用于治疗咳嗽、尿血、胎盘不下、无名肿毒等症。麝香百合可食用及作调料，同洋葱、大蒜等同属鳞茎类香辛调料，入肴可赋香气。麝香百合的鳞茎是著名的保健食物，鲜品可用于制作菜肴，鳞叶味甘微苦，具有润肺止咳、清心安神的功效；用于肺痨久咳、咳嗽痰血、虚烦惊悸、精神恍惚等症；花具有润肺清火、安神的功效，用于咳嗽、眩晕、夜寐不安、天疮湿疮等症。
百合是药食两用品，其营养成分主要有蛋白质、淀粉、多糖和无机盐等，其中，百合多糖具有降血糖、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、增强机体免疫力、提高淋巴细胞转化率的特性，常食用其加工品对人体非常有益。
综上所述，百合具有较高的经济利用价值，但是在提取百合多糖时还存在诸多问题，例如百合多糖难以提取，或是所用提取方法难以去除杂质，从而导致的多糖提取率和纯化率较低，不能满足当今消费人群的需求。
【发明内容】
鉴于以上提出的问题，本发明提供了一种百合多糖的提取方法，可以较为完全的保持其中的营养成分，还能提高百合多糖的提取率和纯化率。
本发明的技术方案如下：
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5-6mm的节段后，再向其中加入鳞片2-3倍体积的乙醇溶液，浸泡1-1.5h后，过滤取出5-8％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22-23h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其1.2-2倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取30-40min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为56-62℃；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至26-29℃后放入超高压均质机中，按照12-15g/100g的用量加入活性液，于压力为200-220MPa的条件下处理5-10min，得到混合物c；
(5)纯化处理：将步骤(4)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为46-48℃条件下处理15-20min，然后用瞬间高压处理10-20s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为12000-15000r/min的条件下离心6-8min，即得到上清液；
(6)成品：将步骤(5)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
进一步地，在步骤(5)中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.03-0.04wt％。
进一步地，在步骤(4)中，所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在24-28℃下培养8-10h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为26-28℃、振荡速度为150-180r/min的条件下振荡20-25min，得到活性液。
进一步地，所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.02-0.03:0.03-0.05:2-3:5-8:1000的质量比混合制成。
进一步地，在步骤(3)中，所述超声波的频率为50-60KHz。
进一步地，在步骤(2)中，所述乙醇的体积浓度为60-65％。
本发明提供了一种百合多糖的提取方法，与现有技术相比，具有以下有益效果：
1.本发明首先以饱满的麝香百合鳞茎作为原料，将其清洗后剥离鳞片，将所得鳞片于特定条件下经过乙醇溶液浸漉处理，将处理所得的物质采用超声波方式进行提取，再将所得物质中添加自制的活性液于超高压均质机中进行酶解处理，酶解后再利用中性蛋白酶对其进行纯化处理，上述步骤相结合的处理工艺得到的百合多糖。其中，将百合鳞片于特定条件下经过乙醇浸漉处理，再除去乙醇，可分离出百合鳞片中易溶于乙醇中的脂类和酮类等成分，进而使后续提取的多糖纯度更高；再将乙醇处理后所得的物质与蒸馏水混合，放于超声波环境下进行水浴加热提取，通过特定范围频率的超声波振动和强烈的空化作用，迫使百合鳞茎的细胞破裂，细胞内的活性酶、无机盐、多糖，可将百合鳞茎中的水溶性成分加速提取到水中，从而缩短了提取时间，并且有利于保护营养成分的活性；然后将超声提取所得的物质采用自制的活性液进行酶解处理，其中酶解处理是于超高压均质机中进行的，两者相结合的方式可使酶解过程于湍流、空穴、剪切等复合力的作用下进行，可使所得产品更为均质、乳化，进而提高多糖的提取效率；可以较为完全的保持其营养成分，还能提高百合多糖的提取率；最后再将酶解后的物质中加入中性蛋白酶对其进行纯化处理，可有效分解多糖中混合的杂质蛋白成分，进而提高提取百合多糖的纯化率。本发明所采用的每一技术手段都是相互配合、相互促进的，且步步为营、环环相扣的，所产生的总的技术效果远远高于单个技术手段所产生的技术手段的简单加和。
2.本发明所制备的活性液的工艺能够高效制备木聚糖酶和纤维素酶，进而为本发明的酶解过程提供充足的活性酶，本发明以黑根霉作为菌种，采用自制方法得到营养液进行培养，其中，所述营养液是由尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照特定的比例制作而成，在营养液的作用下能够满足黑根霉诱变时对渗透压的要求，为促进黑根霉诱变提供能量，各无机离子为产生的酶活性提供了促进作用，本发明中所采用的技术手段相互配合、相互促进，从不同方面和角度促进活性液的制备，大幅提升提高制备效率。
总之，本发明提供的百合多糖的提取方法，可以较为完全的保持其营养成分，还能提高百合多糖的提取率和纯化率，具有丰富的营养价值和良好的保健效果。
【具体实施方式】
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5mm的节段后，再向其中加入鳞片2倍体积的乙醇溶液，浸泡1h后，过滤取出5％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；其中，所述乙醇的体积浓度为60％；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其1.2倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取30min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为56℃；所述超声波的频率为50KHz；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至26℃后放入超高压均质机中，按照12g/100g的用量加入活性液，于压力为200MPa的条件下处理5min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在24℃下培养8h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为26℃、振荡速度为150r/min的条件下振荡20min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.02:0.03:2:5:1000的质量比混合制成；
(5)纯化处理：将步骤(4)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为46℃条件下处理15min，然后用瞬间高压处理10s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为12000r/min的条件下离心6min，即得到上清液；其中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.03wt％；
(6)成品：将步骤(5)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
实施例2
