CN107382938A - 一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物及其制备方法与应用，属于植物化学技术领域。该黄酮类化合物是从蒸馏法生产玫瑰精油后的废渣中分离得到，化合物命名为：5,7‑二羟基‑2'‑甲氧基‑6‑甲基‑黄酮，英文名为：5,7‑dihydroxy‑2'‑methoxy‑6‑methyl‑flavone，分子式为C17H14O5，结构式如式（I）：，式（I）。制备方法是以生产玫瑰精油后的废渣为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、MCI脱色、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得。该化合物添加到卷烟滤嘴中能够与烟草本香协调，增加烟气的甜润感，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，能明显改善卷烟的抽吸品质。
Description
技术领域
本发明属于植物化学技术领域，涉及一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物及其制备方法与应用，具体涉及一种从生产玫瑰精油后的废渣中首次提取得到的黄酮类化合物。该化合物添加到卷烟滤嘴中，能够与烟草本香协调，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，能明显改善卷烟的抽吸品质。
背景技术
大马士革玫瑰（学名Rosa Damascena，常用名Damask rose），又名突厥蔷薇，蔷薇科蔷薇属，属古典庭院玫瑰，丛生灌木植物，原产于叙利亚，14世纪开始在法国广为栽种，大马士革玫瑰是保加利亚种植的主要的玫瑰品种，开重瓣花，花瓣边缘颜色稍浅，有绸缎般的质感；纯粹、细致的花香使其冠压群芳，成为油用玫瑰中的上品，因而被广泛种植用以提取玫瑰精油。玫瑰精油是世界上最昂贵的精油，被称为“精油之后”。除广泛应用于食品和化妆品外，玫瑰精油也广泛应用于卷烟加香；添加玫瑰精油后的卷烟具有烟草加玫瑰花香的复合香型特征，吃味丰富清甜，烟味清新淡爽，能给消费者带来优雅芬芳的独特享受。
玫瑰精油一般是以在清晨采摘的玫瑰鲜花为原料，通过蒸馏或超临界萃取的方法制备，玫瑰精油的产率极低，大约五吨重的花朵只能提炼出两磅的玫瑰油。精油生成后的废渣中还富含大量具有开发利用价值的化学成分，如：槲皮甙、苦味质、鞣质、脂肪油、有机酸（没食子酸）、红色素、黄色素、β-胡萝卜素等。对生产精油后的玫瑰废渣进行综合利用，对综合利用资源，提高玫瑰花加工的附加值具有重要现实意义。
研究表明，除蛋白质、氨基酸、糖、磷、钙、钾等常规化学成分外，生产玫瑰精油后的废渣中还含有大量次生代谢产物，化合物类型包括黄酮、香豆素、单宁、呋喃、黄酮、苯丙素、萜类、生物碱等。这些化合物具有多种生物活性，在抗菌、消炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿、抗氧化、抗癌、防癌、抑制脂肪酶等方面多个方面具有显著效果。
黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，阻止氧化的能力是维生素E的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮可以改善血液循环，降低胆固醇，改善心脑血管疾病。另外，黄酮类化合物也有突出的改善味觉功效，有些黄酮类化合物的味觉表现非常特别，入口后有一种自然的甜味。橄榄所含的黄酮就是其能回甘的主要原因，而且黄酮含量越高，回甘就越明显，气味越醇厚。本发明从生产玫瑰精油废渣中分离得到了一种黄酮类化合物，该化合物添加到卷烟过滤嘴中，能显著增加烟气的甜润感，降低刺激和喉部的干燥感，具有改善卷烟的抽吸品质的功效。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物；第二目的在于提供所述黄酮类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述黄酮类化合物在卷烟滤嘴加香中的应用，用于改善卷烟抽吸品质。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一目的是这样实现的，一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物，是所述黄酮类化合物是从生产玫瑰精油后的废渣中分离得到，命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮，英文名为：5,7-dihydroxy-2'-methoxy-6-methyl-flavone，其分子式为C17H14O5，其结构式如式（I）所示：
，式（I）。
该化合物为浅黄色胶状物，命名为：化合物命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮，英文名为：5,7-dihydroxy-2'-methoxy-6-methyl-flavone。
本发明的第二目的是这样实现的，所述黄酮类化合物的制备方法，是以生产玫瑰精油后的废渣为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、MCI脱色、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体为：
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取2~5次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的2~6倍，每次提取时间为30~60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20~60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1~2倍的水，然后用有机溶剂萃取3~5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3~5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%~95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：将浸膏c上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6~10倍量；以体积比为1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，即得所述的黄酮类化合物。
进一步，优选的是，所述A步骤的溶剂为体积浓度为70~100%的丙酮水溶液、体积浓度为90~100%的乙醇水溶液或体积浓度为90~100%的甲醇水溶液。
