CN107333653B - 一种普通野生稻组织培养快繁方法 - Google Patents

一种普通野生稻组织培养快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及植物快繁技术领域，特别涉及一种普通野生稻组织培养快繁方法，所述方法包括如下步骤：水稻种子的选择与消毒；将种子接种到含海带提取物的培养基中培养获得无菌试管苗；将试管苗接种到含芦荟提取物的培养基中培养获得丛生芽；将丛生芽接种到含小麦胚芽提取物的培养基中培养获得健壮植株；将健壮植株移接至含小球藻提取物的培养基中培养获得带根的完整植株。与传统方法相比，本发明通过对快速繁殖各阶段的培养基进行优化，进一步提高了野生稻种子发芽率，促进丛生芽的繁殖和分化，增强了新生植株的生根能力，得到的新生苗长势好，株苗健壮，显著提高了野生水稻组织培养快繁的成功率。

Description

一种普通野生稻组织培养快繁方法
【技术领域】
本发明涉及植物快繁技术领域，特别涉及一种普通野生稻组织培养快繁方法。
【背景技术】
普通野生稻(OryzarufipogonGriff.)为禾本科植物，是水稻的祖先，国家二级保护植物。考古学家通过对挖掘出土的稻秆、稻叶进行外形特征鉴定，证明了中国在7000年前就已经培育出了水稻，比盛产水稻的泰国栽培历史还早1000多年。普通野生稻是水稻的近缘祖先，亲和性好，杂交结实率极高，为水稻育种提供珍贵的遗传资料，并为阐明水稻起源和演化提供理论基础，有重要科学价值。
植物组织培养始于20世纪初，之后这项技术得到了迅速的发展，渗透到植物生理学、遗传学、育种学及生物化学等领域，并成为了一项举世瞩目的现代生物技术，在农业、林业和医药业有广泛的应用。植物组织培养技术把植物的细胞、组织和器官等在无菌条件下置入培养基上，培养基中有植物所需的所有营养和控制植物生长分化的植物生长调节物质。在适宜的环境条件下，植物的一个细胞或很小的一块组织就能长成一株幼苗。培育的水稻幼苗可以继续切割和再次培养，从而得到大量的幼苗。由于植物组织培养的快速繁殖比常规方法的繁殖速度快万倍到数百万倍，并且不受地区和气候的影响，可以及时提供大量优质幼苗。
对于普通野生稻而言，收获成熟种子较难，而且种子休眠性很强，这给繁殖带来了一定困难。如果用组织培养技术使之快速繁殖，1粒种子即可得到无数株再生幼苗。普通野生稻是水稻遗传育种工作中的宝贵物质资源，在研究稻种起源，演化，分类及分离和重组的研究工作中，普通野生稻起到不可替代的作用。
【发明内容】
鉴于上述内容，本发明提供了一种普通野生稻组织培养快繁方法，该方法能够快速繁殖出大量适合移栽的优良普通野生稻种苗。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种普通野生稻组织培养快繁方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1-2％的洗洁精水溶液浸泡5-15min，自来水冲洗10-20min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1-2min，再于含有2％活性氧的浓度为0.003-0.006％的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于22-26℃下避光培养18-24天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和海带提取物0.3-0.5mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于22-26℃下光照培养25-30天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.2-1.0mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、KT 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和芦荟提取物0.5-0.8mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养30-40天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.2-0.4mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小麦胚芽提取物0.4-0.7mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行15-25天的生根培养，培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L、AC1.0-1.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小球藻提取物0.1-0.3mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中。
进一步地，步骤(1)中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
进一步地，步骤(2)中，所述海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入10-20体积倍的水中进行胶体磨处理5-8min，70-80℃下水浴提取10-12h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取2-3次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入3-4体积倍的乙醇中沉淀20-24h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物。
进一步地，步骤(3)中，所述芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.6-0.9％的淀粉酶进行酶解处理1-2h，酶解后加入1-2体积倍的90-95％的乙醇中混匀，浸制20-25天，将浸制后的混合液于80-90℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物。
进一步地，步骤(4)中，所述小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入4-6重量倍的体积浓度为75-85％甲醇溶液中研磨30-40min，高速冷冻离心8-10min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物。
进一步地，步骤(5)中，所述小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入4-5体积倍的体积分数为80-90％的乙醇中回流提取2-4h，重复提取2-3次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入3-4体积倍的体积分数为60-70％的乙醇中静置12-24h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物。
本发明具有如下有益效果：
(1)对普通野生稻进行组织培养快速繁殖，通过普通野生稻丛生芽快速繁殖，在短时间内培育出大量适合移栽的普通野生稻种苗，显著提高了普通野生稻种苗的增殖系数和种苗质量。
(2)本发明通过优化快速繁殖各阶段的培养基，进一步提高了水稻发芽率，促进丛生芽的繁殖和分化，增强了新生植株的生根能力，得到的新生苗长势好，株苗健壮，显著提高了野生水稻组织培养快繁的成功率。其中，种子萌发获得无菌试管苗步骤中，使用的第一培养基是在MS培养基中添加GA3、蔗糖、琼脂和海带提取物制成，其中，海带提取物中富含海带多糖类活性成分，与GA3配合协同增效，可快速打破野生稻种子的休眠，促进种子的萌发，提高了发芽率，为后期的培养奠定了良好的基础；试管苗丛生芽的繁殖培养步骤中，使用的第二培养基是在MS培养基中添加芸苔素内脂、NAA、KT、蔗糖、琼脂和芦荟提取物制成，芦荟提取物中富含芦荟苷，与芸苔素内脂、NAA和KT复配，可加速丛生芽的生长和分化，缩短丛生芽生长时间，同时芦荟提取物中的芦荟大黄素可抑制培养基中微生物的生长，减少了培养基的污染，进一步提高成功率；丛生芽的培养步骤中，使用的第三培养基中培养是在MS培养基中添加6-BA、蔗糖、琼脂和小麦胚芽提取物制成，小麦胚芽提取物中含有可促进组织分化的激素，与6-BA复配使用，加速了细胞的分裂和组织分化，使植株生长速度快，长势好，株苗健壮；健壮植株生根培养步骤中，使用的第四培养基是在1/2MS培养基中添加NAA、AC、蔗糖、琼脂和小球藻提取物制成，小球藻提取物含小球藻多糖活性成分，与GA3配合使用协同增效，促进根细胞的生长和伸长，增强生根能力；除此，在MS繁殖培养基中添加的芸苔素内脂、KT、IBA属于化学合成物质，较为便宜，可大大降低普通野生稻组织的成本消耗，达到降低成本的目的。
(3)采用本发明方法种子发芽率为90.0-96.7％，生根率为96.5-98.9％，丛生芽生长速度快，植株健壮，移栽苗床成活率在95％以上，有效解决了野生稻快速繁殖的问题。
【具体实施方式】
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1：
本实施例一种普通野生稻组织培养快繁方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1％的洗洁精水溶液浸泡5min，自来水冲洗10min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1min，再于含有2％活性氧的浓度为0.003％的次氯酸钠溶液中浸泡5min，最后用无菌水冲洗3次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；其中，无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于22℃下避光培养18天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.1mg/L、蔗糖20mg/L、琼脂3mg/L和海带提取物0.3mg/L，并将pH调整为5.5制得；其中，海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入10体积倍的水中进行胶体磨处理5min，70℃下水浴提取10h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取2次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入3体积倍的乙醇中沉淀20h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物；
(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于22℃下光照培养25天，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.2mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 0.1mg/L、蔗糖20mg/L、琼脂3mg/L和芦荟提取物0.5mg/L，并将pH调整为5.5制得；其中，芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.6％的淀粉酶进行酶解处理1h，酶解后加入1体积倍的90％的乙醇中混匀，浸制20天，将浸制后的混合液于80℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物；
(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养30天，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.2mg/L、蔗糖20mg/L、琼脂3mg/L和小麦胚芽提取物0.4mg/L，并将pH调整为5.5制得；其中，小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入4重量倍的体积浓度为75％甲醇溶液中研磨30min，高速冷冻离心8min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行15天的生根培养，培养温度为22℃，光照强度为1200lux，光照时间为8小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 0.1mg/L、AC 1.0mg/L、蔗糖20mg/L、琼脂3mg/L和小球藻提取物0.1mg/L，并将pH调整为5.5制得；其中，小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入4体积倍的体积分数为80％的乙醇中回流提取2h，重复提取2次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入3体积倍的体积分数为60％的乙醇中静置12h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物；
(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中。
实施例2：
本实施例一种普通野生稻组织培养快繁方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡15min，自来水冲洗20min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡2min，再于含有2％活性氧的浓度为0.006％的次氯酸钠溶液中浸泡10min，最后用无菌水冲洗5次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；其中，无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于26℃下避光培养24天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.5mg/L、蔗糖25mg/L、琼脂5mg/L和海带提取物0.5mg/L，并将pH调整为6.0制得；其中，海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入20体积倍的水中进行胶体磨处理8min，80℃下水浴提取12h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取3次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入4体积倍的乙醇中沉淀24h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物；
(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于26℃下光照培养30天，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂1.0mg/L、NAA 0.5mg/L、KT 0.5mg/L、蔗糖25mg/L、琼脂5mg/L和芦荟提取物0.8mg/L，并将pH调整为6.0制得；其中，芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.9％的淀粉酶进行酶解处理2h，酶解后加入2体积倍的95％的乙醇中混匀，浸制25天，将浸制后的混合液于90℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物；
(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养40天，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.4mg/L、蔗糖25mg/L、琼脂5mg/L和小麦胚芽提取物0.7mg/L，并将pH调整为6.0制得；其中，小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入6重量倍的体积浓度为85％甲醇溶液中研磨40min，高速冷冻离心10min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行25天的生根培养，培养温度为26℃，光照强度为1800lux，光照时间为10小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 1.0mg/L、AC 1.5mg/L、蔗糖25mg/L、琼脂5mg/L和小球藻提取物0.3mg/L，并将pH调整为6.0制得；其中，小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入5体积倍的体积分数为90％的乙醇中回流提取4h，重复提取3次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入4体积倍的体积分数为70％的乙醇中静置24h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物；
(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中。
实施例3：
本实施例一种普通野生稻组织培养快繁方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1.5％的洗洁精水溶液浸泡10min，自来水冲洗15min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1.5min，再于含有2％活性氧的浓度为0.005％的次氯酸钠溶液中浸泡8min，最后用无菌水冲洗4次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；其中，无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于24℃下避光培养20天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.4mg/L、蔗糖23mg/L、琼脂4mg/L和海带提取物0.4mg/L，并将pH调整为5.8制得；其中，海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入15体积倍的水中进行胶体磨处理6min，75℃下水浴提取11h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取2次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入3.5体积倍的乙醇中沉淀22h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物；
(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于25℃下光照培养27天，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.8mg/L、NAA 0.3mg/L、KT 0.4mg/L、蔗糖23mg/L、琼脂5mg/L和芦荟提取物0.6mg/L，并将pH调整为5.8制得；其中，芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.8％的淀粉酶进行酶解处理1.5h，酶解后加入1.5体积倍的94％的乙醇中混匀，浸制23天，将浸制后的混合液于85℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物；
(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养35天，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.3mg/L、蔗糖23mg/L、琼脂4mg/L和小麦胚芽提取物0.6mg/L，并将pH调整为5.8制得；其中，小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入5重量倍的体积浓度为80％甲醇溶液中研磨35min，高速冷冻离心9min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行20天的生根培养，培养温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 0.7mg/L、AC 1.3mg/L、蔗糖22mg/L、琼脂4mg/L和小球藻提取物0.2mg/L，并将pH调整为5.8制得；其中，小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入4.5体积倍的体积分数为85％的乙醇中回流提取3h，重复提取2次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入3.5体积倍的体积分数为65％的乙醇中静置20h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物；
(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中。
对比试验：
为了说明本发明野生水稻组培快繁方法的效果，申请人做了以下对比试验，试验分为第1组、第2组、第3组、对照组1、对照组2、对照组3、对照组4共7个小组，每个小组均使用30粒野生水稻种子作为外植体，第1组、第2组、第3组分别使用实施例1、实施例2、实施例3的方法进行快繁；对照组1：步骤(2)中的第一培养基内无海带提取物，其他步骤均与实施例3相同；对照组2：步骤(3)中的第二培养基内无芦荟提取物，其他步骤均与实施例3相同；对照组3：步骤(4)中的第三培养基内无小麦胚芽提取物，其他步骤均与实施例3相同；对照组4：步骤(5)中的第四培养基内无小球藻提取物，其他步骤均与实施例3相同。各组其他培养条件均相同，培养过程中记录各组种子的发芽率、丛生芽生长速度、生根率和植株长势情况，记录结果见表1：
表1不同组野生稻快繁结果
从第1组、第2组、第3组可知，使用本发明的快繁方法，种子发芽率为90.0-96.7％，生根率为96.5-98.9％，丛生芽生长速度快，植株健壮，显著提高了野生水稻组织培养快繁的成功率。从第3组与对照组1的对比可知，本发明种子萌发获得无菌试管苗步骤中，使用的第一培养基中，海带提取物与GA3配合协同增效，可快速打破普通野生稻种子的休眠，促进种子的萌发，提高了发芽率，为后期的培养奠定了良好的基础；从第3组与对照组2的对比可知，本发明试管苗丛生芽的繁殖培养步骤中，使用的第二培养基中，芦荟提取物与芸苔素内脂、NAA和KT复配，可加速丛生芽的生长和分化，缩短丛生芽生长时间；从第3组与对照组3的对比可知，本发明丛生芽的培养步骤中，使用的第三培养基中，小麦胚芽提取物与6-BA复配使用，加速了细胞的分裂和组织分化，使植株生长速度快，涨势好，株苗健壮；从第3组与对照组4的对比可知，本发明健壮植株生根培养步骤中，使用的第四培养基中，小球藻提取物与GA3配合使用协同增效，促进根细胞的生长和伸长，增强生根能力。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (2)

1.一种普通野生稻组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1-2％的洗洁精水溶液浸泡5-15min，自来水冲洗10-20min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1-2min，再于含有2％活性氧的浓度为0.003-0.006％的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于22-26℃下避光培养18-24天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和海带提取物0.3-0.5mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于22-26℃下光照培养25-30天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.2-1.0mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、KT 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和芦荟提取物0.5-0.8mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养30-40天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.2-0.4mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小麦胚芽提取物0.4-0.7mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行15-25天的生根培养，培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L、AC 1.0-1.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小球藻提取物0.1-0.3mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；
(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中；
步骤(2)中，所述海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入10-20体积倍的水中进行胶体磨处理5-8min，70-80℃下水浴提取10-12h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取2-3次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入3-4体积倍的乙醇中沉淀20-24h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物；
步骤(3)中，所述芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.6-0.9％的淀粉酶进行酶解处理1-2h，酶解后加入1-2体积倍的90-95％的乙醇中混匀，浸制20-25天，将浸制后的混合液于80-90℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物；
步骤(4)中，所述小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入4-6重量倍的体积浓度为75-85％甲醇溶液中研磨30-40min，高速冷冻离心8-10min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物；
步骤(5)中，所述小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入4-5体积倍的体积分数为80-90％的乙醇中回流提取2-4h，重复提取2-3次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入3-4体积倍的体积分数为60-70％的乙醇中静置12-24h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物。
2.根据权利要求1所述一种普通野生稻组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(1)中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
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