CN107343474A - 一种糯米香高效快速扩繁的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种糯米香高效快速扩繁的方法，包括以下步骤：外植体的选择与消毒—启动培养—增殖培养—生根培养—炼苗与移栽；选取生长健壮的糯米香幼嫩枝条，去除叶片，用毛刷轻刷嫩枝表面，除去表面杂质，用2％的肥皂水溶液浸泡10‑15分钟，在流水下冲洗2小时，剪成2‑3cm长且含1‑2个叶腋的茎段进行繁殖培养。本发明公开的糯米香扩繁方法遗传性状稳定、培养过程简单、易生根、培养扩繁周期短、移栽容易成活，有效解决了糯米香高效快速繁殖的问题，同时也为工厂化育苗奠定了技术基础，值得推广。

Description

一种糯米香高效快速扩繁的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养方法技术领域，具体涉及一种糯米香高效快速扩繁的方法。
背景技术
糯米香：爵床科糯米香属，多年生草本植物。糯米香富含粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、氨基酸，其氨基酸种类和含量都很丰富，利用氨基酸自动分析仪共检测到17种氨基酸，还含有丰富的矿物质和微量元素，除此之外，糯米香还含有铁、铜、锰、锌等人体必须微量元素。
糯米香鲜叶香味不浓，但是经过加工后，会散发出一股浓郁的糯米清香，因而得名糯米香，也称糯米香叶。可供调配香精，亦可作茶叶、酒曲、饼干、冰淇淋、点心配料。糯米香还有药理作用可以治感冒风寒、健胃、利尿、消肿、消化不良、下痢腹痛等症；嫩叶可代茶用，香气清雅、滋味醇正爽口，并具有独特的糯米香口感，有清热解毒、养颜抗衰和补肾健胃的功效是一种理想的天然饮料，被誉为“美容茶”。备受消费者青睐，消费量日趋增长，产品在国内外市场拥有很大潜力，前景诱人。
糯米香在贵州省许多地区都有分布，主要依靠自然繁殖，少有人工种植，且种植面积零散而少，产量低，抗病虫害能力弱。目前市场上开发糯米香产品主要利用天然生长的糯米香，野生资源受到威胁，分布面积急剧减少。市场开发需求的增加和野生资源逐年减少的矛盾日益激化，在保护野生糯米香资源的前提下必需积极开展多种方式的人工繁育工作，以扩大糯米香的种群数量。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种糯米香高效快速扩繁的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的。
一种糯米香高效快速扩繁的方法，包括以下步骤：
a、外植体的选择与消毒：选取生长健壮的糯米香幼嫩枝条，去除叶片，用毛刷轻刷嫩枝表面，除去表面杂质，用2％的肥皂水溶液浸泡10-15分钟，在流水下冲洗2小时，剪成2-3cm长且含1-2个叶腋的茎段，置于已消毒灭菌后的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒；
b、启动培养：将茎段两端分别切去2-3mm，依照生长方向顺势直立插入启动培养基，置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温23-27℃，夜温18-22℃的条件下培养10-15天；
c、增殖培养：待腋芽长到3-4cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1-2个叶片，直立插入幼苗增殖培养基上，置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温23-27℃，夜温18-22℃的条件下光照培养10-15天后，腋芽基部形成1cm3大小的愈伤组织，在相同条件下继续培养10-15天，基部愈伤组织诱导出4-8个1-2cm高的不定芽；15天后，不定芽小苗长到3-4cm高，将小苗切下，转到另一个增殖培养基上，培养45天得到糯米香组培苗；
d、生根培养：将3-4cm高的组培苗转接到生根培养基上，置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温23-27℃，夜温18-22℃的条件下光照培养10-15天后，得到糯米香生根苗；
e、炼苗与移栽：待生根苗的根长2cm后，将其置于25℃的温室中炼苗2-4天，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，移栽到基质配比为红土:腐殖土:珍珠岩＝1:1:1的沙盘中，培养10-15天后移栽至杯口直径为10cm的营养袋中，再养护2个月，即得苗高20cm的糯米香。
优选的，所述外植体的消毒方法为用75％乙醇浸泡10-20秒，1％的苯扎氯胺溶液浸泡30-40秒，无菌水冲洗2-3次后，再用0.1％升汞浸泡8-10分钟，无菌水冲洗3-5次，最后置于已灭菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分。
优选的，所述启动培养基配方如下：MS+6-BA 1.5-2.5mg/L+ZT 0.1-0.5mg/L，10-15g/L蔗糖，2.0-3.0g/L琼脂，pH值为5.8-6.0。