进一步，优选的是，所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。
进一步，优选的是，所述D步骤中浸膏c在经硅胶柱层析前，先用重量是浸膏c 1.5~3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，之后上样。
进一步，优选的是，所述D步骤中，梯度洗脱时，所使用的氯仿和丙酮混合有机溶剂的体积比依次为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱。
进一步，优选的是，所述E步骤的高效液相色谱分离纯化是以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速15~25ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为362nm，每次进样50~200μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干。
本发明对废渣粉的粒度无限制。
以上述方法制备得到的黄酮类化合物的结构通过以下方法进行测定：
本发明化合物为浅黄色胶状物；HRESI-MS 显示其准分子离子峰为321.0732 [M+Na]+(计算值321.0739)，结合1H NMR和 DEPT 谱确定其分子式为C17H14O5，不饱和度为11。
红外光谱中显示了羟基(3446)、羰基(1662)和芳环(1620、1453和1412 cm-1) 的共振吸收峰。而紫外光谱在 210、260、362 nm 有最大吸收也说明了化合物中可能存在芳环结构。
化合物的1H和13C NMR谱（如表1、图1和图2）显示其含有17个碳和14个氢，包括1个1,2,3,4,5-五取代的苯环 (C-5~C-10，H-8)，1个1,2-二取代的苯环 (C-1'~C-6'，H-3'~H-6')，1个α,β-不饱和羰基(C-4)，1组双键(C-2和C-3，H-3)，1个甲基(d C 7.85 q，d H 2.48 s)，1个甲氧基(d C 56.3 q，d H 3.81 s)，以及2个酚羟基(d H 13.98 s 和12.89 s)。根据典型的2个苯环、α,β-不饱和羰基和双键信号，可推测化合物为黄酮类化合物。根据H-3和C-1'，以及H-6'和C-2的HMBC相关（如图3）可进一步确认化合物为黄酮类结构。
化合物的母体确定后，其余的取代基，甲基、甲氧基和酚羟基可视为黄酮上的取代基。化合物的HMBC谱（如图3）中可观察到甲氧基氢(d H 3.81)和C-2' (d C 156.3) 的HMBC相关，可推测甲氧基取代在C-2'位；根据甲基氢(d H 2.48)和 C-5、C-6、C-7的HMBC相关，可证实甲基取代在C-6位；根据一个酚羟基氢(d H 13.98)和C-5、C-6和C-10的HMBC相关，以及另一个酚羟基氢(d H 12.89)和C-6、C-7和C-8的HMBC相关，可证实两个酚羟基分别取代在C-5和C-7位。
至此，化合物的结构得到确定，并命名为化合物命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮。
化合物的红外、紫外和质谱数据：UV(甲醇)，λ max (log ε) 210 (4.64)、260(4.26)、362 (3.76) nm；IR (溴化钾压片)：ν max 3446、1662、1620、1453、1412、1367、1165、1047、806、768 cm-1；1H 和 13C NMR 数据 (400和100 MHz, (C5D5N)，见表-1；正离子模式ESIMS m/z 321 [M+Na]+；正离子模式HRESIMS m/z 321.0732 [M+Na]+ (计算值C17H14NaO5，321.0739)。
表1 本发明化合物的 1H NMR 和 13C NMR 数据 (C5D5N)
、
本发明的第三目的是这样实现的：
所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物作为制备卷烟滤嘴添加剂的应用。
考虑到三醋酸甘油酯为卷烟滤嘴成型最常用的增塑剂，而且本发明化合物溶于三醋酸甘油酯，在卷烟滤嘴成型过程中，本发明化合物通过三醋酸甘油酯添加到过滤嘴中。
供添加用卷烟为红塔集团的卷烟“红塔山经典”，用三醋酸甘油酯将上述黄酮化合物用配成0.5 mg/mL的溶液。按滤嘴丝束重量的5-8%均匀的喷洒到滤嘴丝束上，制成滤棒，然后将该滤棒通过常规的卷烟卷接制成卷烟，进行感官评吸，并以未添加该化合物的相同卷烟作为对照。评析结果表明：和对照相比较，本发明化合物添加到卷烟滤嘴中，增加烟气的甜润感，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，能明显改善卷烟的抽吸品质。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明化合物是以生产玫瑰精油后的废渣中分离得到，原料来源非常广泛，成本低；生产该化合物可综合利用废弃资源，岁提高玫瑰花加工的附加值具有重要现实意义。
本发明化合物结构简单，也可通过人工合成进行生产，较容易实现，为烟草工业提供新添加剂。而本发明化合物溶于三醋酸甘油酯，在卷烟滤嘴成型过程中，可通过三醋酸甘油酯添加到过滤嘴中，不增加额外的工序，在卷烟中的应用容易实现。
和对照相比较，添加本发明化合物能降低卷烟抽吸喉部刺激性，具有明显清咽利喉功效。和对照相比较，本发明化合物添加到卷烟滤嘴中能够与烟草本香协调，增加烟气的甜润感，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，改善卷烟抽吸品质的效果非常明显。
附图说明
图1本发明黄酮类化合物的核磁共振碳谱（13C NMR）；
图2为本发明黄酮类化合物的核磁共振氢谱（1H NMR）；
图3本发明黄酮类化合物的关键HMBC相关图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
本发明所述的黄酮类化合物，是从生产玫瑰精油后的废渣中分离得到，命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮，英文名为：5,7-dihydroxy-2'-methoxy-6-methyl-flavone，其分子式为C17H14O5，其结构式如式（I）所示：
，式（I）。
该化合物为浅黄色胶状物，命名为：化合物命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮，英文名为：5,7-dihydroxy-2'-methoxy-6-methyl-flavone。
