CN107365776A - Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用 - Google Patents

Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107365776A
CN107365776A CN201710708833.7A CN201710708833A CN107365776A CN 107365776 A CN107365776 A CN 107365776A CN 201710708833 A CN201710708833 A CN 201710708833A CN 107365776 A CN107365776 A CN 107365776A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rice
seq
gene
emp
callus differentiation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710708833.7A
Other languages
English (en)
Inventor
张群宇
贾春阳
周峰
刘耀光
王曼
江燕翔
赵秀彩
谢敏
祝钦泷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Agricultural University
Original Assignee
South China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Agricultural University filed Critical South China Agricultural University
Priority to CN201710708833.7A priority Critical patent/CN107365776A/zh
Publication of CN107365776A publication Critical patent/CN107365776A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于植物基因工程领域，公开了一种影响水稻愈伤分化发育的EMP基因及其在水稻愈伤分化发育中的应用。所述EMP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；本发明的EMP基因与水稻愈伤分化发育相关，通过检测EMP基因的表达量，可以快速检测鉴定水稻愈伤再生能力；同时，过表达EMP基因，可提高水稻种愈伤分化能力，提高水稻遗传转化效率，进而改进以农杆菌介导的水稻转基因转化效率，对培育新的水稻品种具有重要意义。

Description

EMP基因在水稻愈伤分化发育中的应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，更具体地，涉及一种EMP基因在水稻愈伤分化发育中的应用。
背景技术
以农杆菌为介导的植物转基因技术广泛应用于植物基因功能研究和作物遗传改良。农杆菌介导法主要以植物的分生组织和生殖器官作为外源基因导入的受体，通过真空渗透法、浸蘸法及注射法等方法使农杆菌与受体材料接触，以完成可遗传细胞的转化，然后利用组织培养的方法培育出转基因植株，并通过抗生素筛选和分子检测鉴定转基因植株后代。农杆菌介导法具有效率高、成本低、可转移较长基因片段等优点。目前，所得到转基因植株中有85%都是通过农杆菌介导法而得到的。农杆菌介导的植物遗传转化中转化率仍然是一个需要解决的问题，有一些理化和生理因素影响着转化率和T-DNA进入植物细胞，主要有菌株、质粒、组培环境、培养基、外植体类型以及植物基因型等，不同的植物，有利于T-DNA转移的条件是不同的，通过优化其中的某个或某些因素，可以大大提高转化率。
植物组织培养过程中植物基因型差异对于转化效率影响较大，例如水稻籼稻和粳稻的愈伤再生能力差异较大，目前对于籼稻再生能力低导致的转化效率极低问题的改良集中在培养基试剂成分的调整，而且仅有少量成功报道，说明其再生能力的提高不能仅依赖愈伤再生培养基的改进。通过研究影响水稻粳稻高再生能力相关的基因型，不仅对研究水稻愈伤再生的机理，而且对提高水稻遗传转化效率应用具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供EMP基因在水稻愈伤分化发育中的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案给予实现的：
本发明利用反向遗传学得到的影响水稻中花11的RNA干涉突变体，并通过与野生型品种的愈伤分化能力比较分析鉴定了一个与水稻愈伤分化能力相关的基因，至今尚未有与此基因相关的文献报道。水稻中该影响水稻愈伤分化发育的基因被破坏，即可导致水稻愈伤分化再生能力下降。所述基因的序列如SEQ ID NO：1所示，其编码氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述蛋白为一个10.1kD小分子量蛋白；比对发现其为水稻EMP基因，现有中仅公开了其与水稻渗透胁迫、盐胁迫和干旱胁迫的耐受性有关，除此之外的其他功能还未见报道。
因此，本发明首先保护EMP基因及其编码蛋白在如下几个方面的应用：
SEQ ID NO：1所述的EMP基因在水稻愈伤分化发育中的应用。
SEQ ID NO：2所述蛋白在水稻愈伤分化发育中的应用。
优选地，为在提高水稻愈伤分化发育能力中的应用。
具体地，所述应用为构建过量表达SEQ ID NO：1所述基因的重组表达载体，并转化水稻植株。
SEQ ID NO：1所述的EMP基因在鉴别水稻愈伤分化发育能力中的应用。
具体地，所述应用为检测水稻品种中SEQ ID NO：1所示EMP基因的表达水平，若EMP基因表达水平高，则表示该水稻愈伤分化发育能力强，反之则表示该水稻品种愈伤分化发育能力弱。
优选地，所述EMP基因的实时定量RT-PCR引物如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示，内参基因OsActin1的扩增引物如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示，
SEQ ID NO：9：5’-CACATTCCAGCAGATGTGGA-3’
SEQ ID NO：10：5’-ACCACAGGTAGCAATAGGTA-3’
SEQ ID NO：11：5’-TCATATGGTGATGCGTGCTT-3’
SEQ ID NO：12：5’-AAGAAGCTAGCAGCTGCTG-3。
优选地，所述检测反应体系为：2×SYBR Green染料定量PCR反应液10μL，无菌水8.6µL，10µmol/L上下游引物各0.2µL，模板为1µL，总体积20μL。