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成6mm的节段后，再向其中加入鳞片3倍体积的乙醇溶液，浸泡1.5h后，过滤取出8％体积的滤液为初漉液，继续浸渍23h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；其中，所述乙醇的体积浓度为65％；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其2倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取40min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为62℃；所述超声波的频率为60KHz；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至29℃后放入超高压均质机中，按照15g/100g的用量加入活性液，于压力为220MPa的条件下处理10min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28℃下培养10h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为28℃、振荡速度为180r/min的条件下振荡25min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.03:0.05:3:8:1000的质量比混合制成；
(5)纯化处理：将步骤(4)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为48℃条件下处理20min，然后用瞬间高压处理20s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为15000r/min的条件下离心8min，即得到上清液；其中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.04wt％；
(6)成品：将步骤(5)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
实施例3
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片2.5倍体积的乙醇溶液，浸泡1.2h后，过滤取出7％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22.5h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；其中，所述乙醇的体积浓度为64％；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其1.8倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取35min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为58℃；所述超声波的频率为56KHz；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至28℃后放入超高压均质机中，按照14g/100g的用量加入活性液，于压力为210MPa的条件下处理8min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在26℃下培养9h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为160r/min的条件下振荡22min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.025:0.04:2.5:7:1000的质量比混合制成；
(5)纯化处理：将步骤(4)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为47℃条件下处理18min，然后用瞬间高压处理15s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为14000r/min的条件下离心7min，即得到上清液；其中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.035wt％；
(6)成品：将步骤(5)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
对比例1
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)超声波处理：将步骤(1)所述百合鳞片放入其1.8倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取35min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为58℃；所述超声波的频率为56KHz；
(3)酶解处理：将步骤(2)所述混合物b冷却至28℃后放入超高压均质机中，按照14g/100g的用量加入活性液，于压力为210MPa的条件下处理8min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在26℃下培养9h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为160r/min的条件下振荡22min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.025:0.04:2.5:7:1000的质量比混合制成；
(4)纯化处理：将步骤(3)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为47℃条件下处理18min，然后用瞬间高压处理15s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为14000r/min的条件下离心7min，即得到上清液；其中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.035wt％；
(5)成品：将步骤(4)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
对比例2
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片2.5倍体积的乙醇溶液，浸泡1.2h后，过滤取出7％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22.5h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；其中，所述乙醇的体积浓度为64％；
(3)酶解处理：将步骤(2)所述的物质a冷却至28℃后，放入超高压均质机中，按照14g/100g的用量加入活性液，于压力为210MPa的条件下处理8min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在26℃下培养9h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为160r/min的条件下振荡22min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.025:0.04:2.5:7:1000的质量比混合制成；
(4)纯化处理：将步骤(3)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为47℃条件下处理18min，然后用瞬间高压处理15s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为14000r/min的条件下离心7min，即得到上清液；其中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.035wt％；
(5)成品：将步骤(4)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
对比例3