本发明所述黄酮类化合物的制备方法，是以生产玫瑰精油后的废渣为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、MCI脱色、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体为：
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取2~5次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的2~6倍，每次提取时间为30~60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20~60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1~2倍的水，然后用有机溶剂萃取3~5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3~5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%~95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：将浸膏c上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6~10倍量；以体积比为1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，即得所述的黄酮类化合物。
所述A步骤的溶剂为体积浓度为70~100%的丙酮水溶液、体积浓度为90~100%的乙醇水溶液或体积浓度为90~100%的甲醇水溶液。
所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。
所述D步骤中浸膏c在经硅胶柱层析前，先用重量是浸膏c 1.5~3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，之后上样。
所述D步骤中，梯度洗脱时，所使用的氯仿和丙酮混合有机溶剂的体积比依次为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱。
所述E步骤的高效液相色谱分离纯化是以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速15~25ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为362nm，每次进样50~200μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干。
本发明化合物添加到卷烟过滤嘴中，具有明显的改善卷烟抽吸喉部舒适性效果；而且和对照相比较，能够与烟草本香协调，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，能明显改善卷烟的抽吸品质。
实施例1
生产玫瑰精油后的废渣样品来源于云南玉溪，品种为大马士革玫瑰。
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取2次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的2倍，每次提取时间为30分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1倍的水，然后用有机溶剂萃取3次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 1.5倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.8倍的80目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为160目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速15ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为365nm，每次进样50μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。
其中，A步骤的溶剂为体积浓度为70%的丙酮水溶液。所述B步骤的有机溶剂为氯仿。
实施例2
生产玫瑰精油后的废渣样品来源于云南玉溪，品种为大马士革玫瑰。
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取5次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的6倍，每次提取时间为60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量2倍的水，然后用有机溶剂萃取5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c1.2倍的100目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量10倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速25ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为365nm，每次进样200μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。
其中，A步骤的溶剂为丙酮。所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷。
实施例3
生产玫瑰精油后的废渣样品来源于云南玉溪，品种为大马士革玫瑰。
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取3次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的3倍，每次提取时间为40分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置40分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.5倍的水，然后用有机溶剂萃取4次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为93%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 2倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c1倍的90目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为180目，所用硅胶的重量为浸膏c重量8倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速20ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为365nm，每次进样100μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。
