CN107347922A

CN107347922A - 一种球孢白僵菌菌株的应用

Info

Publication number: CN107347922A
Application number: CN201710712743.5A
Authority: CN
Inventors: 魏萍; 李辉; 彭金海; 刘林; 颜莹洁; 张枫
Original assignee: Linyi Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Linyi Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2017-08-18
Filing date: 2017-08-18
Publication date: 2017-11-17

Abstract

本发明公开了一种球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用以及作为制备防治粮食作物上害虫药物的应用，所述的粮食作物为水稻、豆类、薯类、青稞、蚕豆或小麦，所述的害虫为稻水象甲、玉米螟、刺吸式害虫粉虱、蚜虫、松毛虫、蛴螬、蝗虫、马铃薯甲虫、松褐天牛、白蚁、茶小绿叶蝉、桃小食心虫，所述球孢白僵菌菌株的培养方法，是将菌株接种于培养基上进行培养，保持温度为25‑30℃培养5‑10d，生产出活化好的孢子粉。本发明的菌株产孢能力强、其生产性状好、生长迅速，具有毒力强、杀虫速度快、对环境友好的特点，利用该菌株生产的杀虫真菌制剂，可有效控制稻水象甲及玉米螟等粮食作物上害虫的种群数量。

Description

一种球孢白僵菌菌株的应用

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体是一种球孢白僵菌菌株的应用。

背景技术

随着生活水平的不断提高，人们对食品质量的要求也越来越高，对食品安全和环境污染问题也越来越关注，无公害食品和绿色食品生产应运而生。农产品安全问题往往是国际贸易壁垒中的筹码，绿色植保也倍受关注。现有的粮食作物上害虫，如稻水象甲、玉米螟、刺吸式害虫粉虱、蚜虫繁殖力强，长期以来，我国主要依赖于化学农药防治以上害虫，由于化学杀虫剂的大量、连年施用，使农产品、土壤和水域受到农药残留污染，对人类健康已构成严重威胁和损害；害虫抗药性的增强，使得用药量不断增加，防治费用倍增；有益天敌生物被大量损伤，生态环境遭到严重破坏，导致害虫的再增猖獗。为保护生态环境，保证食品和饲料的产量、品质和安全性，应用生物防治技术大面积控制农业害虫，采取害虫可持续治理措施势在必行。

昆虫病原真菌是最重要的杀虫微生物类群，在自然条件下约70％的昆虫病害是真菌引起的。其致病机制复杂，不会引起害虫产生抗性，对解决害虫的抗药性问题极具潜力。因此，昆虫病原真菌作为重要的替代农药，近年来受到广泛关注。球孢白僵菌是一种昆虫病原真菌，分布广泛，可以用于防治蟒槽、小地老虎、粉虱、蚜虫、蓟马、叶甲、棉铃虫、玉米螟、天牛等害虫，其中著名的应用是防治螃槽、玉米螟、松毛虫、茶小绿叶蝉，具有很好的应用效果。球孢白僵菌作为一种活体生物农药，具有不同于化学杀虫剂的全新的作用机理、对环境友好的特征，可以作为防治某些对化学杀虫剂产生抗药性的害虫的替代防治药物，开发利用球孢白僵菌具有重要的经济意义。科学研究表明，不同地理种群或不同株系的球孢白僵菌对害虫的毒力存在较大的差异，即使同一株系的球孢白僵菌对不同种类害虫的毒力也不相同，因此在应用真菌进行生物防治的过程中针对不同种类的害虫经常要筛选高毒力菌株。

发明内容

本发明的目的在于提供一种球孢白僵菌菌株的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用。

一种球孢白僵菌菌株作为制备防治粮食作物上害虫药物的应用。

作为本发明进一步的方案：所述的粮食作物为水稻、豆类、薯类、青稞、蚕豆或小麦，所述的害虫为稻水象甲、玉米螟、刺吸式害虫粉虱、蚜虫、松毛虫、蛴螬、蝗虫、马铃薯甲虫、松褐天牛、白蚁、茶小绿叶蝉、桃小食心虫。

作为本发明进一步的方案：所述球孢白僵菌菌株的培养方法，是将菌株接种于培养基上进行培养，保持温度为25-30℃培养5-10d，生产出活化好的孢子粉。

作为本发明进一步的方案：所述培养基含有1-3%的蛋白胨、2-4%的碳源、0.5-1.5%的酵母粉、1-2%的酪蛋白、1-3%的牛肉膏以及0.3-0.7%的无机盐。

作为本发明进一步的方案：所述碳源选自淀粉、黄豆饼粉、大米粉、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖中一种或几种。