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片2.5倍体积的乙醇溶液，浸泡1.2h后，过滤取出7％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22.5h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；其中，所述乙醇的体积浓度为64％；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其1.8倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取35min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为58℃；所述超声波的频率为56KHz；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至28℃后放入超高压均质机中，按照14g/100g的用量加入活性液，于压力为210MPa的条件下处理8min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在26℃下培养9h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为160r/min的条件下振荡22min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、葡萄糖、水按照6:7:1000的质量比混合制成；
(5)纯化处理：将步骤(4)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为47℃条件下处理18min，然后用瞬间高压处理15s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为14000r/min的条件下离心7min，即得到上清液；其中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.035wt％；
(6)成品：将步骤(5)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
对比例4
一种百合多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片2.5倍体积的乙醇溶液，浸泡1.2h后，过滤取出7％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22.5h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；其中，所述乙醇的体积浓度为64％；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其1.8倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取35min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为58℃；所述超声波的频率为56KHz；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至28℃后放入超高压均质机中，按照14g/100g的用量加入活性液，于压力为210MPa的条件下处理8min，得到混合物c；其中，
所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在26℃下培养9h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为160r/min的条件下振荡22min，得到活性液；
所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.025:0.04:2.5:7:1000的质量比混合制成；
(5)成品：将步骤(4)所述混合物c通过离心机于转速为14000r/min的条件下离心7min，即得到上清液，将所述上清液进行真空干燥即得所述百合多糖。
实验例
实验分为7组，每组各分别按照实施例1-3和对比例1-4的提取方法提取麝香百合中的多糖，记录所得百合多糖的提取率，具体结果见表1。
表1百合多糖的提取率
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | |
| 提取率(％) | 7.919 | 7.967 | 7.951 | 7.712 | 7.653 | 7.434 | 7.518 |
| 纯度(％) | 70.23 | 69.57 | 69.84 | 58.32 | 62.35 | 63.15 | 40.53 |
表1的结果表明：实施例1-3的麝香百合多糖提取率较高，说明采用本发明的提取方法可提高多糖提取率。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.一种百合多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的麝香百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)预处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5-6mm的节段后，再向其中加入鳞片2-3倍体积的乙醇溶液，浸泡1-1.5h后，过滤取出5-8％体积的滤液为初漉液，继续浸渍22-23h后，过滤出全部滤液为续漉液，将初漉液和续漉液合并后回收除去乙醇，所得的固液混合物作为物质a；
(3)超声波处理：将步骤(2)所述物质a放入其1.2-2倍质量的蒸馏水中得到混合液，将混合液放于超声波环境中进行水浴加热提取30-40min后得到混合物b，其中，所述水浴的温度为56-62℃；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述混合物b冷却至26-29℃后放入超高压均质机中，按照12-15g/100g的用量加入活性液，于压力为200-220MPa的条件下处理5-10min，得到混合物c；
(5)纯化处理：将步骤(4)所述混合物c中加入中性蛋白酶于温度为46-48℃条件下处理15-20min，然后用瞬间高压处理10-20s，得到固液混合物；将所述固液混合物通过离心机于转速为12000-15000r/min的条件下离心6-8min，即得到上清液；
(6)成品：将步骤(5)所述上清液采用中空纤维超滤膜进行过滤，将所得滤液进行真空干燥即得所述百合多糖。
2.根据权利要求1所述一种百合多糖的提取方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述中性蛋白酶的使用量为所述混合物c的0.03-0.04wt％。
3.根据权利要求1所述的一种百合多糖的提取方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述的活性液由下述方法制备：将黑根霉菌株转接至查式斜面培养基中，在24-28℃下培养8-10h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为26-28℃、振荡速度为150-180r/min的条件下振荡20-25min，得到活性液。
4.根据权利要求3所述的一种百合多糖的提取方法，其特征在于，所述的营养液包括以下原料：尿素、硫酸镁、氯化钴、磷酸二氢钾、葡萄糖、水按照6:0.02-0.03:0.03-0.05:2-3:5-8:1000的质量比混合制成。
5.根据权利要求1所述一种百合多糖的提取方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述超声波的频率为50-60KHz。
6.根据权利要求1所述一种百合多糖的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述乙醇的体积浓度为60-65％。
Priority Applications (1)
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Cited By (4)
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2017
- 2017-07-14 CN CN201710573115.3A patent/CN107383227A/zh active Pending
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