优选地，反应程序为（i）94℃预变性5min；（ii）94℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，45个循环；（iii）72℃延伸5min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的EMP基因与水稻愈伤分化发育相关，通过检测EMP基因的表达量，可以快速检测鉴定水稻愈伤再生能力；同时，过表达EMP基因，可提高水稻愈伤分化能力，提高水稻遗传转化效率，进而改进以农杆菌介导的水稻转基因转化效率，对培育新的水稻品种具有具有重要意义。
附图说明
图1为中花11和RNA干涉突变体诱导愈伤组织的基因表达水平的RT-PCR结果图；其中，ZH是指野生型水稻中花11，EMPi是指雌激素诱导型RNAi干涉转基因植株；+ER指加入诱导剂雌激素ER处理。
图2为中花11和RNA干涉突变体的愈伤组织分化能力差异结果图；其中，ZH 是指野生型水稻中花11，EMPi是指雌激素诱导型RNAi干涉转基因植株；+ER指加入诱导剂雌激素ER处理。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1水稻影响愈伤分化能力相关基因EMP的RNA干涉突变体材料的获得
根据NCBI数据库Os05g0349800序列信息设计特异引物：
SEQ ID NO：3：
CTAGTCGACTCTAGCCTCGAGATGGCGTCCGGGCAGCAG
SEQ ID NO：4：ATCTGCTCCTTCCTCGTCT
SEQ ID NO：5：GGAGGCCTGGATCGACTAGTATGGCGTCCGGGCAGCAG
SEQ ID NO：6：AGACGAGGAAGGAGCAGATCTCGGCGAGGTTCTCCTG
利用引物SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4组合以及SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6组合扩增两个DNA片段后利用一步构建RNA干涉载体方法（Jiang, et al., Planta. 2013. (238)：325-330）构建pER8雌激素诱导型RNA干涉载体（Zuo J, et al., 2000. 11(2): 146-151.）。通过农杆菌介导转化方法转化中花11，获得稳定的转基因株系，该转基因株系的愈伤分化能力与中华11相比显著下降，即影响愈伤分化能力相关基因EMP的RNA干涉突变体材料。
实施例2水稻影响愈伤分化能力相关基因功能鉴定
1、水稻RNA的提取和反转录反应
（1）取水稻（中花11）组织约0.5g，放入预冷的研钵中，加入液氮，将其研磨成粉末后，放入2 mL离心管中，加入1000 μL RNA提取缓冲液和200 μL氯仿，混匀，65℃水浴5min；
（2）在12000 转/分的条件下离心12min，将上清液转移到另一个1.5mL离心管中，加入其0.6倍体积异丙醇或两倍体积无水乙醇，混匀，12000 转/分离心12min，去上清，用0.5ml70％的乙醇漂洗两次，风干，溶于20 μL DEPC水中；
（3）取1μL RNA用于PCR反转录反应，反转录cDNA第一链的合成（15 μL），反应体系为：DNase处理后的总RNA 1μL、OligodT（10 μmol/L） 1 μL、DEPC水补足15 μL；该反应体系于65℃保温5 min，冰上冷却3 min，之后利用表1所述的体系，在42 ℃条件下反应1h，65 ℃加热10 min终止反应，放入-20 ℃冰箱中备用。
表1
5×第一链反应缓冲液 5 μL
dNTPs (10 μmol/L) 1 μL
反转录酶(200 U/ μL) 1 μL
RNA酶抑制剂 1 μL
DEPC ddH2O 17μL
总体积 25 μL
2、PCR扩增和基因检测
（一）具体操作如下：
a. PCR反应体系包括无菌水16.2µL，10×buffer 2µL，10µmol/L上下游引物（引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示或者引物序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6）各0.2µL，2.5mmol/L dNTPs 0.2µL，5 U/µL Taq DNA聚合酶0.2µL，50ng/µL模板DNA 1µL，反应体系的总体积为20μl。
PCR的反应条件为：（i）94℃预变性5min，（ii）94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；（iii）72℃延伸5min。
扩增得到的中花11的PCR产物长度分别为0.18kb和0.2kb；其核苷酸序列包含在SEQ ID NO：1所示序列内。
参照NCBI网站上获得的水稻中花11的ORF序列，设计特异性PCR引物，引物序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示。
SEQ ID NO：7：5’- ATGGCGTCCGGGCAGCAG-3’
SEQ ID NO：8：5’- CTAGGACTTGGTCTTGTAC-3’
对提取的正常水稻中花11植株cDNA进行扩增，其目的片段长度为288bp，并进行测序。将测序得到的DNA序列即编码序列利用DNAStar软件翻译成氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
（二）检测影响水稻愈伤分化能力相关基因EMP的表达情况，具体操作如下：
1、引物设计：
SEQ ID NO：9：5’- CACATTCCAGCAGATGTGGA -3’
SEQ ID NO：10：5’- ACCACAGGTAGCAATAGGTA -3’
SEQ ID NO：11：5’- TCATATGGTGATGCGTGCTT -3’
SEQ ID NO：12：5’- AAGAAGCTAGCAGCTGCTG -3
SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10引物为实时定量RT-PCR内参基因OsActin1扩增引物，SEQID NO：11和SEQ ID NO：12引物为实时定量RT-PCR目标基因EMP扩增引物。
2、PCR反应体系：2×SYBR Green染料定量PCR反应液10μL，无菌水8.6µL，10µmol/L上下游引物各0.2µL，模板为1µL中花11或RNA干涉突变体总RNA的RT产物，反应体系的总体积为20μL。
在Realtime PCR仪上设定反应条件为：（i）94℃预变性5min；（ii）94℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，45个循环；（iii）72℃延伸5min。