优选的，所述增殖培养基配方如下：MS+6-BA 1.5-2.5mg/L+ZT 0.1-1.0mg/L+IAA0.1-0.5mg/L，10-15g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH值为5.8-6.0。
优选的，所述生根培养基配方如下：1/2MS+IAA0.05-0.1mg/L+IBA0.01-0.05mg/L，0.1-0.5g/L活性炭，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH值为5.8-6.0。
优选的，所述糯米香生根苗平均每个小苗6-8条根，根长2.0-3.5cm，生根率100％。
优选的，所述幼苗移栽条件为：温度25-30℃，湿度75-80％。
优选的，所述营养袋基质配比如下：红土:腐殖土:珍珠岩＝1:1:1。
本发明的有益效果为：
1、通过生物技术对糯米香进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的糯米香幼苗，显著提高了糯米香种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
2、在增殖过程中，选择多种细胞分裂素(ZT、IAA、6-BA)相结合的方法，使糯米香腋芽的增殖系数达到4-5倍。在生根过程中也综合运用IBA、IAA等生长调节剂和活性炭相互配合，获得组培苗的生根率在100％，每株平均带6-8条根。
综上所述，本发明公开的糯米香高效快速扩繁的方法具有遗传性状稳定、培养过程简单、易生根，培养扩繁周期短，移栽容易成活等优点，采用对优良糯米香优良单株进行组织培养的方法，可使其繁殖系数达到5.5-7.5，每1个有效糯米香嫩茎，按繁殖系数为6.5，增殖周期为45天计算，除去污染损耗，其年繁殖量仍将达到300万个以上，有效解决了糯米香快速繁殖的问题，使得优良无性系材料能够大面积推广，同时也为工厂化育苗奠定了技术基础。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进一步作详细的说明：
一种糯米香高效快速扩繁的方法，具体实施过程如下：
a、外植体的选择与消毒：2016年3月选取生长健壮的糯米香幼嫩枝条，去除叶片，用毛刷轻刷嫩枝表面，除去表面杂质，用2％的肥皂水溶液浸泡15分钟，在流水下冲洗2小时，剪成2cm长含1个叶腋的茎段，放于灭过菌的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒，75％乙醇浸泡10秒，1％的苯扎氯胺溶液浸泡30秒，无菌水冲洗3次后，用0.1％升汞浸泡8分钟，无菌水冲洗5次，置于已消毒灭菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分；
b、启动培养：将茎段两端分别切去2mm，依照生长方向顺势直立插入启动培养基，启动培养基的配方为：MS+6-BA 2.0mg/L+ZT 0.3mg/L，15g/L蔗糖，2.5g/L琼脂，pH为5.8-6.0。置于光照强度1500Lux，光照时间12小时/天，昼温25℃，夜温20℃的条件下培养15天；
c、增殖培养：2016年4月，待腋芽长到3cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部2个叶片，直立于幼苗增殖培养基上，增殖培养基的配方为：MS+6-BA 2.0mg/L+ZT 0.5mg/L+IAA0.5mg/L，15g/L蔗糖，5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0。置于光照强度1500Lux，光照时间12小时/天，昼温25℃，夜温20℃的条件下光照培养10天后，腋芽基部形成约1cm3的愈伤组织，继续在相同条件下培养10天，基部愈伤组织诱导出6个2cm高的不定芽；15天后，待不定芽小苗长到3＝cm高，再将小苗切下，转到相同的增殖培养基上，经过45天的培养，诱导出的小苗又可长到3＝cm，反复将高3＝cm的小苗切下进行增殖培养，可以使糯米香进行快速大量的扩繁，其增值系数为7.35；
d、生根培养：2016年9月将3cm高的组培苗转接到生根培养基上，生根培养基配方为：1/2MS+IAA0.05mg/L+IBA0.05mg/L，0.5g/L活性炭，30g/L蔗糖，5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0。置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25℃，夜温20℃的条件下光照培养10天后，得到糯米香生根苗，平均每个小苗生6条根，根长3.0cm，生根率100％。
e、炼苗与移栽：待生根苗的根长达2cm后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗2天后，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，之后移栽到基质配比为红土、腐殖土、珍珠岩＝1:1:1的沙盘中，移栽后注意控制温室内的温度在25℃之间，湿度在75％之间，15天后成活，移至杯口直径为10cm的营养袋中，移栽基质配比同沙盘。再通过养护2个月，苗高达20cm时，可以售卖。
