CN107361024A - 一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法，属于生物医学领域，以根据所建立的食管鳞癌早期转移模型有效的研究临床上食管鳞癌转移的规律和特点。该建立方法包括对食管鳞癌细胞进行筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。本发明提供的食管鳞癌早期转移模型的建立方法用于研究临床上食管鳞癌转移的规律和特点。
Description
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法。
背景技术
食管鳞癌转移模型是一种制备方法简单、成瘤快、成瘤率高、成本低的食管癌动物模型，其广泛应用于研究食管鳞癌侵袭及转移机制等各个方面。
现有技术中，在制备食管鳞癌转移模型时，采用尾静脉或腹腔注射食管鳞癌细胞的方法，将食管鳞癌细胞接种到小鼠体内，食管鳞癌细胞在小鼠中大多产生肺、肝及腹膜转移，且极少发现淋巴结转移，而临床转移多为淋巴结远处转移，因此，这种实验转移与食管鳞癌细胞的临床转移(多为淋巴结远处转移)相差甚远，无法有效的研究临床上食管鳞癌转移的规律和特点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法，以根据所建立的食管鳞癌早期转移模型有效的研究临床上食管鳞癌转移的规律和特点。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法，包括：
S100：对食管鳞癌细胞进行筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；
S300：将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。
与现有技术相比，本发明提供的食管鳞癌早期转移模型的建立方法中，通过对食管鳞癌细胞进行筛选，使得筛选出的食管鳞癌亚系细胞具有良好侵袭能力，以使得食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下后，能够降低食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的异质性。而且，由于小鼠的肾包膜下具有丰富的血液，使得食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下后，能够利用此处丰富的血液加快食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的培养，而通过此处的众多血管，使得食管鳞癌亚系细胞能够通过血管，随着血液进行扩散转移，从而增加了食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的扩散性。
而经实验证明，将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下后，食管鳞癌亚系细胞能够在早期转移过程中迅速发生肾浸润与远处肺转移，因此，本发明提供的食管鳞癌早期转移模型的建立方法所建立的食管鳞癌早期转移模型能够反映临床食管鳞癌的早期转移情况，这给研究人员根据所建立的食管鳞癌早期转移模型研究临床上食管鳞癌早期转移的规律和特点提供了有利的条件。
另外，本发明提供的食管鳞癌早期转移模型的建立方法，只需挑开小鼠的肾包膜，就能够将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠体内，以方便的构建食管鳞癌早期转移模型。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1a为本发明所使用的食管鳞癌细胞的细胞形态图；
图1b为本发明筛选得到的食管鳞癌亚系细胞的细胞形态图；
图2为本发明所使用的食管鳞癌细胞以及食管鳞癌亚系细胞的细胞增殖能力比较曲线；
图3为本发明所使用的食管鳞癌细胞以及食管鳞癌亚系细胞在72h内的细胞迁移比较图；
图4为本发明所使用的食管鳞癌细胞以及食管鳞癌亚系细胞在72h内的迁移距离统计分析图；
图5为本发明所使用的食管鳞癌细胞和食管鳞癌亚系细胞分别在小鼠体内的生长成像比较图；
图6为本发明所使用的食管鳞癌细胞和食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的早期转移病理切片比较图。
具体实施方式
本发明提供了一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法，包括：
S100:对食管鳞癌细胞进行筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；食管鳞癌细胞购自中国医学科学院肿瘤细胞库。
S300：将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。小鼠的种类比较多，一般可选择NOG小鼠，NOD-SCID小鼠，SCID Beige小鼠或BALB/c Nude小鼠。
通过上述食管鳞癌早期转移模型的建立方法可知，通过对食管鳞癌细胞进行筛选，使得筛选出的食管鳞癌亚系细胞具有良好侵袭能力，以使得食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下后，能够降低食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的异质性。而且，由于小鼠的肾包膜下具有丰富的血液，使得食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下后，能够利用此处丰富的血液加快食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的培养，而通过此处的众多血管，使得食管鳞癌亚系细胞能够通过血管，随着血液进行扩散转移，从而增加了食管鳞癌亚系细胞在小鼠体内的扩散性。
而经实验证明，将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下后，食管鳞癌亚系细胞能够在早期转移过程中迅速发生了肾浸润与远处肺转移，因此，本发明提供的食管鳞癌早期转移模型的建立方法所建立的食管鳞癌早期转移模型能够反映临床食管鳞癌的早期转移情况，这给研究人员根据所建立的食管鳞癌早期转移模型研究临床上食管鳞癌早期转移的规律和特点提供了有利的条件。
另外，本发明提供的食管鳞癌早期转移模型的建立方法，肾包膜与肾实质之间组织疏松，容易分离，因此，只需挑开小鼠的肾包膜，就能够将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠体内，以方便的构建食管鳞癌早期转移模型。
需要说明的是，上述对食管鳞癌进行筛选的次数至少为三次，每次筛选中所使用的食管鳞癌细胞为上一次筛选出的食管鳞癌亚系细胞，以保证所筛选出的食管鳞癌亚系细胞的性能稳定。
示例性的：对食管鳞癌进行筛选，得到食管鳞癌亚系细胞包括：
S101：采用transwell侵袭实验对食管鳞癌细胞进行趋化性处理，收集transwell小室中下室内的食管鳞癌细胞；transwell小室中上室和下室之间的通透膜为聚碳酸酯膜；聚碳酸酯膜朝向上室的一侧铺设有基质胶。
S102：将收集的食管鳞癌细胞细胞进行培养和筛选，得到食管鳞癌亚系细胞。
其中，transwell小室中上室内的培养液为北京索莱宝科技有限公司的1640培养基，下室为含胎牛血清的培养液，至于含胎牛血清的培养液中胎牛血清的质量分数，则根据具体情况设定。例如：含胎牛血清的培养液中胎牛血清的质量分数为15％-30％。transwell小室中上室和下室之间的通透膜为聚碳酸酯膜；聚碳酸酯膜朝向上室的一侧铺设有基质胶。
进一步，为了保证食管鳞癌亚系细胞具有足够的侵袭性，在S100和S300之间还包括S200：对食管鳞癌亚系细胞进行多次传代培养，将多次传代培养得到的食管鳞癌亚系细胞与未进行筛选得食管鳞癌细胞进行生物学特性比较；
在多次筛选后得到的食管鳞癌亚系细胞的侵袭性大于未进行筛选得食管鳞癌细胞的侵袭性，执行S300，否则，返回S100。
对未筛选的食管鳞癌细胞与筛选后的食管鳞癌亚系细胞从细胞形态、细胞增殖能力以及侵袭能力方面进行分析。为了便于说明，以EC9706-I0细胞代表未筛选的食管鳞癌细胞，EC9706-I3细胞代表经过三次Transwell侵袭实验筛选出的食管鳞癌亚系细胞。
一、细胞形态比较
图1a为本发明实施例所使用的食管鳞癌细胞(未筛选前)的细胞形态图；图1b为本发明筛选得到的食管鳞癌亚系细胞的细胞形态图；通过对比图1a和图1b可以发现，EC9706-I3细胞与未进行筛选的EC9706-I0细胞相比，其细胞形态变长、有伪足、细胞之间比较疏散。
二、增殖能力比较
采用CCK-8实验检测EC9706-I3细胞与EC9706-I0细胞的增殖能力，其实验结果如图2所示；从图2可以发现，EC9706-I3细胞在24h、48h、72h的增殖能力均强于EC9706-I0细胞(P<0.001)。
三、迁移能力比较
采用划痕愈合实验检测EC9706-I3细胞与EC9706-I0细胞的迁移能力，其实验结果如图3和图4所示，通过图3和图4可以发现，EC9706-I3细胞的迁移能力强于EC9706-I0细胞的迁移能力(P<0.05)。
四、细胞周期比较
采用流式细胞术检测EC9706-I0细胞与EC9706-I3细胞的周期变化，实验结果如表1所示。
表1 EC9070-I0细胞和EC9070-I3细胞周期比较
从表1可以发现，EC9706-I3细胞的S期(即DNA合成期)相对于EC9706-I0细胞有所延长,且增殖指数较大(P<0.001)。
示例性的，上述S300中，将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠肾包膜下包括：
S301：对食管鳞癌亚系细胞进行荧光标记，使得建立食管鳞癌早期转移模型后，能够很容易观察到食管鳞癌亚系细胞；
S302：将食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶；
S303：将食管鳞癌亚系细胞凝胶接种到小鼠肾包膜下，得到食管鳞癌早期转移模型；其中，
按照小鼠周龄6周到7周，体重19g到21g，每个小鼠的接种量控制在食管鳞癌亚系细胞凝胶中含有0.9×106个-1.3×106个食管鳞癌亚系细胞。
示例性的，将食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，然后滴到培养板上，于36℃-38℃下培养，直到食管鳞癌亚系细胞凝胶化，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶，一般培养30min，即可实现食管鳞癌亚系细胞凝胶化。
下面结合附图对本发明实施例进行详细说明，此说明仅用于描述具体方案，并不构成对该方案的限定。
实施例一
S101：采用transwell侵袭实验对食管鳞癌细胞进行趋化性处理，收集transwell小室中下室内的食管鳞癌细胞；transwell小室中上室和下室之间的通透膜为聚碳酸酯膜；聚碳酸酯膜朝向上室的一侧铺设有基质胶；transwell小室中上室内的培养液为北京索莱宝科技有限公司的1640培养基，下室内的培养液为含胎牛血清的培养液，含胎牛血清的培养液中胎牛血清的质量分数为20％；
S102：将收集的食管鳞癌细胞细胞进行培养和筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；
S103：重复S101-S102三次，得到食管鳞癌亚系细胞；
S200：对食管鳞癌亚系细胞进行十次传代培养，将十次传代培养得到的食管鳞癌亚系细胞与未进行筛选得食管鳞癌细胞进行生物学特性比较；发现得到的食管鳞癌亚系细胞的侵袭性大于未进行筛选的食管鳞癌细胞的侵袭性，执行S301；
S301：对食管鳞癌亚系细胞进行荧光标记，使得建立食管鳞癌早期转移模型后，能够很容易观察到食管鳞癌亚系细胞；
S302：将食管鳞癌细胞与鼠尾胶原混合，然后滴到培养板上，于37℃下培养30min，食管鳞癌亚系细胞凝胶化，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶。
S303：将食管鳞癌亚系细胞凝胶接种到小鼠肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。其中；按照小鼠周龄7周，体重20g，每个小鼠的接种量控制在食管鳞癌亚系细胞凝胶中含有1.0×106个食管鳞癌亚系细胞。
为了研究临床上食管鳞癌转移的规律和特点，将EC9076-I0细胞按照EC9706-I3细胞的接种量接种到小鼠的肾包膜下，使得EC9076-I0细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌转移模型。
在EC9706-I3细胞在小鼠的肾包膜下生长过程中，对小鼠进行活体成像，EC9076-I0细胞在小鼠的肾包膜下生长过程中，对小鼠进行活体成像，其结果如图5所示，从图5可看出EC9706-I3细胞的荧光面积大于EC9076-I0细胞的荧光面积，说明筛选过的EC9706-I3细胞更易生长。
在接种EC9706-I3细胞12周后，将小鼠处死，内脏器官进行HE染色，得到EC9706-I3细胞病理切片，在接种EC9706-I0细胞12周后，将小鼠处死，内脏器官进行HE染色，得到EC9706-I0细胞病理切片。其中，EC9706-I3细胞在小鼠体内早期转移后的病理切片和EC9706-I0细胞在小鼠体内早期转移后的病理切片如图6所示。
对图6所示的EC9706-I3细胞在小鼠体内早期转移后的病理切片和EC9706-I0细胞在小鼠体内早期转移后的病理切片进行病理学评价：
图6中，a、b为EC9706-I0的早期肾转移照片，d、e为EC9706-I3的早期肾转移照片，从a、b、d、e可以发现EC9706-I3细胞与EC9706-I0细胞均在小鼠肾部发生了早期肾转移。
图6中，c图为EC9706-I3在低倍镜下的早期远处肺转移照片，f为EC9706-I3在高倍镜下的早期远处肺转移照片，从c和f可以发现，EC9706-I3发生了早期远处肺转移，而此时的EC9706-I0细胞未发现早期远处肺转移。
实施列二
S101：采用transwell侵袭实验对食管鳞癌细胞进行趋化性处理，收集transwell小室中下室内的食管鳞癌细胞；transwell小室中上室和下室之间的通透膜为聚碳酸酯膜；聚碳酸酯膜朝向上室的一侧铺设有基质胶；transwell小室中上室内的培养液为北京索莱宝科技有限公司的1640培养基，下室内的培养液为含胎牛血清的培养液，含胎牛血清的培养液中胎牛血清的质量分数为15％；
S102：将收集的食管鳞癌细胞细胞进行培养和筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；
S103：重复S101-S103二次，得到食管鳞癌亚系细胞；
S200：对食管鳞癌亚系细胞进行十次传代培养，将十次传代培养得到的食管鳞癌亚系细胞与未进行筛选得食管鳞癌细胞进行生物学特性比较；发现得到的食管鳞癌亚系细胞的侵袭性大于未进行筛选得食管鳞癌细胞的侵袭性，执行S301；
S301：对食管鳞癌亚系细胞进行荧光标记，使得建立食管鳞癌早期转移模型后，能够很容易观察到食管鳞癌亚系细胞；
S302：将食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，然后滴到培养板上，于36℃下培养30min，食管鳞癌亚系细胞凝胶化，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶。
S303：将食管鳞癌亚系细胞凝胶接种到小鼠肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。其中；按照小鼠周龄6周，体重19g，每个小鼠的接种量控制在食管鳞癌亚系细胞凝胶中含有0.9×106个食管鳞癌亚系细胞。
实施例三
S101：采用transwell侵袭实验对食管鳞癌细胞进行趋化性处理，收集transwell小室中下室内的食管鳞癌细胞；transwell小室中上室和下室之间的通透膜为聚碳酸酯膜；聚碳酸酯膜朝向上室的一侧铺设有基质胶；transwell小室中上室内的培养液为北京索莱宝科技有限公司的1640培养基，下室内的培养液为含胎牛血清的培养液，含胎牛血清的培养液中胎牛血清的质量分数为30％；
S102：将收集的食管鳞癌细胞细胞进行培养和筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；
S103：重复S101-S103三次，得到食管鳞癌亚系细胞；
S200：对食管鳞癌亚系细胞进行十次传代培养，将十次传代培养得到的食管鳞癌亚系细胞与未进行筛选得食管鳞癌细胞进行生物学特性比较；发现得到的食管鳞癌亚系细胞的侵袭性大于未进行筛选得食管鳞癌细胞的侵袭性，执行S301；
S301：对食管鳞癌亚系细胞进行荧光标记，使得建立食管鳞癌早期转移模型后，能够很容易观察到食管鳞癌亚系细胞.
S302：将食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，然后滴到培养板上，于38℃下培养28min，食管鳞癌亚系细胞凝胶化，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶。
S303：将食管鳞癌亚系细胞凝胶接种到小鼠肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。其中；按照小鼠周龄7周，体重21g，每个小鼠的接种量控制在食管鳞癌亚系细胞凝胶中含有1.3×106个食管鳞癌亚系细胞。
Claims (9)
1.一种食管鳞癌早期转移模型的建立方法，其特征在于，包括：
S100：对食管鳞癌细胞进行筛选，得到食管鳞癌亚系细胞；
S300：将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠的肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。
2.根据权利要求1所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述S100中，对食管鳞癌进行筛选，得到食管鳞癌亚系细胞包括：
S101：采用transwell侵袭实验对食管鳞癌细胞进行趋化性处理，收集transwell小室中下室内的食管鳞癌细胞；
S102：将收集的食管鳞癌细胞进行培养和筛选，得到食管鳞癌亚系细胞。
3.根据权利要求2所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述transwell小室中上室和下室之间的通透膜为聚碳酸酯膜；所述聚碳酸酯膜朝向上室的一侧铺设有基质胶。
4.根据权利要求3所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述上室内的培养液为1640培养基，所述下室内的培养液为含胎牛血清的培养液。
5.根据权利要求2所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述S100与S300之间还包括：
S200：对所述食管鳞癌亚系细胞进行多次传代培养，将多次传代培养得到的食管鳞癌亚系细胞与未进行筛选的食管鳞癌细胞进行生物学特性比较；
在多次传代培养得到的食管鳞癌亚系细胞的侵袭性大于未进行筛选的食管鳞癌细胞的侵袭性，执行S300；
否则，返回S100。
6.根据权利要求1所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述对食管鳞癌细胞进行筛选的次数至少为三次；每次筛选中所使用的食管鳞癌细胞为上一次筛选出的食管鳞癌亚系细胞。
7.根据权利要求2-6任一项所述食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述S300中，将食管鳞癌亚系细胞接种到小鼠肾包膜下包括：
S301：对食管鳞癌亚系细胞进行荧光标记；
S302：将所述食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶；
S303：将食管鳞癌亚系细胞凝胶接种到小鼠肾包膜下，使得食管鳞癌亚系细胞在小鼠的肾包膜下生长，得到食管鳞癌早期转移模型。
8.根据权利要求7所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，将所述食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶包括：
将食管鳞癌亚系细胞与鼠尾胶原混合，然后滴到培养板上，于36℃-38℃下培养，直到食管鳞癌亚系细胞凝胶化，得到食管鳞癌亚系细胞凝胶。
9.根据权利要求1所述的食管鳞癌早期转移模型的建立方法,其特征在于，所述小鼠为NOG小鼠、NOD-SCID小鼠、SCIDBeige小鼠或BALB/cNude小鼠。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115024280A (zh) * | 2022-06-08 | 2022-09-09 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 食管癌原位种植成瘤模型建立方法及模型 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1264429A (zh) * | 1997-04-28 | 2000-08-23 | 抗癌股份有限公司 | 以绿荧光蛋白(gfp)为标记的肿瘤转移模型 |
| CN1580075A (zh) * | 2004-05-17 | 2005-02-16 | 中国人民解放军第四军医大学 | 11段人消化道肿瘤血管特异性结合环肽gx系列 |
| CN1982441A (zh) * | 2006-02-16 | 2007-06-20 | 上海市胸科医院 | 一种人肺腺癌自发转移细胞株及其建立方法 |
| CN102067828A (zh) * | 2009-11-24 | 2011-05-25 | 上海市肿瘤研究所 | 人黑色素瘤高转移模型、细胞亚系以及建立方法和转移的动态检测 |
| CN102181397A (zh) * | 2011-02-17 | 2011-09-14 | 四川大学华西医院 | 一种喉鳞癌软骨侵袭模型 |
| CN102766600A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-11-07 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种食管鳞癌原代瘤株ch-h-2的应用 |
| CN105980541A (zh) * | 2014-01-22 | 2016-09-28 | 泽帕蒂卡股份有限公司 | 用于分离进行治疗评价和预测转移能力的侵袭性和转移性细胞的方法及装置 |
| CN106011072A (zh) * | 2016-06-03 | 2016-10-12 | 南通大学 | 人膀胱移行细胞癌细胞系及膀胱癌组织重组功能性重建模型的建立方法 |
-
2017
- 2017-07-18 CN CN201710587508.XA patent/CN107361024A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1264429A (zh) * | 1997-04-28 | 2000-08-23 | 抗癌股份有限公司 | 以绿荧光蛋白(gfp)为标记的肿瘤转移模型 |
| CN1580075A (zh) * | 2004-05-17 | 2005-02-16 | 中国人民解放军第四军医大学 | 11段人消化道肿瘤血管特异性结合环肽gx系列 |
| CN1982441A (zh) * | 2006-02-16 | 2007-06-20 | 上海市胸科医院 | 一种人肺腺癌自发转移细胞株及其建立方法 |
| CN102067828A (zh) * | 2009-11-24 | 2011-05-25 | 上海市肿瘤研究所 | 人黑色素瘤高转移模型、细胞亚系以及建立方法和转移的动态检测 |
| CN102181397A (zh) * | 2011-02-17 | 2011-09-14 | 四川大学华西医院 | 一种喉鳞癌软骨侵袭模型 |
| CN102766600A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-11-07 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种食管鳞癌原代瘤株ch-h-2的应用 |
| CN105980541A (zh) * | 2014-01-22 | 2016-09-28 | 泽帕蒂卡股份有限公司 | 用于分离进行治疗评价和预测转移能力的侵袭性和转移性细胞的方法及装置 |
| CN106011072A (zh) * | 2016-06-03 | 2016-10-12 | 南通大学 | 人膀胱移行细胞癌细胞系及膀胱癌组织重组功能性重建模型的建立方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 孙培鸣等: "工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察", 《南方医科大学学报》 * |
| 尹家荣等: "蒲薏颗粒对小鼠肾包膜下植入人食管癌肿瘤的抑制作用研究", 《陕西中医》 * |
| 胡翠梨等: "不同转移潜能食管癌细胞株裸鼠模型的建立", 《胃肠病学》 * |
| 龚守良: "《肿瘤基因放射治疗学基础》", 30 September 2013, 人民军医出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115024280A (zh) * | 2022-06-08 | 2022-09-09 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 食管癌原位种植成瘤模型建立方法及模型 |
| CN115024280B (zh) * | 2022-06-08 | 2023-05-12 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 食管癌原位种植成瘤模型建立方法及模型 |
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