经测序序列长度为0.2kb，其核苷酸序列包含在SEQ ID NO：1所示序列内。
其实时定量PCR结果分析如图1所示：无论是否加入诱导剂雌激素，中花11愈伤在预分化培养基上随着培养时间的增加，EMP表达水平迅速提高，与EMPi愈伤在不含诱导剂雌激素的预分化培养基上类似。而EMPi愈伤在含有诱导剂雌激素的预分化培养基上时，EMP基因表达水平没有提高，说明在雌激素诱导EMP基因的RNA干涉结构的作用下，EMP表达水平被下调。
同时，本实施例按照上述方法提取了几个不同水稻品种的总RNA，反转成cDNA，然后用上述实时定量RT-PCR的反应引物、反应体系和程序进行EMP基因表达水平的检测，于此同此，用现有方法测定这几个水稻品种愈伤分化能力；结果显示，EMP基因的表达量与水稻愈伤分化能力呈正相关，其反映出的水稻品种愈伤分化能力与现有的测试结果一致；因此，可通过检测水稻EMP基因的表达量来快速鉴定水稻品种的水稻愈伤分化能力。
实施例3影响水稻愈伤分化能力相关基因的功能验证
采用雌激素诱导表达RNA干涉产物并破坏水稻中SEQ ID NO：1的基因序列。经实时定量RT-PCR检测，其mRNA表达水平下降，雌激素处理RNAi干涉突变体预分化能力显著下降。
影响水稻愈伤分化能力相关基因的功能验证包括以下步骤：
（1）利用雌激素诱导表达载体构建影响水稻愈伤分化能力相关基因RNA干涉载体，并通过农杆菌介导转化中花11并鉴定获得纯合转基因T2代材料。
（2）将中花11和影响水稻愈伤分化能力相关基因RNA干涉转基因材料种子进行诱导愈伤，并转入正常预分化培养基和加入雌激素的预分化培养基培养。
（3）统计预分化成功率与雌激素诱导表达RNAi干涉造成的稻愈伤分化能力相关基因表达下降的相关性，结果表明该基因表达水平下调影响了水稻中花11的愈伤分化能力，如图2。
实施例4 过表达EMP基因的转基因水稻植株
通过选用常用的植物表达载体，构建EMP基因的过表达载体，然后通过农杆菌介导转化中花11并鉴定获得纯合转基因T2代材料；将获得的转基因材料和中花11在相同条件下进行诱导愈伤，结果显示，过表达EMP基因的转基因植株的愈伤组织分化能力要显著高于中花11；同时提取该转基因水稻植株和普通中花11的RNA，进行定量PCR检测，显示EMP基因在转基因水稻植株中的表达量要显著高于中花11。
SEQUENCE LISTING
<110> 华南农业大学
<120> EMP基因在水稻愈伤分化发育中的应用
<130> 2017
<160> 12
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 395
<212> DNA
<213> EMP基因
<400> 1
atggcgtccg ggcagcagca gcagggcagg tcggagctgg accgcatggc cagggagggc 60
cagaccgtcg tccccggcgg caccggcggc aagagcctcg aggcccagga gaacctcgcc 120
gagggtatgc aaaataatac tgaaactttt gatagatcaa acttgccatt tcattcggta 180
tttcggttga agtacgtaac taatatgcgt acgtgtgcat cgatcgatca gggcgcagcc 240
gcggggggca gacgaggaag gagcagatgg gggaggaagg gtaccgcgag atggggcgca 300
agggcggcct cagcaccggc gacgagtccg gcggcgagcg cgccgcccgc gagggcatcg 360
acatcgacga gtccaagtac aagaccaagt cctag 395
<210> 2
<211> 95
<212> PRT
<213> EMP蛋白
<400> 2
Met Ala Ser Gly Gln Gln Gln Gln Gly Arg Ser Glu Leu Asp Arg Met
1 5 10 15
Ala Arg Glu Gly Gln Thr Val Val Pro Gly Gly Thr Gly Gly Lys Ser
20 25 30
Leu Glu Ala Gln Glu Asn Leu Ala Glu Gly Arg Ser Arg Gly Gly Gln
35 40 45
Thr Arg Lys Glu Gln Met Gly Glu Glu Gly Tyr Arg Glu Met Gly Arg
50 55 60
Lys Gly Gly Leu Ser Thr Gly Asp Glu Ser Gly Gly Glu Arg Ala Ala
65 70 75 80
Arg Glu Gly Ile Asp Ile Asp Glu Ser Lys Tyr Lys Thr Lys Ser
85 90 95
<210> 3
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ctagtcgact ctagcctcga gatggcgtcc gggcagcag 39
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
atctgctcct tcctcgtct 19
<210> 5
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ggaggcctgg atcgactagt atggcgtccg ggcagcag 38
<210> 6
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
agacgaggaa ggagcagatc tcggcgaggt tctcctg 37
<210> 7
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
atggcgtccg ggcagcag 18
<210> 8
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ctaggacttg gtcttgtac 19
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cacattccag cagatgtgga 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
accacaggta gcaataggta 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
tcatatggtg atgcgtgctt 20
<210> 12
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
aagaagctag cagctgctg 19