作为本发明再进一步的方案：所述无机盐选自氯化钠、磷酸氢钾、硫酸镁或碳酸钙。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的菌株产孢能力强、其生产性状好、生长迅速，具有毒力强、杀虫速度快、对环境友好的特点，利用该菌株生产的杀虫真菌制剂，可有效控制稻水象甲及玉米螟等粮食作物上害虫的种群数量。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

一种球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用。

所述的粮食作物为水稻、豆类、薯类、青稞、蚕豆或小麦，所述的害虫为稻水象甲、玉米螟、刺吸式害虫粉虱、蚜虫、松毛虫、蛴螬、蝗虫、马铃薯甲虫、松褐天牛、白蚁、茶小绿叶蝉、桃小食心虫。

所述球孢白僵菌菌株的培养方法，是将菌株接种于培养基上进行培养，保持温度为25-30℃培养5-10d，生产出活化好的孢子粉；所述培养基含有1-3%的蛋白胨、2-4%的碳源、0.5-1.5%的酵母粉、1-2%的酪蛋白、1-3%的牛肉膏以及0.3-0.7%的无机盐；所述碳源选自淀粉、黄豆饼粉、大米粉、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖中一种或几种；所述无机盐选自氯化钠、磷酸氢钾、硫酸镁或碳酸钙。

所述球孢白僵菌菌株的形态特征：将球孢白僵菌菌株接种在PDA平板上，28℃培养观察菌落形态特征、产孢结构和孢子形状与大小。结果显示在PDA培养基上培养初期菌落呈白色绒毛状至棉絮状，产孢后变成淡黄色；菌丝透明，具有分隔和分支，直径为3.0-3.5μm；分生孢子梗浓密簇生、轮生或单生，呈帚状分支，大小2.5～5.5×1.5～2.5μm，其末端产生瓶形小梗，大小15.5～25.5×1.5～3.0μm；从瓶梗的末端以向基式连续形成长串链的分生孢子，分生孢子为单细胞，呈球形或近球形，大小2～3×2～2.5umμm。

所述的球孢白僵菌菌株的培养特性：在培养基（培养基含有1-3%的蛋白胨、2-4%的碳源、0.5-1.5%的酵母粉、1-2%的酪蛋白、1-3%的牛肉膏以及0.3-0.7%的无机盐）中，分别换用淀粉、黄豆饼粉、大米粉、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖作为碳源。不同碳源上的菌丝生长和产孢量的结果显示，球孢白僵菌菌株菌丝生长偏好蔗糖，第14天时在蔗糖培养基上菌落直径为5.82cm（见表1）：产孢也偏好蔗糖，第14天时在蔗糖上产孢量为14.12×10⁹个孢子/ml（见表2）。

表1：不同碳源上球孢白僵菌菌株的菌落生长特征

碳源种类	第6天	第8天	第10天	第12天	第14天
						淀粉	1.23±0.02	1.82±0.04	2.61±0.06	3.78±0.04	4.19±0.10
黄豆饼粉	1.25±0.07	1.93±0.06	2.59±0.01	3.82±0.06	4.78±0.06
						大米粉	1.21±0.04	1.89±0.04	2.72±0.06	3.76±0.01	5.11±0.07
可溶性淀粉	1.30±0.06	1.88±0.05	2.64±0.02	3.81±0.06	4.17±0.04
						葡萄糖	1.22±0.05	1.87±0.01	2.63±0.05	3.85±0.09	4.83±0.06
蔗糖	1.71±0.05	2.84±0.02	3.71±0.03	4.54±0.08	5.82±0.04

注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）。

表2不同碳源上球饱白僵菌菌株的产孢特征

碳源种类	第14天的产孢量（10⁹个孢子/ml）
		淀粉	4.98±0.44
黄豆饼粉	5.11±0.71
		大米粉	3.94±0.39
可溶性淀粉	2.49±0.42
		葡萄糖	3.57±0.18
蔗糖	14.12±0.33

注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）。

用葡萄糖替代基础培养基中的蔗糖，选用氯化钠、磷酸氢钾、硫酸镁或碳酸钙作为不同的无机盐源，不同无机盐上的菌丝生长和产孢量的结果显示，球孢白僵菌菌株菌丝生长偏好氯化钠，第14天时在氯化钠培养基上的菌落直径为5.33cm（见表3），产孢偏好磷酸氢钾，第14天时在磷酸氢钾培养基上产孢量为6.13×10⁸个孢子/ml（见表4）。

表3：不同无机盐上球孢白僵菌菌株的菌落生长特征

无机盐种类	第6天	第8天	第10天	第12天	第14天
						氯化钠	1.31±0.04	2.13±0.05	2.92±0.06	3.69±0.01	5.33±0.02
磷酸氢钾	1.09±0.03	1.97±0.03	2.44±0.02	3.24±0.02	4.52±0.08
						硫酸镁	1.14±0.07	1.92±0.09	2.38±0.05	3.33±0.05	5.01±0.04
碳酸钙	1.27±0.09	1.98±0.04	2.61±0.03	3.47±0.07	4.37±0.05

注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）。

表4不同无机盐上球饱白僵菌菌株的产孢特征

无机盐种类	第14天的产孢量（10⁹个孢子/ml）
		氯化钠	4.28±0.36
磷酸氢钾	6.13±0.54
		硫酸镁	4.19±0.55
碳酸钙	3.74±0.61

注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）。

在培养基上，不同温度下的菌丝生长和产孢量的结果显示，球孢白僵菌菌株菌落生长最适温度为28℃，在此温度下第14天时的菌落生长直径为5.66cm（见表5）；产孢最适温度也是28℃，在此温度下第14天时的产孢量为128.71×10⁶个孢子/ml（见表6）。

表5：不同温度下球孢白僵菌菌株的菌落生长特征

温度（℃）	第6天	第8天	第10天	第12天	第14天
						15	0.22±0.03	0.45±0.05	1.13±0.04	1.38±0.05	1.45±0.04
18	0.61±0.06	1.07±0.07	1.64±0.03	2.11±0.07	2.64±0.01
						22	0.89±0.05	1.33±0.06	2.15±0.08	2.59±0.03	3.02±0.01
25	1.13±0.01	1.34±0.05	2.52±0.09	2.69±0.08	3.42±0.02
						28	1.12±0.01	2.77±0.03	3.45±0.01	4.89±0.04	5.66±0.06
30	1.02±0.02	1.54±0.01	2.68±0.02	3.01±0.04	3.42±0.05

注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）。

表6：不同温度下球饱白僵菌菌株的产孢特征

温度（℃）	第14天的产孢量（10⁹个孢子/ml）
		15	13.65±3.84
18	19.78±2.45
		22	54.92±11.23
25	62.74±15.77
		28	128.71±18.72
30	88.65±20.16

注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）。

所述球孢白僵菌菌株在防治粮食作物上害虫的应用：球孢白僵菌菌株产生的分生孢子，对粮食作物上害虫具有高侵染能力，孢子能附着在昆虫的表皮，并萌发产生芽管，菌株借助芽管从昆虫的节间膜侵入，继而消化和破坏昆虫的组织，杀死昆虫。菌株孢子的应用制剂，可配制成10%球孢白僵菌可湿性粉剂进行植物叶面喷雾杀虫，其配方组成含量比例（重量比）为：球孢白僵菌纯孢粉（200亿孢子/克）10%,葡萄糖（粉末）2%、木质素磺酸钠1%,淀粉3%，分散剂BD553%,洗衣粉3%、高岭土补至100%。田间应用时将该制剂加水稀释2000倍，其悬浮液中蜡蚁轮枝菌孢子的浓度为106个/ml，使用大容量喷雾器均匀喷洒在有害虫的粮食作物表面，在相对湿度85%的温室环境中，对粮食作物上害虫7天的累计防治效果达到98.9%，可有效控制害虫种群，可用于无公害蔬菜和绿色食品蔬菜的生产温室。

上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。

Claims

1.一种球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用。

2.一种球孢白僵菌菌株作为制备防治粮食作物上害虫药物的应用。

3.根据权利要求1所述的球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用，其特征在于，所述的粮食作物为水稻、豆类、薯类、青稞、蚕豆或小麦，所述的害虫为稻水象甲、玉米螟、刺吸式害虫粉虱、蚜虫、松毛虫、蛴螬、蝗虫、马铃薯甲虫、松褐天牛、白蚁、茶小绿叶蝉、桃小食心虫。

4.根据权利要求1所述的球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用，所述球孢白僵菌菌株的培养方法，是将菌株接种于培养基上进行培养，保持温度为25-30℃培养5-10d，生产出活化好的孢子粉。

5.根据权利要求4所述的球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用，所述培养基含有1-3%的蛋白胨、2-4%的碳源、0.5-1.5%的酵母粉、1-2%的酪蛋白、1-3%的牛肉膏以及0.3-0.7%的无机盐。

6.根据权利要求5所述的球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用，所述碳源选自淀粉、黄豆饼粉、大米粉、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖中一种或几种。

7.根据权利要求5所述的球孢白僵菌菌株用于防治粮食作物上害虫的应用，所述无机盐选自氯化钠、磷酸氢钾、硫酸镁或碳酸钙。