下面结合例表对本方法与现有其他繁殖方式进行对比说明：
方法 增殖系数 繁育周期
本发明方法 5.5-7.5 45天
传统扦插 2-3 180天
张翠玲等2009 2-3 90天
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、外植体的选择与消毒：选取生长健壮的糯米香幼嫩枝条，去除叶片，用毛刷轻刷嫩枝表面，除去表面杂质，用2％的肥皂水溶液浸泡10-15分钟，在流水下冲洗2小时，剪成2-3cm长且含1-2个叶腋的茎段，置于已消毒灭菌后的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒；
b、启动培养：将茎段两端分别切去2-3mm，依照生长方向顺势直立插入启动培养基，置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温23-27℃，夜温18-22℃的条件下培养10-15天；
c、增殖培养：待腋芽长到3-4cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1-2个叶片，直立插入幼苗增殖培养基上，置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温23-27℃，夜温18-22℃的条件下光照培养10-15天后，腋芽基部形成1cm3大小的愈伤组织，在相同条件下继续培养10-15天，基部愈伤组织诱导出4-8个1-2cm高的不定芽；15天后，不定芽小苗长到3-4cm高，将小苗切下，转到另一个增殖培养基上，培养45天得到糯米香组培苗；
d、生根培养：将3-4cm高的组培苗转接到生根培养基上，置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温23-27℃，夜温18-22℃的条件下光照培养10-15天后，得到糯米香生根苗；
e、炼苗与移栽：待生根苗的根长2cm后，将其置于25℃的温室中炼苗2-4天，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，移栽到基质配比为红土:腐殖土:珍珠岩＝1:1:1的沙盘中，培养10-15天后移栽至杯口直径为10cm的营养袋中，再养护2个月，即得苗高20cm的糯米香。
2.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述外植体的消毒方法为用75％乙醇浸泡10-20秒，1％的苯扎氯胺溶液浸泡30-40秒，无菌水冲洗2-3次后，再用0.1％升汞浸泡8-10分钟，无菌水冲洗3-5次，最后置于已灭菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分。
3.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(b)中，所述启动培养基配方如下：MS+6-BA 1.5-2.5mg/L+ZT 0.1-0.5mg/L，10-15g/L蔗糖，2.0-3.0g/L琼脂，pH值为5.8-6.0。
4.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(c)中，所述增殖培养基配方如下：MS+6-BA 1.5-2.5mg/L+ZT 0.1-1.0mg/L+IAA 0.1-0.5mg/L，10-15g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH值为5.8-6.0。
5.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(d)中，所述生根培养基配方如下：1/2MS+IAA0.05-0.1mg/L+IBA0.01-0.05mg/L，0.1-0.5g/L活性炭，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH值为5.8-6.0。
6.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(d)中，所述糯米香生根苗平均每个小苗6-8条根，根长2.0-3.5cm，生根率100％。
7.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(e)中，所述幼苗移栽条件为：温度25-30℃，湿度75-80％。
8.根据权利要求1所述的一种糯米香高效快速扩繁的方法，其特征在于，步骤(e)中，所述营养袋基质配比如下：红土:腐殖土:珍珠岩＝1:1:1。
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张翠玲等: "糯米香茶快繁技术研究", 《广东农业科学》 *

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