Claims (9)

1.SEQ ID NO：1所述的EMP基因在水稻愈伤分化发育中的应用。
2.SEQ ID NO：2所述蛋白在水稻愈伤分化发育中的应用。
3.SEQ ID NO：1所述的EMP基因在鉴别水稻愈伤分化发育能力中的应用。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，为在提高水稻愈伤分化发育能力中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用为构建过量表达SEQ ID NO：1所述基因的重组表达载体，并转化水稻植株。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用为检测水稻品种中SEQ ID NO：1所示EMP基因的表达水平，若EMP基因表达水平高，则表示该水稻愈伤分化发育能力强，反之则表示该水稻品种愈伤分化发育能力弱。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述EMP基因的实时定量RT-PCR引物如SEQID NO：11和SEQ ID NO：12所示，内参基因OsActin1的扩增引物如SEQ ID NO：9和SEQ IDNO：10所示。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测反应体系为：2×SYBR Green染料定量PCR反应液10μL，无菌水8.6µL，10µmol/L上下游引物各0.2µL，模板1µL，总体积20μL。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，反应程序为94℃预变性5min；94℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，45个；72℃延伸5min。
CN201710708833.7A 2017-08-17 2017-08-17 Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用 Pending CN107365776A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710708833.7A CN107365776A (zh) 2017-08-17 2017-08-17 Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710708833.7A CN107365776A (zh) 2017-08-17 2017-08-17 Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107365776A true CN107365776A (zh) 2017-11-21