其中，A步骤的溶剂为乙醇。所述B步骤的有机溶剂为乙酸乙酯。
本实施例采用废渣粉4.4kg，得到浸膏a 120g，浸膏b 80g，浸膏c 62g，体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分18g。
实施例4
生产玫瑰精油后的废渣样品来源于新疆和田，品种为大马士革玫瑰。
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取4次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的4倍，每次提取时间为50分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置40分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.2倍的水，然后用有机溶剂萃取4次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4.5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为92%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 2.5倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.9倍的80目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为160目，所用硅胶的重量为浸膏c重量8倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速23ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为365nm，每次进样80μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。
其中，A步骤的溶剂为甲醇。所述B步骤的有机溶剂为乙醚。
本实施例采用废渣粉10kg，得到浸膏a 350g，浸膏b 210g，浸膏c 150g，体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分55g。
实施例5
生产玫瑰精油后的废渣样品来源于新疆和田，品种为大马士革玫瑰。
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取4次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的5倍，每次提取时间为35分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置55分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.6倍的水，然后用有机溶剂萃取4次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4.5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为94%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 2.4倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 1倍的100目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量7倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速18ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为365nm，每次进样120μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。
其中，A步骤的溶剂为体积浓度为95%的甲醇水溶液。所述B步骤的有机溶剂为石油醚。
实施例6
采用实施例1方法制备得到的黄酮类化合物的结构通过以下方法进行测定：
本发明化合物为浅黄色胶状物；HRESI-MS 显示其准分子离子峰为321.0732 [M+Na]+(计算值321.0739)，结合1H NMR和 DEPT 谱确定其分子式为C17H14O5，不饱和度为11。
红外光谱中显示了羟基(3446)、羰基(1662)和芳环(1620、1453和1412 cm-1) 的共振吸收峰。而紫外光谱在 210、260、362 nm 有最大吸收也说明了化合物中可能存在芳环结构。
化合物的1H和13C NMR谱（如表1、图1和图2）显示其含有17个碳和14个氢，包括1个1,2,3,4,5-五取代的苯环 (C-5~C-10，H-8)，1个1,2-二取代的苯环 (C-1'~C-6'，H-3'~H-6')，1个α,β-不饱和羰基(C-4)，1组双键(C-2和C-3，H-3)，1个甲基(d C 7.85 q，d H 2.48 s)，1个甲氧基(d C 56.3 q，d H 3.81 s)，以及2个酚羟基(d H 13.98 s 和12.89 s)。根据典型的2个苯环、α,β-不饱和羰基和双键信号，可推测化合物为黄酮类化合物。根据H-3和C-1'，以及H-6'和C-2的HMBC相关（如图3）可进一步确认化合物为黄酮类结构。
化合物的母体确定后，其余的取代基，甲基、甲氧基和酚羟基可视为黄酮上的取代基。化合物的HMBC谱（如图3）中可观察到甲氧基氢(d H 3.81)和C-2' (d C 156.3) 的HMBC相关，可推测甲氧基取代在C-2'位；根据甲基氢(d H 2.48)和 C-5、C-6、C-7的HMBC相关，可证实甲基取代在C-6位；根据一个酚羟基氢(d H 13.98)和C-5、C-6和C-10的HMBC相关，以及另一个酚羟基氢(d H 12.89)和C-6、C-7和C-8的HMBC相关，可证实两个酚羟基分别取代在C-5和C-7位。
至此，化合物的结构得到确定，并命名为化合物命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮。
实施例7
取实施例2-5制备的化合物，为浅黄色胶状物。测定方法与实施例6相同，确认实施例2-5制备的化合物为所述黄酮类化合物——5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮。
实施例8
取实施例1-5中任一制备的黄酮化合物进行卷烟滤嘴的添加效果试验，试验情况如下：
供添加用卷烟为红塔集团的卷烟“红塔山经典”，用三醋酸甘油酯将上述黄酮化合物用配成0.1 mg/mL的溶液。按滤嘴丝束重量的8%均匀的喷洒到滤嘴丝束上，制成滤棒，然后将该滤棒通过常规的卷烟卷接制成卷烟，进行感官评析，并以未添加该化合物的相同卷烟作为对照。评析结果表明：本发明化合物能够与烟草本香协调，增加烟气的甜润感，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，能明显改善卷烟的抽吸品质。
实施例9
取实施例1-5中任一制备的黄酮类化合物进行卷烟滤嘴的添加效果试验：
供添加用卷烟为红云红河集团的卷烟“紫云”，用三醋酸甘油酯将上述黄酮类化合物用配成0.5 mg/mL的溶液。按滤嘴丝束重量的5%均匀的喷洒到滤嘴丝束上，制成滤棒，然后将该滤棒通过常规的卷烟卷接制成卷烟，进行感官评析，并以未添加该化合物的相同卷烟作为对照。评析结果表明：本发明化合物能够与烟草本香协调，增加烟气的甜润感，对降低刺激和喉部的干燥感有明显作用，能明显改善卷烟的抽吸品质。
本发明化合物应用方法不限于此，还可添加至内衬纸上等。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (8)
1.一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物，其特征在于，所述黄酮类化合物命名为：5,7-二羟基-2'-甲氧基-6-甲基-黄酮，英文名为：5,7-dihydroxy-2'-methoxy-6-methyl-flavone，其分子式为C17H14O5，其结构式如式（I）所示：
，式（I）。
2.权利要求1所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，以生产玫瑰精油后的废渣为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、MCI脱色、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体为：
A、浸膏提取：将生产玫瑰精油后的废渣粉用溶剂超声提取2~5次，每次所用提取溶剂的质量为废渣粉质量的2~6倍，每次提取时间为30~60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20~60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；
B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1~2倍的水，然后用有机溶剂萃取3~5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；
C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3~5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%~95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；
D、硅胶柱层析：将浸膏c上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6~10倍量；以体积比为1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将采用体积比为6:4的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，即得所述的黄酮类化合物。
3.根据权利要求2所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述A步骤的溶剂为体积浓度为70~100%的丙酮水溶液、体积浓度为90~100%的乙醇水溶液或体积浓度为90~100%的甲醇水溶液。
4.根据权利要求2所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。
5.根据权利要求2所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述D步骤中浸膏c在经硅胶柱层析前，先用重量是浸膏c 1.5~3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，之后上样。
6.根据权利要求2所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述D步骤中，梯度洗脱时，所使用的氯仿和丙酮混合有机溶剂的体积比依次为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱。
7.根据权利要求2所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述E步骤的高效液相色谱分离纯化是以体积浓度为40%的甲醇水溶液为流动相，流速15~25ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为362nm，每次进样50~200μL，收集35.2min的色谱峰，多次累加后蒸干。
8.权利要求1所述的能改善卷烟抽吸喉部舒适性的黄酮类化合物作为制备卷烟滤嘴添加剂的应用。
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| CN102351827A (zh) * | 2011-08-16 | 2012-02-15 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟草根茎中异黄酮类化合物及其制备方法和应用 |
| CN102796066A (zh) * | 2012-08-31 | 2012-11-28 | 云南民族大学 | 一种黄酮类化合物及其制备方法与应用 |
| US20170107242A1 (en) * | 2014-03-24 | 2017-04-20 | Institut National De La Recherche Agronomique | Novel flavonoids o-a-glucosylated on the b cycle, method for the production thereof and uses |
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