Family

ID=60309194

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710708833.7A Pending CN107365776A (zh) 2017-08-17 2017-08-17 Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107365776A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114736912A (zh) * 2022-03-24 2022-07-12 华南农业大学 优化的玉米rZmG2基因及其在提高植物遗传转化效率中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005185101A (ja) * 2002-05-30 2005-07-14 National Institute Of Agrobiological Sciences 植物の全長ｃＤＮＡおよびその利用
US20070039076A1 (en) * 1999-07-20 2007-02-15 Boukharov Andrey A Plant genome sequence and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070039076A1 (en) * 1999-07-20 2007-02-15 Boukharov Andrey A Plant genome sequence and uses thereof
JP2005185101A (ja) * 2002-05-30 2005-07-14 National Institute Of Agrobiological Sciences 植物の全長ｃＤＮＡおよびその利用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
登录号：BAS93528.1: "Oryza sativa Japonica Group DNA, chromosome 5, cultivar: Nipponbare, complete sequence", 《GENBANK》 *
登录号：BAS93528.1: "Os05g0349800 [Oryza sativa Japonica Group]", 《GENBANK》 *
贾春阳: "水稻胚性愈伤组织分化相关基因的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114736912A (zh) * 2022-03-24 2022-07-12 华南农业大学 优化的玉米rZmG2基因及其在提高植物遗传转化效率中的应用
CN114736912B (zh) * 2022-03-24 2023-05-26 华南农业大学 优化的玉米rZmG2基因及其在提高植物遗传转化效率中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109161550B (zh) 一种调控番茄果实抗坏血酸含量的SlbHLH59基因及应用方法
CN108588092B (zh) 一种梨花色素苷合成转录因子PbMYB109及其应用
CN106754948B (zh) 褐飞虱NlMLP基因、编码蛋白及其应用
CN107759676B (zh) 一种植物直链淀粉合成相关蛋白Du15与其编码基因及应用
CN110872598B (zh) 一种棉花抗旱相关基因GhDT1及其应用
CN111978387A (zh) 水稻稻瘟病抗性基因Pikg、编码蛋白及其应用
CN103695438A (zh) 拟南芥MYB家族转录因子AtMYB17基因、编码序列及其应用
CN102766618A (zh) 水稻OsICL蛋白及其编码基因和应用
CN110804090B (zh) 蛋白质CkWRKY33及其编码基因与应用
CN113186198B (zh) 一种抗褐飞虱基因Bph41及其编码蛋白质和应用
CN109134633A (zh) 抗稻瘟病蛋白和基因、分离的核酸及其应用
CN107574171A (zh) 一种玉米抗盐主效qtl及其相关基因、分子标记和应用
CN107365776A (zh) Emp基因在水稻愈伤分化发育中的应用
CN111334492A (zh) 西瓜几丁质酶及其编码基因和应用
CN115976052A (zh) 小麦茎基腐病抗性基因TaHSP18．6、其表达产物、重组载体及应用
CN112795580B (zh) 火龙果基因HuAAE3及其在调控植物抗高温胁迫中的应用
CN115247184B (zh) 一种籽粒粒型及产量控制基因及其应用
CN108409844A (zh) 蛋白质TaNRT2.5在调控植物产量中的应用
CN104109192A (zh) 一种小麦抗旱基因及其应用
CN108864265A (zh) 蛋白质TabZIP60在调控植物根系发育中的应用
CN101883572A (zh) 高粱铝耐受基因SbMATE
CN109234290B (zh) 甘蓝型油菜BnKAT2基因及其启动子和应用
CN108913699B (zh) 蛋白质TaNAC2在调控植物种子萌发中的应用
CN102994528B (zh) 一个簇毛麦类钙调素互作蛋白激酶基因及其表达载体和应用
CN107365774A (zh) Emp基因在水稻种子萌发发育中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20171121

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication